專利名稱：一種東北鐵線蓮三萜皂苷對照品的制備方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥領(lǐng)域，具體涉及一種東北鐵線蓮三萜皂苷對照品的制備方法。
背景技術(shù)：
毛茛科植物東北鐵線蓮Clematis manshurica Rupr.的根及根莖，具有祛風濕， 通經(jīng)絡，止痛之功能，用于治風濕性關(guān)節(jié)炎，神經(jīng)痛，四肢麻木，肢體疼痛，跌打損傷，魚刺鯁 喉，又用于黃疸性肝炎[嚴仲鎧，李萬林.中國長白山藥用植物彩色圖志[M].北京人民衛(wèi) 生出版社，1997 170-171.]。東北鐵線蓮收載于《中華人民共和國藥典》2010年版威靈仙項 下，含量測定項下采用齊墩果酸和常春藤皂苷元為對照品，高效液相色譜法測定含量以控 制藥材質(zhì)量。3-0-α-L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-吡 喃葡萄糖基_ (1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡 喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(結(jié)構(gòu)式見下)是東北鐵線蓮中主要三萜皂苷類化學成 分，以其原型三萜皂苷 評價東北鐵線蓮藥材質(zhì)量更為合理。但是目前無法從國內(nèi)外市場購 得3-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯 糖基齊墩果酸28-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - β -D-吡 喃葡萄糖苷對照品。2006年中國學者史社坡從東北鐵線蓮的根及根莖中分離鑒定出3-0-α -L-吡喃 鼠李糖基_ (1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡 喃核糖基-(1 — 3)-a-L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸 28-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷 [Shi S P,Jiang D,Dong C X,et al. Triterpene saponin fromClematis manshurica[J]. J Nat Prod, 2006,69 :1591-1595.]，采用的方法為東北鐵線蓮的根及根莖乙醇回流提取， 提取液濃縮后分別用乙酸乙酯和正丁醇振搖提取，正丁醇提取物經(jīng)大孔吸附柱色譜、硅膠 柱色譜、ODS柱色譜和高效液相柱色譜，最后得到此種皂苷單體。3-0-α -L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖 基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28_0_ α -L-吡 喃鼠李糖基_ (1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷是以齊墩果酸為 苷元的九糖苷，極性大，正丁醇振搖提取提取率低；硅膠柱色譜有機溶劑消耗量大，回收率 低，成本高。<formula>formula see original document page 4</formula>

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術(shù)中的不足，提供一種東北鐵線蓮三萜皂苷 3-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯 糖基齊墩果酸28-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - β -D-吡 喃葡萄糖苷對照品的制備方法。本案發(fā)明人通過對東北鐵線蓮三萜皂苷類化學成分進行細致深入的研究，發(fā)明 了東北鐵線蓮的根及根莖回流提取，提取物經(jīng)大孔吸附柱色譜和高效液相柱色譜制備 3-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯 糖基齊墩果酸28-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - β -D-吡 喃葡萄糖苷，經(jīng)純度檢測大于98%，符合含量測定用中藥化學對照品的要求，因而完成了本 發(fā)明。本發(fā)明提供一種東北鐵線蓮三萜皂苷3-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6) - β _D_吡 喃葡萄糖基_ (1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡 喃鼠李糖基-(I — 2)-a-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α -L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 4)-β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷對照品的制備方法，該方 法包括以下步驟a)東北鐵線蓮的根及根莖粗粉加50 90%乙醇回流提取，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；b)將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂柱色譜，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用70%乙醇洗脫至洗 脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫 液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；C)將步驟b)獲得的東北鐵線蓮三萜皂苷提取物經(jīng)制備高效液相色譜，色譜 柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水(65 35，體積比)，同步采用示差折光檢 測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得3-0-α-L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖 基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28_0_ α -L-吡 喃鼠李糖基_ (1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷。