本發(fā)明涉及一種農(nóng)藥殘留方法的檢測，具體涉及一種葉類蔬菜中惡霉靈農(nóng)藥殘留檢測前處理方法。

背景技術(shù)：

惡霉靈俗稱綠亨一號、土菌消、土菌克或綠佳寶，是一種高效廣譜殺菌劑，惡霉靈對各種植物真菌的病害防治效果較好，毒性較低，因此在我國應(yīng)用廣泛。目前，隨著人們對健康安全關(guān)注度的增加，植物中惡霉靈農(nóng)藥殘留對人體的毒害作用也逐漸受到關(guān)注，有資料顯示惡霉靈農(nóng)藥殘留不僅會損害人體的腸胃、腎臟器官，而且在人體代謝過程中惡霉靈轉(zhuǎn)變成的亞硝基化合物容易誘發(fā)癌癥等疾病。據(jù)此，需要對植物中，特別是水果蔬菜中的惡霉靈農(nóng)藥殘留進(jìn)行檢測，以及早做出防治準(zhǔn)備。

現(xiàn)有針對惡霉靈農(nóng)殘檢測報(bào)道不多，特別是葉類蔬菜，報(bào)道較少，且檢測中的回收率低，檢測方法選擇性不好，容易造成假陽性判斷，誤差較大。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明要解決的技術(shù)方案是克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種葉類蔬菜中惡霉靈農(nóng)藥殘留檢測前處理方法，該方法回收率高，檢測準(zhǔn)確度高、重復(fù)性好。

為解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明采用的技術(shù)方案是：

一種葉類蔬菜中惡霉靈農(nóng)藥殘留檢測前處理方法，包括步驟：

（1）將葉類蔬菜洗凈，置于烘箱內(nèi)烘干；

（2）研磨成粉末，加入乙醇浸潤，然后再加入堿性溶液，攪拌后冷藏0.5-1h；

（3）冷藏后加入乙酸乙酯渦旋振蕩，得到初提液；

（4）將初提液與氯化鈉、醋酸鈉、硫酸鎂和檸檬酸鈉混合均勻，靜置，取上清液。

優(yōu)選的，步驟（1）中烘干分兩段，第一段是初步烘干，將葉類蔬菜在堿性氛圍下烘至少1h，第二段是深度烘干，撤去堿性氛圍，烘干至含水率小于10%。

優(yōu)選的，所述堿性氛圍為含有氨水的空間。優(yōu)選的操作方法包括：將葉類蔬菜置于裝有氨水的容器中或容器上部，葉類蔬菜不與氨水接觸，如采用支架或金屬網(wǎng)墊隔開，然后容器上蓋，留有氣體溢出的出口，烘箱在不高于90℃的溫度下，進(jìn)一步優(yōu)選在60-80℃下烘0.5-1h后，撤去盛有氨水的容器，正常烘干至含水率小于10%。

優(yōu)選的，所述堿性溶液為氫氧化鈉、氫氧化鉀或碳酸鉀、碳酸鈉溶液。

優(yōu)選的，步驟（4）得到的上清液中加有吸附劑。吸附劑包括現(xiàn)不限于活性炭、硅藻土、psa吸附劑等中的一種或一種以上的混合物。

優(yōu)選的，以質(zhì)量計(jì)，氯化鈉用量是烘干后葉類蔬菜重量的0.1-0.5倍，醋酸鈉用量是烘干后葉類蔬菜重量的0.5-1.0倍，硫酸鎂用量是烘干后葉類蔬菜重量的4.0-5.0倍，檸檬酸鈉用量是烘干后葉類蔬菜重量的0.1-0.5倍。

優(yōu)選的，步驟（2）中乙醇浸提時(shí)間為0.5-1h，冷藏溫度為-4-0℃。

優(yōu)選的，步驟（3）中渦旋振蕩的速率為1500-2000r/min，時(shí)間為1-5min。

優(yōu)選的，采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對上清液進(jìn)行檢測。

本發(fā)明所達(dá)到的有益效果：

本發(fā)明檢測方法所用溶劑及試劑為常用試劑，毒性低，處理新鮮葉類蔬菜時(shí)在堿性條件下烘干能幫助釋放葉類蔬菜中的農(nóng)殘，后續(xù)的堿溶液處理能進(jìn)一步將葉類蔬菜中的農(nóng)殘充分的提取出來，隨后加入乙酸乙酯、氯化鈉、醋酸鈉、硫酸鎂和檸檬酸鈉等步驟在進(jìn)一步將水果中農(nóng)殘釋放出來同時(shí)，還進(jìn)一步將水相中農(nóng)殘向乙酸乙酯中轉(zhuǎn)移，從而提高惡霉靈的提取率。吸附劑對上清液的處理能進(jìn)一步減少后續(xù)測量的干擾，提高檢測的準(zhǔn)確度。

具體實(shí)施方式

下面結(jié)合具體實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步描述。以下實(shí)施例僅用于更加清楚地說明本發(fā)明的技術(shù)方案，而不能以此來限制本發(fā)明的保護(hù)范圍。

