乳癌的鑒定方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及新型的乳癌標(biāo)志物，及檢測(cè)該標(biāo)志物并根據(jù)其結(jié)果來(lái)鑒定（診斷、篩 查）乳癌的方法，及用于該鑒定的試劑盒。
【背景技術(shù)】
[0002] 目前，作為乳癌的診斷方法，有借助檢測(cè)體液、血液等試樣中的乳癌標(biāo)志物的診 斷，或借助乳房造影術(shù)的診斷。
[0003] 就通過(guò)檢測(cè)乳癌標(biāo)志物診斷乳癌的方法而言，是將癌胚抗原（Carcinoembryonic antigen，CEA)作為標(biāo)志物，用診斷試劑盒等測(cè)定試樣中的量后，根據(jù)其結(jié)果來(lái)診斷乳癌。然 而，該方法在顯示乳癌特異性的精確度方面有欠缺，還沒有成為實(shí)用性的乳癌確定診斷。
[0004] 并且，在日本特開2002-131322號(hào)公報(bào)（專利文獻(xiàn)1)中公開了將受試者的乳腺導(dǎo) 管液用作為試樣，通過(guò)檢測(cè)乳腺導(dǎo)管液中的成分來(lái)鑒定具有乳癌或乳腺癌前病變的患者的 方法。然而，該文獻(xiàn)中雖然記載了包括細(xì)胞外基質(zhì)蛋白或載脂蛋白在內(nèi)的多個(gè)候選標(biāo)志物， 但只是羅列了候選標(biāo)志物，并未進(jìn)行乳癌患者乳腺導(dǎo)管液中的成分分析。因此，根據(jù)專利文 獻(xiàn)1的公開內(nèi)容，并不能確定所列舉的多個(gè)標(biāo)志物作為乳癌標(biāo)志物是否真正有用的問(wèn)題。
[0005] 并且，在日本特表2008-502891號(hào)公報(bào)（專利文獻(xiàn)2)中記載了以下技術(shù)方案，即， 用LC-ESI-MS/MS(液相色譜-電噴射離子化-串聯(lián)質(zhì)譜分析）分析乳癌患者的組織片，選 擇FTOQ (Peroxiredoxin-1，過(guò)氧化物還原酶1)作為乳癌的候選標(biāo)志物，及對(duì)乳癌患者的血 清中的PXD1進(jìn)行了檢測(cè)。并且，對(duì)于通過(guò)并用roxi和其他標(biāo)志物來(lái)診斷乳癌的問(wèn)題也做了 提示。然而，對(duì)于顯示這些標(biāo)志物是乳癌特異性的證據(jù)，例如，對(duì)于來(lái)自非乳癌受試者的試 樣中的這些標(biāo)志物的測(cè)定結(jié)果等沒有做公開。因此，對(duì)于roxi作為乳癌標(biāo)志物是否有用， 及其與其他標(biāo)志物的組合對(duì)于乳癌的診斷是否有用的問(wèn)題并沒有得到確認(rèn)。
[0006] 并且，就使用乳房造影術(shù)的乳癌的診斷方法而言，會(huì)給檢查的被檢查者（受試者） 帶來(lái)不少精神及肉體上的痛苦。并且，由于乳腺密度高的青年人群的造影困難，因此還沒有 成為精確度高的乳癌診斷技術(shù)。
[0007] 此外，近年來(lái)，有關(guān)生物標(biāo)志物（蛋白質(zhì)/多肽、脂質(zhì)、糖鏈等）的探索的研宄變得 活躍，尤其是與疾病相關(guān)的利用各種體液的蛋白質(zhì)組學(xué)等系統(tǒng)性分析研宄得以普遍展開。 通過(guò)這些分析，能夠?qū)θ∽陨矬w的微量試樣進(jìn)行高靈敏度且精確的分析。在F. Mannello et al. Expert Rev.Proteomics 6,43-60(2009)(非專利文獻(xiàn)1)中，對(duì)于利用蛋白質(zhì)組分析 方法進(jìn)行乳癌標(biāo)志物的研宄的情況進(jìn)行了介紹。然而，就作為乳癌標(biāo)志物而言，目前還沒有 確定乳癌診斷精確度高的乳癌標(biāo)志物。