所述的東北鐵線蓮的根及根莖粗粉回流提取溶劑優(yōu)選的濃度為50% 90%乙 醇，最佳濃度為70%乙醇。所述的大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂或弱極性大孔吸附樹脂。本發(fā)明制備的東北鐵線蓮三萜皂苷經(jīng)ESI-MS JH-NMR^C-NMR、HSQC, HMBC鑒定為 3-0- α -L-鼠李糖基-(1 — 6) - β -D-葡萄糖-(1 — 4) - β -D-葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-核 糖基-(1 — 3) - α -L-鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-阿拉伯糖基齊墩果酸28_0_ α -L-鼠李糖 基-(1 — 4) - β -D-葡萄糖基-(1 — 6) - β -D-葡萄糖苷；經(jīng)高效液相色譜_蒸發(fā)光檢測器 (HPLC-ELSD)純度檢查，不同色譜柱和流動相測定結(jié)果表明均為一個主色譜峰，改變色譜柱 和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以HPLC-ELSD峰面積歸一化法和不加校正因子的主成分自 身對照法測定質(zhì)量分數(shù)均大于98%，符合含量測定用中藥化學對照品的要求。而且本發(fā)明 方法藥材提取完全，產(chǎn)率高；有機溶劑用量少，成本低。


圖1為本發(fā)明制備的三萜皂苷3-0-α -L-鼠李糖基_(1 — 6)-β-D-葡 萄糖-(1 — 4)-β-D-葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-核糖基-(1 — 3)-a-L-鼠李糖 基-(1 — 2)-a-L-阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α-L-鼠李糖基_(1 —葡萄糖 基-(1 — 6) - β -D-葡萄糖苷的高效液相色譜條件A純度檢查2為本發(fā)明制備的三萜皂苷3-0-α -L-鼠李糖基_(1 — 6)-β-D-葡 萄糖-(1 — 4)-β-D-葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-核糖基-(1 — 3)-a-L-鼠李糖 基-(1 — 2)-a-L-阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α-L-鼠李糖基_(1 —葡萄糖 基-(1 — 6) - β -D-葡萄糖苷的高效液相色譜條件B純度檢查3為本發(fā)明制備的三萜皂苷3-0-α -L-鼠李糖基_(1 — 6)-β-D-葡 萄糖-(1 — 4)-β-D-葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-核糖基-(1 — 3)-a-L-鼠李糖 基-(1 — 2)-a-L-阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α-L-鼠李糖基_(1 —葡萄糖 基-(1 — 6) - β -D-葡萄糖苷的高效液相色譜條件C純度檢查4為本發(fā)明制備的三萜皂苷3-0-α -L-鼠李糖基_(1 — 6)-β-D-葡 萄糖-(1 — 4)-β-D-葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-核糖基-(1 — 3)-a-L-鼠李糖 基-(1 — 2)-a-L-阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α-L-鼠李糖基_(1 —葡萄糖基-(1 — 6)-β -D-葡萄糖苷的高效液相色譜峰面積歸一化法純度檢查圖以下通過具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明，并非對本發(fā)明的限定，依照本領(lǐng) 域公知的現(xiàn)有技術(shù)，本發(fā)明的實施方式并不限于具體實施例。
具體實施例方式實施例1(1)東北鐵線蓮的藥材提取取東北鐵線蓮根及根莖粗粉500g，加50%乙醇回流提取2次，每次2小時，分次濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；(2)大孔吸附樹脂柱色譜分離提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂DlOl柱色譜， 用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用 70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙 醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；(3)制備高效液相色譜分離東北鐵線蓮三萜皂苷提取物加甲醇溶解，微孔濾 膜(0.45μπι)濾過，經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水 (65 35，體積比)，同步采用示差折光檢測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃 縮干燥后得3-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃 葡萄糖基_ (1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡 喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(產(chǎn)率1. 12% )?；衔锝Y(jié)構(gòu)鑒定白色粉末，Liebermann-Burchard反應呈陽性，Molish反應呈陽性，1H-NMR譜和 13C-NMR譜顯示三萜皂苷類化合物特征，推測化合物為三萜皂苷類化合物。ESI-MS譜顯示準分子離子峰m/z 1807 [M+H]+，結(jié)合13C-NMR譜和HSQC譜數(shù)據(jù)推 測分子式為C82Hl34O4315 1H-NMR譜顯示7個角甲基質(zhì)子信號δ 0. 