一種雙黃連口服液指紋圖譜的構(gòu)建方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明設(shè)及雙黃連口服液多種成分測定。更具體地說，本發(fā)明設(shè)及能夠同時檢測 雙黃連口服液中多種有效成分W及判斷是否存在山銀花的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 雙黃連口服液是由金銀花、黃琴及連翅經(jīng)提取精制而成，具有辛涼解表、清熱解毒 功效，適用于風(fēng)熱感冒引起的上呼吸道感染、扁桃體炎、咽炎、病毒性肺炎等細(xì)菌和病毒感 染性疾病有一定療效。雙黃連口服液對風(fēng)熱感冒有很好的療效。但是，由于金銀花的價格 越來越高的原因，現(xiàn)在市場出現(xiàn)了使用山銀花代替金銀花來制備雙黃連口服液的現(xiàn)象。由 于金銀花和山銀花無論從來源和性狀還是其化學(xué)成分等方面都有很大不同，如果使用山銀 花代替金銀花制備雙黃連口服液的話，對雙黃連口服液的療效會產(chǎn)生極大的影響。
[0003] 金銀花為忍冬科植物忍冬的干燥花蕾或帶初開的花。山銀花為忍冬科植物灰拉毛 忍冬、紅腺忍冬或華南忍冬的干燥花蕾或帶初開的花。雖然兩者都含有綠原酸，但是其他有 效成分例如蘆了、木犀草巧、搬皮素=個化學(xué)成分更多分布于金銀花中，而在山銀花中更多 含有灰拉毛忍冬皂巧己和川續(xù)斷皂巧己。
[0004] 現(xiàn)有的關(guān)于雙黃連液體制劑的質(zhì)量檢測方法，都僅僅W綠原酸為依據(jù)來進(jìn)行檢 巧。，對于其他成分例如蘆了、木犀草巧、搬皮素均沒有標(biāo)準(zhǔn)的指紋圖譜作為鑒定依據(jù)，同時， 是否含有灰拉毛忍冬皂巧己和川續(xù)斷皂巧己也沒有相應(yīng)的檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 作為各種廣泛且細(xì)致的研究和實(shí)驗(yàn)的結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，在金銀花 中含有特定的化學(xué)成分蘆了、木犀草巧、搬皮素，而山銀花中含有川續(xù)斷皂巧己和灰拉毛 忍冬皂巧己特定成分?；谠摲N發(fā)現(xiàn)，完成了本發(fā)明。
[0006] 本發(fā)明的一個目的是解決至少上述問題和/或缺陷，并提供至少后面將說明的優(yōu) 點(diǎn)。
[0007] 本發(fā)明還有一個目的是通過本發(fā)明所述檢測方法，構(gòu)建雙黃連口服液的指紋圖 譜，同時可W檢測出雙黃連口服液中是否含有川續(xù)斷皂巧己成分，為建立雙黃連口服液質(zhì) 量監(jiān)控體系提供基礎(chǔ)。
[000引本發(fā)明還有一個目的是通過本發(fā)明所述檢測方法，提高雙黃連口服液的HPLC待 測液制備效率，W便獲得更好的檢測效果。
[0009] 為了實(shí)現(xiàn)根據(jù)本發(fā)明的該些目的和其它優(yōu)點(diǎn)，提供了一種雙黃連口服液指紋圖譜 的構(gòu)建方法。其中所述雙黃連口服液由金銀花、黃琴、連翅、庶糖W及香精制成，所述構(gòu)建方 法包括W下步驟：
[0010] 步驟一、制備供試品溶液，取雙黃連口服液1. 0血，精密稱定，加入25血50%甲醇 水溶液，45°C水浴5-lOmin后，立即進(jìn)行離屯、，取上清液；將所述上清液置于50mL圓底燒瓶 中，回流提取化，冷卻后稱重，用50%甲醇溶液補(bǔ)足失重，超微過濾；得供試品溶液；由于雙 黃連口服液在制備過程中添加了庶糖和香精等輔助成分，在供試品溶液制備的過程中要避 免庶糖和香精殘留在供試品溶液中，影響后續(xù)色譜分析結(jié)果。所W，提前將供試品在45°C下 水浴，由于在高溫狀態(tài)下，庶糖極難溶解于甲醇中，通過后續(xù)的回流提取得到的供試品溶液 更純凈為后期高效液相色譜檢測奠定基礎(chǔ)。
[0011] 步驟二、采用高效液相色譜法檢測所述雙黃連口服液的活性成分，W及檢測是否 含有川續(xù)斷皂巧己；其中色譜條件為：
[0012] 色譜柱；WatersAcquityUPLC肥HRPis;流動相：己膳-0.4%冰醋酸水；梯度洗 脫；0-10min，15 %A-85 %B;2-4min，25 %A-75 %B;4-8min，37 %A-63 %B;8-10min，56 % A-44%B;10-llmin，93%A-7%B;柱溫；35°C;檢測波長；300nm。理論塔板數(shù)按綠原酸峰 計(jì)算不低于1000,與相鄰峰的分離度大于2. 0。
