專利名稱：脂質(zhì)體藥物包封率測定方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及含藥脂質(zhì)體藥物包封率的測定方法。
背景技術(shù)：
脂質(zhì)體(Liposomes)是由磷脂與(或不與)附加劑為骨架膜材制成的具有雙分子層結(jié)構(gòu)的封閉囊狀體。常見的磷脂分子結(jié)構(gòu)中有兩條較長的疏水烴鏈和一個親水基團(tuán)，將適量的磷脂加至水或緩沖溶液中，磷脂分子定向排列，其親水基團(tuán)面向兩側(cè)的水相，疏水的烴鏈彼此相對締和為雙分子層，構(gòu)成脂質(zhì)體。用于制備脂質(zhì)體的磷脂有天然磷脂，如豆磷脂、蛋黃磷脂等；合成磷脂，如二棕櫚酰磷脂酰膽堿，二硬脂酰磷脂酰膽堿等。常用的附加劑為膽固醇。膽固醇也是兩親性物質(zhì)，與磷脂混合使用，可制得穩(wěn)定的脂質(zhì)體，其作用是調(diào)節(jié)雙分子層的流動性，減低脂質(zhì)體膜的通透性。其他附加劑有十八胺、磷脂酸等，這兩種附加劑能改變脂質(zhì)體表面的電荷性質(zhì)，從而改變脂質(zhì)體的包封率、體內(nèi)外其他參數(shù)。
脂質(zhì)體可分為三類小單室(層)脂質(zhì)體，粒徑為20-50nm，經(jīng)超聲波處理的脂質(zhì)體，絕大部分為小單室脂質(zhì)體；多室(層)脂質(zhì)體，粒徑約為400-3500nm，顯微鏡下可觀察到尤如洋蔥斷面或人手指紋的多層結(jié)構(gòu)；大單室脂質(zhì)體，粒徑約為200-1000nm，用乙醚注入法制備的脂質(zhì)體多為這一類。
脂質(zhì)體的制法有多種，根據(jù)藥物的性質(zhì)或需要進(jìn)行選擇。(1)薄膜分散法這是一種經(jīng)典的制備方法，它可形成多室脂質(zhì)體，經(jīng)超聲處理后得到小單室脂質(zhì)體。此法優(yōu)點是操作簡便，脂質(zhì)體結(jié)構(gòu)典型，但包封率較低。(2)注入法有乙醚注入法和乙醇注入法等。“乙醚注入法”是將磷脂等膜材料溶于乙醚中，在攪拌下慢慢滴于55-65℃含藥或不含藥的水性介質(zhì)中，蒸去乙醚，繼續(xù)攪拌1-2h，即可形成脂質(zhì)體。(3)逆相蒸發(fā)法系將磷脂等脂溶性成分溶于有機(jī)溶劑，如氯仿中，再按一定比例與含藥的緩沖液混合、乳化，然后減壓蒸去有機(jī)溶劑即可形成脂質(zhì)體。該法適合于水溶性藥物、大分子活性物質(zhì)，如胰島素等的脂質(zhì)體制備，可提高包封率。(4)冷凍干燥法適于在水中不穩(wěn)定藥物脂質(zhì)體的制備。(5)熔融法采用此法制備的多相脂質(zhì)體，其物理穩(wěn)定性好，可加熱滅菌。
在制備含藥脂質(zhì)體時，根據(jù)藥物裝載的機(jī)理不同，可分為“主動載藥”與“被動載藥”兩大類。所謂“主動載藥”，即通過內(nèi)外水相的不同離子或化合物梯度進(jìn)行載藥，主要有K+-Na+梯度和H+梯度(即pH梯度)等。傳統(tǒng)上，人們采用最多的方法是“被動載藥”法。所謂“被動載藥”，即首先將藥物溶于水相或有機(jī)相(脂溶性藥物)中，然后按所選擇的脂質(zhì)體制備方法制備含藥脂質(zhì)體，其共同特點是在裝載過程中脂質(zhì)體的內(nèi)外水相或雙分子層膜上的藥物濃度基本一致，決定其包封率的因素為藥物與磷脂膜的作用力、膜材的組成、脂質(zhì)體的內(nèi)水相體積、脂質(zhì)體數(shù)目及藥脂比(藥物與磷脂膜材比)等。對于脂溶性的、與磷脂膜親和力高的藥物，“被動載藥”法較為適用。而對于兩親性藥物，其油水分配系數(shù)受介質(zhì)的pH值和離子強(qiáng)度的影響較大，包封條件的較小變化，就有可能使包封率有較大的變化。