88 (3H，s)，0.91(3H，s)， 0. 91 (3H, s)，1.07(3H，s)，1· 14 (3H，s)，1.25(3H，s)和 1. 29 (3H, s)，與氧相連的次甲基質(zhì) 子信號 δ3. 29(lH，dd，J= 11.4，4. 0Hz)，烯氫質(zhì)子信號 δ 5. 41 (1H，brt)。13C-NMR 譜顯示 82個碳信號，其中30個為三萜皂苷元的碳信號。羰基碳信號δ 176. 59，烯碳信號δ 122. 92 和144. 20，與氧相連的碳信號δ 88. 84，為齊墩果酸型五環(huán)三萜皂苷苷元的特征信號。以 上數(shù)據(jù)與苷元齊墩果酸文獻[郭啟雷，楊峻山.掌葉覆盆子的化學成分研究.中國中藥雜 志，2005，30 (3) =198-200.]比較，3位碳信號向低場位移10. 7ppm, 28位碳信號向高場位移 3. 3ppm，推測化合物為3位和28位均連糖的雙糖鏈齊墩果酸型皂苷。1H-WR 譜顯示 9 個糖端基質(zhì)子信號 δ 4. 86 (1Η，d，J = 6. OHz)，4. 96 (1H，d，J = 7. 6Hz)，5. 00 (1H, d, J = 8. OHz)，5. 10 (1H, d, J = 7. 8Hz)，5. 43 (1H, d, J = 0. 8Hz)，5. 85 (1H, br s),5. 85(lH,br s)，6. 23 (1H，d，J = 8. 3Hz)和 6. 24 (1H，br s)，3 個鼠李糖特征甲基質(zhì)子 信號 δ 1. 54 (1Η, d, J = 6. OHz)，1. 59 (1H, d, J = 6. OHz)和 1· 70 (1H, d, J = 6. 2Hz) ； 13C-NMR 譜顯示 9 個糖端基碳信號 δ 95. 71，101. 53，102. 80，102. 80，103. 21，104. 69，104. 88， 104. 98和105. 23，3個鼠李糖特征碳信號δ 18. 51，18. 56和18. 66?；衔锝?jīng)酸水解后HPLC 法鑒定結(jié)構(gòu)中存在D-葡萄糖，D-核糖，L-阿拉伯糖和L-鼠李糖。1H-NMR譜顯示葡萄糖端 基質(zhì)子偶合常數(shù)分別為J = 7. 6Hz，J = 7. 8Hz，J = 8. OHz和J = 8. 3Hz，推測葡萄糖均為β構(gòu)型；13C-NMR譜顯示鼠李糖5位碳信號分別為δ 69. 92，69. 92和70. 37，推測鼠李糖均 為α構(gòu)型，阿拉伯糖端基質(zhì)子偶合常數(shù)J = 6.0Hz，推測阿拉伯糖為α構(gòu)型；13C-NMR譜顯 示核糖端基碳信號為S 104. 69，推測核糖為β構(gòu)型。HMBC譜顯示阿拉伯糖端基質(zhì)子δ 4. 86與苷元3位碳δ 88. 84，鼠李糖端基質(zhì)子 δ 6. 24與阿拉伯糖2位碳δ 75. 59，核糖端基質(zhì)子δ 5. 85與鼠李糖3位碳δ 82. 03，葡萄 糖端基質(zhì)子S 4. 96與核糖4位碳δ 76. 59，葡萄糖'端基質(zhì)子δ 5. 10與葡萄糖4位碳 δ81.94，鼠李糖'端基質(zhì)子δ 5. 42與葡萄糖'6位碳δ 68. 64遠程相關(guān)信號，推測結(jié)構(gòu) 中存在3-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡 萄糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃核糖基-(1 — 3)-a-L-吡喃鼠李糖基_(1 — 2)-a-L-吡 喃阿拉伯糖基；葡萄糖"端基質(zhì)子S 6. 23與苷元28位碳δ 176. 59，葡萄糖"’端基質(zhì) 子S 5. 00與葡萄糖〃 6位碳δ 69. 30，鼠李糖〃端基質(zhì)子δ 5. 85與葡萄糖〃 ‘4位碳 δ 78. 42遠程相關(guān)信號，推測結(jié)構(gòu)中存在28-0-α -L-批喃鼠李糖基_(1 — 4)-β-D-吡喃 葡萄糖基-(1 — 6)-i3_D-葡萄糖基。綜合分析數(shù)據(jù)并和文獻[Mimaki Y, Yokosuka A， Hamanaka Μ, et al. Triterpene saponins from the roots ofClematis chinensis[J]. J Nat Prod,2004,67 1511-1516.]對照，鑒定化合物結(jié)構(gòu)為3_0_ α-L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖 基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28_0_ α -L-吡 喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷?；衔锝Y(jié)構(gòu)鑒定數(shù)據(jù)1H-NmR(C6D5NjSOOmHz) δ 6. 24(1H, br s, H-Rha-1) ,6. 23 (1H, d, J = 8. 3Hz, H-Glu 〃 -1) ,5. 85 (2H, br s, H-Rib-I, Rha “ ), 5. 43 (1Η, d, J = 0. 8Hz, H-Rha ‘ -1)， 5. 41 (1H, br t, H-12) , 5. 10 (1H, d, J = 7. 8Hz, H-Glu ‘ -1) ,5. 00(1H, d, J = 8.0Hz，H-Glu “ ‘ -1) ,4. 96 (1H, d, J = 7. 6Hz, H-Glu-l)，4. 86 (1H，d, J = 6.0Hz， H-Ara-1) ,3. 29 (1H, dd, J = 11. 4，4.0Hz，H_3)，1. 70 (1H，d, J = 6. 2Hz, H-Rha “ -6)， 1. 59(lH，d，J = 6.0Hz，H-Rha ' -6)，1. 54 (1H，d，J = 6. OHz, H-Rha), 1. 29 (3H, s, H-23)，1. 25(3H, s, H-27)，1. 14 (3H, s, H-24)，1. 07(3H, s, H-26),0. 91(6H, s, H-29, 30) ,0. 88 (3H, s, H-25)。13C-NMR (C6D5N, 125MHz) δ 176. 59 (C-28)，144. 20 (C-13)， 122. 