用于治療和診斷乳腺癌的方法和組合物的制作方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明提供包括但不限于乳腺癌的癌癥的診斷、預(yù)后和治療方法。具體地，本發(fā)明提供了乳腺癌相關(guān)的標(biāo)志基因的表達(dá)譜作為診斷和治療的靶標(biāo)。本發(fā)明進(jìn)一步公開(kāi)了通過(guò)測(cè)量一個(gè)以上標(biāo)志基因的表達(dá)水平確定乳腺癌是否發(fā)展的方法。
【專(zhuān)利說(shuō)明】用于治療和診斷乳腺癌的方法和組合物
[0001]本申請(qǐng)要求2011年8月16日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)61/524，170以及2011年10月31日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)61/553，706的優(yōu)先權(quán)，兩臨時(shí)申請(qǐng)均整體以引用方式并入。
發(fā)明領(lǐng)域
[0002]本發(fā)明的領(lǐng)域涉及癌癥以及癌癥的診斷和治療。
[0003]背景
[0004]癌癥的早期檢測(cè)可影響治療結(jié)果和疾病進(jìn)展。通常，癌癥檢測(cè)依賴(lài)于得自活組織檢查、X光、CAT掃描、NMR等的診斷信息。這些程序可能是侵入性、耗時(shí)而又昂貴的。此外，它們就靈敏性和特異性而言存在局限。在癌癥診斷領(lǐng)域存在對(duì)高特異性、高靈敏性、快速、低成本和相對(duì)非侵入性的癌癥診斷方法的需要。在下文所述的本發(fā)明的各種實(shí)施方案滿(mǎn)足此需要以及在癌癥診斷和治療領(lǐng)域中的其他需要。
發(fā)明概要
[0005]本公開(kāi)的實(shí)施方案提供諸如乳腺癌的癌癥的診斷、預(yù)后和治療方法。其他實(shí)施方案提供與諸如乳腺癌的癌癥的診斷、預(yù)后和治療相關(guān)的組合物。
[0006]在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供檢測(cè)受試者中的乳腺癌的方法，其包括:a)從受試者獲得樣品山)將得自受試者的樣品與檢測(cè)由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的一種或多種標(biāo)記物的一種或多種試劑接觸；c)將非癌性細(xì)胞與得自b)的所述一種或多種試劑接觸；以及d)將得自受試者的樣品中的標(biāo)記物表達(dá)水平與非癌性細(xì)胞中的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與非癌性細(xì)胞相比樣品中標(biāo)記物的表達(dá)水平更高表明受試者患有乳腺癌。
[0007]在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供檢測(cè)受試者中的乳腺癌的方法，其包括:a)從受試者獲得樣品山)將得自受試者的樣品與檢測(cè)表1中所列標(biāo)記物中的至少一種的表達(dá)的一種或多種試劑接觸；c)將非癌性細(xì)胞(例如得自乳腺組織的非癌性細(xì)胞)與得自b)的所述一種或多種試劑接觸；以及d)將得自受試者的樣品中表1所列標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平與非癌性細(xì)胞中表1所列標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與非癌性細(xì)胞相比在樣品中表1所列標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平更高表明受試者患有乳腺癌。
[0008]在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供檢測(cè)受試者中的乳腺癌的方法，其包括:a)從受試者獲得樣品；b)將得自受試者的樣品與檢測(cè)由SEQ ID NO:1-70或其補(bǔ)體編碼的標(biāo)記物中至少一種的表達(dá)的一種或多種試劑接觸；c)將非癌性細(xì)胞(例如得自乳腺組織的非癌性細(xì)胞)與得自b)的所述一種或多種試劑接觸；以及d)將得自受試者的樣品中由SEQ IDNO:1-70或其補(bǔ)體編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平與非癌性細(xì)胞中由SEQ ID NO:1-70或其補(bǔ)體編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與非癌性細(xì)胞相比在樣品中表1所列標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平更高表明受試者患有乳腺癌。
[0009]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供檢測(cè)受試者中的乳腺癌的方法，包括:a)從受試者獲得樣品；b)將得自受試者的樣品與檢測(cè)由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、COL1A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、⑶L11A1、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPU GFRAU LOC647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、LOC727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145、LOC727941 (XR_037165.1)、NATl、NXPHl、SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428, L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU 或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)的一種或多種試劑接觸；c)將非癌性細(xì)胞(例如得自乳腺組織的非癌性細(xì)胞)與得自b)的所述一種或多種試劑接觸；以及d)將從受試者獲得的樣品中由選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、C0L10Al、MMPll、DSCR6、CYP4Zl、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、COLlIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHl、SERHL2、SYCP2、D59687、CYP41、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平與非癌性細(xì)胞中由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HISTlH4H、ASCLl、C0L10Al、MMPll、DSCR6、CYP4Zl、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、 FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、COLlIAU DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941(XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHl、SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428,L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與非癌性細(xì)胞相比在樣品中由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、⑶LIIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145, L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1A1、NMU或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平更高表明受試者患有乳腺癌。
[0010] 在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供檢測(cè)樣品中的乳腺癌細(xì)胞的方法，包括:a)從受試者獲得樣品山)將在a)中得到的樣品與檢測(cè)由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、COL1A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、⑶L11A1、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPU GFRAU L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、LOC727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145、LOC727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428, L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU 或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)的一種或多種試劑接觸；c)將非癌性細(xì)胞(例如得自乳腺組織的非癌性細(xì)胞)與得自b)的所述一種或多種試劑接觸；以及d)將在 a)中得到的樣品中由選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLUC0L10Al、MMPll、DSCR6、CYP4Zl、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、COLlIAU DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428,L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平與非癌性細(xì)胞中由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HISTlH4H、ASCLl、C0L10Al、MMPll、DSCR6、CYP4Zl、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、 FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、COLlIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPU GFRAU L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941(XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHl, SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與非癌性細(xì)胞相比在樣品中由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、⑶LIIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATl、NXPHl、SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、N0S1AP、UGT2B28、GRM4、FU30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平更高表明樣品含有乳腺癌細(xì)胞。樣品可以為體外樣品或體內(nèi)樣品，或衍生自體內(nèi)樣品。
[0011]至于在前述段落中所述的實(shí)施方案，樣品可以為下文所述的任何樣品，例如體液，諸如血液、血清或尿液。樣品可以為細(xì)胞樣品或細(xì)胞樣品的提取物。試劑可以為特異性結(jié)合到由癌細(xì)胞表達(dá)的一種或多種蛋白或由細(xì)胞表達(dá)的一種或多種核酸的一種或多種分子。例如，試劑可以為特異性結(jié)合到由下文確定的標(biāo)記基因之一表達(dá)的蛋白的蛋白，諸如抗體。試劑可以為雜交到由癌細(xì)胞表達(dá)的核酸的一種或多種核酸。由癌細(xì)胞表達(dá)的核酸可以為RNA分子，例如mRNA分子。雜交到由癌細(xì)胞表達(dá)的核酸的核酸分子可以為DNA分子,諸如DNA探針。
[0012]在另外其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供可用于從非癌性細(xì)胞中區(qū)分乳腺癌細(xì)胞的物質(zhì)組合物，其包含特異性結(jié)合到與非癌細(xì)胞相比在乳腺癌細(xì)胞上以較高水平表達(dá)的分子的一種或多種分子。例如，該組合物可包含結(jié)合到與非癌細(xì)胞相比由癌細(xì)胞以較高水平表達(dá)的一種或多種分子的蛋白。又如，該組合物可包含結(jié)合到與非癌細(xì)胞相比由乳腺癌細(xì)胞以較高水平表達(dá)的一種或多種分子的核酸。
[0013]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含諸如抗體的蛋白的物質(zhì)組合物，該蛋白特異性結(jié)合到由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子，該分子選自由表1所列的序列編碼的標(biāo)記物。由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子可由乳腺癌細(xì)胞以比非癌性細(xì)胞(諸如非癌性乳腺組織細(xì)胞)表達(dá)的水平更高的水平表達(dá)。
[0014]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含諸如抗體的蛋白的物質(zhì)組合物，該蛋白特異性結(jié)合到由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子，該分子選自由SEQ ID NO:1-70編碼的標(biāo)記物。由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子可由乳腺癌細(xì)胞以比非癌性細(xì)胞(諸如非癌性乳腺組織細(xì)胞)表達(dá)的水平更高的水平表達(dá)。
[0015]在某些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含諸如抗體的蛋白的物質(zhì)組合物，該蛋白特異性結(jié)合到由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子，該分子選自由選自以下的基因中的一種或多種編碼的分子:Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、C0L10A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl 16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCC11、ANKRD30A、CNTD2、COLl IAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPU GFRAU L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、 RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428, L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU或其補(bǔ)體。由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子可由乳腺癌細(xì)胞以比非癌性細(xì)胞(諸如非癌性乳腺組織細(xì)胞)表達(dá)的水平更高的水平表達(dá)。
[0016]在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含核酸的物質(zhì)組合物，該核酸特異性結(jié)合到由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子，諸如mRNA分子，其中該分子選自由表1所列的基因編碼的標(biāo)記物。由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子可由乳腺癌細(xì)胞以比非癌性細(xì)胞(諸如非癌性乳腺組織細(xì)胞)表達(dá)的水平更高的水平表達(dá)。
[0017]在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含核酸的物質(zhì)組合物，該核酸特異性結(jié)合到由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子，諸如mRNA分子，其中該mRNA分子選自由SEQ ID N0:l_70編碼的mRNA。由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子可由乳腺癌細(xì)胞以比非癌性細(xì)胞(諸如非癌性乳腺組織細(xì)胞)表達(dá)的水平更高的水平表達(dá)。
[0018]在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含核酸的物質(zhì)組合物，該核酸特異性結(jié)合到由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子，諸如mRNA分子，其中該分子由選自以下的基因編碼:Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、⑶L10A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、⑶L11A1、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC,FSIPU GFRAU L0C647333、POTEF, POTEE, POTEK, C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHl, SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428, L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU或其補(bǔ)體。由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的分子可由乳腺癌細(xì)胞以比非癌性細(xì)胞(諸如非癌性乳腺組織細(xì)胞)表達(dá)的水平更高的水平表達(dá)。
[0019]在另外其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供確定受試者中的癌癥是否進(jìn)展的方法，其包括:a)在第一時(shí)間點(diǎn)測(cè)量與癌癥相關(guān)的一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平；b)在第二時(shí)間點(diǎn)測(cè)量在a)中測(cè)量的所述一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平，其中第二時(shí)間點(diǎn)在第一時(shí)間點(diǎn)之后；以及c)對(duì)在a)和b)中測(cè)量的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與a)相比在b)中所述一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平升高表明受試者的癌癥正在進(jìn)展。
[0020]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供確定受試者中的乳腺癌是否進(jìn)展的方法，其包括:a)在第一時(shí)間點(diǎn)測(cè)量表1中所列的一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平；b)在第二時(shí)間點(diǎn)測(cè)量在a)中測(cè)量的所述一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平，其中第二時(shí)間點(diǎn)在第一時(shí)間點(diǎn)之后；以及c)對(duì)在a)和b)中測(cè)量的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與第一時(shí)間點(diǎn)相比在第二時(shí)間點(diǎn)所述一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平升高表明受試者的乳腺癌正在進(jìn)展。
[0021]在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供確定受試者中的乳腺癌是否進(jìn)展的方法，其包括:a)在第一時(shí)間點(diǎn)測(cè)量由SEQ ID NO:1-70編碼的一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平；b)在第二時(shí)間點(diǎn)測(cè)量在a)中測(cè)量的所述一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平，其中第二時(shí)間點(diǎn)在第一時(shí)間點(diǎn)之后；以及c)對(duì)在a)和b)中測(cè)量的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與第一時(shí)間點(diǎn)相比在第二時(shí)間點(diǎn)所述一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平升高表明受試者的乳腺癌正在進(jìn)展。