實(shí)施例1

一種葉類蔬菜中惡霉靈農(nóng)藥殘留檢測前處理方法，包括步驟：

將葉類蔬菜洗凈，置于烘箱內(nèi)烘干；具體烘干做法是：將葉類蔬菜置于裝有氨水的容器中，葉類蔬菜不與氨水接觸，可采用金屬網(wǎng)墊隔開，然后容器上蓋，留有氣體溢出的出口，烘箱在78℃的溫度下烘0.5h后，撤去盛有氨水的容器，然后再正常烘干至含水率小于10%。隨后研磨成粉末，取5g加入乙醇10ml浸潤1h，然后再加入ph為12的氫氧化鈉溶液10ml，攪拌后-1℃冷藏0.5h；冷藏后加入乙酸乙酯15ml渦旋振蕩，渦旋振蕩速率2000r/min，時(shí)間2min，得到初提液；隨后將初提液與氯化鈉、醋酸鈉、硫酸鎂和檸檬酸鈉的混合物混合均勻，靜置，取上清液。以質(zhì)量計(jì)，氯化鈉用量是烘干后葉類蔬菜重量的0.1倍，醋酸鈉用量是烘干后葉類蔬菜重量的0.6倍，硫酸鎂用量是烘干后葉類蔬菜重量的4.2倍，檸檬酸鈉用量是烘干后葉類蔬菜重量的0.1倍。

向上述得到的上清液中加有吸附劑psa。然后用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對上清液進(jìn)行檢測。

取5μl上清液進(jìn)樣至超高效液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國agilent公司生產(chǎn)的agilent1290型號高效液相色譜儀和美國absciex公司生產(chǎn)的ap15500質(zhì)譜儀連用）中平行測定三次，測定條件參考如下：

色譜條件：色譜柱agilentzorbax300sb-c8(規(guī)格為2.1×100mm，1.8μm)；流動相：a：甲醇，b：水；梯度洗脫程序：0-2min甲醇：水＝3:7，2-4min甲醇：水＝12:1，4-10min甲醇：水＝10:1，10-15min甲醇：水＝4：7，流速：250μl/min，柱溫：40℃。

質(zhì)譜條件：電噴霧離子源，噴霧電壓（is）：2.6v；離子化溫度350℃，霧化器流量1000l/hr；錐孔氣流量50l/hr；碰撞氣流量為0.15ml/min，碰撞氣氮?dú)?，駐留時(shí)間100ms。

隨后配標(biāo)準(zhǔn)溶液，線性回歸，計(jì)算惡霉靈含量及加標(biāo)回收率。經(jīng)檢測，本實(shí)施例中惡霉靈加標(biāo)回收率為98.1%，rsd值為2.0%。

對比例

本對比例中，在烘干新鮮葉類蔬菜時(shí)，不在堿性氛圍下烘干，而是在烘箱內(nèi)直接烘干至含水量小于10%，其余各步驟均與實(shí)施例1相同，測定結(jié)果：惡霉靈加標(biāo)回收率為91.1%，rsd值為1.8%?？梢姡瑢Ρ壤须m然回收率較高，但烘干條件的差異還是對惡霉靈回收率較大影響。

實(shí)施例2

將葉類蔬菜洗凈，置于烘箱內(nèi)烘干；具體烘干做法是：將葉類蔬菜置于裝有氨水的容器中，葉類蔬菜不與氨水接觸，可采用金屬網(wǎng)墊隔開，然后容器上蓋，留有氣體溢出的出口，烘箱在60℃的溫度下烘1h后，撤去盛有氨水的容器，然后再正常烘干至含水率小于10%。隨后研磨成粉末，取5g加入乙醇10ml浸潤40min，然后再加入ph為12的氫氧化鉀溶液10ml，攪拌后0℃冷藏40min；冷藏后加入乙酸乙酯12ml渦旋振蕩，渦旋振蕩速率2000r/min，時(shí)間4min，得到初提液；隨后將初提液與氯化鈉、醋酸鈉、硫酸鎂和檸檬酸鈉的混合物混合均勻，靜置，取上清液。以質(zhì)量計(jì)，氯化鈉用量是烘干后葉類蔬菜重量的0.3倍，醋酸鈉用量是烘干后葉類蔬菜重量的0.8倍，硫酸鎂用量是烘干后葉類蔬菜重量的5.0倍，檸檬酸鈉用量是烘干后葉類蔬菜重量的0.3倍。

向上述得到的上清液中加有吸附劑活性炭。然后用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜對上清液進(jìn)行檢測。測定條件參加實(shí)施例1，必要時(shí)需做不付出創(chuàng)造性的參數(shù)調(diào)整：

計(jì)算惡霉靈含量及加標(biāo)回收率。經(jīng)檢測，本實(shí)施例中惡霉靈加標(biāo)回收率為97.9%，rsd值為2.6%。

以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對于本技術(shù)領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和變形，這些改進(jìn)和變形也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。