評價脂質(zhì)體質(zhì)量的指標(biāo)有粒徑、粒徑分布和包封率等。其中脂質(zhì)體的包封率(即，包入脂質(zhì)體內(nèi)的藥物量與投料量的重量百分比)是衡量脂質(zhì)體內(nèi)在質(zhì)量的一個重要指標(biāo)。然而，目前常用的包封率測定方法往往存在較大的問題。如方法的準(zhǔn)確性、重復(fù)性差，不同測定方法的測定結(jié)果更是難以一致，同一脂質(zhì)體樣品采用不同的方法測定往往得到不同的結(jié)果?？偟膩碚f，脂質(zhì)體的包封率測定方法分為平衡法與非平衡法，前者測得的數(shù)據(jù)較可靠，后者測得的數(shù)據(jù)經(jīng)常會由于測定過程中包封藥物的泄漏而降低，但是，如果藥物在脂質(zhì)體中滯留性較好，不會因為外水相藥物濃度降低而泄漏，平衡法與非平衡法測得的結(jié)果會比較一致。Teshima等人的研究也證明了這一點(Teshima M，Kawahami S，Nishida K，et al.Prednisone retention in integrated liposomes by chemical approachand pharmaceutical approach[J].J Control Release，2004，97(2)211-218.)，他們用超濾法、凝膠層析法測定潑尼松龍脂質(zhì)體的包封率，前法的測定結(jié)果在90％以上，而后法的測定結(jié)果均小于4.5％，通過將潑尼松龍制備成棕櫚酸酯后再做成脂質(zhì)體，用上述兩種方法進(jìn)行包封率測定，結(jié)果都在85％以上。平衡法包括超速離心法、超(高)速離心與離心超濾法聯(lián)用，這兩種方法需要昂貴的離心機(jī)或超濾管，同時耗時長，因此成本(包括時間成本)很高，更重要地，這兩種方法并不能對脂質(zhì)體與外水相進(jìn)行準(zhǔn)確地分離，前者分離出來的外水相很可能有小單室脂質(zhì)體存在，導(dǎo)致測得的外水相濃度偏高，這將影響了測定結(jié)果的準(zhǔn)確性。
熊非等人報道了用反透析法測定燈盞花素脂質(zhì)體的包封率(熊非，朱家壁，王維，等.燈盞花素納米脂質(zhì)體包封率測定方法研究[J].藥學(xué)學(xué)報，2004，39(9)755-757.)，該法因為只向脂質(zhì)體混懸液體系加入相對體系本身體積很少的透析液，測定過程中對體系的稀釋作用可以忽略，所以這種方法可以看作是一種近似平衡法。因此可以用于測定稀釋后藥物容易泄漏的脂質(zhì)體的包封率。他們按下式計算脂質(zhì)體的包封率，EE=Ctotal×V0-Cfree×V1Ctotal×V0×100%---(1)]]>式(1)中EE為包封率，Ctotal為待測脂質(zhì)體中藥物的總濃度，Cfree為外水相中藥物的濃度，V0為待測脂質(zhì)體樣品的取樣體積，V1為V0與反透析液體積之和。因為反透析液體積很小，所以V1與V0很接近。不難看出，這個公式中Cfree×V1表示游離藥物的總量，作者用V1表示外水相總體積，顯然是不妥的，因為脂質(zhì)體混懸液體系中脂質(zhì)體本身也要占一定的體積，除非脂質(zhì)體的體積在整個體系中小到可以忽略不計。因此要測得準(zhǔn)確的包封率，必須準(zhǔn)確測定外水相體積，一種常規(guī)方法是用超(高)速離心將脂質(zhì)體沉積，與外水相實現(xiàn)分離，然后稱定重量。但是此法對儀器要求高，耗時長，而且結(jié)果誤差大的缺點已在上面提到。

發(fā)明內(nèi)容
針對現(xiàn)有技術(shù)的上述不足，本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提出一種能準(zhǔn)確測定含藥脂質(zhì)體包封率的方法。該測定方法設(shè)計了一種全新的測定外水相體積的方法，進(jìn)而能準(zhǔn)確測定含藥脂質(zhì)體包封率。
為了解決上述技術(shù)問題，本發(fā)明的技術(shù)構(gòu)思是利用一種水溶性的物質(zhì)，這種物質(zhì)與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用，在反透析測脂質(zhì)體包封率的過程中，將一定量的該物質(zhì)加到脂質(zhì)體混懸液中，達(dá)到透析平衡后通過測定透析袋中該物質(zhì)的濃度即可求得外水相的體積，將外水相體積替代公式(1)中的V1即可求得準(zhǔn)確的脂質(zhì)體包封率。
相似地，本發(fā)明還將這種輔助物質(zhì)定外水相體積的方法與離心超濾法結(jié)合測定脂質(zhì)體的包封率，即，在離心超濾之前將一定量的該水溶性的物質(zhì)加入到待測樣品中，超濾得到適量濾出液后分別測定其中藥物與該水溶性的物質(zhì)的濃度即可計算出游離藥物總量，進(jìn)而求得包封率。