[0008] 現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)
[0009] 專利文獻(xiàn)
[0010] 專利文獻(xiàn)1 :日本特開2002-131322號(hào)公報(bào)
[0011] 專利文獻(xiàn)2 :日本特表2008-502891號(hào)公報(bào)
[0012] 非專利文獻(xiàn)
[0013]非專利文獻(xiàn)1 :F. Mannello et al. Expert Rev. Proteomics 6, 43-60 (2009)

【發(fā)明內(nèi)容】

[0014] 發(fā)明要解決的問(wèn)題
[0015] 由于現(xiàn)有的乳癌診斷方法存在如上所述的問(wèn)題，乳癌檢查、受診率得不到提高，延 遲了早期乳癌及乳癌的診斷，其結(jié)果，乳癌罹患率及乳癌死亡率的降低變得困難，并成為了 大的社會(huì)問(wèn)題。為了解決這些問(wèn)題，目前對(duì)于用更為低侵襲且精確度高的乳癌標(biāo)志性蛋白 質(zhì)作為乳癌診斷的指標(biāo)的、新型的乳癌診斷技術(shù)的開發(fā)提出了要求。
[0016] 本發(fā)明的目的在于提供對(duì)于乳癌的檢測(cè)有用的新型的乳癌標(biāo)志物，及通過(guò)檢測(cè)該 乳癌標(biāo)志物得以實(shí)現(xiàn)的精確度高的、新型的乳癌鑒定方法。
[0017] 解決問(wèn)題的方法
[0018] 出于解決上述問(wèn)題的目的，本發(fā)明采用了以下的技術(shù)方案。
[0019] 1) -種乳癌標(biāo)志物，該乳癌標(biāo)志物選自由羧肽酶N2 (Carboxypeptidase N subunit 2)、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1、血清淀粉樣蛋白P成分、伴肌動(dòng)蛋白、補(bǔ)體成分C8a鏈、載 脂蛋白L1、黃素還原酶、過(guò)氧化氫酶、碳酸酐酶2(Carbonic anhydrase 2)、載脂蛋白C-I、 核孔糖蛋白210、超氧化物歧化酶[Cu-Zn] (Superoxide dismutase[Cu_Zn])、二磷酸甘油酸 變位酶（Bisphosphoglycerate mutase)、碳酸酐酶 1 (Carbonic anhydrase 1)、及過(guò)氧化物 還原酶2(Peroxiredoxin_2)構(gòu)成的群組。
[0020] 2) -種乳癌的鑒定方法，該方法檢測(cè)在由試樣中的羧肽酶N2、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1、 血清淀粉樣蛋白P成分、伴肌動(dòng)蛋白、補(bǔ)體成分C8 a鏈、載脂蛋白L1、黃素還原酶、過(guò)氧化 氫酶、碳酸酐酶2(Carbonic anhydrase 2)、載脂蛋白C-I、核孔糖蛋白210、超氧化物歧化 酶[Cu_Zn] (Superoxide dismutase[Cu_Zn])、二磷酸甘油酸變位酶、碳酸酐酶 1 (Carbonic anhydrase 1)、及過(guò)氧化物還原酶2構(gòu)成的群組中任意選擇的一種以上的乳癌標(biāo)志物，根 據(jù)其結(jié)果進(jìn)行鑒定。
