本發(fā)明涉及化學(xué)分析，具體而言，涉及用于血清或血漿中脂溶性維生素提取的內(nèi)標(biāo)溶液、用于檢測的前處理試劑和前處理方法。

背景技術(shù)：

1、脂溶性維生素是人體保持最佳新陳代謝狀態(tài)所必需的微量營養(yǎng)素,主要包括維生素a、維生素d、維生素e。隨著研究的深入,脂溶性維生素的作用早已不局限于人們的初步認(rèn)識(shí),比如夜盲癥[維生素a(va)缺乏]、骨軟化癥(維生素d缺乏)、氧化應(yīng)激異常[維生素e(ve)缺乏]等,而是發(fā)現(xiàn)脂溶性維生素的異常變化與越來越多的疾病及其他生理狀態(tài)有關(guān)。有研究表明va可促進(jìn)免疫系統(tǒng)發(fā)育,增強(qiáng)免疫能力,其含量低甚至與成人早期肥胖有關(guān)；維生素d在某些精神性疾病和糖尿病的預(yù)防方面有一定作用；適宜濃度的ve對癌癥預(yù)防和糖尿病腎病、非酒精性脂肪肝的治療有所幫助。

2、現(xiàn)有的高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜檢測血清中脂溶性維生素的樣品前處理方法主要是采用液液提取和固液萃取方法，蛋白沉淀方法等。

3、液液提取和固液萃取方法的前處理方法需經(jīng)稀釋、多次萃取、旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)、氮?dú)獯蹈?、凈化等多個(gè)步驟，過程繁瑣，需大量的人工操作，而且液液提取難以實(shí)現(xiàn)高通量和自動(dòng)化，固液萃取雖然能實(shí)現(xiàn)高通量，但其中樣品萃取過程主要依靠sle板來完成，耗材成本高。

4、目前也有不少采用蛋白沉淀法進(jìn)行血清和血漿中脂溶性維生素樣品測定的樣品前處理的相關(guān)專利申請，但是普遍存在參考物質(zhì)的檢測準(zhǔn)確率不高，回收率不高，繼而導(dǎo)致靈敏度偏低的問題，且容易堵塞造成管路堵塞，或色譜柱堵塞等問題，有些甚至在蛋白沉淀后，還需要進(jìn)一步萃取，才能進(jìn)行后續(xù)的檢測分析，使臨床檢測需要更多的人工操作，不利于臨床的推廣和使用。

5、鑒于此，特提出本發(fā)明。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

1、本發(fā)明的目的在于提供用于血清或血漿中脂溶性維生素提取的內(nèi)標(biāo)溶液、用于檢測的前處理試劑和前處理方法。本發(fā)明實(shí)施例提供的內(nèi)標(biāo)溶液能夠提升參考物質(zhì)的準(zhǔn)確率和回收率，繼而提升檢測的靈敏度。

2、本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種用于血清或血漿中脂溶性維生素提取的內(nèi)標(biāo)溶液，所述內(nèi)標(biāo)溶液包括甲醇、乙腈、異丙醇和改良劑，所述異丙醇、所述甲醇和所述乙腈的體積比為：(28-32)％：(5-20)％：(50-65)％，所述改良劑在所述內(nèi)標(biāo)溶液的濃度為40-60mmol/l。

4、在可選的實(shí)施方式中，所述異丙醇、所述甲醇和所述乙腈的體積比為：30％：(5-20)％：(50-65)％。

5、在可選的實(shí)施方式中，所述改良劑選自酸銨類物質(zhì)，優(yōu)選為甲酸銨或乙酸銨。

6、在可選的實(shí)施方式中，所述內(nèi)標(biāo)溶液還包括抗氧化劑。

7、在可選的實(shí)施方式中，所述抗氧化劑在所述內(nèi)標(biāo)溶液的濃度為2-7mg/ml；

8、優(yōu)選地，所述抗氧化劑選自維生素c、茶多酚、2,6二叔丁基對甲酚和丁基羥基茴香醚中的任意一種或至少兩種的組合。

9、第二方面，本發(fā)明提供一種用于血清或血漿中脂溶性維生素檢測的前處理試劑，其包括蛋白沉淀劑和前述實(shí)施方式所述的內(nèi)標(biāo)溶液。

10、在可選的實(shí)施方式中，所述蛋白沉淀劑選自銨鹽或鹵代羧酸；更優(yōu)選為硫酸鋅、三氯乙酸、硫酸銨和氯化銨中的任意一種或至少兩種的組合；

11、優(yōu)選地，所述蛋白沉淀劑以溶劑的形式添加；

12、優(yōu)選地，所述蛋白沉淀劑形成的溶劑的濃度為0.1-0.3mol/l，所述蛋白沉淀劑形成的溶劑與所述內(nèi)標(biāo)溶液的體積比為(1:25)-(1:50)。