[0022]在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供確定受試者中的乳腺癌是否進(jìn)展的方法，其包括:a)在第一時(shí)間點(diǎn)測(cè)量由選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、C0L10Al、MMPll、DSCR6、CYP4Zl、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANK RD30A、CNTD2、COLlIAU DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPU GFRAU L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHl, SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU或其補(bǔ)體的基因編碼的一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平；b)在第二時(shí)間點(diǎn)測(cè)量在a)中測(cè)量的所述一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平，其中第二時(shí)間點(diǎn)在第一時(shí)間點(diǎn)之后；以及c)對(duì)在a)和b)中測(cè)量的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與第一時(shí)間點(diǎn)相比在第二時(shí)間點(diǎn)所述一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平升高表明受試者的乳腺癌正在進(jìn)展。
[0023]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供與乳腺癌相關(guān)的抗原(即，癌相關(guān)多肽)作為診斷性和/或治療性抗體的靶標(biāo)。在一些實(shí)施方案中，該抗原可選自由表1所列的基因、其片段編碼的蛋白或由表1所列的基因編碼的蛋白的組合。
[0024]在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供與乳腺癌相關(guān)的抗原(即，癌相關(guān)多肽)作為診斷性和/或治療性抗體的靶標(biāo)。在一些實(shí)施方案中，抗原可選自由選自SEQ ID NO:1-70的序列、其片段編碼的蛋白，或由選自SEQ ID NO:1-70的序列編碼的蛋白的組合。
[0025]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供與乳腺癌相關(guān)的抗原(即，癌相關(guān)多肽)作為診斷性和/或治療性抗體的靶標(biāo)。在一些實(shí)施方案中，抗原可選自由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、⑶LIIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, LOC441376、LOC643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、LOC388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、LOC647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、LOC727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145、LOC727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOS1AP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AI的基因、其片段編碼的蛋白，或由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLUC0L10Al、MMPll、DSCR6、CYP4Zl、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、COLl IAU DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428,L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU的基因(或其片段)編碼的蛋白的組合。
[0026]在另外其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供引起對(duì)乳腺癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)的方法，其包括將受試者與由乳腺癌細(xì)胞表達(dá)的蛋白或蛋白片段接觸，從而引起對(duì)癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)。例如，受試者可通過(guò)靜脈內(nèi)或肌內(nèi)接觸。
[0027]在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供引起對(duì)乳腺癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)的方法，其包括將受試者與由選自表1所列的基因的基因編碼的一種或多種蛋白或蛋白片段接觸，從而引起對(duì)乳腺癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)。例如，受試者可通過(guò)靜脈內(nèi)或肌內(nèi)接觸。
[0028]在另外其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供引起對(duì)乳腺癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)的方法，其包括將受試者與由SEQ ID NO:1-70所列的序列編碼的一種或多種蛋白或蛋白片段接觸，從而引起對(duì)乳腺癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)。例如，受試者可通過(guò)靜脈內(nèi)或肌內(nèi)接觸。
[0029]在另外其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供引起對(duì)乳腺癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)的方法，其包括將受試者與由選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、C0L10A1、MMP11、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl 16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、COLlIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5,L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428,L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU的基因編碼的一種或多種蛋白或蛋白片段接觸，從而引起對(duì)乳腺癌細(xì)胞的免疫反應(yīng)。例如，受試者可通過(guò)靜脈內(nèi)或肌內(nèi)接觸。
[0030]在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供檢測(cè)得自受試者的樣品中的癌癥的試劑盒。該試劑盒可包含特異性結(jié)合到由乳腺癌細(xì)胞特異性表達(dá)的分子的一種或多種試劑。該試劑盒可包含一個(gè)或多個(gè)容器和確定樣品是否為癌癥陽(yáng)性的使用說(shuō)明。該試劑盒可任選地包含一個(gè)或多個(gè)多孔板、可檢測(cè)的物質(zhì)，諸如染料、放射性標(biāo)記分子、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記分子等。該試劑盒還可以包含陽(yáng)性對(duì)照(例如，一種或多種癌性乳腺細(xì)胞；或具體已知量的由癌細(xì)胞表達(dá)的分子)和陰性對(duì)照(例如，非癌性組織或細(xì)胞樣品)。
[0031]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供檢測(cè)乳腺癌的試劑盒，該試劑盒包含特異性結(jié)合由選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、COL1A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl 16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCC11、ANKRD30A、CNTD2、COLl IAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATl、NXPHl、SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428, L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU的基因編碼的一種或多種標(biāo)記物的一種或多種試劑。該試劑可以為蛋白，諸如抗體。作為另外一種選擇，該試劑可以為核酸，諸如DNA分子或RNA分子。該試劑盒可包含一個(gè)或多個(gè)容器和確定樣品是否為癌癥陽(yáng)性的使用說(shuō)明。該試劑盒可任選地包含一個(gè)或多個(gè)多孔板、可檢測(cè)的物質(zhì)，諸如染料、放射性標(biāo)記分子、化學(xué)發(fā)光標(biāo)記分子等。該試劑盒還可以包含陽(yáng)性對(duì)照(例如，一種或多種癌性細(xì)胞；或具體已知量的由癌細(xì)胞表達(dá)的分子)和陰性對(duì)照(例如，非癌性組織或細(xì)胞樣品)。例如，試劑盒可以呈ELISA或DNA微陣列的形式。
[0032]一些實(shí)施方案涉及治療受試者中的乳腺癌的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呤┯谜{(diào)節(jié)乳腺癌相關(guān)蛋白的活性的治療劑，其中癌相關(guān)蛋白由表1所列的基因、其同源物、其組合或其片段編碼。在一些實(shí)施方案中，治療劑結(jié)合到乳腺癌相關(guān)蛋白。在一些實(shí)施方案中，治療劑為抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體可以為單克隆抗體或多克隆抗體。在一些實(shí)施方案中， 抗體為人源化或人類(lèi)抗體。
[0033]其他實(shí)施方案涉及治療受試者中的乳腺癌的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呤┯谜{(diào)節(jié)癌相關(guān)蛋白的活性的治療劑，其中癌相關(guān)蛋白由選自SEQ ID N0:l-70、其同源物、其組合或其片段的一種或多種序列編碼。在一些實(shí)施方案中，治療劑結(jié)合到乳腺癌相關(guān)蛋白。在一些實(shí)施方案中，治療劑為抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體可以為單克隆抗體或多克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體為人源化或人類(lèi)抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體為人源化或人類(lèi)抗體。
[0034]本文的實(shí)施方案涉及治療受試者中的乳腺癌的方法，該方法包括向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呤┯谜{(diào)節(jié)癌相關(guān)蛋白的活性的治療劑，其中癌相關(guān)蛋白由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、⑶LIIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145, L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1A1、NMU的基因、其同源物、其組合或其片段編碼。在一些實(shí)施方案中，治療劑結(jié)合到乳腺癌相關(guān)蛋白。在一些實(shí)施方案中，治療劑為抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體可以為單克隆抗體或多克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，抗體為人源化或人類(lèi)抗體。
[0035]在一些實(shí)施方案中，治療受試者中的乳腺癌的方法可包括向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呤┯谜{(diào)節(jié)選自表1所列的那些、其片段、其同源物和/或其補(bǔ)體的一種或多種基因的表達(dá)的治療劑。
[0036]在一些實(shí)施方案中，治療受試者中的乳腺癌的方法可包括向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呤┯谜{(diào)節(jié)選自SEQ ID NO:1-70、其片段、其同源物和/或其補(bǔ)體的一種或多種序列的表達(dá)的治療劑。
[0037]在一些實(shí)施方案中，治療受試者中的乳腺癌的方法可包括向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呤┯谜{(diào)節(jié)選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、C0L10A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、COLlIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5,L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPU GFRAU L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941(XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHl, SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU的一種或多種基因、其片段、其同源物和/或其補(bǔ)體的表達(dá)的治療劑。
[0038]在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療乳腺癌的方法，可包括表1中所列的一種或多種基因、其片段、其同源物和/或其補(bǔ)體的基因敲低。在一些實(shí)施方案中，治療乳腺癌的方法可包括對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理以敲低或抑制基因的表達(dá)，該基因編碼選自表1所列的那些、其片段、其同源物和/或其補(bǔ)體的一種或多種基因的mRNA。
[0039]在其他實(shí)施方案中，治療乳腺癌的方法可包括選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、⑶L11A1、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEMl45, L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1A1、NMU的一種或多種基因的基因敲低。在一些實(shí)施方案中，治療乳腺癌的方法可包括對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理以敲低或抑制基因的表達(dá)，該基因編碼選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、COL1A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2,⑶L11A1、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATl、NXPHl、SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428, L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AU NMU 的一種或多種基因的mRNA。
[0040]在另外其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選候選藥物的抗乳腺癌活性的方法，該方法包括:(a)將表達(dá)選自表1所列的那些的一種或多種癌相關(guān)基因的細(xì)胞與候選藥物接觸；(b)檢測(cè)候選藥物對(duì)得自a)的細(xì)胞中所述一種或多種乳腺癌相關(guān)基因的表達(dá)的影響；以及(C)將不存在候選藥物的情況下在a)中所列的基因中的一種或多種的表達(dá)水平與存在候選藥物的情況下所述一種或多種基因的表達(dá)水平進(jìn)行比較；其中在存在候選藥物的情況下乳腺癌相關(guān)基因表達(dá)的降低表明候選藥物具有抗乳腺癌活性。
[0041]在另外其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選候選藥物的抗乳腺癌活性的方法，該方法包括:(a)將表達(dá)選自由SEQ ID NO: 1_70編碼的那些基因的一種或多種癌相關(guān)基因的細(xì)胞與候選藥物接觸；(b)檢測(cè)候選藥物對(duì)得自a)的細(xì)胞中所述一種或多種乳腺癌相關(guān)基因的表達(dá)的影響；以及(C)將不存在候選藥物的情況下在a)中所列的基因中的一種或多種的表達(dá)水平與存在候選藥物的情況下所述一種或多種基因的表達(dá)水平進(jìn)行比較；其中在存在候選藥物的情況下乳腺癌相關(guān)基因表達(dá)的降低表明候選藥物具有抗乳腺癌活性。
[0042]在另外的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選候選藥物的抗乳腺癌活性的方法，該方法包括:(a)將表達(dá)選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、C0L10A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、COLlIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5,L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPU GFRAU L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941(XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHl, SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU的一種或多種乳腺癌相關(guān)基因的細(xì)胞與候選藥物接觸；(b)檢測(cè)候選藥物對(duì)得自a)的細(xì)胞中所述一種或多種乳腺癌相關(guān)基因的表達(dá)的影響；以及(c)將不存在候選藥物的情況下在a)中所列的基因中的一種或多種的表達(dá)水平與存在候選藥物的情況下的表達(dá)水平進(jìn)行比較；其中在存在候選藥物的情況下乳腺癌相關(guān)基因表達(dá)的降低表明候選藥物具有抗乳腺癌活性。
[0043]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供受試者中的乳腺癌腫瘤的可視化方法，其包括:a)將一種或多種乳腺癌相關(guān)蛋白用特異性結(jié)合到乳腺癌腫瘤的標(biāo)記分子靶向，其中癌相關(guān)蛋白選自由選自表1所列的那些的一種或多種基因編碼的蛋白；以及b)檢測(cè)標(biāo)記分子，其中標(biāo)記分子使受試者中的腫瘤可視化?？梢暬稍隗w內(nèi)或體外進(jìn)行。
[0044]在其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供受試者中的乳腺癌腫瘤的可視化方法，其包括:a)將一種或多種乳腺癌相關(guān)蛋白用特異性結(jié)合到乳腺癌腫瘤的標(biāo)記分子靶向，其中癌相關(guān)蛋白選自由選自SEQ ID NO:1-70的一種或多種序列編碼的蛋白；以及b)檢測(cè)標(biāo)記分子，其中標(biāo)記分子使受試者中的腫瘤可視化?？梢暬稍隗w內(nèi)或體外進(jìn)行。
[0045]在另外其他實(shí)施方案中，本發(fā)明提供受試者中的乳腺癌腫瘤的可視化方法，其包括:a)將一種或多種乳腺癌相關(guān)蛋白用特異性結(jié)合到乳腺癌腫瘤的標(biāo)記分子靶向，其中癌相關(guān)蛋白選自由選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、COL1A1、MMPl 1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、COLlIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5,L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPU GFRAU L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941(XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHl, SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1、NMU 的一種或多種基因編碼的蛋白；以及 b)檢測(cè)標(biāo)記分子，其中標(biāo)記分子使受試者中的腫瘤可視化?？梢暬稍隗w內(nèi)或體外進(jìn)行。

