專利名稱：茅蒼術組培繁殖的種質保存方法
技術領域：
本發(fā)明涉及植物的種質保存方法，特指茅蒼術組培繁殖的種質保存技術。
背景技術：
茅蒼術(Atractylodes lancea(thunb.)DC)為菊科植物，是多年生草本植物。茅蒼術是道地中藥材，可用于治療消化不良、胃痛及夜盲癥等癥，科學研究正不斷豐富人類對它的藥理認識。現在人們還利用它預防感冒和SARS、治療竇性心動過速、糖尿病、細菌性痢疾等上。
但是，由于生態(tài)環(huán)境的破壞和過去掠奪式的采挖，野生茅蒼術的資源日漸稀缺，已處于瀕危狀態(tài)。藥材市場上茅蒼術是有價無貨的。目前，全國各大藥材市場上均為北蒼術，其質量和療效均遜于茅蒼術。除了保護茅蒼術的生境外，人工馴化和栽培就成為拯救茅蒼術資源的重要手段。目前的研究發(fā)現，野生茅蒼術具有多種類型，各種類型的產量和品質具有較大的差異，因此栽培優(yōu)質茅蒼術成為高產優(yōu)質栽培的關鍵。而選擇優(yōu)良無性系，保存優(yōu)質種質資源又是栽培優(yōu)質茅蒼術的關鍵。
茅蒼術的繁殖主要通過兩種途徑一是有性繁殖，即通過種子繁衍下一代種苗；由于，野生茅蒼術具有多種類型，長期混栽，將會引起不同類型的茅蒼術之間的天然雜交，種質資源迅速退化。另一種繁殖途徑是無性繁殖，即通過分根的方法，這類繁殖方法受季節(jié)性及自然條件的限制，同時一旦母株感染了病蟲害等，通過無性繁殖很快地造成病菌蔓延，也將使茅蒼術的產量和質量受到很大影響。因此，很有必要利用組織培養(yǎng)技術來解決茅蒼術優(yōu)質資源的種質保存問題。但迄今未有茅蒼術優(yōu)質資源的種質保存成功的報道。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的在于針對現有技術中存在的問題，提供一種茅蒼術種質保存技術，該技術不受自然條件或地區(qū)差異的限制，有利于種質的長期保存，隨時能提供優(yōu)質純化的種苗，且保存后栽培的幼苗生長快，能使茅蒼術達到優(yōu)質高產。
為了實現本發(fā)明的上述目的，本發(fā)明提供了如下技術方案茅蒼術組培繁殖的種質保存方法，包括選用無性系的根莖為外植體，在附加激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導出芽，芽經增殖、繼代、生根、試管苗移栽，完成優(yōu)質資源的種質保存過程，基本培養(yǎng)基選用MS附加蔗糖3％、瓊脂0.8％；芽誘導和增殖培養(yǎng)基選用MS+6-BA 2.0～3.0mg/l+NAA0.1～0.2mg/l；繼代培養(yǎng)基選用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05～0.1mg/l；生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/l或1/2MS+IBA1.0mg/l，pH5.4～5.8，常規(guī)高壓滅菌；試管苗培養(yǎng)條件選20±2℃；光照12h/d，光照強度1500～2000Lux。
上述方法可選用生殖生長期的根莖為外植體。
上述方法根莖的取材時期選擇進人生殖生長期、植株開始結實的季節(jié)。
上述方法外植體選擇長度0.5-1.5厘米的根莖。
上述方法可以根據需要進行繼代培養(yǎng)，常規(guī)情況應每隔1-2月繼代培養(yǎng)一次。
試管苗的移栽選擇在生根培養(yǎng)10-15天后，小苗莖葉長4-6厘米時，在移栽前2-3天打開瓶蓋，待葉色加深，再移栽到溫室，開始一周使?jié)穸缺３衷?0％以上，其后使?jié)穸缺３衷?5％左右，10-15天后栽到露地，再經一月定植田間。
與常規(guī)方法相比，本發(fā)明的優(yōu)點在于1、與以種子進行種質保存的方法相比，本發(fā)明不受自然條件或地區(qū)差異的限制。種子繁殖受所在地區(qū)的氣候及地理條件的限制，而本發(fā)明是通過對營養(yǎng)體進行組織培養(yǎng)獲得種苗，不受氣候條件的限制，由于組培苗能長期繼代培養(yǎng)保存，因此一旦需要可以隨時提供種苗。