92(C-12)，105. 23(C-Ara-I)，104.98 (C-Glc ' -1)，104. 88 (C—Glc “ ' -1)， 104. 69(C-Rib-I)，103. 21(C-Glc-I)，102. 80(C-Rha ' -1，Rha “ -1),101. 53 (C-Rha-I), 95. 71 (C-Glc “ -1)，88.84 (C—3)，82. 03(C-Rha—3),81. 94(C—Glc—4)，78. 78(C-Glc “ -3)， 78.42 (C-Glc “ ‘ -4)，78. 25(C-Glc ‘ -3)，78. 10(C—Glc 〃 -5)，77. 20(C—Glc 〃 ‘ -5)， 76. 82 (C-Glc ‘ -5), 76. 67(C-Glc-5),76. 59 (C-Glc “ ‘ -3)，76. 59(C-Rib-4)， 76. 42(C-Glc-3),75. 59 (C-Ara-2),75.39 (C-Glc “ ‘ -2)，74.89 (C-Glc ‘ -2)， 74.59 (C-Ara-3)，74. 19 (C-Glc-2)，74. 12(C-Rha ‘ -4),74. 04(C-Rha “ -4)， 73. 93 (C-Glc “ -2)，72. 82 (C-Rha ‘ -3)，72. 67 (C-Rha “ -3)，72. 60 (C-Rha “ -2)， 72. 53(C-Rib-2),71. 97(C-Rha-2, Glc ‘ -4)，71. 81(C-Rha ‘ -2)，70. 95 (C-Glc “ -4)， 70. 37(C-Rha “ -5)，69. 92(C-Rib-3，Rha-5, Rha ‘ -5)，69. 92 (C-)，69. 30 (C-Ara-4, Glc “ -6),68. 64 (C-Glc ‘ -6),65. 58(C-Ara-5),61. 96(C-Glc-6),61. 78(C-Rib-5), 61. 39 (C-Glc “ ‘ -6)，56. 12 (C-5)，48. 16 (C-9)，47. 12 (C-17)，46. 33 (C-19)，42. 21 (C-14)，41. 74(C-18) , 39. 97 (C_8) , 39. 65 (C_4) , 39. 05 (C-I) , 37. 12 (C-10) , 34. 09 (C-21)， 33. 20(C-7,29)，32. 60(C-22)，30. 82(C-20)，28. 34(C-15)，28.26 (C-23)，26.72 (C-2)， 26. 14(C-27)，23· 87 (C-Il) ,23. 77 (C-30)，23. 46 (C-16)，18. 66 (C-Rha ‘ -6)，18. 56(C_6， Rha “ -6)，18.51(C-Rha-6)，17.55(C-26)，17. 18(C-24)，15.73(C-25)。ESI-MS m/z 926[(M-23)/2]。高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)純度檢測溶液的制備精密稱取3-0-α -L-吡喃鼠李糖基_(1 — 6)-β _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡 喃葡萄糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷適量，加60%甲醇制成1. 442mg · mL—1的溶液。色譜條件色譜條件A 色譜柱Agilent ZORBAX XDB-C18 (250mmX4. 6mm，5 μ m)；柱溫 30°C ；流動相甲醇-水(60 40)；流速1. OmL · mirT1 ；ELSD條件漂移管溫度95°C，載 氣流速:2· 8L · mirT1。色譜條件B 色譜柱Agilent ZORBAX SB-C18 (250mmX 4. 6mm，5 μ m)；柱溫30°C ； 流動相甲醇-水(60 40)；流速1. OmL · min-1 ；ELSD條件漂移管溫度95°C，載氣流 速2. 8L · mirT1。色譜條件C 色譜柱Agilent ZORBAX XDB-C18 (250mmX4. 6mm, 5 μ m)；柱溫30°C ； 流動相乙腈-水(28 72)；流速1. OmL · mirT1 ；ELSD條件漂移管溫度110°C，載氣流 速3. 2L · mirT1。方法與結(jié)果精密吸取20 μ L，注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結(jié)果表明，3-0- α -L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖 基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28_0_ α -L-吡 喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷為一個主色譜峰， 改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰，色譜峰保留時間分別為31. 938min、34. 814min 和19. 051min，色譜圖見附圖1 附圖3。HPLC-ELSD峰面積歸一化法純度檢測溶液的制備精密稱取3-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡 喃葡萄糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷適量，加60%甲醇制成5. 768mg · mL—1的溶液。色譜條件色譜柱AgilentZORBAX XDB-C18 (250mmX 4. 6mm, 5 μ m)；柱溫30 "C ；流動 相甲醇-水(60 40)；流速1. OmL · HiirT15ELSD條件漂移管溫度95°C，載氣流速 2. 8L · mirT1。方法與結(jié)果