【專(zhuān)利附圖】

【附圖說(shuō)明】
[0046]為了進(jìn)一步理解本發(fā)明的實(shí)質(zhì)和優(yōu)點(diǎn)，應(yīng)結(jié)合附圖參考以下詳細(xì)說(shuō)明，其中:
[0047]圖1顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的Clorf64的表達(dá)。
[0048]圖2顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的L0C648879的表達(dá)。
[0049]圖3顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的HIST1H4H的表達(dá)。
[0050]圖4顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的HIST2H4B的表達(dá)。
[0051]圖5顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的BX116033的表達(dá)。
[0052]圖6顯示了在乳腺腫瘤、多種類(lèi)型的惡性腫瘤和正常組織中的DSCR6的表達(dá)。
[0053]圖7顯示了在不同來(lái)源組織的轉(zhuǎn)移性腫瘤與正常組織中的DSCR6的表達(dá)。
[0054]圖8顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的POTEC的表達(dá)。
[0055]圖9顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的FSIPl的表達(dá)。
[0056]圖10顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的GFRAl的表達(dá)。
[0057]圖11顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的POTEF、POTEE和POTEK的表達(dá)。
[0058]圖12顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的C2orf27A的表達(dá)。
[0059]圖13顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的L0C727941的表達(dá)。
[0060]圖14顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的NBPF22P的表達(dá)。
[0061]圖15顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的POTEG的表達(dá)。
[0062]圖16顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的RET的表達(dá)。
[0063]圖17顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的TMEM145的表達(dá)。
[0064]圖18顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的L0C727941的表達(dá)。
[0065]圖19顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的NATl的表達(dá)。
[0066]圖20顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的NXPHl的表達(dá)。
[0067]圖21顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的SERHL2的表達(dá)。
[0068]圖22顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的SYCP2的表達(dá)。
[0069]圖23顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的D59687的表達(dá)。
[0070]圖24顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的CYP4Z1的表達(dá)。
[0071]圖25顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的L0C730024的表達(dá)。
[0072]圖26顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的NOSlAP的表達(dá)。
[0073]圖27顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的UGT2B28的表達(dá)。
[0074]圖28顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的GRM4的表達(dá)。
[0075]圖29顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的FLJ30428的表達(dá)。
[0076]圖30顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的L0C440905的表達(dá)。
[0077]圖31顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的L0C642460的表達(dá)。
[0078]圖32顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的MTL5的表達(dá)。
[0079]圖33顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的GRPR的表達(dá)。
[0080]圖34顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的C0L10A1的表達(dá)。
[0081]圖35顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的ASCLl的表達(dá)水平。
[0082]圖36顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的BX116033的表達(dá)水平。
[0083]圖37顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的Clorf64的表達(dá)水平。
[0084]圖38顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的C0L10A1的表達(dá)水平。
[0085]圖39顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的DSCR6的表達(dá)水平。
[0086]圖40顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的FLJ23152的表達(dá)水平。
[0087]圖41顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的GRM4的表達(dá)水平。
[0088]圖42顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的TMEM145的表達(dá)水平。
[0089]圖43顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的POTEG的表達(dá)水平。
[0090]圖44顯示了在乳腺腫瘤與正常組織中的FSIPl的表達(dá)水平。
[0091]圖45顯示了乳腺腫瘤中膠原10(C0L10A1)的表達(dá)。
[0092]圖46顯示了乳腺腫瘤中MMPll的表達(dá)。
[0093]圖47顯示了得自乳腺癌患者的血清與正常供體血清中ANKRD30A的表達(dá)水平。
[0094]圖48顯示了得自乳腺癌患者的血清與正常供體血清中Clorf64的表達(dá)水平。
[0095]圖49顯示了得自乳腺癌患者的血清與正常供體血清中C0L10A1的表達(dá)水平。
[0096]圖50顯示了得自乳腺癌患者的血清與正常供體血清中MMPll的表達(dá)水平。
[0097]圖51顯示了得自乳腺癌患者的血清與正常供體血清中C0L11A1的表達(dá)水平。
[0098]圖52顯示了得自乳腺癌患者的血清與正常供體血清中POTEG的表達(dá)水平。
[0099]圖53顯示了乳腺腫瘤中FSIPl的表達(dá)。
[0100]圖54顯示了得自乳腺癌患者的血清與正常供體血清中NMU的表達(dá)水平。

【具體實(shí)施方式】
[0101]在描述本發(fā)明的組合物和方法前，應(yīng)當(dāng)理解，本發(fā)明不限于所述的特定過(guò)程、組合物或方法學(xué)，因?yàn)樗鼈兛梢宰兓＿€應(yīng)當(dāng)理解，在說(shuō)明書(shū)中所用的術(shù)語(yǔ)僅是為了描述特定的形式或?qū)嵤┓桨?，而不旨在限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍將只由所附權(quán)利要求書(shū)限制。除非另有定義，否則本文使用的所有技術(shù)和科學(xué)術(shù)語(yǔ)具有如本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員通常理解的相同含義。雖然類(lèi)似于或等同于本文所述的那些的任何方法和材料均可用于實(shí)踐或檢驗(yàn)本公開(kāi)的實(shí)施方案，但是現(xiàn)在描述優(yōu)選的方法、裝置和材料。本文中的任何信息都不應(yīng)解釋為承認(rèn)本發(fā)明不能因?yàn)槭窃谙劝l(fā)明而先于包含在引用的出版物中的這些揭示。
[0102]定義
[0103]如本文所用，除非上下文另外明確指出，否則單數(shù)形式“一”、“一個(gè)/種”和“該/所述”也包括復(fù)數(shù)指代。因此，例如，提及“治療劑”涉及一種或多種治療劑以及本領(lǐng)域技術(shù)人員已知的其等同形式等等。
[0104]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“約”意指與其一起使用的數(shù)值的加或減10%。因此，約50%意指在45%至55%的范圍內(nèi)。
[0105]“施用”在結(jié)合治療劑使用時(shí)意指直接向靶組織中或上施用治療劑或向患者施用治療劑，該治療劑從而對(duì)其靶向的組織產(chǎn)生積極影響。因此，如本文所用，術(shù)語(yǔ)“施用”在結(jié)合治療劑使用時(shí)可包括但不限于:向靶組織中或上提供治療劑；通過(guò)例如靜脈注射向患者全身提供治療劑，治療劑從而達(dá)到靶組織；向靶組織提供其編碼序列形式的治療劑(例如通過(guò)所謂的基因療法技術(shù))?！笆┯谩苯M合物可通過(guò)經(jīng)口施用、靜脈注射、腹膜內(nèi)注射、肌內(nèi)注射、皮下注射、透皮擴(kuò)散或電泳、局部注射、諸如可生物侵蝕的或基于貯存器的植入物的延釋遞送裝置(包括局部植入的延釋裝置)、作為蛋白治療劑或通過(guò)基因療法載體作為核酸治療劑、局部施用、或通過(guò)與其他已知技術(shù)結(jié)合的任何這些方法實(shí)現(xiàn)。此類(lèi)組合技術(shù)包括但不限于加熱、福射和超聲。
[0106]如本文所用的術(shù)語(yǔ)“動(dòng)物”、“患者”或“受試者”包括但不限于人和非人脊椎動(dòng)物，諸如野生、家養(yǎng)和農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物。受試者可以為例如任何哺乳動(dòng)物，包括人、非人靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物、狗、貓、嚙齒類(lèi)動(dòng)物，諸如大鼠或小鼠、兔、豚鼠、豬、奶牛、綿羊等。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“受試者”、“患者”或“動(dòng)物”是指雄性。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“受試者”、“患者”或“動(dòng)物”是指雌性。
[0107]如本文所用的術(shù)語(yǔ)“乳腺癌”可包括以下一者或多者:導(dǎo)管原位癌(DCIS)、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(IDC)、髓樣癌、浸潤(rùn)性小葉癌(ILC)、小管癌、粘液癌、炎性乳腺癌(IBC)、小葉原位癌(LCIS)、男性乳腺癌、乳頭派杰氏病、乳腺葉狀腫瘤、復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌。
[0108]術(shù)語(yǔ)“捕獲試劑”是指能夠結(jié)合要在樣品中進(jìn)行檢測(cè)的靶標(biāo)分子或分析物的試劑，例如抗體或抗原結(jié)合蛋白。
[0109]術(shù)語(yǔ)“抑制”包括施用本公開(kāi)的化合物以防止癥狀的發(fā)生、緩解癥狀或消除疾病、
病癥或障礙。
[0110]術(shù)語(yǔ)“分化細(xì)胞”當(dāng)關(guān)于通過(guò)本發(fā)明的方法由多能干細(xì)胞制備的細(xì)胞使用時(shí)是指當(dāng)與親本多能干細(xì)胞相比時(shí)分化潛力降低的細(xì)胞。本發(fā)明的分化細(xì)胞包括可進(jìn)一步分化的細(xì)胞(即，它們可以不是終末分化的)。
[0111]術(shù)語(yǔ)“基因表達(dá)結(jié)果”是指關(guān)于基因或基因產(chǎn)物的表達(dá)的定性和/或定量結(jié)果。基因表達(dá)結(jié)果可以是基因、基因編碼的RNA、基因編碼的mRNA、基因編碼的蛋白產(chǎn)物或其任意組合的量或拷貝數(shù)?；虮磉_(dá)結(jié)果也可針對(duì)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化或與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較?；虮磉_(dá)結(jié)果可用于例如確定基因在兩個(gè)或更多個(gè)樣品中是否表達(dá)、過(guò)表達(dá)或差異表達(dá)。
[0112]如本文所用的術(shù)語(yǔ)“同源性”是指互補(bǔ)性程度?？梢源嬖诓糠滞葱曰蛲耆葱?。詞語(yǔ)“同一性”可代替詞語(yǔ)“同源性”。至少部分地抑制相同的序列雜交到靶標(biāo)核酸的部分互補(bǔ)的核酸序列稱(chēng)為“基本上同源的”。完全互補(bǔ)的核酸序列與靶標(biāo)序列的雜交的抑制可使用雜交陣列(Southern或Northern印跡、液相雜交等)在低嚴(yán)格性條件下進(jìn)行研究。基本上同源的序列或雜交探針在低嚴(yán)格性條件下將競(jìng)爭(zhēng)并抑制完全同源的序列與靶標(biāo)序列的結(jié)合。這并非是說(shuō)，低嚴(yán)格性條件使得允許非特異性結(jié)合，因?yàn)榈蛧?yán)格性條件要求兩種序列彼此之間的結(jié)合為特異性(即，選擇性)的相互作用。不存在非特異性結(jié)合可通過(guò)使用第二靶標(biāo)序列加以測(cè)試，該序列甚至缺乏部分互補(bǔ)性程度(例如，低于約30%的同源性或同一性)。在不存在非特異性結(jié)合的情況下，基本上同源的序列或探針將不會(huì)雜交到第二非互補(bǔ)靶標(biāo)序列。
[0113]短語(yǔ)“百分比同源性”、同源性”、“百分比同一性”或同一性”是指存在于兩種或更多種氨基酸或核酸序列的比較中的序列相似性百分比。百分比同一性可例如通過(guò)使用MEGALIGN程序(LASERGENE軟件包，DNASTAR)以電子方式測(cè)定。MEGALIGN程序可根據(jù)不同的方法在兩個(gè)或更多個(gè)序列之間形成比對(duì)，例如Clustal方法(Higgins，D.G和P.M.Sharp (1988) Gene73:237-244)。Clustal算法通過(guò)檢查所有對(duì)之間的距離而將序列分成聚類(lèi)。對(duì)聚類(lèi)進(jìn)行成對(duì)比對(duì)然后分組。兩個(gè)氨基酸序列(例如序列A與序列B)之間的百分比相似性的計(jì)算方式為:將序列A的長(zhǎng)度減去序列A中的間隙殘基數(shù)減去序列B中的間隙殘基數(shù)除以序列A與序列B之間的殘基匹配總和再乘以一百。在確定百分比相似性時(shí)，并不將兩個(gè)氨基酸序列之間低同源性或無(wú)同源性的間隙包括在內(nèi)。核酸序列之間的百分比同一'I"生也可通過(guò)Clustal方法或通過(guò)本領(lǐng)域已知的其他方法計(jì)算,諸如Jotun Hein方法(參見(jiàn)例如Hein, J.(1990)Methods Enzymol.183:626-645)。序列之間的同一性也可通過(guò)本領(lǐng)域已知的其他方法確定，例如通過(guò)改變雜交條件。
[0114]術(shù)語(yǔ)“標(biāo)記”或“可檢測(cè)物質(zhì)”是指能夠產(chǎn)生表明在測(cè)定樣品中存在靶多核苷酸的可檢測(cè)信號(hào)的組合物。合適的標(biāo)記包括放射性同位素、核苷酸發(fā)色團(tuán)、酶、底物、熒光分子、化學(xué)發(fā)光部分、磁粒、生物發(fā)光部分等。因此，標(biāo)記是能夠由裝置或方法檢測(cè)的任意組合物，諸如但不限于光譜、光化學(xué)、生物化學(xué)、免疫化學(xué)、電、光學(xué)、化學(xué)檢測(cè)裝置或任何其他合適的裝置。在一些實(shí)施方案中，標(biāo)記可無(wú)需借助于裝置而在視覺(jué)上檢測(cè)。術(shù)語(yǔ)“標(biāo)記”用于指代具有可檢測(cè)的物理性質(zhì)的任何化學(xué)基團(tuán)或部分或能夠?qū)е禄瘜W(xué)基團(tuán)或部分表現(xiàn)出可檢測(cè)的物理性質(zhì)的任何化合物，諸如催化底物轉(zhuǎn)化成可檢測(cè)產(chǎn)物的酶。術(shù)語(yǔ)“標(biāo)記”還涵蓋抑制特定物理性質(zhì)的表現(xiàn)的化合物。標(biāo)記也可以是作為結(jié)合對(duì)的成員的化合物，其另一個(gè)成員具有可檢測(cè)的物理性質(zhì)。
[0115]如本文所用的“微陣列”是指在固相載體的表面上形成的例如離散區(qū)的線性或二維陣列，每個(gè)離散區(qū)具有限定的區(qū)域。離散區(qū)在微陣列上的密度由要在單一固相載體的表面上檢測(cè)的靶多核苷酸的總數(shù)決定，優(yōu)選至少約50個(gè)/cm2，更優(yōu)選至少約100個(gè)/cm2，甚至更優(yōu)選至少約500個(gè)/cm2,還優(yōu)選至少約1,000個(gè)/cm2。如本文所用,DNA微陣列是用于鑒定、擴(kuò)增、檢測(cè)或克隆靶多核苷酸的置于芯片或其他表面上的寡核苷酸引物的陣列。由于陣列中每一特定組的引物的位置都是已知的，因此可基于目標(biāo)多核苷酸與微陣列中特定位置的結(jié)合而確定它們的種類(lèi)。
[0116]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“天然存在的”是指可以為通常存在于自然界中的形式的序列或結(jié)構(gòu)?！疤烊淮嬖诘摹笨砂ㄒ酝ǔ４嬖谟谌魏蝿?dòng)物中的形式的序列。
[0117]本文的術(shù)語(yǔ)“核酸”、“多核苷酸”或“寡核苷酸”或其等同形式意指共價(jià)連接在一起的至少兩個(gè)核苷酸。在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸是6、8、10、12、20、30或多達(dá)100個(gè)核苷酸的低聚物。在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸是至少6、8、10、12、20、30、40、50、60、70、80、90、100、150、200、300、400或500個(gè)核苷酸的低聚物。“多核苷酸”或“寡核苷酸”可包括DNA、RNA、PNA或通過(guò)磷酸二酯鍵和/或任何替代鍵連接的核苷酸的聚合物。
[0118]所謂“藥學(xué)上可接受的”是指載體、稀釋劑或賦形劑必須與制劑的其他成分相容并且對(duì)其受體無(wú)害。
[0119]如本文所用，“衍生自”指定序列的多核苷酸是指由對(duì)應(yīng)于指定核苷酸序列的一定區(qū)域的大致至少約6個(gè)核苷酸、優(yōu)選至少約8個(gè)核苷酸、更優(yōu)選至少約10-12個(gè)核苷酸甚至更優(yōu)選至少約15-20個(gè)核苷酸的序列構(gòu)成的多核苷酸序列。“對(duì)應(yīng)”意指與指定序列同源或互補(bǔ)。優(yōu)選地，衍生出多核苷酸的區(qū)域的序列與癌相關(guān)基因特有的序列同源或互補(bǔ)。
[0120]如本文所用的“重組蛋白”是使用重組技術(shù)制備的蛋白，例如但不限于通過(guò)表達(dá)如上所述的重組核酸。重組蛋白可通過(guò)至少一種或多種特性而區(qū)別于天然存在的蛋白。例如，蛋白可以從與其在野生型宿主中通常相關(guān)的蛋白和化合物中的一些或全部分離或純化，并因而可以為基本上純的。例如，分離的蛋白不伴有在其自然狀態(tài)中通常與之相關(guān)的材料中的至少一些，優(yōu)選地在給定的樣品中占總蛋白重量的至少約0.5%，更優(yōu)選地至少約5%?；旧霞兊牡鞍渍技s50-75%、約80%或約90%。在一些實(shí)施方案中，基本上純的蛋白占總蛋白重量的約80-99 %、85-99 %、90-99 %、95-99 %或97-99 %。重組蛋白還可以包括在不同的生物體(例如酵母、大腸桿菌等)或宿主細(xì)胞中從一種生物體(例如人類(lèi))產(chǎn)生癌相關(guān)蛋白。作為另外一種選擇，蛋白可以通過(guò)使用誘導(dǎo)型啟動(dòng)子或高表達(dá)啟動(dòng)子以比通常所見(jiàn)的明顯更高的濃度制備，使得蛋白以提高的濃度水平制備。作為另外一種選擇，蛋白可以為不通常存在于自然界中的形式，如添加表位標(biāo)簽或發(fā)生氨基酸取代、插入和缺失，如本文所述。
