專利名稱：Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因檢測用引物組、快速診斷試劑盒和檢測方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物檢測試劑，具體涉及一種Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因 檢測用引物組、快速診斷試劑盒和檢測方法。
背景技術(shù)：
孟山都公司于1994年研制的抗草甘膦品種大豆，轉(zhuǎn)化了來自于微生物 Agrobacterium tumefaciens的5-烯醇丙酮酸莽草酸-3-磷酸合成酶(CP4EPSPS)編碼 基因，能夠抵抗除草劑草甘膦對莽草酸合成途徑的抑制，使轉(zhuǎn)基因大豆在噴灑除草劑之 后能夠正常生長。該品種的受體是大豆品種A5403，轉(zhuǎn)基因大豆基因組中整合了外源的 CP4EPSPS基因、E35S啟動子和N0S終止子。該品種是目前種植面積最大的轉(zhuǎn)基因大豆品 種，廣泛應(yīng)用在食用油和食品的加工生產(chǎn)當(dāng)中。為了加強對轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的監(jiān)督和管理，目前發(fā)展了多種轉(zhuǎn)基因成分檢測方法，從 基于蛋白質(zhì)的ELISA檢測技術(shù)到基于核酸的聚合酶鏈式反應(yīng)(PCR)技術(shù)以及快速發(fā)展 的基因芯片技術(shù)。其中PCR檢測技術(shù)以其靈敏性、特異性、高效性而最為通用，這種技術(shù) 通過檢測轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品中含有的外源核酸片段來鑒定，隨著熒光實時定量聚合酶鏈式反應(yīng) (realtime PCR)的出現(xiàn)，不僅能夠進行轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品的定性鑒定，而且可以對轉(zhuǎn)基因成分進 行定量。以PCR技術(shù)為代表的轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測技術(shù)在實際應(yīng)用中也存在一些問題，如普通 PCR技術(shù)需要專門的儀器，而且存在容易交叉污染和操作過程煩瑣的缺點。而Real time PCR技術(shù)雖然較好地解決了交叉污染的問題，并簡化了操作過程，但卻需要更復(fù)雜的定量 測定儀器，因此不適用于現(xiàn)場快速檢測。而且實時定量聚合酶鏈式反應(yīng)PCR技術(shù)中熒光探 針的成本較高，加大了推廣應(yīng)用的難度。基因芯片技術(shù)能夠?qū)崿F(xiàn)快速和高通量的檢測，然 而價格昂貴，檢測成本高。所以及時運用生物技術(shù)發(fā)展的最新成果對滿足轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢 測要求的不斷提高具有重要意義。其中等溫擴增(Isothermal Amplification)核酸快 速檢測技術(shù)是轉(zhuǎn)基因產(chǎn)品檢測技術(shù)上的長足進步，現(xiàn)已建立起來的環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù) (loop-mediated isothermal amplication of DNA，簡稱 LAMP)具有很多的優(yōu)越性，且目前 也未見有用環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)檢測轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，提供一種對可用于環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù) 檢測Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因，且對該EPSPS基因具有高特異性的檢測用引 物組。本發(fā)明的另一個目的在于提供一種檢測成本低、使用方便、檢測速度快、特異性高 的基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)的轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒。本發(fā)明的另一個目的是提供上述轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒的檢測方法。本發(fā)明的上述目的是通過如下技術(shù)方案予以實現(xiàn)的一、本發(fā)明的Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因檢測用引物組，是基于環(huán)介 導(dǎo)等溫擴增技術(shù)，根據(jù)已公開的Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因序列，選取Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因的特異性序列，然后分析設(shè)計出的，能專一性鑒別Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因的特異性引物組，通過PCR來鑒定Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆 EPSPS基因，該引物組由如下四條引物組成外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示；外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID N0 2所示；內(nèi)引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID N0 3所示；內(nèi)引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID N0:4所示。