[0013] 在其中一個實(shí)施例中，所述雙黃連口服液的活性成分包括；綠原酸、連翅巧、黃琴 巧W及木犀草巧。其中木梶草甘是金銀花中區(qū)別于山銀花的特征成分，所W除了檢測雙黃 連口服液中綠原酸、連翅巧W及黃琴巧該=種活性成分之外，為了保證其質(zhì)量檢測體系的 精確性，本發(fā)明選擇木梶草甘作為檢測成分之一。
[0014] 在其中一個實(shí)施例中，所述色譜條件還包括；ELSD檢測器參數(shù)；漂移管溫度為 80°C，載氣流速為2. 5ml/min。
[0015] 在其中一個實(shí)施例中，所述超微過濾具體指；使用0. 45ym微孔濾膜過濾。
[0016] 在其中一個實(shí)施例中，所述構(gòu)建方法還包括對照品溶液的制備，具體包括；精密稱 取綠原酸、連翅巧、黃琴巧、木犀草W及川續(xù)斷皂巧己對照品；〇. 889mg、0. 886mg、0. 903mg、 0.92〇111肖化及〇.976111肖化及，^己膳-〇.4%磯酸水溶液為溶劑，于棟色容量瓶中定容至2血， 作為儲備液。其他不同質(zhì)量濃度的對照品溶液由儲備液稀釋得到。
[0017] 在其中一個實(shí)施例中，雙黃連口服液中金銀花采用山銀花取代，其制備方法如下： 取山銀花、連翅W及黃琴的干燥生藥，粉碎成細(xì)粉過4號篩；加水煎煮比，過濾蒸干，殘?jiān)?70%甲醇超聲20min，0. 45ym微孔濾膜過濾。其中所述供試品中含有綠原酸1. 18mg/mU黃 琴巧7. 2mg/mL，連翅巧0. 04mg/mL，木梶草甘0. 013mg/mL，川續(xù)斷皂巧己3. 51mg/血。
[001引本發(fā)明至少包括W下有益效果；本發(fā)明通過在雙黃連口服液檢測過程中對雙黃連 口服液的綠原酸、連翅巧、黃琴巧、木犀草等多種成分同時測定，使用現(xiàn)有設(shè)備，同一種檢測 條件下將指紋圖譜和多種活性成分一次性檢測完成，同時，在此特定條件下還可W檢測出 川續(xù)斷皂巧己等成分，用于鑒定雙黃連口服液的質(zhì)量。采用簡單的緩沖鹽溶液直接溶解對 照品和供試品溶液，成功地解決川續(xù)斷皂巧己對照品高濃度情況下的析出問題，也解決了 供試品溶液長期室溫放置的某些成分衰減問題；采用于一定溫度下制備供試品溶液，解決 了雙黃連口服液中輔料對供試品溶液中活性成分檢測的影響。
[0019] 本發(fā)明的其它優(yōu)點(diǎn)、目標(biāo)和特征將部分通過下面的說明體現(xiàn)，部分還將通過對本 發(fā)明的研究和實(shí)踐而為本領(lǐng)域的技術(shù)人員所理解。
【附圖說明】
[0020] 圖1示出了本發(fā)明其中一個實(shí)施例所述雙黃連口服液的高效液相色譜圖；
[0021] 圖2示出了本發(fā)明其中一個實(shí)施例所述雙黃連口服液的高效液相色譜圖。
【具體實(shí)施方式】
[0022] 下面結(jié)合附圖對本發(fā)明做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，W令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文 字能夠據(jù)W實(shí)施。
[0023] 應(yīng)當(dāng)理解，本文所使用的諸如"具有"、"包含及"包括"術(shù)語并不配出一個或多 個其它元件或其組合的存在或添加。
[0024] < 實(shí)例 1〉
[0025] 本發(fā)明雙黃連口服液指紋圖譜的構(gòu)建方法，采用的儀器和材料：
[0026] WatersAcquityUPLCH-Class系統(tǒng)，包括四元累，自動進(jìn)樣器，E：LSD檢測器等。 十萬分之一天平（梅特勒公司）；EL204萬分之一天平（上海精密儀器有限公司）；KQ-250DE 超聲波清洗器（昆山市超聲波儀器有限公司）。
[0027] 甲醇與己膳（色譜純，F(xiàn)isher公司），己醇，磯酸（分析純，北京化工廠），雙蒸 水。對照品綠原酸（N0;110753-201313)和木犀草巧（N0;111720-201107)購自中國食品 藥品檢定研究院。山銀花材料經(jīng)鑒定為忍冬科植物灰拉毛忍冬Loniceramacranthoides Hand.-Mazz