本發(fā)明涉及一種檢測(cè)方法，具體是一種快速檢測(cè)替米考星的方法。

背景技術(shù)：

替米考星是一種動(dòng)物專用的新型大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，臨床主要用于牛、豬、雞、綿 羊、山羊、兔等感染性疾病，特別是用于畜禽呼吸道疾病，并取得顯著療效。該藥具有抗菌活 性強(qiáng)、藥代動(dòng)力學(xué)特征優(yōu)良、用量少、毒性小等特點(diǎn)。臨床應(yīng)用表明 ：替米考星是一種安全有 效的新型獸藥，具有廣闊的應(yīng)用前景。

替米考星具有同泰樂菌素相似的廣譜抗菌活性，對(duì)革蘭氏陽性菌和某些革蘭氏陰性菌、霉形體、螺旋體等均有抑制作用，對(duì)胸膜肺炎放線桿菌、巴氏桿菌及霉形體具有比泰樂菌素更強(qiáng)的抗菌活性。Inamoto等報(bào)道，替米考星(TMS)、金霉素(CTC)、甲砜霉素(TP)和泰樂菌素(TS)對(duì)日本1980～1989年間從豬肺炎損害部位分離出的61株多殺性巴氏桿菌和35株胸膜肺炎放線桿菌的抗菌作用，大多數(shù)菌株對(duì)TMS、CTC、TP敏感。CTC和TP分別在3.13μg/ml和0.78μg/ml時(shí)對(duì)51株(83.6%)和46株(75.4%)多殺性巴氏桿菌有抑制作用。TS對(duì)幾乎所有菌株的抗菌活性較低，MIC≥6.25μg/ml。TMS對(duì)23株(37.7%)多殺性巴氏桿菌的MIC≥1.56μg/ml，但在3.13μg/ml時(shí)，TP和TMS分別能抑制32株(91.4%)和33株(94.3%)放線桿菌，可見作為同一大環(huán)內(nèi)酯類藥物，泰樂菌素對(duì)兩種細(xì)菌的抗菌活性均不及替米考星。SalmonSA等用從美國、加拿大分離到的515株致病菌對(duì)頭孢噻呋、恩諾沙星、紅霉素、磺胺二甲嘧啶、壯觀霉素、林可霉素、磺胺嘧啶/TMP、氨芐青霉素和替米考星等9種藥物的敏感性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，抗菌作用最強(qiáng)的是恩諾沙星和頭孢噻呋，替米考星對(duì)巴氏桿菌和胸膜肺炎放線桿菌活性中等。替米考星對(duì)雞霉形體表現(xiàn)出較強(qiáng)的體外抗菌活性。Jordan等報(bào)道了替米考星和泰樂菌素對(duì)家禽6株雞敗血霉形體和3株滑液霉形體的體外MIC值。替米考星對(duì)6株雞敗血霉形體的MIC值分別為：＜0.0125、0.0025、0.0025，＞12.5、0.004、0.1、0.0125、0.006和0.025μg/ml；而泰樂菌素的MIC值則分別為：＜0.0125、0.02、0.02、3.2、0.016、0.8、0.0125、0.025和0.025μg/ml。Ziv等應(yīng)用替米考星對(duì)從奶牛乳房炎分離的112株金黃色葡萄球菌和其它致病菌進(jìn)行MIC-90測(cè)定。結(jié)果替米考星對(duì)乳房炎金黃色葡萄球菌和鏈球菌均很敏感，其中對(duì)化膿性鏈球菌活性最強(qiáng)(MIC-90為0.04μg/ml)。替米考星在小于3.12μg/ml時(shí)能抑制90.8%的其它革蘭氏陽性乳房炎致病菌。綜上所述，替米考星作為一種較新的大環(huán)內(nèi)酯類抗生素，其較強(qiáng)的抗菌活性和優(yōu)越的藥物動(dòng)力學(xué)特征，使它在畜禽敏感菌引起的肺炎、巴氏桿菌病以及乳房炎等疾病的防治方面發(fā)揮著重要作用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的目的在于提供一種快速檢測(cè)替米考星的方法，以解決上述背景技術(shù)中提出的問題。