13、第三方面，本發(fā)明提供一種血清或血漿中脂溶性維生素檢測的前處理方法，包括：將樣品與前述實(shí)施方式所述的用于血清或血漿中脂溶性維生素檢測的前處理試劑混合進(jìn)行前處理。

14、在可選的實(shí)施方式中，所述脂溶性維生素包括va、25(oh)vd2、25(oh)vd3和ve中的至少一種。

15、本發(fā)明具有以下有益效果：本發(fā)明實(shí)施例提供的內(nèi)標(biāo)溶液通過采用甲醇、異丙醇、乙腈和改良劑，并限定其含量，繼而提升參考物質(zhì)的準(zhǔn)確率和回收率，繼而提升檢測的靈敏度。

技術(shù)特征：

1.一種用于血清或血漿中脂溶性維生素提取的內(nèi)標(biāo)溶液，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)溶液包括甲醇、乙腈、異丙醇和改良劑，所述異丙醇、所述甲醇和所述乙腈的體積比為：(28-32)％：(5-20)％：(50-65)％，所述改良劑在所述內(nèi)標(biāo)溶液的濃度為40-60m?mol/l。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的內(nèi)標(biāo)溶液，其特征在于，所述異丙醇、所述甲醇和所述乙腈的體積比為：30％：(5-20)％：(50-65)％。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的內(nèi)標(biāo)溶液，其特征在于，所述改良劑選自酸銨類物質(zhì)，優(yōu)選為甲酸銨或乙酸銨。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的內(nèi)標(biāo)溶液，其特征在于，所述內(nèi)標(biāo)溶液還包括抗氧化劑。

5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的內(nèi)標(biāo)溶液，其特征在于，所述抗氧化劑在所述內(nèi)標(biāo)溶液的濃度為2-7mg/ml；

6.一種用于血清或血漿中脂溶性維生素檢測的前處理試劑，其特征在于，其包括蛋白沉淀劑和權(quán)利要求1所述的內(nèi)標(biāo)溶液。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的前處理試劑，其特征在于，所述蛋白沉淀劑選自銨鹽或鹵代羧酸；更優(yōu)選為硫酸鋅、三氯乙酸、硫酸銨和氯化銨中的任意一種或至少兩種的組合；

8.一種血清或血漿中脂溶性維生素檢測的前處理方法，其特征在于，包括：將樣品與權(quán)利要求6所述的用于血清或血漿中脂溶性維生素檢測的前處理試劑混合進(jìn)行前處理。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的血清或血漿中脂溶性維生素檢測的前處理方法，其特征在于，所述脂溶性維生素包括va、25(oh)vd2、25(oh)vd3和ve中的至少一種。

10.根據(jù)權(quán)利要求8所述的血清或血漿中脂溶性維生素檢測的前處理方法，其特征在于，檢測所述血清或血漿中脂溶性維生素的方法為高效液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜。

技術(shù)總結(jié)
本發(fā)明涉及化學(xué)分析技術(shù)領(lǐng)域，具體而言，涉及用于血清或血漿中脂溶性維生素提取的內(nèi)標(biāo)溶液、用于檢測的前處理試劑和前處理方法。用于血清或血漿中脂溶性維生素提取的內(nèi)標(biāo)溶液包括甲醇、乙腈、異丙醇和改良劑，所述異丙醇、所述甲醇和所述乙腈的體積比為：(28?32)％：(5?20)％：(50?65)％，所述改良劑在所述內(nèi)標(biāo)溶液的濃度為40?60mmol/L。該內(nèi)標(biāo)溶液能夠提升參考物質(zhì)的準(zhǔn)確率和回收率，繼而提升檢測的靈敏度。

技術(shù)研發(fā)人員：何培培,陳麗雪,張歡
受保護(hù)的技術(shù)使用者：瑞萊譜（杭州）醫(yī)療科技有限公司
技術(shù)研發(fā)日：
技術(shù)公布日：2024/11/14