2、方便保存后的栽培由于組培苗繁殖系數高，速度快，可以迅速提供優(yōu)質苗，移栽后的苗的生長速度快，有利于大規(guī)模的栽培。
3、減少常規(guī)的無性系種質保存的用地常規(guī)的無性系保存種質需要占用一定的土地，且易感染病毒、病害造成種質資源退化。利用本發(fā)明技術，可以減少用地，同時可以對生長過弱、嚴重感染病毒、病害的無性系在培養(yǎng)基上進行脫毒培養(yǎng)，使無性系復壯、純化，達到種質長期保存的目的。
4、本發(fā)明技術穩(wěn)定可靠，可重復性強，可以滿足既擴繁又保存種質資源的目的。
5、本發(fā)明技術提供的種質資源移栽到田間后苗齊、生長健壯，抗性強、生長勢勝于種子培育的苗且能保持培養(yǎng)前的無性系的優(yōu)良性狀。


圖1為繼代培養(yǎng)9次的組培苗
具體實施例方式
下面用實施例來進一步說明本發(fā)明的實質性內容，但本發(fā)明的內容并不局限于此。
實施例一選用茅蒼術優(yōu)良無性系的根莖為外植體，根莖的取材時期選在當年10月份，外植體選擇長度0.5厘米的根莖。在附加不同種類和濃度激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導出芽，然后通過增殖、繼代、生根到試管苗移栽培完成種質保存過程；上述繁殖的培養(yǎng)基選用MS附加蔗糖3％、瓊脂0.8％，芽誘導和增殖培養(yǎng)基選用MS+6-BA2.0mg/l+NAA0.1mg/l；繼代培養(yǎng)基選用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05mg/l；生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/l，pH為5.5，常規(guī)高壓滅菌；試管苗培養(yǎng)條件選20±2℃；光照12h/d，光照強度為1500Lux，繼代培養(yǎng)1次。
試管苗的移栽選擇在生根培養(yǎng)10天后，小苗莖葉長4厘米時，在移栽前2天打開瓶蓋，待葉色加深，再移栽到溫室，開始一周使?jié)穸缺３衷?0％以上，其后使?jié)穸缺３衷?5％左右，10天后栽到露地，再經一月定植田間。
定植后的組培苗生長健壯整齊，通過一系列生物學性狀調查及統(tǒng)計，組培小苗表現出與上代母株極大的一致性，同一來源的無性系的田間植株長勢整齊，各無性系之間仍保持原有品系的明顯特征。
實施例二選用茅蒼術優(yōu)良無性系的根莖為外植體，根莖的取材時期選在當年12月份，外植體選擇長度1.0厘米的根莖。在附加不同種類和濃度激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導出芽，然后通過增殖、繼代、生根到試管苗移栽培完成種質保存過程；上述繁殖的培養(yǎng)基選用MS附加蔗糖3％、瓊脂0.8％，芽誘導和增殖培養(yǎng)基選用MS+6-BA3.0mg/l+NAA0.2mg/l；繼代培養(yǎng)基選用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.1mg/l；生根培養(yǎng)基為1/2MS+IBA1.0mg/l，pH為5.6，常規(guī)高壓滅菌；試管苗培養(yǎng)條件選20±2℃；光照12h/d，光照強度為1800Lux，繼代培養(yǎng)1次。
試管苗的移栽選擇在生根培養(yǎng)12天后，小苗莖葉長5厘米時，在移栽前3天打開瓶蓋，待葉色加深，再移栽到溫室，開始一周使?jié)穸缺３衷?0％以上，其后使?jié)穸缺３衷?5％左右，12天后栽到露地，再經一月定植田間。
定植后的組培苗生長健壯整齊，通過一系列生物學性狀調查及統(tǒng)計，組培小苗表現出與上代母株極大的一致性，同一來源的無性系的田間植株長勢整齊，各無性系之間仍保持原有品系的明顯特征。