本發(fā)明人制備了一種易被離心沉淀的空白脂質(zhì)體，將一定體積的5-氟尿嘧啶(5-Fluorouracil，5-Fu)溶液加到上述脂質(zhì)體混懸液中，混勻后用透析法求得外水相的5-Fu濃度，接著用離心沉淀法測得脂質(zhì)體的外水相的體積，根據(jù)外水相體積與5-Fu濃度求得外水相中5-Fu的總量，此值除以加入的5-Fu總量即可求得脂質(zhì)體混懸液中5-Fu的回收率，三次測定的結(jié)果分別為94.8％、93.2％、95.2％，回收率及其精密度結(jié)果良好，證明了5-Fu可用以準(zhǔn)確測定脂質(zhì)體混懸液的外水相體積。
利用相同的方法測定酚紅在空白脂質(zhì)體混懸液中回收率，三次測定結(jié)果分別為95.5％、96.1％、96.6％，回收率及其精密度結(jié)果良好，由此證明了酚紅也可以準(zhǔn)確測定脂質(zhì)體混懸液的外水相體積。
由此，本發(fā)明人發(fā)現(xiàn)上述水溶性物質(zhì)滿足與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的條件，進(jìn)而提出如下測定含藥脂質(zhì)體包封率的方法。
本發(fā)明提出的具體技術(shù)解決方案之一一種脂質(zhì)體包封率測定方法，取待測脂質(zhì)體混懸液樣品ms，將體積為V5-Fu濃度為C5-Fu的與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)的溶液加入到脂質(zhì)體混懸液中，混合均勻；將裝有水合介質(zhì)的透析袋投入其中，達(dá)到透析平衡后，測定透析液中藥物的濃度為CAE、該水溶性物質(zhì)的濃度為CFE，測定脂質(zhì)體混懸液中藥物的含量為CT，按下式計算脂質(zhì)體的藥物包封率EE。
EE=(1-C5-Fu×V5-FuCAECFE·mS·CT)×100%]]>作為技術(shù)解決方案之一的優(yōu)選方案，上述與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)最好為5-氟尿嘧啶或酚紅。
本發(fā)明提出的具體技術(shù)解決方案之二一種脂質(zhì)體包封率測定方法，取待測脂質(zhì)體混懸液樣品WS，將體積為V5-Fu濃度為C5-Fu的與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)的溶液加入到脂質(zhì)體混懸液中，混合均勻，離心，分層后取清液置于超濾單元中進(jìn)行離心超濾，得到濾出液，測定濾出液中藥物的濃度為CAF、該水溶性物質(zhì)的濃度為CFF，測定脂質(zhì)體混懸液中藥物含量為CT，按下式計算脂質(zhì)體的藥物包封率EE。
EE=(1-C5-Fu×V5-FuCAFCFF·WS·CT)×100%]]>作為技術(shù)解決方案之二的優(yōu)選方案，上述與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)最好為5-氟尿嘧啶或酚紅。
相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明以與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作的水溶性物質(zhì)測定外水相體積的反透析法與離心-超濾法是兩種在近似平衡條件下測定脂質(zhì)體包封率的方法，因此具備平衡測定法的所有優(yōu)點，同時本發(fā)明的兩種方法精密度高，準(zhǔn)確性好，耗時短，實驗成本低。
相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明提出的離心-超濾法需要的樣品量很小，同一次實驗可以方便的進(jìn)行多份樣品的測定，是測定脂質(zhì)體的包封率的理想方法，集中小耗樣量、準(zhǔn)確、高效、大樣品吞吐量等優(yōu)點。
