.的干燥花蕾。
[002引本發(fā)明所述雙黃連口服液指紋圖譜的構(gòu)建方法。其中所述雙黃連口服液由金銀 花、黃琴、連翅、庶糖W及香精制成，所述構(gòu)建方法包括W下步驟：
[0029] 步驟一、制備供試品溶液，取市售雙黃連口服液1. 0血，精密稱定，加入25血50% 甲醇水溶液，45°C水浴5-lOmin后，立即進(jìn)行離屯、，其中離屯、的溫度例如控制在30°C-40°C 之間；之后取上清液；將所述上清液置于50mL圓底燒瓶中，回流提取化，冷卻后稱重，用 50%甲醇溶液補(bǔ)足失重，使用0. 45ym微孔濾膜過(guò)濾。得供試品溶液；
[0030] 對(duì)照品溶液的制備，具體包括；精密稱取綠原酸、連翅巧、黃琴巧、木犀草W及川續(xù) 斷皂巧己對(duì)照品；〇. 889mg、0. 886mg、0. 903mg、0. 920mgW及 0. 976mg，W己膳-0. 4%磯酸水 溶液為溶劑，于棟色容量瓶中定容至2mU作為儲(chǔ)備液。其他不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液由 儲(chǔ)備液稀釋得到。
[0031] 步驟二、采用高效液相色譜法檢測(cè)所述雙黃連口服液的活性成分，W及檢測(cè)是否 含有川續(xù)斷皂巧己；其中色譜條件為：
[0032] 色譜柱；WatersAcquityUPLC肥HRPis;流動(dòng)相：己膳-0.4%冰醋酸水；梯度洗 脫；0-10min，15 %A-85 %B;2-4min，25 %A-75 %B;4-8min，37 %A-63 %B;8-10min，56 % A-44%B;10-llmin，93%A-7%B;柱溫；35°C;檢測(cè)波長(zhǎng)；300nm。理論塔板數(shù)按綠原酸峰 計(jì)算不低于1000,與相鄰峰的分離度大于2. 0。，所述色譜條件還包括；ELSD檢測(cè)器參數(shù)；漂 移管溫度為80°C，載氣流速為2. 5ml/min。
[0033] 如圖1所示，所述雙黃連口服液的活性成分包括；綠原酸1、連翅巧3、黃琴巧4 W及木梶草甘2,其中綠原酸1.Img/mL、連翅巧0. 5mg/mL、黃琴巧8. 2mg/mLW及木梶草甘 0.002mg/mL。
[0034] 實(shí)施例2
[0035] 供試品溶液的制備，取山銀花、連翅W及黃琴的干燥生藥，粉碎成細(xì)粉過(guò)4號(hào)篩； 加水煎煮比，過(guò)濾蒸干，殘?jiān)?0 %甲醇超聲20min，0.45ym微孔濾膜過(guò)濾。其中所述供 試品中含有綠原酸1. 18mg/mU黃琴巧7. 2mg/mL，連翅巧0. 04111徑/111以木梶草甘0. 013mg/mL， 川續(xù)斷皂巧己3. 51mg/mL。
[0036] 對(duì)照品溶液的制備，具體包括；精密稱取綠原酸、連翅巧、黃琴巧、木犀草W及川續(xù) 斷皂巧己對(duì)照品；〇. 889mg、0. 886mg、0. 903mg、0. 920mgW及 0. 976mg，W己膳-0. 4%磯酸水 溶液為溶劑，于棟色容量瓶中定容至2mU作為儲(chǔ)備液。其他不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液由 儲(chǔ)備液稀釋得到。
[0037] 步驟二、采用高效液相色譜法檢測(cè)所述雙黃連口服液的活性成分，W及檢測(cè)是否 含有川續(xù)斷皂巧己；得圖2,其中活性成分為；綠原酸1、連翅巧3、黃琴巧4、木犀草巧2和川 續(xù)斷皂巧己5其中色譜條件為：
[003引 色譜柱；WatersAcquityUPLC肥HRPis;流動(dòng)相：己膳-0. 4%冰醋酸水；梯度洗 脫；0-10min，15 %A-85 %B;2-4min，25 %A-75 %B;4-8min，37 %A-63 %B;8-10min，56 % A-44%B;10-llmin，93%A-7%B;柱溫；35°C;檢測(cè)波長(zhǎng)；300nm。理論塔板數(shù)按綠原酸峰 計(jì)算不低于1000,與相鄰峰的分離度大于2. 0。，所述色譜條件還包括；ELSD檢測(cè)器參數(shù)；漂 移管溫度為80°C，載氣流速為2. 5ml/min。
[0039] 標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立
[0040] a,線性關(guān)系、檢測(cè)限（LOD)和定量限化OQ)的考察