實施例三選用茅蒼術優(yōu)良無性系的根莖為外植體，根莖的取材時期選在后一年2月份，外植體選擇長度1.5厘米的根莖。在附加不同種類和濃度激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導出芽，然后通過增殖、繼代、生根到試管苗移栽培完成種質保存過程；上述繁殖的培養(yǎng)基選用MS附加蔗糖3％、瓊脂0.8％，芽誘導和增殖培養(yǎng)基選用MS+6-BA2.0mg/l+NAA0.1mg/l；繼代培養(yǎng)基選用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05mg/l；生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/l，pH為5.8，常規(guī)高壓滅菌；試管苗培養(yǎng)條件選20±2℃；光照12h/d，光照強度為2000Lux，繼代培養(yǎng)1次。
試管苗的移栽選擇在生根培養(yǎng)15天后，小苗莖葉長6厘米時，在移栽前2天打開瓶蓋，待葉色加深，再移栽到溫室，開始一周使?jié)穸缺３衷?0％以上，其后使?jié)穸缺３衷?5％左右，15天后栽到露地，再經一月定植田間。
定植后的組培苗生長健壯整齊，通過一系列生物學性狀調查及統(tǒng)計，組培小苗表現出與上代母株極大的一致性，同一來源的無性系的田間植株長勢整齊，各無性系之間仍保持原有品系的明顯特征。
實施例四取用材料為實施例一中繼代培養(yǎng)1次的組培苗，繼續(xù)繼代培養(yǎng)，8次后再進行生根和試管苗的移栽，如圖1所示，通過田間生物學性狀調查及統(tǒng)計發(fā)現，通過300多天繼代保存后的試管苗仍保持良好的生活力，同一來源的無性系植株，田間生長勢整齊，仍保持原有無性系的明顯特征。由此可以看出本發(fā)明對茅蒼術種質的保存表現出明顯的效果。
權利要求
1.一種茅蒼術組培繁殖的種質保存方法，其特征在于種質保存過程為選用無性系的根莖為外植體，在附加激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導出芽，芽經增殖、繼代、生根、試管苗移栽，其中基本培養(yǎng)基選用MS附加蔗糖3％、瓊脂0.8％，芽誘導和增殖培養(yǎng)基選用MS+6-BA 2.0～3.0mg/l+NAA0.1～0.2mg/l；繼代培養(yǎng)基選用MS+6-BA 1.0mg/l+NAA0.05～0.1mg/l；生根培養(yǎng)基為1/2MS+NAA0.2mg/l或1/2MS+IBA1.0mg/l，pH5.4～5.8，常規(guī)高壓滅菌；試管苗培養(yǎng)條件選20±2℃；光照12h/d，光照強度1500～2000Lux。
2.根據權利要求1所述的一種茅蒼術組培繁殖的種質保存方法，其特征是選用生殖生長期的根莖為外植體。
3.根據權利要求2所述的一種茅蒼術組培繁殖的種質保存方法，其特征是選擇長度0.5～1.5厘米的根莖作為外植體。
4.根據權利要求1所述的一種茅蒼術組培繁殖的種質保存方法，其特征是可以每隔1-2月繼代培養(yǎng)一次。
5.根據權利要求1所述的一種茅蒼術組培繁殖的種質保存方法，其特征是試管苗的移栽選擇在生根培養(yǎng)10～15天后，小苗莖葉長4～6厘米時，在移栽前2～3天打開瓶蓋，待葉色加深，再移栽到溫室，開始一周使?jié)穸缺３衷?0％以上，其后使?jié)穸缺３衷?5％左右，10～15天后栽到露地，再經一月定植田間。
全文摘要
本發(fā)明提供了茅蒼術組培繁殖的種質保存技術，包括選用優(yōu)良無性系的根莖為外植體，在附加不同種類和濃度激素的MS培養(yǎng)基上直接誘導出芽，然后通過增殖、繼代、生根、試管苗移栽，完成優(yōu)質資源的種質保存過程。本發(fā)明技術穩(wěn)定可靠，可重復性強，種質保存的時間長，經過保存的茅蒼術的試管苗，移栽到田間后苗齊、生長健壯，抗性強、生長勢優(yōu)于種子培育的苗且能保持培養(yǎng)前的無性系的優(yōu)良性狀。
文檔編號A01H4/00GK1653889SQ200510037859
公開日2005年8月17日 申請日期2005年2月25日 優(yōu)先權日2005年2月25日
發(fā)明者吳沿友, 李萍萍, 李西騰, 趙新政 申請人:江蘇大學