相對于現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的兩種測定方法(包括其他的平衡法)對于探明脂質(zhì)體與被包封藥物的相互作用很有價值，對于一份脂質(zhì)體混懸液，只要測定稀釋適當(dāng)倍數(shù)前后藥物包封率的變化即可了解藥物在脂質(zhì)雙分子層中的滯留特性，如果稀釋后藥物包封率未下降或下降不明顯，就說明藥物在脂質(zhì)雙分子層中滯留好，如果稀釋后藥物包封率明顯下降，就說明藥物在脂質(zhì)雙分子層滯留不好。


圖1是不同時間透析袋中全緣千里光堿的濃度變化示意圖。
圖2是不同時間透析袋中5-Fu的濃度變化示意圖。
具體實施例方式
下面結(jié)合附圖和實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說明。
實施例1(以輔助物質(zhì)測定外水相體積的反透析法測定全緣千里光堿脂質(zhì)體的包封率)。
1.1全緣千里光堿脂質(zhì)體樣品的制備采用干膜分散法制備全緣千里光堿(A堿)脂質(zhì)體。取A堿原料藥0.2g，注射級大豆磷脂2g，膽固醇0.5g，維生素E 0.1g置于500ml茄形瓶中，加入氯仿50ml使溶解，60℃，50r/min旋轉(zhuǎn)減壓蒸去氯仿使形成脂質(zhì)干膜，室溫真空干燥12h以除去殘余氯仿，用50ml CBS 4.0水化干膜，充氮?dú)夂髶u床振搖使瓶壁上的膜溶散，再在4℃冰箱靜置12h，最后用高剪切分散儀分散使整個體系均勻，即得脂質(zhì)體成品，充氮?dú)夂罄洳貍溆谩?br> 1.2外水相及脂質(zhì)體中A堿濃度的測定方法采用HPLC法測定外水相及脂質(zhì)體中A堿的濃度，測定脂質(zhì)體樣品時用適量10％曲拉通X-100乙醇溶液破壞脂質(zhì)體。
1.3外水相中5-Fu的濃度測定方法采用HPLC法測定外水相中5-Fu的濃度。
1.4反透析平衡時間的考察取10ml脂質(zhì)體混懸液置于燒杯中，加入1.626mg/ml 5-FU溶液0.2ml，混合均勻，同時透析袋中裝入0.5ml CBS 4.0水化液，將透析袋放入脂質(zhì)體混懸液中，磁力攪拌下進(jìn)行透析，間隔一定的時間吸取袋內(nèi)透析液25μl，稀釋適當(dāng)倍數(shù)后分別進(jìn)樣20μl在不同條件下HPLC測定其中A堿與5-Fu的濃度。將透析袋中不同時間的兩種藥物的濃度對時間作圖，如圖1、2所示。由圖中可以看出A堿在4h內(nèi)基本達(dá)到透析平衡，5-FU在2h內(nèi)達(dá)到透析平衡，為確保兩藥物都充分達(dá)到透析平衡，故反透析平衡時間確定為6h。
1.5反透析回收率的考察取不同量的四份A堿原料藥，分別以CBS 4.0配制0.8、2、3、4mg/ml的溶液，各取10ml置于燒杯中，依次向不同濃度的A堿溶液中加入1.626mg/ml的5-Fu溶液500、300、400、500μl，混合均勻后每份溶液分別取25μl的試樣兩份，分別用于測定透析前溶液中A堿濃度與5-Fu的濃度，隨后將裝有400μlCBS 4.0水化液的透析袋放入不同的混合溶液中(除第一份混合液中的透析袋裝有500μl水化液)進(jìn)行反向透析，6h后透析結(jié)束，從各個透析袋中分別取25μl的試樣兩份，分別用于測定透析袋中A堿與5-Fu的濃度，所有樣品的濃度測定按2.2、2.3中的條件進(jìn)行。透析回收率的計算公式如下RA=CA1(V0′+Vd)CA0V0′---(2)]]>RF=CF1(V0′+Vd)CF0V0′---(3)]]>V0′＝V0+VF-VS1(4)式(2)、(3)、(4)中RA、RF分別為A堿與5-Fu的回收率，CA0、CF0分別為透析前混合溶液中A堿與5-Fu的濃度，CA1、CF1分別為透析結(jié)束時透析袋中A堿與5-Fu的濃度，V0為不同濃度A堿溶液的取量，VF為5-Fu溶液的取量，VS1為用于測定透析前混合液中兩藥物濃度的兩份樣品的總體積，V0′為透析前兩藥物混合溶液的總體積。樣品溶液濃度測定結(jié)果及回收率計算結(jié)果見表1、2，由表中可以看出，反透析過程中A堿與輔助物質(zhì)5-Fu的回收率都良好，而且重復(fù)性很好，說明反透析法可以準(zhǔn)確、精密地測定外水相中藥物濃度。
表1反透析中全緣千里光堿的回收率

注*CINT全緣千里光堿的標(biāo)示濃度。
表2反透析中5-Fu的回收率

注*V5-Fu為加全混合溶液中的5-Fu溶液(1.626mg/ml)的體積。