精密吸取溶液20 μ L，注入液相色譜儀，記錄時間比主色譜峰保留時間延長1倍 的色譜圖。測定各雜質(zhì)峰面積和色譜圖總色譜峰面積，計算各雜質(zhì)峰面積之和占總色 譜峰面積的百分數(shù)。結(jié)果表明，3-0-(1-1^-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-0-0-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡 喃葡萄糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷的質(zhì)量分數(shù)為99. 134%，色譜圖見圖4。HPLC-ELSD不加校正因子的主成分自身對照法純度檢測溶液的制備精密稱取3-0-α -L-吡喃鼠李糖基_(1 — 6)-β _D_吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡 喃葡萄糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷適量，加60%甲醇制成5. 768mg · mL—1的溶液。自身對照溶液的制備精密吸取上述溶液0. 5mL，分別置5mL量瓶中，加60%甲醇稀釋至刻度，搖勻。色譜條件色譜柱AgilentZORBAX XDB-C18 (250mmX 4. 6mm, 5 μ m)；柱溫30 "C ；流動 相甲醇-水(60 40)；流速1. OmL · HiirT15ELSD條件漂移管溫度95°C，載氣流速 2. 8L · mirf1。方法與結(jié)果精密吸取自身對照溶液20 μ L，注入液相色譜儀，調(diào)節(jié)檢測器靈敏度，使主色譜 峰的峰高達滿量程的10%以上，精密吸取溶液和自身對照溶液20 μ L，注入液相色譜儀， 記錄時間比主色譜峰保留時間延長1倍的色譜圖。測定溶液各雜質(zhì)峰面積和自身對照 溶液主色譜峰面積，各雜質(zhì)峰面積之和與主色譜峰面積比較計算雜質(zhì)含量。結(jié)果表明， 3-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯 糖基齊墩果酸28-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - β -D-吡 喃葡萄糖苷的質(zhì)量分數(shù)為98. 826%。實施例2(1)東北鐵線蓮的藥材提取取東北鐵線蓮根及根莖粗粉500g，加70%乙醇回流 提取2次，每次2小時，分次濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；(2)大孔吸附樹脂柱色譜分離提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂DlOl柱色譜， 用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用 70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙 醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；(3)制備高效液相色譜分離東北鐵線蓮三萜皂苷提取物加甲醇溶解，微孔濾 膜(0.45μπι)濾過，經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水 (65 35，體積比)，同步采用示差折光檢測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃 縮干燥后得3-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃 葡萄糖基_ (1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 —6) - β -D-吡喃葡萄糖苷(產(chǎn)率1. 28 % )。經(jīng)高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)純度檢查，不同色譜柱和流動相測 定結(jié)果表明均為一個主色譜峰，改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以HPLC-ELSD 峰面積歸一化法測定質(zhì)量分數(shù)為99. 691% ；以HPLC-ELSD不加校正因子的主成分自身對照 法測定質(zhì)量分數(shù)為99.414%。實施例3(1)東北鐵線蓮的藥材提取取東北鐵線蓮根及根莖粗粉500g，加90%乙醇回流 提取2次，每次2小時，分次濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；(2)大孔吸附樹脂柱色譜分離提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂DlOl柱色譜， 用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用 70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙 醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；(3)制備高效液相色譜分離東北鐵線蓮三萜皂苷提取物加甲醇溶解，微孔濾 膜(0.45μπι)濾過，經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水 (65 35，體積比)，同步采用示差折光檢測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃 縮干燥后得3-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃 葡萄糖基_ (1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡 喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(產(chǎn)率1.06% )。經(jīng)高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)純度檢查，不同色譜柱和流動相測 定結(jié)果表明均為一個主色譜峰，改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以HPLC-ELSD 峰面積歸一化法測定質(zhì)量分數(shù)為98. 945% ；以HPLC-ELSD不加校正因子的主成分自身對照 法測定質(zhì)量分數(shù)為98. 373%。