本發(fā)明涉及測量頭足類脂肪酸含量領(lǐng)域，更具體地說，涉及一種快速測定頭足類脂肪酸含量的方法。
背景技術(shù)：
脂肪酸是生物生命活動不可或缺的成分，在生物體內(nèi)占重要比例，對海洋生物而言，其體內(nèi)的某些脂肪酸可以用來示蹤食物沿食物鏈的傳遞過程，脂肪酸的信息可以反應(yīng)攝食者較長時間段內(nèi)的攝食餌料情況，不同脂肪酸組成特征指示不同的餌料種類。海洋生物的脂肪酸組成特征既可以反映出海洋生物在食物網(wǎng)中的營養(yǎng)狀態(tài)，同時還可以反映其攝食生物的選擇性及生活史，因此，海洋生物的脂肪酸組成及應(yīng)用在海洋生態(tài)系統(tǒng)食物網(wǎng)中有廣泛的研究。
據(jù)fao統(tǒng)計，世界頭足類產(chǎn)量由上世紀(jì)70年代100萬噸上升到近年來的430多萬噸，在世界海洋漁業(yè)中的地位越來越重要。頭足類是金槍魚等大型魚類、鳥類和抹香鯨等哺乳動物的重要餌料，在海洋食物網(wǎng)中具有很重要的地位，同時，短生命周期的頭足類種類通常被認(rèn)為是海洋生態(tài)系統(tǒng)變化的指示器。
目前針對頭足類脂肪酸的研究比較缺乏，沒有快速準(zhǔn)確的處理并測定頭足類脂肪酸的方法。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
1．要解決的技術(shù)問題
針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的目前沒有快速準(zhǔn)確的處理并測定頭足類脂肪酸的方法問題，本發(fā)明的目的在于提供一種快速測定頭足類脂肪酸含量的方法，它可以實(shí)現(xiàn)快速準(zhǔn)確的處理并測定頭足類的脂肪酸種類和含量。
2.技術(shù)方案
為解決上述問題，本發(fā)明采用如下的技術(shù)方案。
一種快速測定頭足類脂肪酸含量的方法，包括如下步驟：
（1）清洗一條魷魚，用手術(shù)剪刀取下魷魚胴體上的一塊重量為0.8-1.2g肌肉樣品,將肌肉樣品放入10ml離心管中，并將10ml離心管標(biāo)記，保存于冰柜中備用；
（2）取出10ml離心管中的肌肉樣品，然后用解剖刀和鑷子剔除肌肉上的皮膚；
（3）用超聲波清洗肌肉3分鐘，清洗后用超純水沖洗；
（4）將清洗去污后的肌肉冷凍干燥，研磨成粉末樣品，制備過程應(yīng)避免沾污；
（5）使用天平準(zhǔn)確稱取研磨后的粉末樣品0.25g，置于15ml離心管中；
（6）向裝有粉末樣品的15ml離心管中加入15ml三氯甲烷-甲醇溶液，浸泡時間為20-25h；
（7）15ml離心管離心溶液后收集其上清液，然后用5ml三氯甲烷-甲醇溶液潤洗15ml離心管的下層，15ml離心管再次離心溶液，離心后再次收集上清液，然后向15ml離心管中加入4ml濃度為0.9%的氯化鈉溶液，靜置2小時；
（8）選取圓底燒瓶并進(jìn)行稱重，記錄重量m1，然后取加入氯化鈉的15ml離心管中的下層溶液于圓底燒瓶中并進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到總脂，然后對圓底燒瓶再次稱重，記錄重量m2，總脂含量為m2-m1；
（9）在圓底燒瓶中加入6ml濃度為0.5mol/l的氫氧化鈉-甲醇溶液，混合后連接水浴回流裝置，水浴加熱5-10分鐘；
（10）加入5ml三氯化硼甲醇溶液水浴回流30分鐘；
（11）加入5ml正己烷水浴回流萃取2分鐘；
（12）將圓底燒瓶回流萃取后的溶液冷卻，然后加入10ml飽和氯化鈉溶液，搖晃,靜置分層30分鐘；
（13）用注射器吸取3-5ml的圓底燒瓶上層溶液；用針頭式過濾器對吸取的溶液進(jìn)行過濾，將過濾后的溶液加入樣品瓶中備用，并標(biāo)記樣品瓶；
