免疫檢測(cè)套組的制作方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本實(shí)用新型涉及免疫層析的技術(shù)領(lǐng)域，尤其是由釋出試劑片、反應(yīng)試劑片與緩沖 稀釋液所構(gòu)成的一種免疫檢測(cè)套組。
【背景技術(shù)】
[0002] 免疫層析檢測(cè)（immunochromatographictest)是近年來(lái)極受重視的一種檢測(cè)方 式，其檢測(cè)試紙具有構(gòu)造簡(jiǎn)單且成本低廉等優(yōu)點(diǎn)；更重要的是，免疫層析檢測(cè)最高靈敏度可 達(dá)10-12g/ml(ppm)。目前，免疫層析檢測(cè)已廣泛地應(yīng)用于下列各方面：
[0003] (1)臨床上的應(yīng)用：如過(guò)敏、毒品、傳染性疾病、內(nèi)分泌疾病、腫瘤標(biāo)志等檢測(cè)；
[0004] (2)農(nóng)業(yè)上的應(yīng)用：如食物安全、農(nóng)作物疾病等檢測(cè)；
[0005] (3)環(huán)境上的應(yīng)用：如生物污染、環(huán)境污染等檢測(cè)；
[0006] (4)獸醫(yī)的應(yīng)用：如動(dòng)物的各項(xiàng)疾病等檢測(cè)。
[0007] 側(cè)流式免疫分析法（LateralFlowImmunoassay)是一種常用于液態(tài)樣品的檢測(cè) 方法。請(qǐng)參見(jiàn)圖1，為現(xiàn)有的一種側(cè)流式免疫分析試紙的結(jié)構(gòu)圖。如圖1所示，現(xiàn)有的側(cè)流式 免疫分析試紙1'包括：支撐底材11'、薄膜（membrane) 12'、結(jié)合墊（conjugatedpad) 13'、 樣品墊（samplepad) 14'、以及吸收墊（absorptionpad) 15'。
[0008] 在現(xiàn)有的側(cè)流式免疫分析試紙Γ中，薄膜12'的功能是用以將抗體、抗原、DND或 RNA與待測(cè)樣品予以鍵結(jié)。并且，根據(jù)所選用的側(cè)流式免疫分析法（競(jìng)爭(zhēng)型或三明治型）的 不同，形成在薄膜12'上的測(cè)試線(xiàn)（testline) 12T'與控制線(xiàn)（controlline) 12C'的成分 也有所不同。當(dāng)選用三明治型的側(cè)流式免疫分析法時(shí)，載有標(biāo)志物的第一抗體設(shè)置在結(jié)合 墊13'上；同時(shí)，薄膜12'上的測(cè)試線(xiàn)12T'由第二抗體所形成，且控制線(xiàn)12C'由第一抗體 的二級(jí)抗體（secondaryantibody)所形成。
[0009] 進(jìn)行三明治型的側(cè)流式免疫分析法時(shí)，是將待測(cè)樣品（或稱(chēng)檢體）滴入該樣品墊 14'上?；诿?xì)現(xiàn)象的作用，待測(cè)樣品中的抗原會(huì)朝向結(jié)合墊13'移動(dòng)進(jìn)而與已標(biāo)志的第 一抗體結(jié)合。接著，抗原與結(jié)合至抗原一端的第一抗體繼續(xù)地移動(dòng)至薄膜12' ；此時(shí)，第二 抗體會(huì)抓住抗原的另一端，使得測(cè)試線(xiàn)12T'顯現(xiàn)顏色。進(jìn)一步地，未與第二抗體結(jié)合的抗 原及第一抗體繼續(xù)地往控制線(xiàn)12C'移動(dòng)；此時(shí)，控制線(xiàn)12C'因?yàn)榈谝豢贵w與二級(jí)抗體的結(jié) 合而顯現(xiàn)顏色。必須補(bǔ)充說(shuō)明的是，三明治型檢測(cè)方法的定性分析是以測(cè)試線(xiàn)12T'顯色與 否為基準(zhǔn)；簡(jiǎn)單的說(shuō)，測(cè)試線(xiàn)12T'顯色表示為陽(yáng)性反應(yīng)，反之則為陰性。