實施例4(1)東北鐵線蓮的藥材提取取東北鐵線蓮根及根莖粗粉500g，加50%乙醇回流 提取2次，每次2小時，分次濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；(2)大孔吸附樹脂柱色譜分離提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂AB-8柱色譜， 用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用 70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙 醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；(3)制備高效液相色譜分離東北鐵線蓮三萜皂苷提取物加甲醇溶解，微孔濾 膜(0.45μπι)濾過，經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水 (65 35，體積比)，同步采用示差折光檢測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃 縮干燥后得3-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃 葡萄糖基_ (1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡 喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷(產(chǎn)率0. 99 % )。經(jīng)高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)純度檢查，不同色譜柱和流動相測定結(jié)果表明均為一個主色譜峰，改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以HPLC-ELSD 峰面積歸一化法測定質(zhì)量分數(shù)為99. 372% ；以HPLC-ELSD不加校正因子的主成分自身對照 法測定質(zhì)量分數(shù)為98. 459%。實施例5(1)東北鐵線蓮的藥材提取取東北鐵線蓮根及根莖粗粉500g，加70%乙醇回流 提取2次，每次2小時，分次濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；(2)大孔吸附樹脂柱色譜分離提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂AB-8柱色譜， 用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用 70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙 醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；(3)制備高效液相色譜分離東北鐵線蓮三萜皂苷提取物加甲醇溶解，微孔濾 膜(0.45μπι)濾過，經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水 (65 35，體積比)，同步采用示差折光檢測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃 縮干燥后得3-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃 葡萄糖基_ (1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡 喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6)-β-D-吡喃葡萄糖苷(產(chǎn)率1.09%)。經(jīng)高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)純度檢查，不同色譜柱和流動相測 定結(jié)果表明均為一個主色譜峰，改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以HPLC-ELSD 峰面積歸一化法測定質(zhì)量分數(shù)為99. 475% ；以HPLC-ELSD不加校正因子的主成分自身對照 法測定質(zhì)量分數(shù)為99. 026%。實施例6(1)東北鐵線蓮的藥材提取取東北鐵線蓮根及根莖粗粉500g，加90%乙醇回流 提取2次，每次2小時，分次濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；(2)大孔吸附樹脂柱色譜分離提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂AB-8柱色譜， 用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用 70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙 醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；(3)制備高效液相色譜分離東北鐵線蓮三萜皂苷提取物加甲醇溶解，微孔濾 膜(0.45μπι)濾過，經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水 (65 35，體積比)，同步采用示差折光檢測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃 縮干燥后得3-0- α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - β -D-吡喃 葡萄糖基_ (1 — 4) - β -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - α -L-吡 喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-α -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4)-β-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6) - β -D-吡喃葡萄糖苷(產(chǎn)率1. 02 % )。經(jīng)高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)純度檢查，不同色譜柱和流動相測 定結(jié)果表明均為一個主色譜峰，改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以HPLC-ELSD 峰面積歸一化法測定質(zhì)量分數(shù)為98. 836% ；以HPLC-ELSD不加校正因子的主成分自身對照 法測定質(zhì)量分數(shù)為98. 552%。