（14）使用移液槍取2-3ml的樣品瓶中的樣品，然后以1:1的比例加入400mg/l十九烷酸甲酯內(nèi)標(biāo)，然后進(jìn)行脂肪酸測量。
通過向帶有粉末樣品的離心管中加入三氯甲烷-甲醇溶液離心分層，并對離心分層的溶液進(jìn)行蒸發(fā)得到總酯，然后向總酯中加入氫氧化鈉-甲醇溶液并對其進(jìn)行處理，并向處理后的溶液中加入十九烷酸甲酯內(nèi)標(biāo)，然后進(jìn)行脂肪酸測量，利用甲酯化方法對頭足類樣品進(jìn)行快速甲酯化，能夠快速準(zhǔn)確的處理并測定頭足類的脂肪酸種類和含量，該方法油脂提取完全，可以分離所有常見脂肪酸，操作過程簡單，減少使用劇毒物質(zhì)進(jìn)行測量，結(jié)果準(zhǔn)確，可重復(fù)性高。
優(yōu)選地，所述步驟（1）和步驟（2）中使用的手術(shù)剪刀、解剖刀和鑷子使用前利用超聲波清洗消毒，對操作工具進(jìn)行清洗消毒，提高測量準(zhǔn)確度。
優(yōu)選地，所述步驟（3）中對肌肉進(jìn)行超聲波清洗前利用膠帶粘取黏連在肌肉表面的雜質(zhì)，對黏連在肌肉表面的雜質(zhì)進(jìn)行粘取，提高清洗肌肉的效率。
優(yōu)選地，所述步驟（4）對肌肉進(jìn)行冷凍干燥前利用吹風(fēng)機(jī)對其進(jìn)行吹熱風(fēng)去除水分處理，利用吹風(fēng)機(jī)吹散肌肉表面的大部分水分，防止了肌肉表面水分過多，提高了冷凍干燥的效果。
優(yōu)選地，所述步驟（4）冷凍干燥采用真空冷凍干燥機(jī)冷凍干燥，真空冷凍干燥機(jī)干燥效率高，且有效的防止雜質(zhì)污染，提高了測量準(zhǔn)確度。
優(yōu)選地，所述步驟（4）對肌肉樣品進(jìn)行研磨前對研磨機(jī)進(jìn)行清洗消毒，對研磨機(jī)進(jìn)行清洗消毒，避免了雜質(zhì)沾污樣品，提高測量準(zhǔn)確度。
優(yōu)選地，所述步驟（6）和步驟（7）使用的三氯甲烷-甲醇溶液體積比為2:1，體積比為2:1的三氯甲烷-甲醇溶液提取脂肪酸提取的更加完整，提高了測量準(zhǔn)確度。
優(yōu)選地，所述步驟（8）選取的圓底燒瓶在進(jìn)行空瓶稱重前進(jìn)行干燥處理，干燥有效的去除了圓底燒瓶空瓶時的水分，使得測量的m1更加準(zhǔn)確，提高測量準(zhǔn)確度。
優(yōu)選地，所述步驟（8）的圓底燒瓶蒸發(fā)采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行蒸發(fā)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀能夠進(jìn)行勻速旋轉(zhuǎn)，蒸發(fā)效率高，提高了測量效率。
優(yōu)選地，所述步驟（14）對脂肪酸進(jìn)行測定時，利用gcmsd測定，色譜柱為hp-88，取樣品瓶中的脂肪酸甲脂樣品1-2ml放入gcmsd，測樣升溫程序為初始125℃，以8℃/min升到145℃，保持26min，以2℃/min升到220℃，保持1min，再以1℃/min升到227℃，保持1min，gcmsd進(jìn)樣口溫度250℃，輔助加熱器溫度280℃；分流比20:1；載氣為氦氣，利用gcmsd測定測量效率高，測量準(zhǔn)確度高。
3.有益效果
相比于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的優(yōu)點(diǎn)在于：
（1）本方案的通過向帶有粉末樣品的離心管中加入三氯甲烷-甲醇溶液離心分層，并對離心分層的溶液進(jìn)行蒸發(fā)得到總酯，然后向總酯中加入氫氧化鈉-甲醇溶液并對其進(jìn)行處理，并向處理后的溶液中加入十九烷酸甲酯內(nèi)標(biāo)，然后進(jìn)行脂肪酸測量，利用甲酯化方法對頭足類樣品進(jìn)行快速甲酯化，能夠快速準(zhǔn)確的處理并測定頭足類的脂肪酸種類和含量，該方法油脂提取完全，可以分離所有常見脂肪酸，操作過程簡單，減少使用劇毒物質(zhì)進(jìn)行測量，結(jié)果準(zhǔn)確，可重復(fù)性高。