[0121]術(shù)語(yǔ)“特異性結(jié)合”是指其中兩種或更多種分子形成可在生理或測(cè)定條件下測(cè)量的復(fù)合物并為選擇性的情況。將抗體或抗原結(jié)合蛋白或其他分子在以下情況下稱(chēng)為“特異性結(jié)合”到蛋白、抗原或表位:在適當(dāng)選擇的條件下，這種結(jié)合不受到實(shí)質(zhì)性抑制，而同時(shí)非特異性結(jié)合受到抑制。特異性結(jié)合的特征在于高親和力以及對(duì)化合物、蛋白、表位或抗原的選擇性。非特異性結(jié)合通常具有較低的親和力。
[0122]例如IgG抗體中的特異性結(jié)合的特征通常在于至少約10_7M或更高，諸如至少約10_8M或更高，或至少約10_9M或更高，或至少約10,或更高，或至少約10_nM或更高，或至少約KT12M或更高的親和力。該條件也可適用于以下情況:例如，抗原結(jié)合域?yàn)椴槐辉S多抗原攜帶的特定表位特異性的時(shí)，在該情況下，攜帶抗原結(jié)合域的抗體或抗原結(jié)合蛋白通常將不結(jié)合其他抗原。
[0123]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“樣品”是指進(jìn)行測(cè)試或用試劑(諸如但不限于治療劑、藥物或候選試劑)處理的組合物 。樣品可得自受試者。在一些實(shí)施方案中，樣品可以為血液、血漿、血清或其任意組合。樣品可衍生自血液、血漿、血清或其任意組合。其他典型的樣品包括但不限于得自哺乳動(dòng)物受試者、組織活檢、痰、淋巴液、血細(xì)胞(例如外周血單核細(xì)胞)、組織或細(xì)針活檢樣品、尿液、腹膜液、初乳、母乳、胎液、糞便、淚液、胸膜液的任何體液或其中的細(xì)胞。樣品可在用于本文所述的方法前以一定的方式加以處理，例如可將要根據(jù)下文所述的任何方法進(jìn)行分析或測(cè)試的特定組分從樣品中分離。
[0124]術(shù)語(yǔ)“載體”是指常規(guī)載體，諸如珠子、粒子、試紙條、纖維、過(guò)濾器、膜和硅烷或硅酸鹽載體，諸如載玻片。
[0125]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“標(biāo)簽”、“序列標(biāo)簽”或“引物標(biāo)簽序列”是指具有用于鑒定一批在其中具有此類(lèi)標(biāo)簽的多核苷酸的特定核酸序列的寡核苷酸。將得自相同生物來(lái)源的多核苷酸用特定的序列標(biāo)簽進(jìn)行共價(jià)標(biāo)記，使得在后續(xù)分析中該多核苷酸可根據(jù)其起源而加以鑒定。序列標(biāo)簽還充當(dāng)核酸擴(kuò)增反應(yīng)的引物。
[0126]如本文所用，術(shù)語(yǔ)“治療劑”意指可用于治療、抗?fàn)?、減輕、預(yù)防或改善患者的不想要的病癥或疾病的試劑。在某種程度上，本公開(kāi)的實(shí)施方案涉及治療癌癥或減少細(xì)胞增殖。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“治療劑”可以指與靶標(biāo)記、其表達(dá)或其功能相關(guān)或影響靶標(biāo)記、其表達(dá)或其功能的任何分子。在多種實(shí)施方案中，此類(lèi)治療劑可包括與靶標(biāo)記、其表達(dá)或其功能相關(guān)或影響靶標(biāo)記、其表達(dá)或其功能的諸如治療性細(xì)胞、治療性肽、治療性基因、治療性化合物等分子。
[0127]組合物的“治療有效量”或“有效量”是經(jīng)計(jì)算實(shí)現(xiàn)所需的效果即抑制、阻斷或逆轉(zhuǎn)細(xì)胞的活化、遷移或增殖的預(yù)定量。在一些實(shí)施方案中，有效量是預(yù)防量。在一些實(shí)施方案中，有效量是用于醫(yī)治疾病或病癥的量。根據(jù)本發(fā)明施用以獲得治療性和/或預(yù)防性效果的組合物的具體劑量將當(dāng)然由與病例相關(guān)的特定情況決定，例如施用的組合物、施用途徑和所治療的病癥。應(yīng)當(dāng)理解，施用的有效量將由醫(yī)生根據(jù)相關(guān)的情況決定，包括待治療的病癥、對(duì)將施用的組合物的選擇以及所選的施用途徑。本發(fā)明的組合物的治療有效量通常為當(dāng)以生理上可耐受的賦形劑組合物施用時(shí)足以實(shí)現(xiàn)所需的全身性濃度或靶組織中的局部濃度的量。
[0128]術(shù)語(yǔ)“組織”是指在特定功能的表現(xiàn)中聯(lián)合的相似特化細(xì)胞的任何聚集。
[0129]如本文所用的術(shù)語(yǔ)“治療”可指治療性處理或預(yù)防性措施，其中目標(biāo)是預(yù)防或減慢(減輕)非期望的生理狀況、障礙或疾病，或獲得有益的或所需的臨床結(jié)果。這些術(shù)語(yǔ)也可以表示改善與疾病或病癥相關(guān)的一種或多種癥狀。在一些實(shí)施方案中，該術(shù)語(yǔ)既可以指代治療也可以指代預(yù)防。出于本公開(kāi)的目的，這些術(shù)語(yǔ)包括但不限于減輕病癥、障礙或疾病的程度；穩(wěn)定(即，不惡化)病癥、障礙或疾病的狀態(tài)；延遲病癥、障礙或疾病的發(fā)生或減緩其進(jìn)展；改善病癥、障礙或疾病狀態(tài)；以及緩解(無(wú)論是部分的還是完全的)(無(wú)論是可檢測(cè)的還是不可檢測(cè)的)或改進(jìn)或改善病癥、障礙或疾病。治療還可以包括相比未接受治療時(shí)的預(yù)期存活期延長(zhǎng)的存活期。
[0130]在某些實(shí)施方案中，本文所述的發(fā)明提供用于檢測(cè)和/或診斷受試者中的諸如乳腺癌的癌癥的快速、相對(duì)非侵入性、靈敏且特異性的方法。在某些實(shí)施方案中的方法包括從受試者中分離樣品并根據(jù)本文所述的方法對(duì)樣品進(jìn)行分析，以確定受試者是否患有癌癥，例如乳腺癌。本文所述的其他實(shí)施方案提供通過(guò)靶向在癌細(xì)胞中表達(dá)的標(biāo)記物的表達(dá)和/或活性而治療癌癥的方法。另外的實(shí)施方案包括通過(guò)分析供試化合物對(duì)癌性細(xì)胞的影響(包括對(duì)本文所公開(kāi)的標(biāo)記物的表達(dá)和/或活性的影響)而篩選具有抗癌活性的化合物。
[0131]診斷癌癥的方法
[0132]可檢測(cè)任何類(lèi)型的樣品中的乳腺癌，包括但不限于血清、血液、組織等。樣品可以為得自任何受試者的如本文所述的任何類(lèi)型的樣品。
[0133]在一些實(shí)施方案中，癌癥可選自導(dǎo)管原位癌(DCIS)、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(IDC)、髓樣癌、浸潤(rùn)性小葉癌(ILC)、小管癌、粘液癌、炎性乳腺癌(IBC)、小葉原位癌(LCIS)、男性乳腺癌、乳頭派杰氏病、乳腺葉狀腫瘤、復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌或其組合。
[0134]在一些實(shí)施方案中，診斷乳腺癌的方法包括從受試者獲得樣品、然后對(duì)樣品分析樣品中選自以下的一種或多種基因的表達(dá)水平:Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、COL1A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2,⑶L11A1、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1A1、NMU0 與正常非癌性樣品相比表達(dá)水平升高可表明受試者患有癌癥。任何上述基因的表達(dá)水平等于或高于存在于已知為癌癥(例如乳腺癌)陽(yáng)性的樣品中的水平也可表明受試者患有癌癥。
[0135]在一些實(shí)施方案中，診斷乳腺癌的方法可包括檢測(cè)受試者中癌相關(guān)蛋白的水平。在一些實(shí)施方案中，篩查癌癥的方法可包括檢測(cè)得自受試者的樣品中的癌相關(guān)蛋白的水平。在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)蛋白由選自SEQ ID NO:1-70的核苷酸序列、其部分或其互補(bǔ)序列的核苷酸序列編碼。
[0136]在一些實(shí)施方案中，檢測(cè)選自SEQ ID NO:1-70的癌相關(guān)序列的存在性包括將得自受試者的樣品與特異性結(jié)合到癌相關(guān)序列的蛋白的抗體或其他類(lèi)型的捕獲試劑接觸，然后檢測(cè)樣品中是否存在與癌相關(guān)序列的蛋白的結(jié)合?？捎脕?lái)檢測(cè)與通過(guò)如下文所述的癌相關(guān)序列編碼的蛋白的結(jié)合的測(cè)定法的實(shí)例包括但不限于ELISA、放射性免疫測(cè)定(RIA)、流式細(xì)胞術(shù)等。
[0137]在一些實(shí)施方案中，診斷受試者患有乳腺癌的方法包括檢測(cè)選自SEQ ID NO:1_70的癌相關(guān)序列的存在性和/或表達(dá)水平，其中癌相關(guān)序列的存在和/或表達(dá)水平表明受試者患有乳腺癌。癌相關(guān)序列的表達(dá)水平可通過(guò)從得自受試者的樣品中分離諸如mRNA的核酸而加以分析。在一些實(shí)施方案中，該方法包括檢測(cè)選自SEQ ID NO:1-70的癌相關(guān)序列的存在與否，其中不存在癌相關(guān)序列表明不存在乳腺癌。
[0138]在一些實(shí)施方案中，診斷乳腺癌的方法可包括測(cè)定對(duì)其有需要的受試者的基因表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，檢測(cè)癌相關(guān)序列的水平可包括從得自受試者的樣品中分離mRNA或蛋白，然后使用諸如但不限于PCR、質(zhì)譜、微陣列或本文所述的其他檢測(cè)技術(shù)或本領(lǐng)域已知的任何技術(shù)的技術(shù)對(duì)樣品進(jìn)行分析。
[0139]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供診斷受試者中的乳腺癌、癌癥或贅生性病況的方法，該方法包括從衍生自受試者的樣品中獲得選自SEQ ID NO:1-70的癌相關(guān)序列的癌相關(guān)序列基因表達(dá)結(jié)果；以及基于癌相關(guān)序列基因表達(dá)結(jié)果診斷受試者中的乳腺癌或贅生性病況，其中如果癌相關(guān)序列過(guò)表達(dá)或以存在于陽(yáng)性對(duì)照(諸如，已知為癌性從而例如被診斷為乳腺癌陽(yáng)性的樣品)中的水平表達(dá)則將受試者診斷為患有乳腺癌或贅生性病況。陽(yáng)性診斷可通過(guò)將癌相關(guān)序列的表達(dá)水平與得自沒(méi)有癌癥的對(duì)照受試者的正常樣品進(jìn)行比較而作出。高于存在于正常樣品中的表達(dá)水平的供試樣品中的表達(dá)水平可表明供試受試者患有癌癥。
[0140]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供診斷供試樣品中的癌癥的方法，包括:(i)檢測(cè)作為基因產(chǎn)物的至少一種多肽的活性水平；以及(ii)將供試樣品中的多肽的活性水平與正常樣品(得自沒(méi)有癌癥的受試者)中的多肽的活性水平進(jìn)行比較，其中相對(duì)于正常樣品中的多肽活性水平而言供試樣品中的多肽活性水平發(fā)生改變表明供試樣品中存在癌癥，其中所述基因產(chǎn)物是選自以下的基因的產(chǎn)物:Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、COL1A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2,⑶L11A1、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG、RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AU NMU 或其組合。
[0141]在一些實(shí)施方案中，如果癌相關(guān)序列不過(guò)表達(dá)或以低于存在于陽(yáng)性對(duì)照(例如，已知為癌癥陽(yáng)性的樣品)中的水平表達(dá)，則將受試者診斷為沒(méi)有乳腺癌、癌癥或贅生性病況。
[0142]在本發(fā)明的一些實(shí)施方案中，基于如下所述的癌相關(guān)序列基因表達(dá)結(jié)果或癌相關(guān)序列或蛋白的存在與否而診斷的癌癥是選自以下的癌癥:導(dǎo)管原位癌(DCIS)、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(IDC)、髓樣癌、浸潤(rùn)性小葉癌(ILC)、小管癌、粘液癌、炎性乳腺癌(IBC)、小葉原位癌(LCIS)、男性乳腺癌、乳頭派杰氏病、乳腺葉狀腫瘤、復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌或其任意組合。
[0143]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供檢測(cè)或診斷諸如乳腺癌的癌癥的方法，其包括檢測(cè)選自SEQ ID NO:1-66的核酸序列的表達(dá)，其中將樣品與包含選自SEQ ID N0:l_70、其同源物、其組合或其片段的序列的生物芯片接觸。核酸可以為mRNA。
[0144]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過(guò)供試樣品中多肽的表達(dá)而檢測(cè)癌相關(guān)序列的方法，其包括檢測(cè)至少一種多肽諸如但不限于癌相關(guān)蛋白或其片段的表達(dá)水平。在一些實(shí)施方案中，該方法包括將供試樣品中多肽的表達(dá)水平與正常樣品中多肽的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中相對(duì)于正常樣品中的多肽表達(dá)水平而言供試樣品中多肽的表達(dá)水平發(fā)生改變表明供試樣品中存在癌癥。在一些實(shí)施方案中，將多肽表達(dá)與癌癥樣品進(jìn)行比較，其中表達(dá)水平至少與癌癥相同表明供試樣品中存在癌癥。在一些實(shí)施方案中，樣品為細(xì)胞樣品。
[0145]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供通過(guò)檢測(cè)供試樣品中抗體的存在性而檢測(cè)癌癥的方法。樣品可以為例如血清 。在一些實(shí)施方案中，抗體識(shí)別作為癌相關(guān)序列的本文所公開(kāi)的多肽或其表位。在一些實(shí)施方案中，抗體識(shí)別由本文所公開(kāi)的核酸序列編碼的多肽或其表位。在一些實(shí)施方案中，該方法包括檢測(cè)針對(duì)抗原性多肽(諸如但不限于癌相關(guān)蛋白)或其抗原性片段的抗體的水平。在一些實(shí)施方案中，該方法包括將供試樣品中的抗體水平與對(duì)照樣品中的抗體水平進(jìn)行比較，其中相對(duì)于對(duì)照樣品中的抗體水平而言所述供試樣品中的抗體水平發(fā)生改變表明在供試樣品中存在癌癥。在一些實(shí)施方案中，對(duì)照樣品是衍生自正常細(xì)胞的樣品或非癌性樣品。在一些實(shí)施方案中，對(duì)照衍生自癌癥樣品，并因此在一些實(shí)施方案中，該方法包括比較樣品中抗體的結(jié)合水平和/或量。因此，如果對(duì)照為陰性對(duì)照，則與陰性對(duì)照相比具有更高的抗體量的樣品可表明受試者患有癌癥。如果對(duì)照為陽(yáng)性對(duì)照，則存在于供試樣品中的抗體量等于或大于存在于陽(yáng)性對(duì)照中的量可表明受試者患有癌癥。
[0146]本文還提供診斷癌癥或確定癌癥傾向的方法，這些癌癥例如但不限于導(dǎo)管原位癌(DCIS)、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(IDC)、髓樣癌、浸潤(rùn)性小葉癌(ILC)、小管癌、粘液癌、炎性乳腺癌(IBC)、小葉原位癌(LCIS)、男性乳腺癌、乳頭派杰氏病、乳腺葉狀腫瘤、復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌或其組合。確定發(fā)生癌癥(諸如乳腺癌)的傾向的方法可包括測(cè)量本文所公開(kāi)的癌相關(guān)標(biāo)記物的表達(dá)水平。本文所公開(kāi)的癌相關(guān)序列的表達(dá)水平升高可表明發(fā)生癌癥的傾向。升高的水平可通過(guò)將得自受試者的供試樣品中本文所公開(kāi)的一種或多種癌相關(guān)序列的表達(dá)水平與已知為癌癥陰性的樣品和/或已知為癌癥陽(yáng)性的樣品進(jìn)行比較而加以測(cè)定。
[0147]在一些實(shí)施方案中，診斷癌癥或贅生性病況的方法包括:a)在第一個(gè)體的第一樣品類(lèi)型(例如組織)中測(cè)定包含選自表1中所述的人類(lèi)基因組和mRNA序列的核酸序列的一種或多種基因的表達(dá)；以及b)比較得自所述第一個(gè)體或第二未受影響個(gè)體的第二正常樣品類(lèi)型的所述基因的所述表達(dá)；其中所述表達(dá)的差異表明第一個(gè)體患有癌癥。在一些實(shí)施方案中，該表達(dá)與正常樣品相比升高。在一些實(shí)施方案中，該表達(dá)與正常樣品相比降低。
[0148]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供檢測(cè)受試者中的癌細(xì)胞的存在與否的方法。在一些實(shí)施方案中，該方法包括將得自受試者的一個(gè)或多個(gè)細(xì)胞與本文所述的抗體接觸。在一些實(shí)施方案中，該方法包括檢測(cè)癌相關(guān)蛋白和抗體的復(fù)合物，其中檢測(cè)到復(fù)合物表明受試者中存在癌細(xì)胞。
[0149]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供診斷受試者中的癌癥或贅生性病況的方法，該方法包括:a)測(cè)定一種或多種基因或基因產(chǎn)物或其同源物的表達(dá)；以及b)比較得自所述第一受試者或第二未受影響的受試者的第二正常樣品的所述一種或多種核酸序列的所述表達(dá)，其中所述表達(dá)的差異表明第一受試者患有癌癥，其中所述基因或基因產(chǎn)物稱(chēng)為選自以下的基因:人染色體I開(kāi)放閱讀框64(Clorf64)、人假想蛋白L0C338579轉(zhuǎn)錄變體2 (L0C338579)、人類(lèi)似蛋白表達(dá)于前列腺、卵巢、睪丸和胎盤(pán)14同工型POTE-14A (L0C648879)、人組蛋白簇I，H4h (HIST1H4H)、人無(wú)剛毛鱗甲復(fù)合體同源物I (ASCLl)、人膠原X型a l(COLlOAl)、人基質(zhì)金屬肽酶11 (溶基質(zhì)素3) (MMPll)、人唐氏綜合征關(guān)鍵區(qū)基因6(DSCR6)、人細(xì)胞色素P450家族4亞家族Z多肽I (CYP4Z1)、人組蛋白簇2，H4b(HIST2H4B)、BX116033NCI_CGAP_Lu24 人 cDNA 克隆 IMAGp998A155622 (BXl 16033)、人染色體6開(kāi)放閱讀框126 (C6orfl26)、人C型凝集素結(jié)構(gòu)域家族3成員A(CLEC3A)、人組蛋白簇 2，H4a(HIST2H4A)、人絲氨酸水解酶樣 2 (SERHL2)、人假想蛋白 L0C401236 (FLJ23152)、人ATP結(jié)合盒亞家族C(CFTR/MRP)成員11 (ABCCll)轉(zhuǎn)錄變體3、人錨蛋白重復(fù)域30A (ANKRD30A)、人含周期蛋白N端結(jié)構(gòu)域2 (CNTD2)、人膠原XI型a I (COL 11A1)轉(zhuǎn)錄變體A、人脫氫酶/還原酶(SDR家族)成員2(DHRS2)轉(zhuǎn)錄變體1、人組蛋白簇1，H3f(HISTlH3F)、人組蛋白簇 1，H3h (HIST1H3H)、人組蛋白簇 2，H2ab (HIST2H2AB)、人鉀通道亞家族K成員15(KCNK15)、人AARD蛋白(L0C441376)、人類(lèi)似甘氨酸-N-酰基轉(zhuǎn)移酶樣I (L0C643637)、人hCG 25653 (L0C646360)、人蛋白酪氨酸磷酸酶受體型T (PTPRT)轉(zhuǎn)錄變體
2、人含RUN域3A(RUNDC3A)、人分泌球蛋白家族2A成員2 (SCGB2A2)、人SLIT和NTRK樣家族成員6(SLITRK6)、人突觸素(SYP)、人泛素結(jié)合酶E2C(UBE2C)轉(zhuǎn)錄變體3、人鋅指蛋白552 (ZNF552)、人類(lèi)似鈣蛋白酶8轉(zhuǎn)錄變體4 (L0C388743)、NMU(NM_006681.1)(人神經(jīng)調(diào)節(jié)肽mRNA)或其組合。
[0150]癌相關(guān)序列
[0151 ] 在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供與癌癥相關(guān)的核酸和蛋白序列，在本文稱(chēng)為“癌相關(guān)”或“CA”序列。癌相關(guān)序列可例如為已分離的mRNA和/或蛋白。癌相關(guān)序列可以為下文所述的癌相關(guān)序列的任一者的片段。癌相關(guān)序列可相對(duì)于存在于生物樣品中的進(jìn)行化學(xué)修飾。