為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明提供如下技術(shù)方案：

一種快速檢測(cè)替米考星的方法，包括以下步驟：步驟1：取樣品加入到緩沖溶液中，融入到光化學(xué)發(fā)光體系中，再用電化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)檢測(cè)體系的發(fā)光強(qiáng)度，與陰性和陽性對(duì)照組相比較，若體系的發(fā)光強(qiáng)度發(fā)生了猝滅現(xiàn)象，且猝滅效率在5%以上，則待檢測(cè)樣品中含有替米考星；經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液少量；步驟2：將上清液加入到SLE柱后，靜置2～4分鐘；步驟3：采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有替米考星的洗脫液；步驟4：采用高效液相色譜法對(duì)步驟3得到的洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，所述的高效液相色譜法的具體參數(shù)為：色譜柱：C18柱，150mm*3.9mmID柱溫：室溫流動(dòng)相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的體積比為100:12；檢測(cè)器：UV檢測(cè)器；檢測(cè)波長：226nm；進(jìn)樣量：50μL；其中，所述的緩沖溶液為：Ph范圍為11.0～13.0的氨水-氯化銨緩沖液，所述的二元洗脫劑為異丙醇和乙酸甲酯的混合物，其中異丙醇和乙酸甲酯的重量比為0.5～1:2。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的樣品為 1g，緩沖溶液為5ml，步驟2中所取的上清液為0.5ml，所述的步驟3中，每次洗脫時(shí)所用的洗脫劑為0.5ml。

作為本發(fā)明進(jìn)一步的方案：所述的步驟1中，漩渦混合器混合處理的時(shí)間為0.5～1.5分鐘。

作為本發(fā)明再進(jìn)一步的方案：所述的步驟1中，所述的離心處理的具體操作為：將經(jīng)混合處理的溶液在離心機(jī)中以9000～11000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心0.5～1.5分鐘。

與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的有益效果是：本發(fā)明快速檢測(cè)替米考星的方法大大簡(jiǎn)化了檢測(cè)步驟，降低了操作難度。

具體實(shí)施方式

下面對(duì)本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述。

本發(fā)明實(shí)施例中，一種快速檢測(cè)替米考星的方法，包括以下步驟：步驟1：取樣品加入到緩沖溶液中，融入到光化學(xué)發(fā)光體系中，再用電化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)檢測(cè)體系的發(fā)光強(qiáng)度，與陰性和陽性對(duì)照組相比較，若體系的發(fā)光強(qiáng)度發(fā)生了猝滅現(xiàn)象，且猝滅效率在5%以上，則待檢測(cè)樣品中含有替米考星；經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液少量；步驟2：將上清液加入到SLE柱后，靜置2～4分鐘；步驟3：采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有替米考星的洗脫液；步驟4：采用高效液相色譜法對(duì)步驟3得到的洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，所述的高效液相色譜法的具體參數(shù)為：色譜柱：C18柱，150mm*3.9mmID柱溫：室溫流動(dòng)相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的體積比為100:12；檢測(cè)器：UV檢測(cè)器；檢測(cè)波長：226nm；進(jìn)樣量：50μL；其中，所述的緩沖溶液為：Ph范圍為11.0～13.0的氨水-氯化銨緩沖液，所述的二元洗脫劑為異丙醇和乙酸甲酯的混合物，其中異丙醇和乙酸甲酯的重量比為0.5～1:2。所述的樣品為 1g，緩沖溶液為5ml，步驟2中所取的上清液為0.5ml，所述的步驟3中，每次洗脫時(shí)所用的洗脫劑為0.5ml。所述的步驟1中，漩渦混合器混合處理的時(shí)間為0.5～1.5分鐘。所述的步驟1中，所述的離心處理的具體操作為：將經(jīng)混合處理的溶液在離心機(jī)中以9000～11000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心0.5～1.5分鐘。

