一種厚樸酚與和厚樸酚的快速檢測方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種基于快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS法）快速檢 測厚樸酚與和厚樸酚含量的方法。
【背景技術(shù)】
[0002] 1930年日本學(xué)者杉井首先從厚樸樹的樹皮中分離得到了厚樸酚。1973年日本學(xué) 者藤田分離得到厚樸酚與其異構(gòu)體和厚樸酚。厚樸酚與和厚樸酚是我國傳統(tǒng)中藥厚樸的兩 個(gè)主要活性成分，具有抗茵、抗炎、抗腫瘤、肌肉松弛、降膽周醇和抗衰老等多種藥理作用。 隨著研究的深入，也發(fā)現(xiàn)了兩者的不同的生理活性，如在抗氧化作用方面，厚樸酚比和厚樸 酚弱；在肌肉松弛方面，和厚樸酚抑制肌肉收縮作用比厚樸酚緩慢；在防止谷氨酸，天門冬 氨酸誘導(dǎo)的線粒體功能障礙方面，和厚樸酚比厚樸酚更有效。因此，針對中藥厚樸建立厚樸 酚與和厚樸酚的含量分析方法對中藥的現(xiàn)代化應(yīng)用有著積極的意義。
[0003] 針對厚樸酚與和厚樸酚的分離和分析方法，國內(nèi)外也做了很多研究，發(fā)明和改進(jìn) 了很多方法，如分子識(shí)別法、機(jī)械化學(xué)法、逆流色譜分離法等。在眾多的方法中高效液相色 譜法是主要和重要的分析方法，該方法配合PDA檢測器可以比較靈敏和快速的給出厚樸酚 與和厚樸酚的相對含量；受分析儀器的限制，該方法需要對樣品進(jìn)行較為復(fù)雜的前處理， 通過萃取等方法將厚樸酚與和厚樸酚從藥材或其復(fù)方制劑中分離，隨后采用HPLC/UPLC/ SFCLC等液相色譜方法分析。該分析方法的樣品處理過程復(fù)雜、總體分析時(shí)間長。
[0004] 快速熱解-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS)是一種高效的檢測易揮發(fā)性成 分的技術(shù)，近年來發(fā)展迅速。低溫下的熱解過程是一種非常有效的熱分離手段，通過控制 熱解的溫度和時(shí)間可以實(shí)現(xiàn)低沸點(diǎn)的復(fù)雜混合物的初步的氣-液或氣-固相分離；為氣相 色譜提供一種在線的和實(shí)時(shí)的樣品前處理和初步分離能力。分析檢測過程中的熱解時(shí)間、 溫度、升溫速率、載氣流速、分流比、離子化溫度等對分析結(jié)果的影響是很大的。因此，基于 PY-GC/MS技術(shù)的特點(diǎn)，目前亟需提出一種針對厚樸酚與和厚樸酚的快速、微量檢測方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005] 本發(fā)明的目的在于提供一種厚樸酚與和厚樸酚的快速檢測方法，并基于此，初步 判斷厚樸等中藥材及其制劑質(zhì)量的高低。
[0006] 為達(dá)到上述目的，本發(fā)明采用了以下技術(shù)方案：
[0007] 1)準(zhǔn)確稱取厚樸或其復(fù)方制劑0. 01~5. OOmg得樣品，將樣品加入熱解杯中；
[0008] 2)采用快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對加入熱解杯中的樣品進(jìn)行測定；
[0009] 3)經(jīng)過步驟2)后，根據(jù)測定的原始色譜數(shù)據(jù)及質(zhì)譜數(shù)據(jù)，定性樣品中厚樸酚與和 厚樸酚的色譜峰，并獲得樣品中厚樸酚與和厚樸酚的相對含量。
[0010] 所述樣品為塊狀或粉末狀固體。
[0011] 所述熱解的條件為：熱解溫度為180~300°C，熱解時(shí)間為0. 1~2min。
[0012] 所述氣相色譜的工作條件為：載氣為流速0. 1~4. OmL/min的氦氣，分流比為0~ 500 :1，升溫程序?yàn)椋撼跏紲囟葹?0~70°C，并保持O~3min，然后以彡20°C /min升至 300。。。
[0013] 所述質(zhì)譜的工作條件為：采用EI源、正離子檢測，電子能量為50~85eV，離子源 溫度為215~290°C，單四級(jí)桿溫度為145~185°C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電 壓為1075~2980V，溶劑延遲為0~6min。
[0014] 所述相對含量采用面積歸一化方法進(jìn)行計(jì)算。
[0015] 所述厚樸酚與和厚樸酚的色譜峰的定性采用NIST08軟件自動(dòng)匹配計(jì)算。
[0016] 本發(fā)明的有益效果體現(xiàn)在：
[0017] 1)分析效率高?，F(xiàn)有方法是將厚樸或其制劑通過萃取方法初步分離得到厚樸酚 與和厚樸酚溶液，過濾處理后，利用液相色譜分析，或薄層層析-光譜聯(lián)用技術(shù)（TLC-SP)等 檢測其有效成分；該方法的一般分析時(shí)間為8~12小時(shí)。本發(fā)明中通過熱分離方法直接對 厚樸或其制劑的低沸點(diǎn)物質(zhì)進(jìn)行初步分離，隨后采用氣相色譜進(jìn)一步分離厚樸酚與和厚樸 酚，大大節(jié)省了分析時(shí)間，常規(guī)分析時(shí)間為〇. 1~〇. 3小時(shí)，提高了分析效率。