實施例7(1)東北鐵線蓮的藥材提取取東北鐵線蓮根及根莖粗粉500g，加50%乙醇回流提取2次，每次2小時，分次濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；(2)大孔吸附樹脂柱色譜分離提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂HPD100柱色譜， 用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用 70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙 醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；(3)制備高效液相色譜分離東北鐵線蓮三萜皂苷提取物加甲醇溶解，微孔濾 膜(0.45i!m)濾過，經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水 (65 35，體積比)，同步采用示差折光檢測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃 縮干燥后得3-0- a -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6) - 3 -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - 3 _D_吡喃 葡萄糖基_ (1 — 4) - 3 -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - a -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - a -L-吡 喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-a -L-吡喃鼠李糖基-(1 — -D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6)-3-D-吡喃葡萄糖苷(產(chǎn)率1.13%)。經(jīng)高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)純度檢查，不同色譜柱和流動相測 定結(jié)果表明均為一個主色譜峰，改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以HPLC-ELSD 峰面積歸一化法測定質(zhì)量分數(shù)為98. 453% ；以HPLC-ELSD不加校正因子的主成分自身對照 法測定質(zhì)量分數(shù)為98.316%。實施例8(1)東北鐵線蓮的藥材提取取東北鐵線蓮根及根莖粗粉500g，加70%乙醇回流 提取2次，每次2小時，分次濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；(2)大孔吸附樹脂柱色譜分離提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂HPD100柱色譜， 用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用 70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙 醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；(3)制備高效液相色譜分離東北鐵線蓮三萜皂苷提取物加甲醇溶解，微孔濾 膜(0.45i!m)濾過，經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水 (65 35，體積比)，同步采用示差折光檢測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃 縮干燥后得3-0- a -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6) - 3 -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - 3 _D_吡喃 葡萄糖基_ (1 — 4) - 3 -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - a -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - a -L-吡 喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-a-L-吡喃鼠李糖基-(1 — 4)-^-D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6)-3-D-吡喃葡萄糖苷(產(chǎn)率1.21%)。經(jīng)高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)純度檢查，不同色譜柱和流動相測 定結(jié)果表明均為一個主色譜峰，改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以HPLC-ELSD 峰面積歸一化法測定質(zhì)量分數(shù)為98. 884% ；以HPLC-ELSD不加校正因子的主成分自身對照 法測定質(zhì)量分數(shù)為98. 457%。實施例9(1)東北鐵線蓮的藥材提取取東北鐵線蓮根及根莖粗粉500g，加90%乙醇回流 提取2次，每次2小時，分次濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；