[0021] 3) -種試劑盒，該試劑盒是為了鑒定乳癌而對(duì)乳癌標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)的試劑盒，包 含對(duì)選自由羧肽酶N2、細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1、血清淀粉樣蛋白P成分、伴肌動(dòng)蛋白、補(bǔ)體成分 C8a鏈、載脂蛋白L1、黃素還原酶、過(guò)氧化氫酶、碳酸酐酶2(Carbonic anhydrase 2)、載脂 蛋白 C-I、核孔糖蛋白 210、超氧化物歧化酶[Cu-Zn] (Superoxide dismutase[Cu_Zn])、二 磷酸甘油酸變位酶、碳酸酐酶1 (Carbonic anhydrase 1)、及過(guò)氧化物還原酶2構(gòu)成的群組 中的乳癌標(biāo)志物進(jìn)行檢測(cè)的試劑。
[0022] S卩，為了確立解決上述問(wèn)題的、乳癌診斷的精確度高的乳癌標(biāo)志物及使用該標(biāo)志 物的乳癌的鑒定方法，本發(fā)明人進(jìn)行了潛心研宄，從而將可以直接獲得乳癌發(fā)病部位、即乳 管內(nèi)的信息的乳頭分泌液（Nipple discharge, ND)作為試樣，通過(guò)應(yīng)用借助了最新的二維 液相色譜（LC)/質(zhì)量分析（MS)系統(tǒng)、即納米LC-ESI-MS/MS的蛋白質(zhì)組學(xué)，對(duì)含有多種成分 的乳頭分泌液中的成分進(jìn)行了分析。隨后，將來(lái)自乳癌患者的乳頭分泌液和來(lái)自非乳癌受 試者的乳頭分泌液用作為試樣，通過(guò)比較納米LC-ESI-MS/MS的結(jié)果，篩選出了有望作為乳 癌標(biāo)志物的新的標(biāo)志物。進(jìn)而發(fā)現(xiàn)，將這些標(biāo)志物用作為指標(biāo)時(shí)，能夠高精確度地鑒定乳 癌，從而完成了本發(fā)明。
[0023] 發(fā)明的效果
[0024] 利用了本發(fā)明的乳癌標(biāo)志物的鑒定方法使精確度更高的乳癌鑒定（診斷、篩查） 成為了可能。并且，作為本發(fā)明的乳癌標(biāo)志物，例如，在乳頭分泌液中即可發(fā)現(xiàn)，因此，能夠 非侵襲性地且簡(jiǎn)便地鑒定（診斷、篩查）乳癌。
【附圖說(shuō)明】
[0025] 圖1示出了對(duì)實(shí)施例1中得到的、來(lái)自乳癌患者及非乳癌受試者的試樣中的各種 蛋白質(zhì)成分進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果、及據(jù)此得出的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，其中，1)表示羧肽酶N2的測(cè)定結(jié)果， 2)表示細(xì)胞外基質(zhì)蛋白1的測(cè)定結(jié)果，3)表示對(duì)血清淀粉樣蛋白P成分的測(cè)定結(jié)果。
[0026] 圖2示出了對(duì)實(shí)施例1中得到的、來(lái)自乳癌患者及非乳癌受試者的試樣中的各種 蛋白質(zhì)成分進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果、及據(jù)此得出的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，其中，1)表示伴肌動(dòng)蛋白的測(cè)定結(jié) 果，2)表示補(bǔ)體成分C8 a鏈的測(cè)定結(jié)果，3)表示載脂蛋白L1的測(cè)定結(jié)果。
[0027] 圖3示出了對(duì)實(shí)施例1中得到的、來(lái)自乳癌患者及非乳癌受試者的試樣中的各種 蛋白質(zhì)成分進(jìn)行檢測(cè)的結(jié)果、及據(jù)此得出的統(tǒng)計(jì)結(jié)果，其中，1)表示黃素還原酶的測(cè)定結(jié) 果，2)表示過(guò)氧化氫酶的測(cè)定結(jié)果，3)表示碳酸酐酶2 (Carbonic anhydrase 2)的測(cè)定結(jié) 果。
[0028] 圖4示出了對(duì)實(shí)施例1中得到的、來(lái)自乳