1.6反透析液中是否含有脂質(zhì)體的檢查采用顯微鏡觀察法與A450濁度檢查法檢查透析液中是否有脂質(zhì)體的存在。
1.6.1顯微鏡觀察法取反透析液制備多個標(biāo)本，在顯微鏡下(在10×40、10×100兩個放大倍數(shù)下)進(jìn)行觀察，每個標(biāo)本都觀察10個以上的視野，均未發(fā)現(xiàn)脂質(zhì)體的存在。
1.6.2 A450濁度檢查法取3ml CBS 4.0水化液置于透析袋內(nèi)，袋外為A堿脂質(zhì)體混懸液樣品10ml，透析6h后，取袋內(nèi)液在450nm測濁度，與蒸餾水一致。說明透析液中無脂質(zhì)體存在。
1.7改進(jìn)的反透析法測定脂質(zhì)體包封率將待測脂質(zhì)體混懸液搖勻，顯微鏡下觀察脂質(zhì)體混懸液中是否有藥物結(jié)晶，如果有藥物結(jié)晶，則放棄本法；如果沒有藥物結(jié)晶，開始測定。取待測脂質(zhì)體混懸液樣品ms(g)，精密稱定，置于燒杯中，加入1.626mg/ml 5-Fu溶液200μl，混合均勻后將裝有20μl水合介質(zhì)的透析袋投入，進(jìn)行透析，6h后取出透析袋，從袋中取出25μl的試樣兩份，分別稀釋適當(dāng)倍數(shù)后用于測定透析液中A堿的濃度(CAE)與5-Fu的濃度(CFE)。同時，測定脂質(zhì)體混懸液中A堿含量CT(mg/g混懸液)。按下式計算脂質(zhì)體的藥物包封率(EE)。
EE=(1-1.626×0.2CAECFE·mS·CT)×100%---(5)]]>表3脂質(zhì)體樣品包封率測定結(jié)果

對1.1制備的脂質(zhì)體樣品進(jìn)行包封率測定，平行3份，結(jié)果見表3，由表中可以看出樣品測定的重復(fù)性較好。該樣品用離心-超濾法測定，測定兩次，結(jié)果分別為39.23％、35.61％，兩種方法的測定結(jié)果基本一致。
對另一份pH梯度載藥的脂質(zhì)體樣品的測定結(jié)果見表4，該脂質(zhì)體pH梯度載藥前的包封率測定值見同表。
表4脂質(zhì)體樣品包封率測定結(jié)果


實施例2(以輔助物質(zhì)測定外水相體積的離心超濾法測定脂質(zhì)體的包封率)2.1超濾對游離藥物溶液濃度的影響取三個不同濃度(分別為1.22、0.50、0.10mg/ml)的A堿水溶液各三份，每份200μL，進(jìn)行超濾(超濾單元采用Microcon YM 100K，Millipore)，以HPLC分別測定濾出液與超濾前溶液中A堿對應(yīng)的峰面積。結(jié)果見表5，可以看出，超濾膜對藥物有少量吸附，當(dāng)藥物濃度足夠大時，可以認(rèn)為超濾對藥物溶液濃度無影響。
表5超濾對游離全緣千里光堿濃度的影響

取三個不同濃度(分別為0.01626、0.008130、0.003252mg/ml)的5-Fu水溶液各三份，每份200μL，進(jìn)行超濾(超濾單元采用Microcon YM100K，Millipore)，以HPLC分別測定濾出液與超濾前溶液中5-Fu對應(yīng)的峰面積。結(jié)果見表6，可以看出，超濾膜對藥物有少量吸附，當(dāng)藥物濃度足夠大時，可以認(rèn)為超濾對藥物溶液濃度無影響。
表6超濾對游離5-Fu濃度的影響

2.2改進(jìn)的離心-超濾法測定脂質(zhì)體包封率取待測脂質(zhì)體樣品，確認(rèn)樣品中無藥物結(jié)晶存在后開始測定，否則，放棄本法。取待測樣品約1g，精密稱定重量(WS)，置于1.5ml ependoff管，加入1.626mg/ml的5-Fu溶液20μl，混勻，5000r/min，4℃下離心。當(dāng)樣品有一定分層后，取適量清液置于超濾單元(Microcon YM 100K，Millipore)中進(jìn)行離心超濾，得到適量濾出液后停止離心，從濾出液中取出25μl的試樣兩份，分別稀釋適當(dāng)倍數(shù)后用于測定濾出液中A堿的濃度(CAF)與5-Fu的濃度(CFF)，同時，測定脂質(zhì)體混懸液中A堿含量GT(mg/g混懸液)。按下式計算脂質(zhì)體的藥物包封率(EE)。
EE=(1-1.626×0.02CAFCFF·WS·CT)×100%---(3)]]>表7脂質(zhì)體樣品包封率測定結(jié)果