[0152]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供與乳腺癌相關(guān)的核酸和蛋白序列，這些乳腺癌諸如但不限于導(dǎo)管原位癌(DCIS)、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(IDC)、髓樣癌、浸潤(rùn)性小葉癌(ILC)、小管癌、粘液癌、炎性乳腺癌(IBC)、小葉原位癌(LCIS)、男性乳腺癌、乳頭派杰氏病、乳腺葉狀腫瘤、復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌或其任意組合。在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供與癌癥相關(guān)的核酸和蛋白序列，這些癌癥諸如但不限于:小細(xì)胞肺癌、轉(zhuǎn)移性子宮頸腺癌、膀胱癌、轉(zhuǎn)移性前列腺腺癌、子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤、胃腫瘤腺癌、轉(zhuǎn)移性扁桃體癌、大腸直腸腫瘤腺癌、轉(zhuǎn)移性胃腫瘤、移行細(xì)胞癌轉(zhuǎn)移性腎腫瘤、轉(zhuǎn)移性子宮內(nèi)膜間質(zhì)肉瘤、胸膜腫瘤惡性肉瘤、直腸腺癌、軟骨肉瘤、胰腺神經(jīng)內(nèi)分泌癌、肺鱗癌、腎癌、肝膽管癌、轉(zhuǎn)移性骨肉瘤、食管胃結(jié)合部轉(zhuǎn)移性腺癌、轉(zhuǎn)移性甲狀腺癌、卵巢腫瘤、前列腺腺癌、直腸轉(zhuǎn)移性腫瘤或其組合。在一些實(shí)施方案中，術(shù)語(yǔ)“癌相關(guān)序列”可指代與正常組織相比核苷酸或蛋白序列在癌癥中差異表達(dá)、活化、失活或改變。癌相關(guān)序列可包括在癌癥中上調(diào)(即，以較高的水平表達(dá))以及下調(diào)(即，以較低的水平表達(dá))的那些。癌相關(guān)序列還可以包括已發(fā)生改變(即，易位、截短的序列或具有取代、缺失或插入的序列，包括但不限于點(diǎn)突變)并顯示出相同的表達(dá)譜或改變的表達(dá)譜的序列。在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列可得自人類(lèi)；然而，如本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到，得自其他生物體的癌相關(guān)序列也可用于疾病和藥物評(píng)價(jià)模型；因此，其他癌相關(guān)序列可能是有用的，諸如但不限于得自以下的序列:脊椎動(dòng)物，包括哺乳動(dòng)物，諸如嚙齒類(lèi)動(dòng)物(大鼠、小鼠、倉(cāng)鼠、豚鼠等)、靈長(zhǎng)類(lèi)動(dòng)物和農(nóng)場(chǎng)動(dòng)物(包括綿羊、山羊、豬、奶牛、馬等)。得自其他生物體的癌相關(guān)序列可使用本文所述的技術(shù)獲得。
[0153]本文的實(shí)施方案的癌相關(guān)序列例如在表1中公開(kāi)。這些序列從倍數(shù)變化和過(guò)濾分析KC110729.5中提取。這些癌相關(guān)序列在正常和乳腺腫瘤組織中的表達(dá)在表2中公開(kāi)。一旦確定表達(dá)后，即對(duì)基因序列結(jié)果通過(guò)考慮以下因素而進(jìn)一步過(guò)濾:癌細(xì)胞系與正常組織中的倍數(shù)變化、一般特異性、分泌與否、癌細(xì)胞系中的表達(dá)水平以及信噪比。
[0154]癌相關(guān)序列可包括多肽和/或多核苷酸。因此，癌相關(guān)序列可包括氨基酸序列和/或核酸序列。癌相關(guān)序列可包括表1中所列的序列。癌相關(guān)序列可包括SEQ IDNO:1-70。癌相關(guān)序列可包括編碼 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLUC0L10Al、MMPll、DSCR6、CYP4Zl、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、COLlIAU DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、 ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE、POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428,L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1中的一者或多者的序列。在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列可以為編碼上述mRNA或由上述mRNA或其同源物表達(dá)的癌相關(guān)蛋白或癌相關(guān)多肽的DNA序列。在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列可以為上文所公開(kāi)的序列的突變體核酸。在一些實(shí)施方案中，同源物可具有與所公開(kāi)的多肽序列至少約60%、至少約65%、至少約70 %、至少約75 %、至少約80 %、至少約85 %、至少約90 %、至少約95 %、至少約97 %、至少約98%、至少約99%、至少約99.5%的同一性。
[0155]在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列既可以包括核酸序列也可以包括氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列可包括與所公開(kāi)的序列具有至少約60%同源性的序列。在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列可與所公開(kāi)的序列具有至少約65%、約70%、約75%、約80%、約85 %、約90 %、約95 %、約97 %、約99 %、約99.8 %的同源性。在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列可以是“突變體核酸”。如本文所用，“突變體核酸”是指缺失突變體、插入、點(diǎn)突變、取代、易位。
[0156]本公開(kāi)的核酸可包含磷酸二酯鍵，然而在一些情況下，如下文所述(例如，在反義應(yīng)用中或當(dāng)核酸為候選試劑時(shí))，核酸類(lèi)似物可具有包含例如磷酰胺酯(Beaucage等人，Tetrahedron49 (10): 1925 (1993)及其中的參考文獻(xiàn)；Letsinger, J.0rg.Chem.35:3800 (1970) ;Sprinzl 等人,Eur.J.B1chem.81:579(1977) ;Letsinger 等人,Nucl.AcidsRes.14:3487 (1986) ；Sawai 等人，Chem.Lett.805(1984)，Letsinger 等人，J.Am.Chem.Soc.110:4470 (1988)和 Pauwels 等人,Chemica Scripta26:14191986))、硫代憐酸酯(Mag 等人，Nucleic Acids Res.19:1437 (1991)和美國(guó)專(zhuān)利 5，644，048)、二硫代磷酸酯(Briu 等人,J.Am.Chem.Soc.1ll:2321 (1989)、O-甲基亞磷酰胺酯鍵合(參見(jiàn) Eckstein,Oligonucleotides and Analogues:A Practical Approach, Oxford University Press)的交替主鏈，以及肽核酸主鏈和鍵合(參見(jiàn)Egholm，J.Am.Chem.Soc.114:1895(1992)；Meier 等人，Chem.1nt.Ed.Engl.31: 1008 (1992) ；Nielsen, Nature, 365:566(1993)；Carlsson等人，Nature380:207 (1996)。其他類(lèi)似核酸包括具有帶正電荷主鏈(Denpcy等人，Proc.Natl.Acad.Sc1.USA92:6097 (1995)、非離子型主鏈(美國(guó)專(zhuān)利 5，386，023、5，637，684,5, 602，240,5, 216，141 和 4，469，863 ；Kiedrowshi 等人，Angew.Chem.1ntl.Ed.English30:423(1991) ;Letsinger 等人，J.Am.Chern.Soc.110:4470(1988) ；Letsinger等人，Nucleoside & Nucleotidel3:1597 (1994);第 2 和 3 章,ASC Symposium Series580,“Carbohydrate Modificat1ns in Antisense Research，，，編者 Y.S.Sanghui 和 P.DanCook ;Mesmaeker 等人，B10rganic & Medicinal Chem.Lett.4:395(1994) ;Jeffs 等人，J.B1molecular NMR34:17(1994) !Tetrahedron Lett.37:743 (1996))和非核糖主鏈(包括在美國(guó)專(zhuān)利 5，235，033 和 5，034，506 以及第 6 和 7 章，ASC Symposium Series580,uCarbohydrate Modificat1ns in Antisense Research，，,編者Y.S.Sanghui 和 P.Dan Cook中所述的那些)的那些。包含一個(gè)或多個(gè)碳環(huán)糖的核酸也包括在核酸的一種定義內(nèi)(參見(jiàn)Jenkins 等人，Chem.Soc.Rev.(1995)ppl69_176)。多種核酸在 Rawls, C&E News, 1997 年 6月2日，第35頁(yè)中進(jìn)行了描述。對(duì)磷酸核糖主鏈的這些修飾可因多種原因而進(jìn)行，例如增加此類(lèi)分子在生理環(huán)境下的穩(wěn)定性和半衰期以用于反義應(yīng)用或作為生物芯片上的探針。
[0157]如本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到，此類(lèi)核酸類(lèi)似物可用于本公開(kāi)的一些實(shí)施方案。此外，可以制備天然存在的核酸和類(lèi)似物的混合物；作為另外一種選擇，可制備不同核酸類(lèi)似物的混合物以及天然存在的核酸和類(lèi)似物的混合物。
[0158]在一些實(shí)施方案中，核酸可以為單鏈的或雙鏈的，或可以包含雙鏈或單鏈序列的部分。如本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到，對(duì)單鏈的描繪也限定了另一條鏈的序列；因此，本文所述的序列還包含序列的補(bǔ)體。核酸可以為DNA、基因組和cDNA、RNA或雜交體，其中核酸包含脫氧核糖核苷酸和核糖核苷酸的任意組合以及堿基(包括尿嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶、胞嘧啶、鳥(niǎo)嘌呤、肌苷、黃嘌呤、次黃嘌呤、異胞嘧啶、異鳥(niǎo)嘌呤等)的任意組合。如本文所用，術(shù)語(yǔ)“核苷”包括核苷酸和核苷及核苷酸類(lèi)似物，以及修飾的核苷，諸如氨基修飾的核苷。此外，“核苷”包括非天然存在的類(lèi)似物結(jié)構(gòu)。因此，例如，肽核酸的主題單元(每一個(gè)包含堿基)在本文稱(chēng)為核苷。
[0159]在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列可以是重組核酸。在本文中所謂術(shù)語(yǔ)“重組核酸”是指非通常存在于自然界中的形式的一般通過(guò)用聚合酶和內(nèi)切酶操縱核酸而最初在體外形成的核酸分子。因此，重組核酸也可以為線性形式的分離核酸，或在通過(guò)連接通常未接合的DNA分子而在體外形成的載體中進(jìn)行克隆，出于本發(fā)明的目的，兩者都被視為重組的。應(yīng)當(dāng)理解，一旦制備了重組核酸并將其重新引入宿主細(xì)胞或生物體后，它就可以在體內(nèi)使用宿主細(xì)胞的細(xì)胞機(jī)器復(fù)制，而不是在體外操縱；然而，此類(lèi)核酸一旦通過(guò)重組方式產(chǎn)生后，雖然隨后在體內(nèi)進(jìn)行復(fù)制，但出于本發(fā)明的目的仍被視為重組的或分離的。如本文所用，“多核苷酸”或“核酸”是任何長(zhǎng)度的核苷酸(核糖核苷酸或脫氧核糖核苷酸)的聚合物形式。該術(shù)語(yǔ)包括雙鏈和單鏈DNA和RNA。它還包括已知類(lèi)型的修飾，例如本領(lǐng)域已知的標(biāo)記；甲基化；“帽”;用類(lèi)似物取代一個(gè)或多個(gè)天然存在的核苷酸；核苷酸間修飾，諸如具有不帶電鍵合(例如，硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)的那些；含側(cè)基部分的那些，諸如蛋白(包括例如核酸酶、毒素、抗體、信號(hào)肽、多聚賴(lài)氨酸等)；具有嵌入劑(例如吖啶、補(bǔ)骨脂素等)的那些；含螯合劑(例如金屬、放射性金屬等)的那些；含烷化劑的那些；含修飾鍵合(例如α異頭核酸等)的那些；以及多核苷酸的未修飾形式。
[0160]一些實(shí)施方案提供與多種癌癥相關(guān)的多肽和抗原(例如，癌相關(guān)多肽)作為診斷性和/或治療性抗體的靶標(biāo)。這些抗原也可用于藥物發(fā)現(xiàn)(例如，小分子)和對(duì)細(xì)胞調(diào)控、生長(zhǎng)及分化的進(jìn)一步表征。
[0161]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供包含選自表1中所公開(kāi)的癌相關(guān)多核苷酸序列和/或SEQ ID NO:1-70的序列的至少10、12、15、20或30個(gè)連續(xù)核苷酸的分離核酸。
[0162]在一些實(shí)施方案中，多核苷酸或其補(bǔ)體或其片段還包含可檢測(cè)的物質(zhì)或標(biāo)記、附接到固相載體、至少部分地通過(guò)化學(xué)合成而制備、為反義片段、為單鏈的、為雙鏈的或構(gòu)成微陣列。
[0163]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供在選自SEQ ID NO: 1_70和/或表1所示的多核苷酸序列或其補(bǔ)體的癌相關(guān)序列的開(kāi)放閱讀框內(nèi)編碼的分離多肽。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供分離的多肽，其中所述多肽包含通過(guò)選自SEQ ID NO:1-70的多核苷酸編碼的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供分離的多肽，其中所述多肽包含由癌相關(guān)多肽編碼的氨基酸序列。
[0164]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供包含癌相關(guān)多肽的氨基酸序列的表位的氨基酸序列的分離多肽，其中該多肽或其片段可附接到固相載體。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供結(jié)合到這種多肽的分離抗體(單克隆或多克隆的)或其抗原結(jié)合片段。分離的抗體或其抗原結(jié)合片段可附接到固相載體，或進(jìn)一步包含可檢測(cè)的標(biāo)記。
[0165]用于分析樣品的檢測(cè)方法
[0166]檢測(cè)下文所公開(kāi)的一種或多種標(biāo)記物的表達(dá)水平可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方式進(jìn)行。例如，如果標(biāo)記物是與乳腺癌相關(guān)的蛋白，則可將ELISA用于檢測(cè)標(biāo)記物的表達(dá)水平。其他合適的用于檢測(cè)蛋白標(biāo)記物存在性的測(cè)定法包括放射免疫測(cè)定法、Western印跡和免疫沉淀測(cè)定法，諸如基于微珠的測(cè)定法，例如基于磁珠的測(cè)定法。在一些實(shí)施方案中，可將標(biāo)記物在檢測(cè)前從樣品中分離，但在其他實(shí)施方案中，不從樣品中分離。在一些實(shí)施方案中，蛋白標(biāo)記物可在細(xì)胞背景下表達(dá)(即，在細(xì)胞表面上或細(xì)胞內(nèi))。在這些情況下，可將免疫細(xì)胞化學(xué)用于檢測(cè)標(biāo)記物。作為另外一種選擇，可將流式細(xì)胞術(shù)用于檢測(cè)標(biāo)記物。如果標(biāo)記物包含在細(xì)胞內(nèi)，則可將細(xì)胞用洗滌劑處理以使得標(biāo)記物可接近檢測(cè)試劑。合適的檢測(cè)試劑將包括特異性結(jié)合標(biāo)記物的任何分子，諸如特異性結(jié)合到標(biāo)記物上的表位的抗體。
[0167]合適的檢測(cè)如下文所公開(kāi)的蛋白標(biāo)記物的試劑包括乳腺癌標(biāo)記物的任何特異性結(jié)合伴侶。例如，特異性結(jié)合伴侶可以是結(jié)合乳腺癌標(biāo)記物的蛋白，諸如抗體。其他合適的特異性結(jié)合伴侶可包括結(jié)合乳腺癌標(biāo)記物的受體或特異性結(jié)合乳腺癌標(biāo)記物的酶。
[0168]還可以通過(guò)標(biāo)記分子的可視化將癌癥診斷到特定的組織類(lèi)型。分子可使用諸如但不限于MR1、CAT掃描、PET掃描等任何方法可視化或檢測(cè)。在一些實(shí)施方案中，抗體可結(jié)合到蛋白，然后接受檢測(cè)。在一些實(shí)施方案中，可對(duì)抗體結(jié)合水平進(jìn)行定量以確定蛋白是否過(guò)表達(dá)。差異表達(dá)也可以通過(guò)已知的方法加以測(cè)定。因此，其實(shí)施方案提供對(duì)患有癌癥、疑似患有癌癥或正在接受診斷程序以確定該人是否患有癌癥的受試者的組織結(jié)構(gòu)和細(xì)胞成像的方法。如果成像表明癌相關(guān)蛋白過(guò)表達(dá)或差異表達(dá)，則將患者診斷為患有癌癥或疑似患有癌癥。也可以進(jìn)行其他測(cè)試，諸如但不限于活組織檢查以確認(rèn)或以其他方式有助于診斷。
[0169]標(biāo)記分子也可通過(guò)但不限于可通過(guò)PET或SPECT相機(jī)成像的任何放射性同位素加以標(biāo)記。例如，多種實(shí)施方案的放射性藥物可通過(guò)諸如但不限于76Br、1231、1251、1311、99mTc、nC、18F或其他Y或正電子發(fā)射放射性核素的放射性同位素進(jìn)行放射性標(biāo)記。在其他實(shí)施方案中，標(biāo)記分子可通過(guò)放射性同位素的組合進(jìn)行放射性標(biāo)記。
[0170]在一些實(shí)施方案中，與乳腺癌相關(guān)的標(biāo)記物可以為核酸，例如mRNA分子。核酸可從樣品中分離。核酸的檢測(cè)可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方式進(jìn)行。例如，核酸分子可通過(guò)Southern印跡或Northern印跡、質(zhì)譜、微陣列等進(jìn)行檢測(cè)。核酸可使用PCR進(jìn)行檢測(cè),例如，如果核酸為RNA分子，諸如mRNA分子，則可以使用rtPCR。PCR可以為定量PCR(例如qPCT)或?qū)崟r(shí)PCR。如果樣品包含乳腺癌細(xì)胞，則核酸可通過(guò)原位雜交進(jìn)行檢測(cè)。
[0171]上述測(cè)定法可包括使用探針檢測(cè)核酸標(biāo)記物。探針在下文進(jìn)行描述。簡(jiǎn)而言之，探針可以是長(zhǎng)度在5-40、10-35、15-30核苷酸范圍內(nèi)的核酸分子。探針的長(zhǎng)度可以為約5、約10、約20、約25、約30、約35個(gè)核苷酸。探針可包含編碼乳腺癌標(biāo)記物的基因或編碼乳腺癌標(biāo)記物的基因的補(bǔ)體的一部分。
[0172]基因表達(dá)水平可表示為針對(duì)ADPRT(登錄號(hào)NM_001618.2)、GAPD (登錄號(hào)NM_002046.2，)或本領(lǐng)域已知的其他看家基因進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的相對(duì)表達(dá)。就mRNA表達(dá)的微陣列化探針而言，基因表達(dá)數(shù)據(jù)也可用中值法的中位值來(lái)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。在該方法中，每個(gè)陣列產(chǎn)生不同的總強(qiáng)度。使用中位值是比較實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞系(陣列)的可靠方式。例如，找出每個(gè)細(xì)胞系的中位值，隨后這些中位值的中位值成為用于標(biāo)準(zhǔn)化的值。相對(duì)于其他細(xì)胞系的每一個(gè)產(chǎn)生來(lái)自各細(xì)胞系的信號(hào)。
[0173]癌相關(guān)序列的鑒定和用途
[0174]基因表達(dá)的微陣列分析可用于鑒定與乳腺癌相關(guān)的序列。然后可將這些鑒定的序列以多種不同的方式使用，包括診斷、預(yù)后、篩選調(diào)節(jié)劑(包括激動(dòng)劑和拮抗劑兩者)、生成抗體(用于免疫療法和成像)等。然而，如本領(lǐng)域的技術(shù)人員將會(huì)認(rèn)識(shí)到，在一種類(lèi)型的癌癥中鑒定的序列可具有也涉及在其他類(lèi)型的癌癥中的高可能性。因此，雖然本文所述的序列最初鑒定為與乳腺癌相關(guān)，但是它們也可存在于其他類(lèi)型的癌癥中。
[0175]如本領(lǐng)域的技術(shù)人員將認(rèn)識(shí)到，本文實(shí)施方案的癌相關(guān)序列可用于檢測(cè)受試者中的核酸表達(dá)水平。它們也可用于治療性應(yīng)用。另外，本文中的實(shí)施方案的癌相關(guān)序列可用于篩選應(yīng)用；例如，生成包含癌相關(guān)序列的核酸探針的生物芯片。
[0176]癌基因是可以導(dǎo)致癌癥的基因。致癌作用可通過(guò)多種機(jī)制發(fā)生，包括細(xì)胞被含有癌基因的病毒感染、宿主基因組中原癌基因的活化以及原癌基因和腫瘤抑制基因的突變。致癌作用從根本上說(shuō)由體細(xì)胞進(jìn)化(即，生長(zhǎng)控制逐步喪失的變體的突變和自然選擇)而驅(qū)動(dòng)。將充當(dāng)這些體細(xì)胞突變的靶標(biāo)的基因根據(jù)其突變表型是顯性的還是隱性的而分別歸為原癌基因或腫瘤抑制基因。
[0177]本發(fā)明的一些實(shí)施方案涉及癌相關(guān)序列(“靶標(biāo)記物”)。一些實(shí)施方案涉及鑒定可用于診斷和治療癌癥的新型靶標(biāo)記物的方法，其中在五類(lèi)細(xì)胞類(lèi)型之間對(duì)mRNA、miRNA、蛋白的表達(dá)水平或包括但不限于磷?；蚐UMO化的蛋白翻譯后修飾進(jìn)行比較:(I)永生化多能干細(xì)胞(諸如胚胎干(“ES”)細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干(“iPS”)細(xì)胞和生殖細(xì)胞，諸如胚胎癌性(“EC”)細(xì)胞)或性腺組織；(2)ES、iPS或EC衍生的克隆胚胎祖(“EP”)細(xì)胞系；