(2)大孔吸附樹脂柱色譜分離提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂HPD100柱色譜， 用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30%乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用 70%乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙 醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；(3)制備高效液相色譜分離東北鐵線蓮三萜皂苷提取物加甲醇溶解，微孔濾 膜(0.45i!m)濾過，經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水 (65 35，體積比)，同步采用示差折光檢測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃 縮干燥后得3-0- a -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 6) - 3 -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - 3 _D_吡喃 葡萄糖基_ (1 — 4) - 3 -D-吡喃核糖基-(1 — 3) - a -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - a -L-吡 喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-0-a -L-吡喃鼠李糖基-(1 — -D-吡喃葡萄糖 基-(1 — 6)-3-D-吡喃葡萄糖苷(產(chǎn)率1.09%)。經(jīng)高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器(HPLC-ELSD)純度檢查，不同色譜柱和流動相測 定結(jié)果表明均為一個主色譜峰，改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以HPLC-ELSD 峰面積歸一化法測定質(zhì)量分數(shù)為98. 549% ；以HPLC-ELSD不加校正因子的主成分自身對照 法測定質(zhì)量分數(shù)為98.112%。
權(quán)利要求
一種東北鐵線蓮三萜皂苷3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷對照品的制備方法，其特征在于包括以下步驟a)東北鐵線蓮的根及根莖粗粉加50～90％乙醇回流提取，濾過，提取液合并，減壓回收乙醇得提取物；b)將步驟a)獲得的提取物加水溶解，經(jīng)大孔吸附樹脂柱色譜，用水洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用30％乙醇洗脫至洗脫液近無色，棄去洗脫液；用70％乙醇洗脫至洗脫液近無色，收集洗脫液；洗脫液經(jīng)脫色樹脂柱D941色譜，6倍柱體積乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、干燥得東北鐵線蓮三萜皂苷提取物；c)將步驟b)獲得的東北鐵線蓮三萜皂苷提取物經(jīng)制備高效液相色譜，色譜柱十八烷基鍵合硅膠，流動相甲醇-水(65∶35，體積比)，同步采用示差折光檢測器監(jiān)視流出曲線以指導產(chǎn)品收集，收集液經(jīng)濃縮干燥后得3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種東北鐵線蓮三萜皂苷3-0-a-L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 6) - 3 -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - 3 -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - 3 -D-吡喃核糖 基-(1 — 3) - a -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - a -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28_0_ a -L-吡 喃鼠李糖基_ (1 — 4) - 0 -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - 0 -D-吡喃葡萄糖苷對照品的制備方 法，其特征在于所述的回流提取溶劑濃度為70%乙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種東北鐵線蓮三萜皂苷3-0-a-L-吡喃鼠李糖 基-(1 — 6) - 3 -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - 3 -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 4) - 3 -D-吡喃核糖 基-(1 — 3) - a -L-吡喃鼠李糖基-(1 — 2) - a -L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28_0_ a -L-吡 喃鼠李糖基-(1 — 4) - 0 -D-吡喃葡萄糖基-(1 — 6) - 0 -D-吡喃葡萄糖苷對照品的制備方 法，其特征在于所述的大孔吸附樹脂為非極性大孔吸附樹脂或弱極性大孔吸附樹脂。
全文摘要
本發(fā)明提供了一種東北鐵線蓮三萜皂苷對照品的制備方法，包括如下步驟(1)東北鐵線蓮的藥材提??；(2)大孔吸附樹脂柱色譜分離；(3)制備高效液相色譜分離得3-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→4)-β-D-吡喃核糖基-(1→3)-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→2)-α-L-吡喃阿拉伯糖基齊墩果酸28-O-α-L-吡喃鼠李糖基-(1→4)-β-D-吡喃葡萄糖基-(1→6)-β-D-吡喃葡萄糖苷對照品。高效液相色譜-蒸發(fā)光檢測器純度檢查，不同色譜柱和流動相測定結(jié)果表明均為一個主色譜峰，改變色譜柱和流動相測定均未出現(xiàn)異常峰；以HPLC-ELSD峰面積歸一化法和不加校正因子的主成分自身對照法測定質(zhì)量分數(shù)大于98％，符合含量測定用中藥化學對照品的要求。而且本發(fā)明方法藥材提取完全，產(chǎn)率高；有機溶劑用量少，成本低。
文檔編號C08B37/00GK101830997SQ20101016553
公開日2010年9月15日 申請日期2010年5月7日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月7日
發(fā)明者崔國賀, 張英華, 王威, 董方言 申請人:吉林省中醫(yī)藥科學院