應(yīng)用本法對一份A堿脂質(zhì)體樣品進(jìn)行包封率測定，平行4份，結(jié)果見表7，由表中可以看出樣品測定的重復(fù)性較好(RSD＝1.8％)。
經(jīng)顯微鏡觀察法與A450濁度法檢查，結(jié)果表明超濾濾出液中無脂質(zhì)體存在。
實施例3(以輔助物質(zhì)測定外水相體積的反透析法測定全緣千里光堿脂質(zhì)體的包封率)。
試驗步驟和試驗條件同實施例1，用酚紅替換5-Fu，試驗結(jié)果和實施例1相同。
實施例4(以輔助物質(zhì)測定外水相體積的離心超濾法測定脂質(zhì)體的包封率)試驗步驟和試驗條件同實施例2，用酚紅替換5-Fu，試驗結(jié)果和實施例2相同。
權(quán)利要求
1.一種脂質(zhì)體藥物包封率測定方法，其特征在于，取待測脂質(zhì)體混懸液樣品ms，將體積為V5-Fu濃度為C5-Fu的與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)的溶液加入到脂質(zhì)體混懸液中，混合均勻；將裝有水合介質(zhì)的透析袋投入其中，達(dá)到透析平衡后，測定透析液中藥物的濃度為CAE、該水溶性物質(zhì)的濃度為CFE，測定脂質(zhì)體混懸液中藥物的含量為CT，按下式計算脂質(zhì)體的藥物包封率EE。EE=(1-C5-Fu×V5-FuCAECFE·msCT)×100%]]>
2.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體藥物包封率測定方法，其特征在于，所述與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)為5-氟尿嘧啶。
3.如權(quán)利要求1所述的脂質(zhì)體藥物包封率測定方法，其特征在于，所述與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)為酚紅。
4.一種脂質(zhì)體藥物包封率測定方法，其特征在于，取待測脂質(zhì)體混懸液樣品WS，將體積為V5-Fu濃度為C5-Fu的與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)的溶液加入到脂質(zhì)體混懸液中，混合均勻，離心，分層后取清液置于超濾單元中進(jìn)行離心超濾，得到濾出液，測定濾出液中藥物的濃度為CAF、該水溶性物質(zhì)的濃度為CFF，測定脂質(zhì)體混懸液中藥物含量為CT，按下式計算脂質(zhì)體的藥物包封率EE。EE=(1-C5-Fu×V5-FuCAFCFF·WS·CT)×100%]]>
5.如權(quán)利要求4所述的脂質(zhì)體藥物包封率測定方法，其特征在于，所述與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)為5-氟尿嘧啶。
6.如權(quán)利要求4所述的脂質(zhì)體藥物包封率測定方法，其特征在于，所述與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)為酚紅。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種含藥脂質(zhì)體藥物包封率的測定方法。本發(fā)明以與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)加到脂質(zhì)體混懸液中，達(dá)到透析平衡后通過測定透析袋中該水溶性物質(zhì)的濃度即可求得外水相的體積，進(jìn)而測定脂質(zhì)體包封率；本發(fā)明還在離心超濾之前將一定量的與脂質(zhì)雙分子層不發(fā)生相互作用的水溶性物質(zhì)加入到待測樣品中，超濾得到適量濾出液后分別測定其中藥物與該水溶性物質(zhì)的濃度即可計算出游離藥物總量，進(jìn)而求得包封率。本發(fā)明具備平衡測定法的所有優(yōu)點，精密度高，準(zhǔn)確性好，耗時短，實驗成本低。
文檔編號G06F19/00GK101017164SQ20061002924
公開日2007年8月15日 申請日期2006年7月21日 優(yōu)先權(quán)日2006年7月21日
發(fā)明者鄭杭生, 徐蓮英, 陳建明 申請人:上海中醫(yī)藥大學(xué)