[0010] 另一方面，當(dāng)選用競(jìng)爭(zhēng)型的側(cè)流式免疫分析法時(shí)，載有標(biāo)志物的抗體設(shè)置在結(jié)合 墊13'上；同時(shí)，競(jìng)爭(zhēng)抗原（competingantigen)設(shè)置在該薄膜12'上以形成測(cè)試線(xiàn)12T'， 且該抗體的二級(jí)抗體設(shè)置在該薄膜12'上以形成控制線(xiàn)12C'。進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)型的側(cè)流式免疫分 析法時(shí)，是將待測(cè)樣品滴入樣品墊14'上?；诿?xì)現(xiàn)象的作用，待測(cè)樣品中的抗原會(huì)朝向 結(jié)合墊13'移動(dòng)進(jìn)而與載有標(biāo)志物的抗體結(jié)合。接著，抗原與抗體繼續(xù)地移動(dòng)至薄膜12' ； 此時(shí)，由于抗體已經(jīng)與抗原結(jié)合，因此抗體不會(huì)與所述的競(jìng)爭(zhēng)抗原進(jìn)一步結(jié)合。繼續(xù)地，與 抗原結(jié)合的抗體繼續(xù)地往控制線(xiàn)12C'移動(dòng)，此時(shí)該控制線(xiàn)12C'因?yàn)榭贵w與二級(jí)抗體的結(jié) 合而顯現(xiàn)顏色。必須補(bǔ)充說(shuō)明的是，競(jìng)爭(zhēng)型檢測(cè)方法的定性分析是以測(cè)試線(xiàn)12T'顯色與否 為基準(zhǔn)；簡(jiǎn)單的說(shuō)，測(cè)試線(xiàn)12T'顯色表示為陰性反應(yīng)，反之則為陽(yáng)性。
[0011] 常見(jiàn)的標(biāo)志物有乳膠與膠體金兩種。目前，試紙廠商將結(jié)合墊13'以微孔材料制 成，使得載有標(biāo)志物的抗體能夠相對(duì)容易地自結(jié)合墊13'移動(dòng)至薄膜12'上的測(cè)試線(xiàn)12T' 與/或控制線(xiàn)12C'，通過(guò)此方式提升側(cè)流式免疫分析試紙的敏感度。
[0012] 即便如此，現(xiàn)有的側(cè)流式免疫分析試紙Γ仍舊在實(shí)務(wù)使用過(guò)程中被發(fā)現(xiàn)了如下的 缺陷：
[0013] (1)由微孔材料制成的結(jié)合墊13'制造成本較高；此外，微孔材料制成的結(jié)合墊 13'需要以4°C的溫度進(jìn)行低溫保存，且其保存期限最多只有1年左右。
[0014] (2)市售的（競(jìng)爭(zhēng)型）側(cè)流式免疫分析試紙Γ因?yàn)闊o(wú)法有效抑制測(cè)試線(xiàn)12T'的 顯色，因此必須透過(guò)比色法判斷控制線(xiàn)12C'與測(cè)試線(xiàn)12T'的色度；其中，顏色的改變可用 肉眼判定（定性法），也可使用儀器自動(dòng)偵測(cè)其亮度的變化（定量法）；然而，由比色法判斷 的敏感度最高只能夠達(dá)到〇. 5ppb。 【實(shí)用新型內(nèi)容】
[0015] 本實(shí)用新型的主要目的，在于提供一種免疫檢測(cè)套組，其主要是由釋出試劑片與 反應(yīng)試劑片所構(gòu)成。不同于現(xiàn)有的側(cè)流式免疫分析試紙，使用本實(shí)用新型的免疫檢測(cè)套組 對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)型或三明治型的側(cè)流式免疫分析時(shí)，要先將該釋出試劑片置入該樣品 液中，使得釋出試劑片所承載結(jié)合有標(biāo)志物的抗體被釋入樣品液中，進(jìn)而與樣品液中的目 標(biāo)檢測(cè)物相互結(jié)合；最后，再將該反應(yīng)試劑片置入樣品液中，使得樣品液與反應(yīng)試劑片上的 測(cè)試線(xiàn)所承載的抗體相互結(jié)合，通過(guò)測(cè)試線(xiàn)的顯色與否來(lái)判斷檢測(cè)結(jié)果為陽(yáng)性或者陰性。
[0016] 因此，為了達(dá)成上述本實(shí)用新型的主要目的，本實(shí)用新型提供了免疫檢測(cè)套組的 第一實(shí)施例，用以對(duì)待測(cè)樣品中的目標(biāo)檢測(cè)物進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)型側(cè)流式免疫分析，該免疫檢測(cè)套 組包括：
[0017] 釋出試劑片，其上設(shè)置有結(jié)合著標(biāo)志物的第一抗體，或設(shè)置有抗生素；其中，該第 一抗體與該抗生素能夠與該目標(biāo)檢測(cè)物結(jié)合；以及