（2）對操作工具進(jìn)行清洗消毒，提高測量準(zhǔn)確度。
（3）利用膠帶粘取黏連在肌肉表面的雜質(zhì)，對黏連在肌肉表面的雜質(zhì)進(jìn)行粘取，提高清洗肌肉的效率。
（4）利用吹風(fēng)機(jī)吹散肌肉表面的大部分水分，防止了肌肉表面水分過多，提高了冷凍干燥的效果。
（5）真空冷凍干燥機(jī)干燥效率高，且有效的防止雜質(zhì)污染，提高了測量準(zhǔn)確度。
（6）對研磨機(jī)進(jìn)行清洗消毒，避免了雜質(zhì)沾污樣品，提高測量準(zhǔn)確度。
（7）體積比為2:1的三氯甲烷-甲醇溶液提取脂肪酸提取的更加完整，提高了測量準(zhǔn)確度。
（8）干燥有效的去除了圓底燒瓶空瓶時的水分，使得測量的m1更加準(zhǔn)確，提高測量準(zhǔn)確度。
（9）旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀能夠進(jìn)行勻速旋轉(zhuǎn)，蒸發(fā)效率高，提高了測量效率。
（10）利用gcmsd測定測量效率高，測量準(zhǔn)確度高。
具體實(shí)施方式
下面將結(jié)合本發(fā)明實(shí)施例；對本發(fā)明實(shí)施例中的技術(shù)方案進(jìn)行清楚、完整地描述；顯然；所描述的實(shí)施例僅僅是本發(fā)明一部分實(shí)施例；而不是全部的實(shí)施例?；诒景l(fā)明中的實(shí)施例；本領(lǐng)域普通技術(shù)人員在沒有做出創(chuàng)造性勞動前提下所獲得的所有其他實(shí)施例；都屬于本發(fā)明保護(hù)的范圍。
實(shí)施例1：
一種快速測定頭足類脂肪酸含量的方法，包括如下步驟：
（1）清洗一條魷魚，用手術(shù)剪刀取下魷魚胴體上的一塊重量為0.8-1.2g肌肉樣品,將肌肉樣品放入10ml離心管中，并將10ml離心管標(biāo)記，保存于冰柜中備用，手術(shù)剪刀利用超聲波清洗消毒，提高了測量準(zhǔn)確度；
（2）取出10ml離心管中的肌肉樣品，然后用解剖刀和鑷子剔除肌肉上的皮膚，剔除皮膚上的黑色素等雜質(zhì)，避免了黑色素影響測試結(jié)果，提高測量準(zhǔn)確度，解剖刀和鑷子利用超聲波清洗消毒，提高了測量準(zhǔn)確度；
（3）用超聲波清洗肌肉3分鐘，清洗后用超純水沖洗，對肌肉進(jìn)行超聲波清洗前利用膠帶粘取黏連在肌肉表面的雜質(zhì)，對黏連在肌肉表面的雜質(zhì)進(jìn)行粘取，提高清洗肌肉的效率，超聲波清洗的肌肉較干凈，而且快，超純水清洗去除雜質(zhì)干擾，避免引入污染，提高測量準(zhǔn)確度；
（4）將清洗去污后的肌肉冷凍干燥，研磨成粉末樣品，制備過程應(yīng)避免沾污，對肌肉進(jìn)行冷凍干燥前利用吹風(fēng)機(jī)對其進(jìn)行吹熱風(fēng)去除水分處理，利用吹風(fēng)機(jī)吹散肌肉表面的大部分水分，防止了肌肉表面水分過多，提高了冷凍干燥的效果，冷凍干燥后的肌肉便于進(jìn)行研磨，冷凍干燥采用真空冷凍干燥機(jī)冷凍干燥，真空冷凍干燥機(jī)干燥效率高，且有效的防止雜質(zhì)污染，提高了測量準(zhǔn)確度，對肌肉樣品進(jìn)行研磨前對研磨機(jī)進(jìn)行清洗消毒，對研磨機(jī)進(jìn)行清洗消毒，避免了雜質(zhì)沾污樣品，提高測量準(zhǔn)確度；
（5）使用天平準(zhǔn)確稱取研磨后的粉末樣品0.25g，置于15ml離心管中；
（6）向裝有粉末樣品的15ml離心管中加入15ml三氯甲烷-甲醇溶液，浸泡時間為20-25h，三氯甲烷-甲醇溶液體積比為2:1，體積比為2:1的三氯甲烷-甲醇溶液提取脂肪酸提取的更加完整，提高了測量準(zhǔn)確度；