[0018] 2)所需樣品量少，靈敏度好。HPLC檢測方法受到儀器的限制，一般需要先分離得 到粗品溶液，因此需要的樣品量較大，通常是幾克到幾十克不等；本發(fā)明方法的分析所用樣 品量一般為〇. 01~lmg，極大的提高了分析靈敏度。
[0019] 3)本發(fā)明優(yōu)化了熱解、色譜、質(zhì)譜等檢測條件，可以快速定性所需的色譜峰，實(shí)現(xiàn) 了快速和準(zhǔn)確檢測。
【具體實(shí)施方式】
[0020] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明作進(jìn)一步說明。
[0021] 本發(fā)明針對厚樸酚與和厚樸酚熔沸點(diǎn)相對較低且易揮發(fā)的特點(diǎn)，采用快速熱 解-氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)（PY-GC/MS)，充分將熱分離和色譜分離相結(jié)合，實(shí)現(xiàn)厚樸酚與 和厚樸酚的快速分離，隨后采用質(zhì)譜定性和定量檢測，達(dá)到快速、微量檢測的目的。
[0022] 實(shí)施例
[0023] 一種基于PY-GC/MS檢測厚樸酚與和厚樸酚的方法，以中藥材厚樸為例，但本發(fā)明 的保護(hù)范圍不局限于該實(shí)施例，具體步驟如下：
[0024] 一、樣品準(zhǔn)備
[0025] 將取得的厚樸（西安天本生物工程有限公司，西安）準(zhǔn)確稱取1.0 Omg (±0. 02mg) 放入50 μ L的熱解小杯中；
[0026] 二、熱解：
[0027] 熱裂解爐采用 Frontiers 的 PY2020is ;
[0028] ①熱解溫度：210 °C ;
[0029] ②熱解時(shí)間：0· 25min。
[0030] 三、分離、檢測
[0031] 色譜：
[0032] 氣相色譜采用安捷倫7890A :
[0033] ①分析柱是HP-5MS彈性石英毛細(xì)管柱（30m*0. 25id*0. 25 μ m);
[0034] ②載氣：高純氦氣，流速為1.0 mL/min ;
[0035] ③進(jìn)樣方式為分流進(jìn)樣，分流比為120 :1 ;
[0036] ④進(jìn)樣口溫度為280 °C，傳輸線溫度為290 °C ;
[0037] ⑤程序升溫：初始溫度為60°C，然后以20°C /min升至300°C。
[0038] 質(zhì)譜（采用安捷倫5975C):
[0039] ①EI源，正離子檢測，電子能量為70eV ;
[0040] ②離子源溫度為290°C，單四級(jí)桿溫度為150°C ;
[0041] ③掃描方式為全掃描方式；
[0042] ④電子倍增器電壓為2320V，溶劑延遲為3. 75min。
[0043] 四、數(shù)據(jù)分析及處理
[0044] 色譜圖的保留時(shí)間和積分面積由工作站自動(dòng)完成，利用NIST08譜庫定性色譜峰。 各揮發(fā)性成分的相對含量通過面積歸一化法得到。
[0045] 本樣品厚樸熱解組分中可辨認(rèn)的峰為29個(gè)，成分及其保留時(shí)間列于表1。保留時(shí) 間及峰面積用安捷倫Chemstation計(jì)算，相對含量用面積歸一化的方法計(jì)算。
[0046] 表1.厚樸中揮發(fā)性成分的組成和含量U1= 13. 741厚樸酚，t ^ 14. 861和厚樸 酚）
[0047]
[0048] υ?Ν 丄 丄 OOdcu λ j ^ o
[0049] CN 105136937 A I兄明書 5/5 頁
[0050] 五、精密度、重現(xiàn)性及穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)
[0051] 1.精密度實(shí)驗(yàn)：以取自同一厚樸的樣品6份，按照上述方法連續(xù)進(jìn)樣6次，對相對 峰面積大于0. 5%的29個(gè)色譜峰進(jìn)行分析，其相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD (相對標(biāo)準(zhǔn) 偏差）分別在1. 91~4. 15%和2. 33~4. 98%之間，說明本發(fā)明方法精密度良好。
[0052] 2.重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)：取同一批次厚樸的樣品6份，按照上述方法連續(xù)進(jìn)樣6次。結(jié)果 29個(gè)色譜峰的相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD分別在1. 76~5. 47%和1. 64~4. 45% 之間，說明本發(fā)明方法重現(xiàn)性良好。