[0018] 反應(yīng)試劑片，其上設(shè)置有薄膜，且該薄膜上還設(shè)置有對(duì)照線(xiàn)與測(cè)試線(xiàn)；其中，該對(duì) 照線(xiàn)由第二抗體所形成，且該測(cè)試線(xiàn)由特定抗原與生物分子的共輒物所形成；其中，該第一 抗體能夠與該目標(biāo)檢測(cè)物結(jié)合，且所述特定抗原為該目標(biāo)檢測(cè)物的抗原；
[0019] 其中，當(dāng)使用所述免疫檢測(cè)套組對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行競(jìng)爭(zhēng)型側(cè)流式免疫分析時(shí)，需先 將該待測(cè)樣品（如為固體或濃稠液體時(shí)）與適量的緩沖稀釋液進(jìn)行混合；接著，再將該釋出 試劑片置入該待測(cè)樣品與該緩沖稀釋液的混合液中，使得結(jié)合有標(biāo)志物的第一抗體釋入混 合液中；最后，再取出釋出試劑片并將反應(yīng)試劑片置入混合液中。并且，當(dāng)待測(cè)樣品含有目 標(biāo)檢測(cè)物時(shí)，反應(yīng)試劑片上的對(duì)照線(xiàn)會(huì)產(chǎn)生呈色反應(yīng)，而測(cè)試線(xiàn)不會(huì)產(chǎn)生呈色反應(yīng)。
[0020] 此外，為了達(dá)成上述本實(shí)用新型的主要目的，本實(shí)用新型還提供了免疫檢測(cè)套組 的第二實(shí)施例，用以對(duì)待測(cè)樣品中的目標(biāo)檢測(cè)物進(jìn)行三明治型側(cè)流式免疫分析，該免疫檢 測(cè)套組包括：
[0021] 釋出試劑片，其上設(shè)置有結(jié)合著標(biāo)志物的第一抗體；其中，該第一抗體系能夠與目 標(biāo)檢測(cè)物結(jié)合；以及
[0022] 反應(yīng)試劑片，其上設(shè)置有薄膜，且該薄膜上還設(shè)置有對(duì)照線(xiàn)與測(cè)試線(xiàn)；其中，對(duì)照 線(xiàn)由第二抗體所形成，且測(cè)試線(xiàn)由第三抗體所形成；其中，第二抗體與第三抗體能夠與目標(biāo) 檢測(cè)物結(jié)合；
[0023] 其中，當(dāng)使用所述免疫檢測(cè)套組對(duì)待測(cè)樣品進(jìn)行所述三明治型側(cè)流式免疫分析 時(shí)，需先將待測(cè)樣品（如為固體或濃稠液體時(shí)）與適量的緩沖稀釋液進(jìn)行混合；接著，再將 該釋出試劑片置入待測(cè)樣品與該緩沖稀釋液的混合液中，使得結(jié)合著標(biāo)志物的第一抗體釋 入混合液中；最后，再取出釋出試劑片并將該反應(yīng)試劑片置入該混合液中。并且，當(dāng)待測(cè)樣 品含有目標(biāo)檢測(cè)物時(shí)，該反應(yīng)試劑片上的對(duì)照線(xiàn)與測(cè)試線(xiàn)會(huì)同時(shí)產(chǎn)生呈色反應(yīng)。
【附圖說(shuō)明】
[0024] 圖1是現(xiàn)有的一種側(cè)流式免疫分析試紙的結(jié)構(gòu)圖；
[0025] 圖2是本實(shí)用新型提供的一種免疫檢測(cè)套組的第一實(shí)施狀態(tài)示意圖；
[0026] 圖3是反應(yīng)試劑片的實(shí)測(cè)影像圖；
[0027] 圖4是A廠牌的片式黃曲毒素試紙的實(shí)測(cè)影像圖；
[0028] 圖5是B廠牌的片式黃曲毒素試紙的實(shí)測(cè)影像圖；
[0029] 圖6是本實(shí)用新型提供的一種免疫檢測(cè)套組的第二實(shí)施狀態(tài)示意圖；
[0030] 圖7是本實(shí)用新型提供的一種免疫檢測(cè)套組的第三實(shí)施狀態(tài)示意圖。
[0031] 附圖符號(hào)說(shuō)明：
[0032] 1 免疫檢測(cè)套組
[0033] 11 釋出試劑片
[0034] 12 反應(yīng)試劑片
[0035] 110 支撐底材
[0036] 111 結(jié)合墊
[0037]120 支撐底材
[0038]121 薄膜
[0039] 12C 對(duì)照線(xiàn)
[0040]12T 測(cè)試線(xiàn)
[0041]122 樣品墊
[0042]123 吸收墊
[0043]13 處