該引物組還可以由如下四條引物組成外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID N0 5所示；外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO 6所示；內(nèi)引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID N0 7所示；內(nèi)引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO 8所示。二、本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒，是由兩對引物、BstDNA聚合 酶、反應(yīng)液、穩(wěn)定液、顯色液和陽性對照液組成，以上六種液體分別置于容器中，其中所述兩對引物分別為外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示；外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID N0 2所示；內(nèi)引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID N0 3所示；內(nèi)引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO 4所示。上述兩對引物還可以為外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID N0 5所示；外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO 6所示；內(nèi)引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID N0 7所示；內(nèi)引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO 8所示。上述每1L 反應(yīng)液中含有 1. 6 2mmol dNTP、20 25mmol Tris_HCl、10 12. 5mmol 氯化鉀、10 12. 5mmol 硫酸銨、8 lOmmol 硫酸鎂、1 1. 25mlTritonX_100、 0.8 lmol甜菜堿、內(nèi)引物FIP/BIP各1. 6 2mol和外引物F3/B3各0. 2 0. 25mol ；優(yōu) 選的比例是每1L反應(yīng)液中含有2mmol dNTP、25mmolTris_HCl、12. 5mmol氯化鉀、12. 5mmol 硫酸銨、lOmmol硫酸鎂、1. 25mlTritonX-100、lmol甜菜堿、內(nèi)引物FIP/BIP各2mol和外引 物 F3/B3 各 0. 25mol。上述顯色液優(yōu)選為熒光染料SYBR Green I或EvaGreen。上述穩(wěn)定液優(yōu)選為石蠟油。上述陽性對照為EPSPS基因DNA片段。三、本發(fā)明基因快速診斷試劑盒的生產(chǎn)工藝1、將內(nèi)引物FIP/BIP和外引物F3/B3合成純化后，定量配制，濃度檢測，抽樣質(zhì)檢；2、將反應(yīng)液無菌分裝，并按照實驗用進行濃度確定，抽樣質(zhì)檢；3、將穩(wěn)定液無菌分裝，抽樣質(zhì)檢；4、將陽性對照標本制備，分裝，抽樣質(zhì)檢；5、組裝試劑盒。四、本發(fā)明基因快速診斷試劑盒的檢測方法1、樣品處理待測樣品中DNA的提取和含量測定按國標按照GB/T 19495. 3-2004中的規(guī)定執(zhí) 行。對樣品進行DNA提取時要保證DNA的質(zhì)量和濃度的穩(wěn)定，以保證PCR反應(yīng)的可重復(fù)性。 要確保提取的DNA片段大于擴增片段。2、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)反應(yīng)過程在反應(yīng)管中加入反應(yīng)液38 40體積％，Bst DNA聚合酶大片段0. 9 1. 8體積％， 穩(wěn)定液52 54. 5體積％，樣品模板DNA4. 5 9體積％，63 65°C恒溫反應(yīng)45 90min。 所述體積百分比是指占四個組分總體積的體積百分比。3、反應(yīng)后處理在上述反應(yīng)管和陽性對照組中分別加入顯色液，混勻，樣品組顯色與對照組相同 則為陽性，否則為陰性。本發(fā)明的原理是利用Bst DNA聚合酶和根據(jù)靶基因序列設(shè)計的兩對特殊的內(nèi)、外 引物(即內(nèi)引物FIP/BIP和外引物F3/B3)，特異性識別靶序列上的六個獨立區(qū)域，啟動循環(huán) 鏈置換反應(yīng)，在靶標DNA區(qū)啟動互補鏈合成，結(jié)果在同一鏈上互補序列周而復(fù)始形成有很 多環(huán)的花椰菜結(jié)構(gòu)的莖_環(huán)DNA混合物。