實(shí)施例1：

本發(fā)明快速檢測(cè)替米考星的方法，包括以下步驟：步驟1：取樣品加入到緩沖溶液中，融入到光化學(xué)發(fā)光體系中，再用電化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)檢測(cè)體系的發(fā)光強(qiáng)度，與陰性和陽性對(duì)照組相比較，若體系的發(fā)光強(qiáng)度發(fā)生了猝滅現(xiàn)象，且猝滅效率在5%以上，則待檢測(cè)樣品中含有替米考星；經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液少量；步驟2：將上清液加入到SLE柱后，靜置2分鐘；步驟3：采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有替米考星的洗脫液；步驟4：采用高效液相色譜法對(duì)步驟3得到的洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，所述的高效液相色譜法的具體參數(shù)為：色譜柱：C18柱，150mm*3.9mmID柱溫：室溫流動(dòng)相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的體積比為100:12；檢測(cè)器：UV檢測(cè)器；檢測(cè)波長：226nm；進(jìn)樣量：50μL；其中，所述的緩沖溶液為：Ph范圍為11.0的氨水-氯化銨緩沖液，所述的二元洗脫劑為異丙醇和乙酸甲酯的混合物，其中異丙醇和乙酸甲酯的重量比為0.5:2。所述的樣品為 1g，緩沖溶液為5ml，步驟2中所取的上清液為0.5ml，所述的步驟3中，每次洗脫時(shí)所用的洗脫劑為0.5ml。所述的步驟1中，漩渦混合器混合處理的時(shí)間為0.5分鐘。所述的步驟1中，所述的離心處理的具體操作為：將經(jīng)混合處理的溶液在離心機(jī)中以9000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心0.5分鐘。

實(shí)施例2：

本發(fā)明快速檢測(cè)替米考星的方法，包括以下步驟：步驟1：取樣品加入到緩沖溶液中，融入到光化學(xué)發(fā)光體系中，再用電化學(xué)發(fā)光分析系統(tǒng)檢測(cè)體系的發(fā)光強(qiáng)度，與陰性和陽性對(duì)照組相比較，若體系的發(fā)光強(qiáng)度發(fā)生了猝滅現(xiàn)象，且猝滅效率在5%以上，則待檢測(cè)樣品中含有替米考星；經(jīng)過漩渦混合器混合處理后再經(jīng)過離心處理，取離心處理后的上清液少量；步驟2：將上清液加入到SLE柱后，靜置4分鐘；步驟3：采用二元洗脫劑對(duì)SLE柱洗脫至少兩次，接收洗脫液，得到含有替米考星的洗脫液；步驟4：采用高效液相色譜法對(duì)步驟3得到的洗脫液進(jìn)行檢測(cè)，所述的高效液相色譜法的具體參數(shù)為：色譜柱：C18柱，150mm*3.9mmID柱溫：室溫流動(dòng)相：0.05％磷酸水溶液和乙腈的混合液，其中0.05％磷酸水溶液和乙腈的體積比為100:12；檢測(cè)器：UV檢測(cè)器；檢測(cè)波長：226nm；進(jìn)樣量：50μL；其中，所述的緩沖溶液為：Ph范圍為13.0的氨水-氯化銨緩沖液，所述的二元洗脫劑為異丙醇和乙酸甲酯的混合物，其中異丙醇和乙酸甲酯的重量比為1:2。所述的樣品為 1g，緩沖溶液為5ml，步驟2中所取的上清液為0.5ml，所述的步驟3中，每次洗脫時(shí)所用的洗脫劑為0.5ml。所述的步驟1中，漩渦混合器混合處理的時(shí)間為1.5分鐘。所述的步驟1中，所述的離心處理的具體操作為：將經(jīng)混合處理的溶液在離心機(jī)中以11000轉(zhuǎn)/分鐘的速度離心1.5分鐘。

對(duì)于本領(lǐng)域技術(shù)人員而言，顯然本發(fā)明不限于上述示范性實(shí)施例的細(xì)節(jié)，而且在不背離本發(fā)明的精神或基本特征的情況下，能夠以其他的具體形式實(shí)現(xiàn)本發(fā)明。因此，無論從哪一點(diǎn)來看，均應(yīng)將實(shí)施例看作是示范性的，而且是非限制性的，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求而不是上述說明限定，因此旨在將落在權(quán)利要求的等同要件的含義和范圍內(nèi)的所有變化囊括在本發(fā)明內(nèi)。

此外，應(yīng)當(dāng)理解，雖然本說明書按照實(shí)施方式加以描述，但并非每個(gè)實(shí)施方式僅包含一個(gè)獨(dú)立的技術(shù)方案，說明書的這種敘述方式僅僅是為清楚起見，本領(lǐng)域技術(shù)人員應(yīng)當(dāng)將說明書作為一個(gè)整體，各實(shí)施例中的技術(shù)方案也可以經(jīng)適當(dāng)組合，形成本領(lǐng)域技術(shù)人員可以理解的其他實(shí)施方式。