(3)有核血細(xì)胞，包括但不限于CD34+細(xì)胞和CD133+細(xì)胞；(4)正常非永生化成體細(xì)胞衍生的組織和培養(yǎng)的細(xì)胞，包括:皮膚成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、正常非淋巴和非癌性組織等；以及(5)惡性癌細(xì)胞，包括培養(yǎng)的癌細(xì)胞系或人類(lèi)腫瘤組織。通常在(或不在)第1、3和5類(lèi)或第I和5類(lèi)中表達(dá)但不在(或在)第2和4類(lèi)中表達(dá)的mRNA、miRNA或蛋白是癌癥診斷和療法的候選靶標(biāo)。本文的一些實(shí)施方案涉及人類(lèi)應(yīng)用、非人類(lèi)獸醫(yī)應(yīng)用或其組合。
[0178]在一些實(shí)施方案中，鑒定靶標(biāo)記物的方法包括以下步驟:1)獲得以下細(xì)胞的mRNA、miRNA、蛋白或蛋白修飾的分子譜:永生化多能干細(xì)胞(諸如胚胎干(“ES”)細(xì)胞、誘導(dǎo)多能干(“iPS”)細(xì)胞和生殖細(xì)胞，諸如胚胎癌性(“EC”)細(xì)胞)；ES、iPS或EC衍生的克隆胚胎祖(“EP”)細(xì)胞系；惡性癌細(xì)胞，包括培養(yǎng)的癌細(xì)胞系或人類(lèi)腫瘤組織；以及2)將那些分子與存在于非永生化體細(xì)胞類(lèi)型(諸如培養(yǎng)的克隆人胚胎祖細(xì)胞、培養(yǎng)的得自胎兒或成年來(lái)源的體細(xì)胞、或惡性癌細(xì)胞的正常組織對(duì)應(yīng)物)中的那些進(jìn)行比較。在諸如hES細(xì)胞的多能干細(xì)胞與惡性癌細(xì)胞之間共有但不存在于大部分體細(xì)胞類(lèi)型中的靶標(biāo)記物可能是候選診斷標(biāo)記物和治療祀標(biāo)。
[0179]分析表達(dá)數(shù)據(jù)的方法
[0180]應(yīng)當(dāng)理解，存在多種獲得表達(dá)數(shù)據(jù)的方法和表達(dá)數(shù)據(jù)的用途。例如，可用于檢測(cè)或診斷受試者患有癌癥的表達(dá)數(shù)據(jù)可通過(guò)實(shí)驗(yàn)獲得。在一些實(shí)施方案中，獲得表達(dá)數(shù)據(jù)包括獲得樣品并對(duì)樣品進(jìn)行處理以從實(shí)驗(yàn)上確定表達(dá)數(shù)據(jù)。表達(dá)數(shù)據(jù)可包括本文所述的癌相關(guān)序列中的一種或多種的表達(dá)數(shù)據(jù)。表達(dá)數(shù)據(jù)可通過(guò)例如使用微陣列或諸如但不限于本文所述的那些的定量擴(kuò)增方法從實(shí)驗(yàn)上確定。在一些實(shí)施方案中，獲得與樣品相關(guān)的表達(dá)數(shù)據(jù)包括從已對(duì)樣品進(jìn)行了處理而從實(shí)驗(yàn)上確定了表達(dá)數(shù)據(jù)的第三方接收表達(dá)數(shù)據(jù)。
[0181]檢測(cè)表達(dá)水平或本文所述的相似步驟可通過(guò)實(shí)驗(yàn)進(jìn)行或由第三方提供，如本文所述。因此，例如，“檢測(cè)表達(dá)水平”可表示從實(shí)驗(yàn)上測(cè)量數(shù)據(jù)和/或獲得已對(duì)樣品進(jìn)行了處理而確定了表達(dá)數(shù)據(jù)并檢測(cè)了表達(dá)水平的另一方所提供的數(shù)據(jù)。在一些實(shí)施方案中，表達(dá)數(shù)據(jù)可通過(guò)實(shí)驗(yàn)檢測(cè)并由第三方提供。
[0182]使用雜交到由以下不同類(lèi)別的細(xì)胞類(lèi)型制備的RNA探針序列(表1所示)的Illumina基因表達(dá)微陣列，進(jìn)行了 mRNA水平上基因表達(dá)的比較:1)人胚胎干(“ES”)細(xì)胞或性腺組織；2)ES、iPS或EC衍生的克隆胚胎祖(“EP”)細(xì)胞系；3)有核血細(xì)胞，包括但不限于⑶34+細(xì)胞和⑶133+細(xì)胞；4)正常非永生化成體細(xì)胞衍生的組織和培養(yǎng)的細(xì)胞，包括:皮膚成纖維細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞、正常非淋巴和非癌性組織等；以及5)惡性癌細(xì)胞，包括培養(yǎng)的癌細(xì)胞系或人類(lèi)腫瘤組織，以檢測(cè)通常在(或不在)第1、3和5類(lèi)或第I和5類(lèi)中表達(dá)但不在(或在)第2和4類(lèi)中表達(dá)的基因。基于此觀察結(jié)果對(duì)這些癌癥的療法將基于降低在癌癥中上調(diào)的上文提及的轉(zhuǎn)錄物的表達(dá)，或者說(shuō)是降低基因產(chǎn)物的表達(dá)。
[0183]基因表達(dá)陣列:測(cè)量基因表達(dá)水平可通過(guò)本領(lǐng)域中任何已知的方法進(jìn)行，包括但不限于定量PCR、或微陣列基因表達(dá)分析、微珠陣列基因表達(dá)分析和Northern分析?；虮磉_(dá)水平可表示為針對(duì)ADPRT(登錄號(hào)NM_001618.2 ;SEQ ID NO:37)、GAPD(登錄號(hào)NM_002046.2 ；SEQ ID NO:38)或本領(lǐng)域已知的其他看家基因進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化的相對(duì)表達(dá)。就mRNA表達(dá)的微陣列化探針而言，基因表達(dá)數(shù)據(jù)也可用中值法的中位值來(lái)進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)化。在該方法中，每個(gè)陣列產(chǎn)生不同的總強(qiáng)度。使用中位值是比較實(shí)驗(yàn)中的細(xì)胞系(陣列)的可靠方式。例如，找出每個(gè)細(xì)胞系的中位值，隨后這些中位值的中位值成為用于標(biāo)準(zhǔn)化的值。相對(duì)于其他細(xì)胞系的每一個(gè)產(chǎn)生來(lái)自各細(xì)胞系的信號(hào)。
[0184]得自受試者的樣品可通過(guò)本領(lǐng)域已知的任何方法進(jìn)行分析以確定受試者是否患有癌癥。例如，可對(duì)mRNA進(jìn)行分析以確定下文所述的一種或多種癌相關(guān)序列的表達(dá)水平。RNA提取:可將本公開(kāi)的細(xì)胞用0.05%的胰蛋白酶和0.5mM的EDTA孵育，然后收集在含有0.5% BSA 的 DMEM(Gibco,Gaithersburg,MD)中?？墒褂?RNeasy 小量提取試劑盒(Qiagen，Hilden, Germany)從細(xì)胞中純化總RNA。
[0185]微RNA和小RNA可實(shí)現(xiàn)基因表達(dá)。因此，癌癥可與微RNA (miRNA)或小RNA的異常表達(dá)相關(guān)?？蓮脑谑斋@RNA前經(jīng)歷了血清饑餓以接近在許多成熟組織中觀察到的細(xì)胞生長(zhǎng)停滯的細(xì)胞培養(yǎng)物中分離總RNA或富集了小RNA物種的樣品。細(xì)胞生長(zhǎng)停滯可通過(guò)更換到含有0.5%血清的培養(yǎng)基持續(xù)5天(其中在第一次添加低血清培養(yǎng)基后2-3天更換一次培養(yǎng)基)而進(jìn)行。RNA可根據(jù)Qiagen RNAeasy試劑盒的供應(yīng)商說(shuō)明而收獲以分離總RNA,或根據(jù)Amb1n mirVana試劑盒的供應(yīng)商說(shuō)明而收獲以分離富集了小RNA物種的RNA。RNA濃度可通過(guò)分光光度法測(cè)定，RNA質(zhì)量可通過(guò)變性瓊脂糖凝膠電泳以顯示28S和18S RNA而測(cè)定。具有清楚可見(jiàn)的28S和18S條帶而無(wú)降解跡象并處于約2: I的28S: 18S比率的樣品可用于隨后的miRNA分析。
[0186]miRNA 可使用得自 Applied B1systems, Inc.的 Human Panel TaqMan MicroRNAAssay進(jìn)行定量。這是一種兩步測(cè)定法，它將莖環(huán)引物用于逆轉(zhuǎn)錄(RT)，然后進(jìn)行實(shí)時(shí)TaqMan?。可進(jìn)行總共330種miRNA測(cè)定以對(duì)H9人類(lèi)胚胎干細(xì)胞系、分化的成纖維細(xì)胞系和從人類(lèi)胚胎干細(xì)胞分化的九種細(xì)胞系中的miRNA水平進(jìn)行定量。測(cè)定法包括兩個(gè)步驟:逆轉(zhuǎn)錄(RT)和定量PCR。實(shí)時(shí)PCR可在Applied B1systems7500實(shí)時(shí)PCR系統(tǒng)上進(jìn)行。每個(gè)細(xì)胞的拷貝數(shù)可基于合成的mir-16miRNA的標(biāo)準(zhǔn)曲線并假定約15pg/細(xì)胞的總RNA質(zhì)量而估計(jì)。
[0187]逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可使用5 μ I最終體積中的Ix cDNA存檔緩沖液、3.35單位MMLV逆轉(zhuǎn)錄酶、5mM各dNTP、l.3單位AB RNA酶抑制劑、2.5nM330-plex反向引物(RP)、3ng細(xì)胞RNA進(jìn)行。逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)可在B1Rad或MJ熱循環(huán)儀上按以下循環(huán)參數(shù)進(jìn)行:20°C 30秒，42°C 30秒，50°C I秒，60個(gè)循環(huán)，然后是85°C 5min的一個(gè)循環(huán)。
[0188]實(shí)時(shí)PCR。兩微升按1: 400稀釋的Pre-PCR產(chǎn)物可用于20ul反應(yīng)。所有反應(yīng)均一式兩份進(jìn)行。由于方法非?？煽?，重復(fù)樣品可以是足夠并且也足夠準(zhǔn)確以獲得miRNA表達(dá)水平的值。ABI的TaqMan universal PCR master mix (TaqMan通用PCR擴(kuò)增預(yù)混試劑)可根據(jù)制造商的建議使用。簡(jiǎn)而言之，可將Ix TaqMan Universal Master Mix(ABI) >IuM正向引物、IuM通用反向引物和0.2uM TaqMan探針用于各實(shí)時(shí)PCR。所用的條件可以如下:95°C lOmin，然后是95°C 15s和60°C Imin的40個(gè)循環(huán)。所有反應(yīng)均可在ABI Prism7000序列檢測(cè)系統(tǒng)上運(yùn)行。
[0189]微陣列雜交和數(shù)據(jù)處理:可通過(guò)體外轉(zhuǎn)錄(IVT) (Affymetrix, Santa Clara,CA)或使用Illumina Total Prep RNA Labelling試劑盒使cDNA樣品和細(xì)胞總RNA(在八根單獨(dú)的管中各5yg)接受用于生物素標(biāo)記的單循環(huán)靶標(biāo)記程序。對(duì)于Affymetix基因芯片上的分析，可隨后使cRNA片段化然后根據(jù)制造商的說(shuō)明雜交到Human GenomeU133Plus2.0Array (Affymetrix)。微陣列數(shù)據(jù)可通過(guò) GeneChip Scanner3000 (Affymetrix)處理以生成CEL數(shù)據(jù)。然后可使CEL數(shù)據(jù)接受dChip軟件分析，該軟件具有同時(shí)標(biāo)準(zhǔn)化和處理多個(gè)數(shù)據(jù)集的優(yōu)點(diǎn)。從八個(gè)得自細(xì)胞的未擴(kuò)增對(duì)照、從八個(gè)得自稀釋的細(xì)胞RNA的獨(dú)立擴(kuò)增樣品以及從得自20個(gè)單細(xì)胞的擴(kuò)增cDNA樣品獲得的數(shù)據(jù)可根據(jù)程序的默認(rèn)設(shè)置在相應(yīng)的組內(nèi)單獨(dú)標(biāo)準(zhǔn)化。基于模型的表達(dá)指數(shù)(MBEI)可使用PM/MM差模通過(guò)信號(hào)強(qiáng)度的log-2變換和低值截?cái)嗟搅愣?jì)算。絕對(duì)結(jié)果(存在、臨界和不存在)可通過(guò)AffymetrixMicroarray Software5.0 (MAS5.0)算法使用dChip默認(rèn)設(shè)置計(jì)算。只有“存在”的探針的表達(dá)水平可考慮用于下文所述的所有定量分析。微陣列數(shù)據(jù)的GEO登錄號(hào)為GSE4309。對(duì)于在 Illumina Human HT-12v4Express1n Bead Chips 上的分析而言，標(biāo)記的 cRNA可根據(jù)制造商的說(shuō)明進(jìn)行雜交。
[0190]覆蓋度和準(zhǔn)確度的計(jì)算:將真陽(yáng)性定義為結(jié)果為在八個(gè)未擴(kuò)增對(duì)照的至少六個(gè)中“存在”的探針，將真表達(dá)水平定義為“存在”的探針的對(duì)數(shù)平均表達(dá)水平。覆蓋度的定義為(在擴(kuò)增樣品中檢測(cè)到的真陽(yáng)性探針數(shù))/(真陽(yáng)性探針數(shù))。準(zhǔn)確度的定義為(在擴(kuò)增樣品中檢測(cè)到的真陽(yáng)性探針數(shù))/(在擴(kuò)增樣品中檢測(cè)到的探針數(shù))。擴(kuò)增的和未擴(kuò)增的樣品的表達(dá)水平可按20.5(20,20.5，21，21.5...)的組距劃分，其中對(duì)準(zhǔn)確度和覆蓋度進(jìn)行計(jì)算。這些表達(dá)水平區(qū)間也可用于分析所檢測(cè)的探針的頻率分布。
[0191]細(xì)胞的基因表達(dá)譜分析:對(duì)得自細(xì)胞的微陣列數(shù)據(jù)的非監(jiān)督聚類(lèi)和鄰類(lèi)分析可使用GenePattern軟件進(jìn)行，該軟件結(jié)合排列檢驗(yàn)進(jìn)行信噪比分析/T檢驗(yàn)以通過(guò)高置信度排除任何樣本變異性(包括得自方法和/或活組織檢查的那些)帶來(lái)的貢獻(xiàn)。這些分析可在14，128個(gè)探針上進(jìn)行，對(duì)于這些探針，20個(gè)單細(xì)胞中至少6個(gè)提供“存在”結(jié)果，而20個(gè)樣品中至少I(mǎi)個(gè)提供> 20個(gè)拷貝每個(gè)細(xì)胞的表達(dá)水平?？蓪⒔Y(jié)果為不存在/臨界的探針?biāo)?jì)算的表達(dá)水平截?cái)嗟搅?。為了?jì)算相對(duì)基因表達(dá)水平，可將通過(guò)Q-PCR分析獲得的Ct值用通過(guò)人類(lèi)全基因組(BD B1sciences)或含有基因片段的質(zhì)粒定量的各個(gè)引物對(duì)的效率加以校正。相對(duì)表達(dá)水平可通過(guò)用包含在反應(yīng)混合物中的加標(biāo)RNA計(jì)算的校準(zhǔn)曲線而進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成拷貝數(shù)(1gltl[表達(dá)水平]=1.05X 1gltl[拷貝數(shù)]+4.65)?？蛇M(jìn)行獨(dú)立性的卡方檢驗(yàn)以評(píng)價(jià)基因表達(dá)與Gata4的關(guān)聯(lián)，它表示通過(guò)非監(jiān)督聚類(lèi)分析確定的聚類(lèi)I與聚類(lèi)2之間的差異并在隨后的階段限于PE。通過(guò)Q-PCR測(cè)量的各個(gè)基因的表達(dá)水平可分成三類(lèi):高(> 100個(gè)拷貝每個(gè)細(xì)胞)、中(10-100個(gè)拷貝每個(gè)細(xì)胞)和低(< 10個(gè)拷貝每個(gè)細(xì)胞)。得自Gata4表達(dá)的獨(dú)立性卡方檢驗(yàn)和P值可基于該分類(lèi)而計(jì)算?？ǚ蕉x如下:χ2=ΣΣ (n fij-fi fj)2/n fi fj，其中i和分別表示參照(Gata4)和靶基因的表達(dá)水平類(lèi)別(高、中或低)和fij分別表示觀察到的類(lèi)別1、和ij的頻率；以及η表示樣品數(shù)(η=24) 0自由度可定義為(r-1) X (c-1)，其中r和c分別表示Gata4和靶基因的表達(dá)水平類(lèi)別的可用數(shù)量。
[0192]治療癌癥的癌癥治療劑和方法
[0193]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供抑制受試者中的癌細(xì)胞生長(zhǎng)的方法。在一些實(shí)施方案中，該方法包括向受試者施用有效量的如本文所述的藥物組合物。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供向受試者中的癌細(xì)胞遞送治療劑的方法，該方法包括:向受試者施用有效量的根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物。
[0194]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供治療諸如乳腺癌的癌癥的方法。在一些實(shí)施方案中，癌癥可選自導(dǎo)管原位癌(DCIS)、浸潤(rùn)性導(dǎo)管癌(IDC)、髓樣癌、浸潤(rùn)性小葉癌(ILC)、小管癌、粘液癌、炎性乳腺癌(IBC)、小葉原位癌(LCIS)、男性乳腺癌、乳頭派杰氏病、乳腺葉狀腫瘤、復(fù)發(fā)性和轉(zhuǎn)移性乳腺癌或其組合。
[0195]在一些實(shí)施方案中，表達(dá)乳腺癌相關(guān)序列之一的乳腺癌可通過(guò)拮抗癌相關(guān)序列的活性而治療。在一些實(shí)施方案中，治療乳腺癌的方法可包括施用治療劑，諸如但不限于拮抗結(jié)合到癌相關(guān)序列的配體的抗體，抑制癌相關(guān)序列的表達(dá)或活性的小分子，針對(duì)癌相關(guān)序列的siRNA等。在一些實(shí)施方案中，可將諸如ELISA的技術(shù)以及本文所述的其他檢測(cè)技術(shù)用于篩查乳腺癌。
[0196]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供治療受試者中的癌癥的方法，該方法包括向患有癌癥的受試者施用抑制選自以下的癌相關(guān)序列的活性的試劑:Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、⑶LIIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC, FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF, POTEE, POTEK, C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG,RET、TMEM145, L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、N0S1AP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AI或其組合。在一些實(shí)施方案中，該試劑包括特異性結(jié)合到選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、 ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、⑶L11A1、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PIPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC, FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF, POTEE, POTEK, C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG,RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、N0S1AP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AI或其組合的癌相關(guān)序列的抗體。
[0197]在一些實(shí)施方案中，治療癌癥的方法可包括向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呤┯玫鞍椎目贵w。在一些實(shí)施方案中，抗體可以為單克隆抗體或多克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，該抗體可以是人源化抗體或重組抗體?？墒褂靡阎姆椒ㄖ苽涮禺愋越Y(jié)合到此區(qū)域的抗體，并且任何方法均是合適的。在一些實(shí)施方案中，該抗體特異性結(jié)合到Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、⑶L11A1、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC, FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF, POTEE, POTEK, C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG,RET、TMEMl45, L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AI
或其片段。例如，抗體可結(jié)合到存在于由本文所述的癌相關(guān)序列編碼的任何蛋白的特定表位。在一些實(shí)施方案中，該表位包含癌相關(guān)序列的約1-10、1-20、1-30、3-10或3_15個(gè)殘基。在一些實(shí)施方案中，該表位不是線性的。
[0198]在一些實(shí)施方案中，該抗體結(jié)合到本文所述的區(qū)域或與該區(qū)域具有至少90%、95%或99%同源性或同一性的肽。在一些實(shí)施方案中，本文所述的區(qū)域的片段的長(zhǎng)度為5-10個(gè)殘基。在一些實(shí)施方案中，本文所述的區(qū)域的片段(例如表位)的長(zhǎng)度為3-5個(gè)殘基。這些片段基于所提供的長(zhǎng)度進(jìn)行描述。在一些實(shí)施方案中，表位的長(zhǎng)度為約3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15 或 20 個(gè)殘基。
