專利名稱：小桿線蟲Rhabditis(Oscheius)spp.在防治植物線蟲中的應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及生物生態(tài)防治技術(shù)領(lǐng)域，特別是涉及小桿線蟲Rhabditis(Oscheius)spp在防治有害線蟲——植物線蟲中的應(yīng)用。
背景技術(shù)：
植物線蟲種類多，分布廣，由其直接或間接引起的植物病害已成為農(nóng)、牧、林等經(jīng)濟(jì)作物生產(chǎn)的主要難題。近年來，隨著保護(hù)地蔬菜、果樹等作物種植面積的擴(kuò)大，由于溫室大棚內(nèi)高溫、高濕、封閉的小氣候和重茬栽培等特點，使許多植物線蟲避開了陸地不良?xì)夂虻南拗贫粩嗦樱蚨?，植物線蟲問題愈加突出，已成為大棚作物生產(chǎn)的重要限制因素。僅以黃瓜為例，隨著溫室黃瓜栽培面積的迅速增長，黃瓜根結(jié)線蟲等植物線蟲的危害日趨嚴(yán)重。黃瓜根結(jié)線蟲病一般能減產(chǎn)20％～30％，重者50％以上，甚至絕收，造成極大的損失，已經(jīng)成為毀滅性病害之一；黃瓜矮化線蟲病一般使根壞死早衰、地上部分矮化，嚴(yán)重時也能引起較大的經(jīng)濟(jì)損失。
目前對植物線蟲的防治仍然以化學(xué)防治為主，化學(xué)藥劑不僅污染環(huán)境，而且防治效果也很差，線蟲易產(chǎn)生抗藥性。為了適應(yīng)可持續(xù)發(fā)展和大田以及溫室瓜果、蔬菜等作物的無公害生產(chǎn)，越來越多的國內(nèi)外研究者開始關(guān)注于生物防治。二十世紀(jì)80年代初美國等一些國家以高效低毒、殺線蟲譜極寬、對環(huán)境副作用較小的阿維菌素作為一種生物源殺線蟲劑。1997年研制新的防治線蟲生物菌劑DiT，被證明對多種植物線蟲有效，并有增產(chǎn)的效果。但目前生物源殺線蟲劑種類仍然較少。因此，一些研究者開始探索用生物的、生態(tài)的、物理的等方法防治植物線蟲。
傳統(tǒng)上認(rèn)為小桿屬Rhabditis(Oscheius)的線蟲(簡稱小桿線蟲)是食細(xì)菌類線蟲，國內(nèi)外尚未見小桿線蟲具有抑制植物線蟲種群密度的報道，更未見田間用小桿線蟲Rhabditis(Oscheius)spp控制植物線蟲、以達(dá)到有效防治的報道。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明針對上述領(lǐng)域的空白，提供小桿線蟲在防治植物線蟲中的應(yīng)用，以解決生產(chǎn)上的難題，拓寬生物和生態(tài)防治途徑。
小桿線蟲Rhabditis(Oscheius)spp.在防治植物線蟲中的應(yīng)用。
所述應(yīng)用是在植物線蟲侵入作物根系之前向田間施用小桿線蟲制劑。
所述作物為黃瓜。
所述小桿線蟲制劑施用量為1.0×108條--1.0×1011條/公頃，較好劑量為1.0×1010條-5.0×1010條/公頃。
本發(fā)明提供了一種新的防治植物線蟲的方法，采用小桿線蟲制成制劑施用于將栽種黃瓜的田中，結(jié)果表明小桿線蟲防治植物線蟲效果特別突出。從實驗結(jié)果看，空白對照組中的植物線蟲密度迅速上升，而處理組的植物線蟲種群密度保持原有較低水平，其中處理組的黃瓜根結(jié)線蟲和矮化線蟲的種群密度較對照組分別降低了70％和87％，實驗結(jié)果表明小桿線蟲對植物寄生線蟲有明顯的抑制作用。