LAMP反應(yīng)過程中，從dNTP析出的焦磷酸根離子與 反應(yīng)溶液中的Mg2+結(jié)合，產(chǎn)生副產(chǎn)物——焦磷酸鎂乳白色沉淀，即可通過肉眼觀察判定結(jié) 果。LAMP反應(yīng)是在恒溫(63 65°C )條件下45 90分鐘內(nèi)完成。這種比較溫和的溫度 條件以及沒有溫度循環(huán)使所需儀器簡單化，克服了傳統(tǒng)PCR固有的檢測時間長、容易污染 及檢測成本高等缺點。此外，這種檢測方法對檢測人員的技術(shù)素質(zhì)要求較低，實際操作極為 簡便，不需要特殊的試劑和儀器設(shè)備，有利于建立成本低廉的快速篩選體系。LAMP法是一種 簡便、快速、高度特異性的基因擴增法。將恒溫基因擴增技術(shù)與PCR技術(shù)(包括熒光實時定 量PCR技術(shù))進行比較，可以發(fā)現(xiàn)該技術(shù)在靈敏度、特異性和檢測范圍等方法學(xué)指標上相當(dāng) 于或優(yōu)于PCR技術(shù)，且不依賴任何專門的儀器設(shè)備即可實現(xiàn)現(xiàn)場高通量快速檢測，而且檢 測成本遠低于熒光定量PCR技術(shù)。國內(nèi)目前尚未有這方面的試劑盒出售。與現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明具有如下有益效果1.本發(fā)明的基因快速診斷試劑盒只需一個恒定溫度就能擴增反應(yīng)，不需要特殊試 劑與設(shè)備，檢測成本低；2.本發(fā)明的基因快速診斷試劑盒應(yīng)用六個區(qū)段，四條引物，根據(jù)是否擴增就能判 斷靶標物質(zhì)的存在與否，因此具有高特異性；3.本發(fā)明的基因快速診斷試劑盒擴增快速且高效，在不到1小時即可完成擴增，
且產(chǎn)率高；4.本發(fā)明的基因快速診斷試劑盒靈敏度高，擴增模板僅需10拷貝或更少；5.本發(fā)明的基因快速診斷試劑盒鑒定簡便，從dNTP析出的焦磷酸根離子與反應(yīng)溶液中的Mg2+結(jié)合，產(chǎn)生副產(chǎn)物-焦磷酸鎂沉淀，可通過肉眼觀察鑒定，并且加入顯色液后， 陰陽性結(jié)果顯色差異顯著，驗證率高，更加明顯可靠。


圖1為實施例4中試劑盒特異性檢測結(jié)果圖；其中，1為TE緩沖液，2為ddH20，3為大豆非轉(zhuǎn)基因樣品W794DNA，4為大米非轉(zhuǎn)基 因樣品W818DNA，5為油菜非轉(zhuǎn)基因樣品W2194DNA，6為250ng大豆轉(zhuǎn)基因樣品W562DNA，7 為lOOng大豆轉(zhuǎn)基因樣品W562DNA，8為50ng大豆轉(zhuǎn)基因樣品W562DNA。
具體實施例方式下面結(jié)合具體實施例對本發(fā)明作進一步地闡述，但具體實施例并不對本發(fā)明做任 何限定。實施例1轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒的制備(1)按以下序列經(jīng)DNA合成儀合成寡聚脫氧核酸引物外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示；外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO 2所示；內(nèi)引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO 3所示；內(nèi)引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO 4所示。(2)購置DNA聚合酶Bst DNApolymerase (大片段)，置于容器。(3)配制反應(yīng)液反應(yīng)液的配方按每1L溶液含有2mmol dNTP、25mmol Tris_Cl、 12. 5mmol 氯化鉀、12. 5mmol 硫酸銨、lOmmol 硫酸鎂、1. 25ml TritonX-100、lmol 甜菜堿、內(nèi) 引物FIP/BIP各2mol和外引物F3/B3各0. 25mol配制，置于容器。(4)購置穩(wěn)定液石蠟油，置于容器。(5)購置顯色液SYBR Green I，置于容器。(6)提取陽性對照制備EPSPS基因DNA片段分別置于容器。(8)將上述5個容器裝成試劑盒，封裝。制備工藝簡述如下1、將內(nèi)引物FIP/BIP和外引物F3/B3合成純化后，定量配制，濃度檢測，抽樣質(zhì) 檢；2、將反應(yīng)液無菌分裝，并按照實驗用進行濃度確定，抽樣質(zhì)檢；3、將穩(wěn)定液分裝，抽樣質(zhì)檢；4、將陽性對照標本制備，分裝，抽樣質(zhì)檢；5、組裝試劑盒。實施例2轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒的制備兩對引物為外引物F3，其核苷酸序列如SEQ ID N0 5所示；外引物B3，其核苷酸序列如SEQ ID NO 6所示；內(nèi)引物FIP，其核苷酸序列如SEQ ID N0 7所示；內(nèi)引物BIP，其核苷酸序列如SEQ ID NO 8所示。
反應(yīng)液的配方為每1L反應(yīng)液中含有1. 6mmol dNTP、20mmol Tris_HCl、lOmmol氯 化鉀、lOmmol硫酸銨、8mmol硫酸鎂、lml TritonX_100、0. 8mol甜菜堿、內(nèi)引物FIP/BIP各 1. 6mol 和外引物 F3/B3 各 0. 2mol ；顯色液為 EvaGreen。其他同實施例1。實施例3轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒的應(yīng)用本實施例采用實施例1制備的轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒進行待測樣 品中EPSPS基因的快速診斷。1、樣品處理(模板DNA提取)1)將lOOmg經(jīng)預(yù)處理的試樣，在液氮中充分研磨成粉末后加人700PLCTAB提取緩 沖液I中(不需研磨的試樣直接加入)，振蕩后混勻，65°C保溫30min，其間不時輕緩顛倒混 勻2-3次。2)加人700 P L三氯甲燒-異戊醇，輕緩顛倒混勻溶液2-3次。12000g離心5min