[0199]在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合的序列可包括核酸和氨基酸序列兩者。在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合的序列可包括與所公開(kāi)的序列具有至少約60%同源性的序列。在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合的序列可與所公開(kāi)的序列具有至少約65%、約70%、約75%、約80%、約85 %、約90 %、約95 %、約97 %、約99 %、約99.8 %的同源性。在一些實(shí)施方案中，序列可稱(chēng)為“突變體核酸”或“突變體肽序列”。
[0200]在一些實(shí)施方案中，該方法還包括用下述抗體治療診斷患有乳腺癌的受試者，該抗體結(jié)合到選自SEQ ID NO:1-70的癌相關(guān)序列并抑制乳腺癌的生長(zhǎng)或進(jìn)展。
[0201]與受體表達(dá)相關(guān)的信息也可用于確定目的在于使用激動(dòng)劑或拮抗劑上調(diào)或下調(diào)癌相關(guān)序列信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的療法。
[0202]在一些實(shí)施方案中，治療癌癥(例如乳腺癌或其他類(lèi)型的癌癥)的方法包括檢測(cè)癌相關(guān)序列的受體的存在性并施用癌癥治療措施。癌癥治療措施可以是任何癌癥治療措施，例如，抑制癌相關(guān)序列的作用特異性的治療措施。例如，可在給予癌癥治療措施前對(duì)各種癌癥進(jìn)行檢測(cè)以確定是否存在特定的分子。因此，在一些實(shí)施方案中，樣品將得自患者并如本文所述檢測(cè)癌相關(guān)序列的存在性或癌相關(guān)序列的過(guò)表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，如果發(fā)現(xiàn)癌相關(guān)序列過(guò)表達(dá)，則將乳腺癌治療措施或治療劑施用給受試者。乳腺癌治療措施可以是常規(guī)的非特異性治療措施，諸如化療，或者治療措施可包括僅靶向癌相關(guān)序列的活性或癌相關(guān)序列結(jié)合的受體的特異性治療措施。這些治療措施可以為例如特異性結(jié)合癌相關(guān)序列并抑制其活性的抗體。
[0203]在一些實(shí)施方案中，治療癌癥的方法可包括施用干擾癌相關(guān)蛋白或其受體的合成、分泌、受體結(jié)合或受體信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)的試劑。
[0204]在一些實(shí)施方案中，可基于差異表達(dá)的基因或基因產(chǎn)物將癌細(xì)胞用治療劑特異性靶向。例如，在一些實(shí)施方案中，差異表達(dá)的基因產(chǎn)物可以是酶，其可以將抗癌前藥轉(zhuǎn)化成其活性形式。因此，在正常細(xì)胞中，其中差異表達(dá)的基因產(chǎn)物不表達(dá)或以明顯較低的水平表達(dá)，前藥可以未活化或以較低的量活化，并因此可對(duì)正常細(xì)胞的毒性較低。因此，癌癥前藥可在一些實(shí)施方案中以較高的劑量給予，使得癌細(xì)胞可代謝前藥，其將例如殺死癌細(xì)胞，而正常細(xì)胞將不代謝前藥或不同樣地代謝，并因此對(duì)患者的毒性較低。這方面的實(shí)例是其中腫瘤細(xì)胞過(guò)表達(dá)金屬蛋白酶，其在Atkinson等人，British Journal ofPharmacology (2008) 153，1344-1352中有所描述，該文獻(xiàn)的整個(gè)內(nèi)容以及特異性靶向癌細(xì)胞的方法據(jù)此以引用方式并入。使用蛋白酶靶向癌細(xì)胞還在Carl等人，PAAS, Vol.77，N0.4，第2224-2228頁(yè)，1980年4月中有所描述，該文獻(xiàn)的整個(gè)內(nèi)容以及特異性靶向癌細(xì)胞的方法據(jù)此以引用方式并入。例如，可將多柔比星或其他類(lèi)型的化療劑連接到由差異表達(dá)的基因產(chǎn)物特異性裂解或識(shí)別的肽序列。然后將多柔比星或其他類(lèi)型的化療劑從肽序列裂解并活化，使得它可以殺死癌細(xì)胞或抑制癌細(xì)胞的生長(zhǎng)，而在正常細(xì)胞中，化療劑不內(nèi)化到細(xì)胞中或不夠有效地代謝并因此毒性較低。
[0205]在一些實(shí)施方案中，治療乳腺癌的方法可包括本文所述的一種或多種癌相關(guān)序列的基因敲低?；蚯玫褪侵附档蜕矬w基因中的一種或多種的表達(dá)所借助的技術(shù)，其通過(guò)遺傳修飾(生物體染色體之一的DNA中的變化，諸如但不限于編碼癌相關(guān)序列的染色體)或通過(guò)用諸如序列與mRNA轉(zhuǎn)錄物或基因互補(bǔ)的短DNA或RNA寡核苷酸的試劑處理而進(jìn)行。在一些實(shí)施方案中，所用的寡核苷酸可選自:RNA酶-H感受態(tài)反義寡核苷酸，諸如但不限于ssDNA寡核苷酸、ssRNA寡核苷酸、硫代磷酸寡核苷酸或嵌合寡核苷酸；RNA酶非依賴(lài)性反義寡核苷酸，諸如嗎啉代寡核苷酸、2' -O-甲基硫代磷酸寡核苷酸、鎖核酸寡核苷酸或肽核酸寡核苷酸；RNAi寡核苷酸，諸如但不限于siRNA雙鏈寡核苷酸或shRNA寡核苷酸；或其任意組合。在一些實(shí)施方案中，可將質(zhì)粒引入細(xì)胞，其中該質(zhì)粒表達(dá)反義RNA轉(zhuǎn)錄物或shRNA轉(zhuǎn)錄物。引入的寡核苷酸或表達(dá)的轉(zhuǎn)錄物可通過(guò)互補(bǔ)堿基配對(duì)(有義-反義相互作用)與靶mRNA (例如SEQ ID NO: 1-70)相互作用。
[0206]具體的沉默機(jī)制可隨寡核苷酸化學(xué)而變化。在一些實(shí)施方案中，本文所述的寡核苷酸的結(jié)合以活化基因或其轉(zhuǎn)錄物可通過(guò)以下機(jī)制導(dǎo)致表達(dá)降低:阻斷轉(zhuǎn)錄，降解mRNA轉(zhuǎn)錄物(例如，通過(guò)小干擾RNA (siRNA)或RNA酶-H依賴(lài)性反義寡核苷酸)，或阻斷mRNA翻譯、前mRNA剪接位點(diǎn)或用于其他功能性RNA諸如miRNA成熟的核酸酶裂解位點(diǎn)(例如，通過(guò)嗎啉代寡核苷酸或其他RNA酶-H非依賴(lài)性反義寡核苷酸)。例如，RNA酶-H感受態(tài)反義寡核苷酸(和反義RNA轉(zhuǎn)錄物)可與由裂解RNA鏈的酶RNA酶-H識(shí)別的RNA形成雙鏈體。又如，RNA酶非依賴(lài)性寡核苷酸可結(jié)合到mRNA并阻斷翻譯過(guò)程。在一些實(shí)施方案中，寡核苷酸可在5' -UTR中結(jié)合并在起始復(fù)合物從5'-帽到起始密碼子時(shí)停止起始復(fù)合物，從而防止核糖體組裝。RNAi寡核苷酸的單鏈可被加載到RISC復(fù)合物中，該復(fù)合物催化裂解互補(bǔ)序列并抑制具有部分互補(bǔ)序列的一些mRNA的翻譯?？赏ㄟ^(guò)任何技術(shù)將寡核苷酸引入細(xì)胞，這些技術(shù)包括但不限于電穿孔、顯微注射、鹽應(yīng)激法(諸如CaC12應(yīng)激)；通過(guò)陽(yáng)離子脂質(zhì)諸如Lipofectamine轉(zhuǎn)染陰離子寡核苷酸；通過(guò)胞內(nèi)釋放劑諸如Endo-Porter轉(zhuǎn)染不帶電的寡核苷酸；或其任意組合。在一些實(shí)施方案中，可使用選自以下的技術(shù)將寡核苷酸從血液遞送到胞液:納米粒子復(fù)合物、病毒介導(dǎo)的轉(zhuǎn)染、連接到八胍鎗鹽樹(shù)枝狀聚合物(octaguanidinium dendrimer)的寡核苷酸(嗎啉代寡核苷酸)或其任意組合。
[0207]在一些實(shí)施方案中，治療乳腺癌的方法可包括對(duì)細(xì)胞進(jìn)行處理以敲低或抑制編碼在SEQ ID NO:1-70中所公開(kāi)的mRNA的基因的表達(dá)。該方法可包括用表達(dá)針對(duì)癌相關(guān)序列的沉默RNA的逆轉(zhuǎn)錄病毒對(duì)衍生自hES細(xì)胞的克隆胚胎祖細(xì)胞系CM02和EN13 (參見(jiàn)名稱(chēng)為“Methods to accelerate the isolat1n of novel cell strains from pluripotentstem cells and cells obtained thereby” 的美國(guó)專(zhuān)利公布 2008/0070303 和 2009 年7 月 16 日提交的并且名稱(chēng)為 “Methods to Accelerate the Isolat1n of Novel CellStrains from Pluripotent Stem Cells and Cells Obtained Thereby” 的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)12/504，630，兩專(zhuān)利均據(jù)此整體以引用方式并入)進(jìn)行培養(yǎng)。在一些實(shí)施方案中，該方法還可以包括通過(guò)qPCR確認(rèn)下調(diào)。在一些實(shí)施方案中，該方法還包括對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存。在一些實(shí)施方案中，該方法還包括對(duì)細(xì)胞進(jìn)行重編程。在一些實(shí)施方案中，該方法包括通過(guò)外源性施用 0CT4、MYC、KLF4 和 S0X2 (參見(jiàn) Takahashi 和 Yamanaka2006 年 8 月 25 日；126 (4):663-76 ;以 US2009/0068742 公布的并且名稱(chēng)為 “Nuclear Reprogramming Factor” 的美國(guó)專(zhuān)利申請(qǐng)12/086，479，每一者均以引用方式并入本文)以及通過(guò)在以W0/2007/019398公布的并且名稱(chēng)為 “Improved Methods of Reprogramming Animal Somatic Cells，，的 PCT/US06/30632中所述的方法在兩天內(nèi)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行冷凍保存或重編程。在一些實(shí)施方案中，該方法可包括在促進(jìn)ES細(xì)胞繁殖的條件下對(duì)哺乳動(dòng)物分化的細(xì)胞進(jìn)行培養(yǎng)。在一些實(shí)施方案中，可以使用任何便利的ES細(xì)胞繁殖條件，例如，在飼養(yǎng)層上或在能夠繁殖ES細(xì)胞的無(wú)飼養(yǎng)層培養(yǎng)基中。在一些實(shí)施方案中，該方法包括從培養(yǎng)物中的ES集落鑒定細(xì)胞。然后可對(duì)得自鑒定的ES集落的細(xì)胞評(píng)價(jià)ES標(biāo)記物，例如0ct4、TRAl-60、TRAl-81、SSEA4等，然后可擴(kuò)增具有ES細(xì)胞表型的那些細(xì)胞?？善叫械貙?duì)尚未通過(guò)敲低而預(yù)處理的對(duì)照細(xì)胞系進(jìn)行重編程以證實(shí)預(yù)處理的有效性。在一些實(shí)施方案中，治療癌癥的方法包括向?qū)ζ溆行枰氖茉囌呤┯谜{(diào)節(jié)癌相關(guān)蛋白的活性的治療劑，其中癌相關(guān)蛋白由包含選自表1中的人類(lèi)核酸序列的核酸序列的核酸編碼并且其中治療劑結(jié)合到癌相關(guān)蛋白。
[0208]在一些實(shí)施方案中，治療癌癥的方法包括施用抗體(例如，單克隆抗體、人類(lèi)抗體、人源化抗體、重組抗體、嵌合抗體等)，該抗體特異性結(jié)合到在細(xì)胞表面上表達(dá)的癌相關(guān)蛋白。在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合到癌相關(guān)蛋白的胞外域。在一些實(shí)施方案中，抗體結(jié)合到相對(duì)于正常細(xì)胞表面在癌細(xì)胞表面上差異表達(dá)的癌相關(guān)蛋白，或在一些實(shí)施方案中，結(jié)合到至少一個(gè)人類(lèi)癌細(xì)胞系。在一些實(shí)施方案中，抗體連接到治療劑。
[0209]篩選抗癌劑
[0210]在一些實(shí)施方案中，提供了鑒定抗癌劑的方法，其中該方法包括將候選試劑與樣品接觸；以及測(cè)定樣品中癌相關(guān)序列的活性。在一些實(shí)施方案中，如果樣品中癌相關(guān)序列的活性在接觸后降低，則將該候選試劑鑒定為抗癌劑。在一些實(shí)施方案中，候選試劑為候選抗體。在一些實(shí)施方案中，該方法包括將結(jié)合到癌相關(guān)序列的候選抗體與樣品接觸，并測(cè)定癌相關(guān)序列的活性，其中如果樣品中癌相關(guān)序列活性在接觸后降低則將該候選抗體鑒定為抗癌劑。癌相關(guān)序列的活性可以是癌相關(guān)序列的任何活性。
[0211]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供鑒定抗癌(例如，乳腺癌)劑的方法，該方法包括將候選試劑與細(xì)胞樣品接觸；以及測(cè)定細(xì)胞樣品中選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、COL1A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2,⑶L11A1、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、P0TEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF, Ρ0ΤΕΕ、Ρ0ΤΕΚ、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AI 或其組合的癌相關(guān)序列的活性，其中如果癌相關(guān)序列的活性在接觸后在細(xì)胞樣品中降低則將候選試劑鑒定為抗癌劑。
[0212]在一些實(shí)施方案中，本公開(kāi)提供鑒定抗癌劑的方法，該方法包括將結(jié)合到選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLl、C0L10A1、MMPl1、DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl 16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCC11、ANKRD30A、CNTD2、COLl IAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC,FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF, POTEE, POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG, RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428, L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1或其組合的癌相關(guān)序列的候選抗體與細(xì)胞樣品接觸，以及測(cè)定癌相關(guān)序列的活性，其中如果癌相關(guān)序列的活性在接觸后在細(xì)胞樣品中降低則將候選抗體鑒定為抗癌劑。
[0213]在一些實(shí)施方案中，篩選候選藥物的方法包括將不存在候選藥物的情況下癌相關(guān)序列的表達(dá)水平與存在候選藥物的情況下的表達(dá)水平進(jìn)行比較。表達(dá)水平可例如通過(guò)測(cè)量下文所公開(kāi)的一種或多種癌相關(guān)序列的mRNA水平而測(cè)定。作為另外一種選擇，表達(dá)水平可通過(guò)測(cè)量由下文所公開(kāi)的癌序列編碼的一種或多種蛋白的表達(dá)水平。
[0214]一些實(shí)施方案涉及篩選能夠結(jié)合到癌相關(guān)序列(核酸或蛋白)的治療劑的方法，該方法包括將癌相關(guān)序列和候選治療劑組合，并測(cè)定候選試劑與癌相關(guān)序列的結(jié)合。
[0215]本文還提供了篩選能夠調(diào)節(jié)癌相關(guān)序列的活性的治療劑的方法。在一些實(shí)施方案中，該方法包括將癌相關(guān)序列和候選治療劑組合，并測(cè)定候選試劑對(duì)癌相關(guān)序列的生物活性的影響。可將調(diào)節(jié)癌相關(guān)序列的生物活性的試劑用作能夠調(diào)節(jié)癌相關(guān)序列的活性的治療劑。
[0216]一種篩選抗癌活性的方法，該方法包括:(a)將表達(dá)癌相關(guān)基因的細(xì)胞與抗癌候選藥物接觸，該癌相關(guān)基因轉(zhuǎn)錄選自SEQ ID NO:1-70的癌相關(guān)序列、其同源物、其組合或其片段；(b)檢測(cè)細(xì)胞中抗癌候選藥物對(duì)癌相關(guān)多核苷酸的表達(dá)的影響；以及(c)將不存在候選藥物的情況下的表達(dá)水平與存在候選藥物的情況下的表達(dá)水平進(jìn)行比較；其中對(duì)癌相關(guān)多核苷酸的表達(dá)的影響表明候選藥物具有抗癌活性。
[0217]在一些實(shí)施方案中，評(píng)價(jià)候選抗癌藥物的影響的方法可包括向患者施用藥物并從患者中取出細(xì)胞樣品。然后測(cè)定細(xì)胞的表達(dá)譜。在一些實(shí)施方案中，該方法還可以包括將患者的表達(dá)譜與健康個(gè)體的表達(dá)譜進(jìn)行比較。在一些實(shí)施方案中，表達(dá)譜包括測(cè)量本文所公開(kāi)的序列的一種或多種或其任意組合的表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，如果本文所公開(kāi)的序列的一種或多種或其任意組合的表達(dá)譜發(fā)生改變(升高或降低)，則將候選抗癌藥物稱(chēng)為是有效的。
[0218]特定活細(xì)胞中的基因表達(dá)模式可能是其當(dāng)前狀態(tài)所特有的。幾乎所有的細(xì)胞狀態(tài)或類(lèi)型差異都反映在一種或多種基因的RNA水平的差異。比較未表征的基因的表達(dá)模式可提供其功能的線索。對(duì)成百上千種基因的表達(dá)進(jìn)行高通量分析可有助于(a)鑒定復(fù)雜的遺傳疾病，(b)分析隨著時(shí)間的推移組織與疾病狀態(tài)之間的差異基因表達(dá)，以及(C)藥物發(fā)現(xiàn)和毒理學(xué)研究。某些基因的表達(dá)水平的升高或降低與癌癥生物學(xué)相關(guān)聯(lián)。例如，癌基因是腫瘤發(fā)生的正調(diào)節(jié)物，而腫瘤抑制基因是腫瘤發(fā)生的負(fù)調(diào)節(jié)物(Marshall，Cell，64:313-326(1991) ；ffeinberg, Science，254:1138-1146 (1991))。因此，本文的一些實(shí)施方案提供在癌癥中、尤其是在癌發(fā)生中涉及的多核苷酸和多肽序列。
[0219]在一些實(shí)施方案中，這些方法包括靶向與正常體組織相比在乳腺癌組織中以異常水平表達(dá)的標(biāo)記物。在一些實(shí)施方案中，該標(biāo)記物可包括SEQ ID NO:1-70或其任意組合。
[0220]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選抗癌活性的方法，其包括:(a)提供表達(dá)癌相關(guān)基因的細(xì)胞，該癌相關(guān)基因編碼選自表1 (SEQ ID NO:1-70)中所示的癌相關(guān)序列或其片段的核酸序列；(b)將可衍生自癌細(xì)胞的細(xì)胞與抗癌候選藥物接觸；(c)監(jiān)測(cè)細(xì)胞樣品中抗癌候選藥物對(duì)癌相關(guān)序列的表達(dá)的影響；以及任選地(d)將不存在所述候選藥物的情況下的表達(dá)水平與存在候選藥物的情況下的表達(dá)水平進(jìn)行比較。候選藥物可以是轉(zhuǎn)錄抑制劑、G蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑、生長(zhǎng)因子拮抗劑、絲氨酸-蘇氨酸激酶拮抗劑、酪氨酸激酶拮抗劑。在一些實(shí)施方案中，如果候選藥物調(diào)節(jié)癌相關(guān)序列的表達(dá)，則將候選藥物稱(chēng)為具有抗癌活性。在一些實(shí)施方案中，抗癌活性通過(guò)測(cè)量細(xì)胞生長(zhǎng)而測(cè)定。在一些實(shí)施方案中，候選藥物抑制或阻礙細(xì)胞生長(zhǎng)，并稱(chēng)為具有抗癌活性。在一些實(shí)施方案中，候選藥物導(dǎo)致細(xì)胞死亡，并因此將候選藥物稱(chēng)為具有抗癌活性。
[0221]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選抗乳腺癌活性的方法。在一些實(shí)施方案中，該方法包括將過(guò)表達(dá)癌相關(guān)基因的細(xì)胞與乳腺癌候選藥物接觸，該癌相關(guān)基因與選自SEQ IDNO:1-70、其同源物、其組合或其片段的癌相關(guān)序列互補(bǔ)。在一些實(shí)施方案中，該方法包括檢測(cè)乳腺癌候選藥物對(duì)細(xì)胞中癌相關(guān)多核苷酸的影響或?qū)?xì)胞生長(zhǎng)或活力的影響。在一些實(shí)施方案中，該方法包括將不存在候選藥物的情況下的表達(dá)水平、細(xì)胞生長(zhǎng)或活力與存在候選藥物的情況下的表達(dá)水平、細(xì)胞生長(zhǎng)或活力進(jìn)行比較；其中對(duì)癌相關(guān)多核苷酸表達(dá)、細(xì)胞生長(zhǎng)或活力的影響表明候選藥物具有對(duì)抗過(guò)表達(dá)癌相關(guān)基因的乳腺癌細(xì)胞的活性，其中所述基因包含的序列為選自SEQ ID NO:1-70、其互補(bǔ)序列、其同源物、其組合或其片段的序列。在一些實(shí)施方案中，候選藥物選自轉(zhuǎn)錄抑制劑、G蛋白偶聯(lián)受體拮抗劑、生長(zhǎng)因子拮抗劑、絲氨酸-蘇氨酸激酶拮抗劑或酪氨酸激酶拮抗劑。