[0053] 3.穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)：取制備好的樣品1份，分別在0、2、4、8、12、24h進(jìn)樣測定，結(jié)果29 個(gè)色譜峰的相對保留時(shí)間和相對峰面積的RSD均小于4. 26%，說明本發(fā)明方法在24h內(nèi)測 定是穩(wěn)定的。
[0054] 中藥材因產(chǎn)地、季節(jié)、炮制方式的不同，其含水量、密度等都有細(xì)微的不同，繼而其 復(fù)方制劑中的含量也有所不同。因此，需要的熱分離、色譜分離和分析條件均不相同，據(jù)此 得出本發(fā)明中的條件范圍。
[0055] 本發(fā)明具有操作簡單，檢測限低，實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)直觀可靠等特點(diǎn)，特別 適用于微量樣品檢測（樣品量可低至10 μg)，并可用于對不同厚樸或其制劑樣品間的質(zhì)量 差別進(jìn)行定量的比較，應(yīng)用性廣，為該類中藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)和現(xiàn)代化應(yīng)用提供了一條參考 的思路和方法。
【主權(quán)項(xiàng)】
1. 一種厚樸酚與和厚樸酚的快速檢測方法，其特征在于：包括以下步驟： 1) 準(zhǔn)確稱取厚樸或其復(fù)方制劑0.0 l~5. OOmg得樣品，將樣品加入熱解杯中； 2) 采用快速熱解-氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用儀對加入熱解杯中的樣品進(jìn)行測定； 3) 經(jīng)過步驟2)后，根據(jù)測定的原始色譜數(shù)據(jù)及質(zhì)譜數(shù)據(jù)，定性樣品中厚樸酚與和厚樸 酚的色譜峰，并獲得樣品中厚樸酚與和厚樸酚的相對含量。2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種厚樸酚與和厚樸酚的快速檢測方法，其特征在于：所述樣 品為塊狀或粉末狀固體。3. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種厚樸酚與和厚樸酚的快速檢測方法，其特征在于：所述熱 解的條件為：熱解溫度為180~300°C，熱解時(shí)間為0. 1~2min。4. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種厚樸酚與和厚樸酚的快速檢測方法，其特征在于：所述氣 相色譜的工作條件為：載氣為流速0. 1~4. OmL/min的氦氣，分流比為0~500 :1，升溫程 序?yàn)椋撼跏紲囟葹?0~70°C，并保持0~3min，然后以彡20°C /min升至300°C。5. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種厚樸酚與和厚樸酚的快速檢測方法，其特征在于：所述 質(zhì)譜的工作條件為：采用EI源、正離子檢測，電子能量為50~85eV，離子源溫度為215~ 290°C，單四級(jí)桿溫度為145~185°C，掃描方式為全掃描方式，電子倍增器電壓為1075~ 2980V，溶劑延遲為0~6min。6. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種厚樸酚與和厚樸酚的快速檢測方法，其特征在于：所述相 對含量采用面積歸一化方法進(jìn)行計(jì)算。7. 根據(jù)權(quán)利要求1所述一種厚樸酚與和厚樸酚的快速檢測方法，其特征在于：所述厚 樸酚與和厚樸酚的色譜峰的定性采用NIST08軟件自動(dòng)匹配計(jì)算。
【專利摘要】本發(fā)明提供一種厚樸酚與和厚樸酚的快速檢測方法：1)樣品的準(zhǔn)備；2)PY-GC/MS檢測；3)數(shù)據(jù)分析及定性和定量分析。本發(fā)明選擇PY-GC/MS技術(shù)對厚樸酚與和厚樸酚含量進(jìn)行檢測，是針對厚樸等以厚樸酚與和厚樸酚為主要活性成分的中藥材，因產(chǎn)地、季節(jié)、炮制等不同而品質(zhì)不同的問題，提供一種厚樸酚與和厚樸酚快速、微量的檢測方法，進(jìn)而初步判斷此類中藥材的質(zhì)量，本發(fā)明具有操作簡單，檢測限低，實(shí)驗(yàn)重現(xiàn)性好，實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)直觀可靠等特點(diǎn)，特別適用于微量樣品檢測，可用于對不同產(chǎn)地、品種、批次的厚樸等樣品間的質(zhì)量差別進(jìn)行初步的比較，應(yīng)用性廣。
【IPC分類】G01N25/00, G01N30/02
【公開號(hào)】CN105136937
【申請?zhí)枴緾N201510598977
【發(fā)明人】陳福欣, 龔頻, 周安寧, 侯春友
【申請人】西安科技大學(xué)
【公開日】2015年12月9日
【申請日】2015年9月18日