[0041] 分別精密吸取對(duì)照品儲(chǔ)備液，用流動(dòng)相逐級(jí)稀釋成一系列不同濃度的對(duì)照品溶 液，分別進(jìn)樣3 測(cè)定（n= 3)。綠原酸、連翅巧、黃琴巧、木犀草巧和川續(xù)斷皂巧己W濃 度X為橫坐標(biāo)，平均峰面積Y為縱坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，考察線性關(guān)系。由表1可知，各回歸 方程呈良好的線性關(guān)系。
[0042] 表1綠原酸、連翅巧、黃琴巧、木犀草巧和川續(xù)斷皂巧己的標(biāo)準(zhǔn)曲線、相關(guān)系數(shù)、線 性范圍測(cè)定結(jié)果
[0043]
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種雙黃連口服液指紋圖譜的構(gòu)建方法，其中所述雙黃連口服液由金銀花、黃芩、連 翹、蔗糖以及香精制成，所述構(gòu)建方法包括以下步驟： 步驟一、制備供試品溶液，取雙黃連口服液1.0 mL，精密稱定，加入25mL50 %甲醇水溶 液，45°C水浴5-10min后，立即進(jìn)行離心，取上清液；將所述上清液置于50mL圓底燒瓶中，回 流提取2h，冷卻后稱重，用50%甲醇溶液補(bǔ)足失重，超微過(guò)濾；得供試品溶液； 步驟二、采用高效液相色譜法檢測(cè)所述雙黃連口服液的活性成分，以及檢測(cè)是否含有 川續(xù)斷皂苷乙；其中色譜條件為： 色譜柱：Waters Acquity UPLC BEH RP18;流動(dòng)相：乙腈-0.4%冰醋酸水；梯度洗脫：O-IOmin, 15%A-85%B；2-4min,25%A-75%B；4-8min,37%A-63%B；8-10min,56% A-44% B ;10-llmin，93% A-7% B ;柱溫：35°C ;檢測(cè)波長(zhǎng)：300nm。
2. 如權(quán)利要求I所述的雙黃連口服液指紋圖譜的構(gòu)建方法，其中所述雙黃連口服液的 活性成分包括：綠原酸、連翹苷、黃芩苷以及木犀草苷。
3. 如權(quán)利要求1所述的雙黃連口服液指紋圖譜的構(gòu)建方法，其中所述色譜條件還包 括：ELSD檢測(cè)器參數(shù)：漂移管溫度為80°C，載氣流速為2. 5ml/min。
4. 如權(quán)利要求1所述的雙黃連口服液指紋圖譜的構(gòu)建方法，其中所述超微過(guò)濾具體 指：使用〇. 45ym微孔濾膜過(guò)濾。
5. 如權(quán)利要求1所述的雙黃連口服液指紋圖譜的構(gòu)建方法，其中所述構(gòu)建方法還包括 對(duì)照品溶液的制備，具體包括：精密稱取綠原酸、連翹苷、黃芩苷、木犀草以及川續(xù)斷皂苷乙 對(duì)照品：〇? 889mg、0. 886mg、0. 903mg、0. 920mg以及0? 976mg以及，以乙腈-0? 4%磷酸水溶液 為溶劑，于棕色容量瓶中定容至2mL，作為儲(chǔ)備液。其他不同質(zhì)量濃度的對(duì)照品溶液由儲(chǔ)備 液稀釋得到。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種雙黃連口服液指紋圖譜的構(gòu)建方法，其中所述雙黃連口服液由金銀花、黃芩、連翹、蔗糖以及香精制成，所述構(gòu)建方法包括制備供試品溶液，采用高效液相色譜法檢測(cè)所述雙黃連口服液的活性成分，以及檢測(cè)是否含有川續(xù)斷皂苷乙；其中色譜條件為：色譜柱：Waters Acquitv UPLC BEH RP18；流動(dòng)相：乙腈-0.4％冰醋酸水；梯度洗脫：0-10min，15％A-85％B；2-4min，25％A-75％B；4-8min，37％A-63％B；8-10min，56％A-44％B；10-11min，93％A-7％B；柱溫：35℃；檢測(cè)波長(zhǎng)：300nm。本發(fā)明構(gòu)建雙黃連口服液的指紋圖譜，同時(shí)可以檢測(cè)出雙黃連口服液中是否含有川續(xù)斷皂苷乙成分，為建立雙黃連口服液質(zhì)量監(jiān)控體系提供基礎(chǔ)。
【IPC分類】G01N30-88
【公開(kāi)號(hào)】CN104880528
【申請(qǐng)?zhí)枴緾N201510299374
【發(fā)明人】李曉甜, 張軼, 肖文雅
【申請(qǐng)人】新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【公開(kāi)日】2015年9月2日
【申請(qǐng)日】2015年6月3日