[0222]在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供篩選能夠調(diào)節(jié)癌相關(guān)序列的活性的治療劑的方法，其中所述序列可由包含選自SEQ ID N0:l-70和/或表1中所示的多核苷酸序列的核酸序列的核酸編碼，所述方法包括:a)將所述癌相關(guān)序列和候選治療劑組合；以及b)測(cè)定候選試劑對(duì)所述癌相關(guān)序列的生物活性的影響。在一些實(shí)施方案中，治療劑影響癌相關(guān)序列的表達(dá)；影響癌相關(guān)序列的活性。在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列是癌相關(guān)蛋白。在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列是癌相關(guān)核酸分子。
[0223]針對(duì)癌癥的免疫反應(yīng)
[0224]下文所公開(kāi)的癌相關(guān)序列可用作抗原以刺激受試者中的免疫反應(yīng)。
[0225]在一些實(shí)施方案中，可將抗原呈遞細(xì)胞(APC)用于在體內(nèi)或離體活化T淋巴細(xì)胞，以引起針對(duì)表達(dá)癌相關(guān)序列的細(xì)胞的免疫反應(yīng)。APC是高度特化的細(xì)胞并可包括但不限于巨噬細(xì)胞、單核細(xì)胞和樹(shù)突狀細(xì)胞(DC)。APC可加工抗原并將其肽片段與淋巴細(xì)胞活化所需的分子一起展示在細(xì)胞表面上。在一些實(shí)施方案中，APC可以是樹(shù)突狀細(xì)胞。DC可分成亞類(lèi)，包括例如濾泡樹(shù)突狀細(xì)胞、朗格漢斯樹(shù)突狀細(xì)胞和表皮樹(shù)突狀細(xì)胞。
[0226]一些實(shí)施方案涉及癌相關(guān)多肽和編碼癌相關(guān)序列的多核苷酸、其片段或其突變體以及抗原呈遞細(xì)胞(諸如但不限于樹(shù)突狀細(xì)胞)在受試者中引起針對(duì)表達(dá)癌相關(guān)多肽序列的細(xì)胞(諸如但不限于癌細(xì)胞)的免疫反應(yīng)的用途。在一些實(shí)施方案中，引起針對(duì)表達(dá)癌相關(guān)序列的細(xì)胞的免疫反應(yīng)的方法包括:(I)分離造血干細(xì)胞，(2)對(duì)細(xì)胞進(jìn)行遺傳修飾以表達(dá)癌癥相關(guān)序列，(3)將細(xì)胞分化成DC，以及(4)將DC施用給受試者(例如，人類(lèi)患者)。在一些實(shí)施方案中，引起免疫反應(yīng)的方法包括:(I)分離DC(或分離并分化DC前體細(xì)胞)，(2)用癌相關(guān)序列對(duì)細(xì)胞進(jìn)行沖擊，以及(3)將DC施用給受試者。這些途徑在下文予以更詳細(xì)的描述。在一些實(shí)施方案中，可將沖擊后的DC或表達(dá)性DC用于離體活化T淋巴細(xì)胞。這些一般技術(shù)及其變型形式可在本領(lǐng)域技術(shù)人員的知識(shí)范圍內(nèi)(參見(jiàn)例如W097/29182、TO97/04802、TO97/22349、TO96/23060、W098/01538 ；Hsu 等人，1996，NatureMed.2:52-58)，并且另外其他變型形式可能在將來(lái)發(fā)現(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，將癌相關(guān)序列與受試者接觸以刺激免疫反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，免疫反應(yīng)是治療性免疫反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，免疫反應(yīng)是預(yù)防性免疫反應(yīng)。例如，可將癌相關(guān)序列與受試者在刺激免疫反應(yīng)有效的條件下接觸。癌相關(guān)序列可作為例如DNA分子(例如DNA疫苗)、RNA分子或多肽或其任意組合而施用。施用序列以刺激免疫反應(yīng)是已知的，但是在本公開(kāi)之前尚不清楚將使用的序列的種類(lèi)。本文所公開(kāi)的任何序列或序列組合或其同源物均可施用給受試者以刺激免疫反應(yīng)。
[0227]在一些實(shí)施方案中，將樹(shù)突狀細(xì)胞前體細(xì)胞分離以通過(guò)癌相關(guān)序列轉(zhuǎn)導(dǎo)，然后進(jìn)行誘導(dǎo)以分化成樹(shù)突狀細(xì)胞。進(jìn)行了遺傳修飾的DC表達(dá)癌相關(guān)序列，并可在細(xì)胞表面上展示肽片段。
[0228]在一些實(shí)施方案中，所表達(dá)的癌相關(guān)序列包括天然存在的蛋白的序列。在一些實(shí)施方案中，癌相關(guān)序列不包括天然存在的序列。如前面所述，可以使用天然存在的蛋白的片段；此外，表達(dá)的多肽與天然存在的多肽相比可包含突變，諸如缺失、插入或氨基酸取代，只要至少一個(gè)肽表位可由DC加工并呈遞在MHC I類(lèi)或II類(lèi)表面分子上。在一些實(shí)施方案中，可能有利的是使用非“野生型”的序列，以便例如增強(qiáng)肽的抗原性或提高肽表達(dá)水平。在一些實(shí)施方案中，引入的癌相關(guān)序列可編碼變體，諸如多態(tài)變體(例如由特定的人類(lèi)患者表達(dá)的變體)或特定癌癥( 例如，在特定受試者中的癌癥)所特有的變體。
[0229]在一些實(shí)施方案中，可通過(guò)多種標(biāo)準(zhǔn)方法中的任一種將癌相關(guān)表達(dá)序列引入(轉(zhuǎn)導(dǎo)進(jìn))DC或干細(xì)胞，這些方法包括轉(zhuǎn)染、重組牛痘病毒、腺相關(guān)病毒(AAV)、逆轉(zhuǎn)錄病毒等。
[0230]在一些實(shí)施方案中，可將本發(fā)明的轉(zhuǎn)化DC引入受試者(例如但不限于人類(lèi)患者)，其中DC可誘導(dǎo)免疫反應(yīng)。通常，免疫反應(yīng)包括針對(duì)具有抗原肽(例如，在MHC I類(lèi)/肽復(fù)合物中)的靶細(xì)胞的細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞(CTL)反應(yīng)。這些靶細(xì)胞通常為癌細(xì)胞。
[0231]在一些實(shí)施方案中，當(dāng)將DC施用給受試者時(shí)，它們可優(yōu)選地從得自該受試者的前體細(xì)胞分離或衍生自該前體細(xì)胞(即，可將DC施用給自體受試者)。然而，可將細(xì)胞輸注進(jìn)HLA匹配的異體或HLA不匹配的異體受試者。在后一情況中，可向受試者施用免疫抑制藥物。
[0232]在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞可按任何合適的方式施用。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞可通過(guò)藥學(xué)上可接受的載體(例如鹽水)施用。在一些實(shí)施方案中，細(xì)胞可通過(guò)靜脈內(nèi)、關(guān)節(jié)內(nèi)、肌內(nèi)、真皮內(nèi)、腹膜內(nèi)或皮下途徑施用。施用(即，免疫)可按一定的時(shí)間間隔重復(fù)。DC的輸注可與作用于維持DC數(shù)量和活性(例如GM-CSF、IL-12)的細(xì)胞因子的施用相結(jié)合。
[0233]在一些實(shí)施方案中，施用給受試者的劑量可以是足以隨著時(shí)間的推移在患者中誘導(dǎo)通過(guò)測(cè)量T細(xì)胞增殖、T淋巴細(xì)胞細(xì)胞毒性的測(cè)定法所檢測(cè)的免疫反應(yīng)和/或?qū)崿F(xiàn)有益治療反應(yīng)的劑量，例如以抑制癌細(xì)胞生長(zhǎng)或?qū)е掳┘?xì)胞數(shù)量或腫瘤大小的減小。
[0234]在一些實(shí)施方案中，獲得DC(例如，從患者中或通過(guò)前體細(xì)胞的體外分化獲得)，然后用具有癌相關(guān)序列的抗原肽沖擊。沖擊導(dǎo)致肽呈遞到細(xì)胞的表面MHC分子上。展示在細(xì)胞表面上的肽/MHC復(fù)合物可能能夠誘導(dǎo)針對(duì)表達(dá)癌相關(guān)多肽的靶細(xì)胞(例如但不限于癌細(xì)胞)的MHC限制性細(xì)胞毒性T淋巴細(xì)胞反應(yīng)。
[0235]在一些實(shí)施方案中，用于沖擊的癌相關(guān)序列的長(zhǎng)度可以為至少約6個(gè)或8個(gè)氨基酸并少于約30個(gè)氨基酸或少于約50個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，免疫原性肽序列可具有約8至約12個(gè)氨基酸。在一些實(shí)施方案中，可以使用人類(lèi)蛋白片段的混合物；作為另外一種選擇，可以使用限定序列的特定肽。肽抗原可通過(guò)以下方式產(chǎn)生:從頭肽合成、用酶消化純化的或重組的人類(lèi)肽、從天然來(lái)源(例如受試者或得自受試者的腫瘤細(xì)胞)純化肽序列、或表達(dá)編碼人類(lèi)肽片段的重組多核苷酸。
[0236]在一些實(shí)施方案中，用于沖擊DC的肽的量可取決于肽或多肽的性質(zhì)、大小和純度。在一些實(shí)施方案中，可以使用約0.05ug/ml至約lmg/ml、約0.05ug/ml至約500ug/ml、約 0.05ug/ml 至約 250ug/ml、約 0.5ug/ml 至約 lmg/ml、約 0.5ug/ml 至約 500ug/ml、約
0.5ug/ml至約250ug/ml或約lug/ml至約100ug/ml量的肽。在向培養(yǎng)的DC添加肽抗原后，然后可允許細(xì)胞吸收并加工抗原足夠的時(shí)間并與I類(lèi)或II類(lèi)MHC相連在細(xì)胞表面上表達(dá)抗原肽。在一些實(shí)施方案中，吸收和加工抗原的時(shí)間可為約18至約30小時(shí)、約20至約30小時(shí)或約24小時(shí)。
[0237]已經(jīng)描述了用于預(yù)測(cè)不同的MHC I類(lèi)和II類(lèi)分子的肽結(jié)合基序的系統(tǒng)和方法的許多實(shí)例。這種預(yù)測(cè)可用于預(yù)測(cè)將結(jié)合到所需的MHC I類(lèi)或II類(lèi)分子的肽基序。此類(lèi)方法、系統(tǒng)以及本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員可出于此目的而查閱的數(shù)據(jù)庫(kù)的實(shí)例包括:Peptide Binding Motifs for MHC Class I and II Molecules ；William E.Biddison,Roland Martin, Current Protocols in Immunology, UnitlI(D01:10.1002/0471142735.1ma01is36 ；Online Posting Date:May，2001)。
[0238]Biddison提供了肽結(jié)合基序在預(yù)測(cè)與特定MHC I或II類(lèi)等位基因相互作用方面的用途，并給出了 MHC結(jié)合基序在預(yù)測(cè)T細(xì)胞識(shí)別方面的用途的實(shí)例。
[0239]表3提供了在NIH Center for Informat1n Technology(美國(guó)衛(wèi)生研究院信息技術(shù)中心)網(wǎng)站、B1lnformatics 和 Molecular Analysis Sect1n (http://www-bimas.cit.nih.gov/cg1-bin/molb1/ken—parker—comboform)進(jìn)行的 HLA 妝基序搜索的不例性結(jié)果。將全長(zhǎng)HIST1H4H肽序列(SEQ ID NO:39)用作搜索查詢(xún)。
[0240]表3:HLA肽基序搜索的示例性結(jié)果

【權(quán)利要求】
1.一種檢測(cè)受試者中的乳腺癌的方法，包括:a)從受試者獲得樣品，b)將得自所述受試者的所述樣品與檢測(cè)由基因FSIPl、Col 10A、MMPl1、NMU和Clorf64或其補(bǔ)體編碼的標(biāo)記物的表達(dá)的一種或多種試劑接觸；c)將非癌性細(xì)胞與得自b)的所述一種或多種試劑接觸；以及d)將得自所述受試者的所述樣品中由基因FSIPl、CollOA, MMPl1、NMU和Clorf64或其補(bǔ)體編碼的標(biāo)記物的表達(dá)水平與所述非癌性細(xì)胞中由基因FSIPl、Col 10A、MMPl1、NMU和Clorf64編碼的標(biāo)記物之一的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與所述非癌性細(xì)胞相比所述樣品中由基因FSIPl、Col 10A、MMPl1、NMU和Clorf64表達(dá)的標(biāo)記物中的至少一種的表達(dá)更高表明所述受試者患有乳腺癌。
2.一種檢測(cè)受試者中的乳腺癌的方法，包括:a)從受試者獲得樣品；b)將得自所述受試者的所述樣品與檢測(cè)由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLUC0L10Al、MMPll、DSCR6、CYP4Zl、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、COLlIAU DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC, FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE, POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHl, SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AI或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)的一種或 多種試劑接觸；c)將例如得自乳腺組織的非癌性細(xì)胞的非癌性細(xì)胞與得自b)的所述一種或多種試劑接觸；以及d)將得自所述受試者的所述樣品中由選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BXl 16033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCC11、ANKRD30A、CNTD2、COLl IAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5, L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP, UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC,FSIPU GFRAU L0C647333、POTEF、POTEE, POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG, RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428, L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AI或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平與所述非癌性細(xì)胞中由選自 Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlUDSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、COLlIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNKl5,L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT、RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP、UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPU GFRAU L0C647333、POTEF、POTEE, POTEK、C2orf27A、L0C727941(XR_037440.1)、NBPF22P、P0TEG、RET、TMEM145、L0C727941(XR_037165.1)、NAT1、NXPHl, SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP, UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、C0L10A1或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與所述非癌性細(xì)胞相比在所述樣品中由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCClU ANKRD30A、CNTD2、COLlIAUDHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP, UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、LOC647333、POTEF、POTEE, POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG,RET、TMEM145, L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHU SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AI或其補(bǔ)體的基因編碼的標(biāo)記物中一種或多種的表達(dá)水平更高表明所述受試者患有乳腺癌。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述受試者為人。
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述樣品為體液。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其中所述體液為血清。
6.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述試劑結(jié)合到所述標(biāo)記物之一。
7.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述試劑為核酸。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的方法，其中所述核酸選自DNA和RNA。
9.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述試劑為蛋白。
10.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述蛋白為抗體。
11.據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其中所述樣品為組織樣品。
12.據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，還包括從所述樣品中分離至少一種分子。
13.據(jù)權(quán)利要求12所述的方法，其中所述分子為編碼所述標(biāo)記物之一的核酸。
14.據(jù)權(quán)利要求11所述的方法，其中所述分子是由選自Clorf64、L0C338579、L0C648879、HIST1H4H、ASCLU C0L10A1、MMPlU DSCR6、CYP4Z1、HIST2H4B、BX116033、C6orfl26、CLEC3A、HIST2H4A、SERHL2、FLJ23152、ABCCl1、ANKRD30A、CNTD2、COLlIAl、DHRS2、HIST1H3F、HIST1H3H、HIST2H2AB、KCNK15、L0C441376、L0C643637、L0C646360、PTPRT, RUNDC3A、SCGB2A2、SLITRK6、SYP, UBE2C、ZNF552、L0C388743、POTEC、FSIPl、GFRAl、L0C647333、POTEF、POTEE, POTEK、C2orf27A、L0C727941 (XR_037440.1)、NBPF22P、POTEG,RET、TMEM145、L0C727941 (XR_037165.1)、NATU NXPHl, SERHL2、SYCP2、D59687、CYP4Z1、L0C730024、NOSIAP、UGT2B28、GRM4、FLJ30428、L0C440905、L0C642460、MTL5、GRPR、COL1AI的基因中的一種或多種編碼的蛋白。
15.種檢測(cè)受試者中的乳腺癌的方法，包括:a)從受試者獲得樣品，b)將得自所述受試者的所述樣品與檢測(cè)由基因MMPll、Coll0A、C10rf64、ColllA、P0TEG和FSIPl或其補(bǔ)體編碼的標(biāo)記物的表達(dá)的一種或多種試劑接觸；c)將非癌性細(xì)胞與得自b)的所述一種或多種試劑接觸；以及d)將得自所述受試者的所述樣品中由基因MMPll、Coll0A、C10rf64、ColllA、POTEG和FSIPl或其補(bǔ)體編碼的標(biāo)記物的表達(dá)水平與所述非癌性細(xì)胞中由基因MMP11、CollOA, C10rf64、ColllA, POTEG和FSIPl編碼的標(biāo)記物之一的表達(dá)水平進(jìn)行比較，其中與所述非癌性細(xì)胞相比所述樣品中由基因MMPl1、CollOA, C10rf64、ColllA, POTEG和FSIPl編碼的標(biāo)記物中的至少一種的表達(dá)更高表明所述受試者患有乳腺癌。
16.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述受試者為人。
17.根據(jù)權(quán)利要求15所述的方法，其中所述樣品為體液。
18.根據(jù)權(quán)利要求17所述的方法，其中所述體液為血清。
【文檔編號(hào)】G01N33/567GK104080924SQ201280050952
【公開(kāi)日】2014年10月1日 申請(qǐng)日期:2012年8月16日 優(yōu)先權(quán)日:2011年8月16日
【發(fā)明者】克倫·查普曼, 約瑟夫·瓦格納, 邁克爾·韋斯特, 詹妮弗·洛麗·基德, 瑪麗亞·J·普倫德斯 申請(qǐng)人:昂科賽特公司