至分相。3)將上清液轉(zhuǎn)移至干凈的離心管中，加人0.6倍體積的4°C預(yù)冷的異丙醇， 于 _20°C靜置 5min, 12000g 離心 5min。4)棄上清液，加入1000 iiL 70%乙醇，輕輕轉(zhuǎn)動離心管，4°C下8000g離心lmin，棄 上清液后，再加入 20 ii L Rnase A 酶(10 y g/ y L)，37°C溫浴 30min。5)加入600iiL氯化鈉溶液，65°C溫浴lOmin。加入600 y L三氯甲烷-Tris飽和 酚，顛倒混勻后，12000g離心5min，轉(zhuǎn)移上清液至1. 5mL離心管中。6)加人0. 6倍體積的4°C預(yù)冷的異丙醇，于4°C靜置30min，12000g離心lOmin，棄
去上清液。7)加入1000 iiL 4°C預(yù)冷70%乙醇，輕輕轉(zhuǎn)動離心管，4°C下12000g離心lOmin，
棄上清液。重復(fù)一次操作。室溫下?lián)]發(fā)液體。8)沉淀干燥后，加入50 ii L TE緩沖液充分溶解DNA，_20°C保存?zhèn)溆谩?、環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)的反應(yīng)過程1)在200 ill反應(yīng)管配制反應(yīng)體系反應(yīng)液22 ill，Bst DNA聚合酶0. 5 u 1 (4U)，模 板 DNA 2. 5 ii 1。2)將配制好的反應(yīng)管于64°C恒溫反應(yīng)lh。3、反應(yīng)后處理向上述PCR反應(yīng)產(chǎn)物中加入2 ill SYBR Green I，混勻，同時也向陽性對照管中加 入SYBR Green I混勻，若反應(yīng)管與對照管一樣顯現(xiàn)綠色則為陽性，若反應(yīng)管顯現(xiàn)橙色則為 陰性。實施例4轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒的特異性驗證本實施例采用實施例2制備的轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒進行試劑盒 的特異性檢測。采用實施例2制備的轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒，分別對大豆轉(zhuǎn)基因 樣品W562、大豆非轉(zhuǎn)基因樣品W794、大米非轉(zhuǎn)基因樣品W818、油菜非轉(zhuǎn)基因樣品W2194、 ddH20和TE緩沖液進行擴增，非轉(zhuǎn)基因樣品DNA分別加入250ng，大豆轉(zhuǎn)基因樣品DNA分別加入250ng、lOOng和50ng，每個樣品設(shè)置2個重復(fù)。反應(yīng)體系為反應(yīng)液22 ill、Bst DNA聚合酶0.5 ill、穩(wěn)定液30 ill和DNA模板 2. 5ii 1。反應(yīng)程序金屬浴中65°C，1小時。反應(yīng)完畢后加入顯色液2. OiU，觀察結(jié)果，如表1和圖1所示。表1試劑盒特異性檢測結(jié)果 上述表1中，P代表擴增陽性；N代表擴增陰性。從表1的結(jié)果可以看出，在含有50ng、100ng和250ng大豆轉(zhuǎn)基因樣品DNA的反應(yīng) 中能夠擴增出靶基因的產(chǎn)物，呈現(xiàn)擴增陽性，而在含有大豆非轉(zhuǎn)基因樣品DNA、大米非轉(zhuǎn)基 因樣品DNA和油菜非轉(zhuǎn)基因DNA以及ddH20和TE中都不能擴增出產(chǎn)物，呈現(xiàn)擴增陰性，由 此說明，本發(fā)明的轉(zhuǎn)基因作物EPSPS基因快速診斷試劑盒具有高特異性，能夠正確的鑒定 出轉(zhuǎn)基因大豆樣品。Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因檢測用引物組、快速診斷試劑盒和檢測方 法序列表SEQUENCE LISTING<110>廣州華峰生物科技有限公司<120>Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因檢測用引物組、快速診斷試劑盒和檢 測方法<130><160>8<170>PatentIn version 3. 5<210>10118]<211>180119]<212>DNA0120]<213>人工序列0121]<400>10122]gcgtgcaggt gaaatcgg0123]<210>20124]<211>180125]<212>DNA0126]<213>人工序列0127]<400>20128]cgcacgtcat gatcggct0129]<210>30130]<211>400131]<212>DNA0132]<213>人工序列0133]<400>30134]gcggtaggtg atcggcgtcttttggtgacc0135]<210>40136]<211>410137]<212>DNA0138]<213>人工序列0139]<400>40140]cgatggcctc cgcacaggtttttcgatgac0141]<210>50142]<211>160143]<212>DNA0144]<213>人工序列0145]<400>50146]cctaccgcgt gccgat0147]<210>60148]<211>160149]<212>DNA0150]<213>人工序列0151]<400>60152]acttggccgg tgagct0153]<210>70154]<211>420155]<212>DNA0156]<213>人工序列