（7）15ml離心管離心溶液后收集其上清液，然后用5ml三氯甲烷-甲醇溶液潤洗15ml離心管的下層，15ml離心管再次離心溶液，離心后再次收集上清液，然后向15ml離心管中加入4ml濃度為0.9%的氯化鈉溶液，靜置2小時，三氯甲烷-甲醇溶液體積比為2:1，體積比為2:1的三氯甲烷-甲醇溶液提取脂肪酸提取的更加完整，提高了測量準(zhǔn)確度；
（8）選取圓底燒瓶并進(jìn)行稱重，記錄重量m1，然后取加入氯化鈉的15ml離心管中的下層溶液于圓底燒瓶中并進(jìn)行旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)得到總脂，然后對圓底燒瓶再次稱重，記錄重量m2，總脂含量為m2-m1，圓底燒瓶在進(jìn)行空瓶稱重前進(jìn)行干燥處理，干燥有效的去除了圓底燒瓶空瓶時的水分，使得測量的m1更加準(zhǔn)確，提高測量準(zhǔn)確度，圓底燒瓶蒸發(fā)采用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀進(jìn)行蒸發(fā)，旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀能夠進(jìn)行勻速旋轉(zhuǎn)，蒸發(fā)效率高，提高了測量效率；
（9）在圓底燒瓶中加入6ml濃度為0.5mol/l的氫氧化鈉-甲醇溶液，混合后連接水浴回流裝置，水浴加熱5-10分鐘；
（10）加入5ml三氯化硼甲醇溶液水浴回流30分鐘；
（11）加入5ml正己烷水浴回流萃取2分鐘；
（12）將圓底燒瓶回流萃取后的溶液冷卻，然后加入10ml飽和氯化鈉溶液，搖晃,靜置分層30分鐘；
（13）用注射器吸取3-5ml的圓底燒瓶上層溶液，上層為正己烷層，用針頭式過濾器對吸取的溶液進(jìn)行過濾，將過濾后的溶液加入樣品瓶中備用，并標(biāo)記樣品瓶；
（14）使用移液槍取2-3ml的樣品瓶中的樣品，然后以1:1的比例加入400mg/l十九烷酸甲酯內(nèi)標(biāo)，然后進(jìn)行脂肪酸測量，對脂肪酸進(jìn)行測定時，利用gcmsd測定，色譜柱為hp-88，取樣品瓶中的脂肪酸甲脂樣品1-2ml放入gcmsd，測樣升溫程序為初始125℃，以8℃/min升到145℃，保持26min，以2℃/min升到220℃，保持1min，再以1℃/min升到227℃，保持1min，進(jìn)樣口溫度250℃，輔助加熱器溫度280℃；gcmsd分流比20:1；載氣為氦氣，利用gcmsd測定測量效率高，測量準(zhǔn)確度高。
通過向帶有粉末樣品的離心管中加入三氯甲烷-甲醇溶液離心分層，并對離心分層的溶液進(jìn)行蒸發(fā)得到總酯，然后向總酯中加入氫氧化鈉-甲醇溶液并對其進(jìn)行處理，并向處理后的溶液中加入十九烷酸甲酯內(nèi)標(biāo)，然后進(jìn)行脂肪酸測量，利用甲酯化方法對頭足類樣品進(jìn)行快速甲酯化，能夠快速準(zhǔn)確的處理并測定頭足類的脂肪酸種類和含量，該方法油脂提取完全，可以分離所有常見脂肪酸，操作過程簡單，減少使用劇毒物質(zhì)進(jìn)行測量，結(jié)果準(zhǔn)確，可重復(fù)性高。
以上所述；僅為本發(fā)明較佳的具體實(shí)施方式；但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不局限于此；任何熟悉本技術(shù)領(lǐng)域的技術(shù)人員在本發(fā)明揭露的技術(shù)范圍內(nèi)；根據(jù)本發(fā)明的技術(shù)方案及其改進(jìn)構(gòu)思加以等同替換或改變；都應(yīng)涵蓋在本發(fā)明的保護(hù)范圍內(nèi)。