<400>7gctcgatgac cgtcgtgatg cttttgtgaa gtccgccgtg ct42<210>8<211>44<212>DNA<213>人工序列<400>8cggaaaagat gctgcagggc ttttttcctt ccaggcggat ggtg4權(quán)利要求
一種Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因檢測用引物組，其特征在于該引物組由外引物F3、外引物B3、內(nèi)引物FIP和內(nèi)引物BIP組成，其中外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO1所示；外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO2所示；內(nèi)引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO3所示；內(nèi)引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO4所示；或者，外引物F3的核苷酸序列如SEQ ID NO5所示；外引物B3的核苷酸序列如SEQ ID NO6所示；內(nèi)引物FIP的核苷酸序列如SEQ ID NO7所示；內(nèi)引物BIP的核苷酸序列如SEQ ID NO8所示。
2.—種Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因快速診斷試劑盒，其特征在于該試劑盒 由權(quán)利要求1所述引物組、Bst DNA聚合酶、反應(yīng)液、穩(wěn)定液、顯色液和陽性對照液組成，以 上六種液體分別置于容器中，其中，所述反應(yīng)液的配方為每IL反應(yīng)液中含有1. 6 2mmol dNTP、20 25mmol Tris-HClUO 12. 5mmol 氯化鉀、10 12. 5mmol 硫酸銨、8 IOmmol 硫酸鎂、1 1. 25mlTritonX-100、0. 8 Imol甜菜堿、內(nèi)引物FIP/BIP各1. 6 2mol和外 引物F3/B3各0. 2 0. 25mol ；所述陽性對照為EPSPS基因DNA片段。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述快速診斷試劑盒，其特征在于所述的顯色液為SYBRGreen I或 EvaGreen0
4.根據(jù)權(quán)利要求2所述快速診斷試劑盒，其特征在于所述每IL反應(yīng)液中含有2mmol dNTP、25mmol Tris-HCl,12. 5mmol 氯化鉀、12. 5mmol 硫酸銨、IOmmol 硫酸鎂、1. 25ml TritonX-IOOUmol 甜菜堿、內(nèi)引物 FIP/BIP 各 2mol 和外引物 F3/B3 各 0. 25mol。
5.根據(jù)權(quán)利要求2所述快速診斷試劑盒，其特征在于所述穩(wěn)定液為石蠟油。
6.一種利用權(quán)利要求2所述快速診斷試劑盒檢測Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基 因的方法，其特征在于該方法包括如下步驟(1)待測樣品DNA的制備；(2)在反應(yīng)管中加入反應(yīng)液38 40體積％，BstDNA聚合酶0. 9 1. 8體積％，穩(wěn)定 液52 54. 5體積％，樣品模板DNA 4. 5 9體積％，恒溫反應(yīng)；(3)在上述反應(yīng)管和陽性對照組中分別加入顯色液，混勻，樣品組顯色與對照組相同則 為陽性，否則為陰性。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述檢測方法，其特征在于步驟(2)中，恒溫反應(yīng)的反應(yīng)條件為溫度 63 65°C，反應(yīng)時間45 90min。
全文摘要
本發(fā)明公開一種基于環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)的Roundup Ready轉(zhuǎn)基因大豆EPSPS基因檢測用引物組、快速診斷試劑盒和檢測方法。本發(fā)明的試劑盒由前述引物組、Bst DNA聚合酶、穩(wěn)定液、反應(yīng)液、顯色液和陽性對照液組成，該試劑盒應(yīng)用六個區(qū)段，四條引物，根據(jù)是否擴增就能判斷靶標物質(zhì)的存在與否，因此具有高特異性。本發(fā)明的快速診斷試劑盒快速、高效、靈敏度高，只需一個恒定溫度就能擴增反應(yīng)，不需要特殊試劑與設(shè)備，檢測成本低，而且鑒定簡便，從dNTP析出的焦磷酸根離子與反應(yīng)溶液中的Mg2+結(jié)合，產(chǎn)生副產(chǎn)物——焦磷酸鎂沉淀，可通過肉眼觀察鑒定，加入顯色液后，陰陽性結(jié)果顯色差異顯著，更加明顯可靠。
文檔編號C12Q1/68GK101838685SQ20091021399
公開日2010年9月22日 申請日期2009年12月18日 優(yōu)先權(quán)日2009年12月18日
發(fā)明者曹以誠, 李志勇, 杜正平, 陳洵, 高東微 申請人:廣州華峰生物科技有限公司