小桿屬的線蟲分布非常廣泛，資源豐富，易于獲得，易于培養(yǎng)擴(kuò)繁，一旦在田間施用，容易在自然界建立種群。它具有化學(xué)農(nóng)藥無可比擬的優(yōu)勢，它不污染環(huán)境，對人畜等脊椎動物安全；害蟲不會產(chǎn)生抗性；可與大多數(shù)化學(xué)農(nóng)藥混用；它能主動尋找寄主；能防治化學(xué)農(nóng)藥難以奏效的鉆蛀性、隱蔽性害蟲。它一旦進(jìn)入害蟲體內(nèi)，便釋放具有侵染能力的細(xì)菌，之后在寄主體內(nèi)發(fā)育，大量繁殖，隨后爬出寄主體外，尋找新的寄主。因此，小桿線蟲用于防治植物線蟲比化學(xué)農(nóng)藥更主動、有效、持久，能夠更好地控制害蟲種群數(shù)量。小桿線蟲使用方便，無化學(xué)農(nóng)藥的殘毒，可以作為生物新農(nóng)藥，是極具有開發(fā)潛力的一類生物防治制劑。


圖1施加的小桿線蟲對黃瓜根際土壤中的小桿線蟲種群數(shù)量的影響圖2施加的小桿線蟲對黃瓜根際土壤中植物線蟲的種群數(shù)量的影響圖3施加的小桿線蟲對黃瓜根際土壤中根結(jié)屬線蟲的種群數(shù)量的影響圖4施加的小桿線蟲對黃瓜根際土壤中矮化屬線蟲的種群數(shù)量的影響圖5施加的小桿線蟲對黃瓜根際土壤中根結(jié)屬線蟲的根結(jié)指數(shù)的影響具體實施方式
現(xiàn)結(jié)合實施例對本發(fā)明作進(jìn)一步的詳細(xì)說明。
本發(fā)明實施例雖然只是應(yīng)用于溫室黃瓜植物線蟲的防治，但對危害其它作物的植物線蟲具有同樣的作用，小桿線蟲同樣適用于發(fā)生植物線蟲的其它地塊。
實施例1材料與方法1.1試驗材料供試藥劑小桿線蟲Rhabditis(Oscheius)sp.(Bn)由實驗室成員從溫室黃瓜根際土壤中用大蠟螟老熟幼蟲誘集所得，并用大蠟螟老熟幼蟲分離、純化、擴(kuò)繁培養(yǎng)，可對外公開發(fā)放。收集后的小桿線蟲懸浮在水溶液中，用淺水層法在4℃保存，20天內(nèi)施用。
1.2試驗地點本試驗在河南省通許縣練城鄉(xiāng)溫室中進(jìn)行。溫室東西走向，長50m，寬8m，分成40個南北走向的壟，壟橫截面為馬鞍形，鞍谷用于澆灌，兩側(cè)種兩行黃瓜，每行約40株。選取中部6壟用于試驗。
1.3試驗方法從黃瓜栽種前10天(2004年9月底)開始隨澆灌水流均勻灌施線蟲溶液，作為處理。處理濃度為每公頃1.0×1010條線蟲(1.0×1010IJs/ha)。澆灌等量自來水為對照。處理和對照各三個壟，作為3個重復(fù)，每重復(fù)1壟、2行、約80株黃瓜。每次施加小桿線蟲前從每壟黃瓜根際用直徑2.5cm的土鉆鉆取5-15cm的土壤約500g，混勻、密封后作為一個土樣。15天內(nèi)從每個土樣中取50mL土壤用改良貝爾曼漏斗法分離24小時，收集線蟲懸浮液并濃縮，用等量FA溶液固定。在光學(xué)顯微鏡下參照Goodey分類系統(tǒng)(1963)和劉維志的《植物線蟲志》(2004)，將線蟲鑒定到屬，并統(tǒng)計各屬數(shù)量。
在4月底黃瓜拉秧前，從每壟隨機(jī)拔取3株，共27株黃瓜觀察其根結(jié)指數(shù)。根結(jié)按直徑大小分為5級，沒有根結(jié)的為O級，直徑小于1mm的為I級，1-2mm的為II級，2-4mm的為III級，大于4mm的為IV級；統(tǒng)計每株黃瓜根上各級根結(jié)的數(shù)目。
2試驗結(jié)果2.1小桿線蟲的種群建立及動態(tài)變化對照組中小桿線蟲的密度始終在每100毫升土壤150條線蟲(150IJs/100mL)左右波動，而處理組的種群密度在2005年1月之前與對照無明顯差異，之后開始迅速上升，在4月份達(dá)到2128IJs/100mL土壤，約為對照的11倍(見圖1)，差異極顯著(P＜0.01)。
2.2植物線蟲的動態(tài)研究結(jié)果表明(圖2)對照組的植物寄生線蟲(主要是根結(jié)線蟲Meloidogyne sp和矮化線蟲Tylenchorhynchus sp，還有少量螺旋線蟲Helicotylenchus sp.和擬滑刃線蟲Aphelenchoides sp.等)種群密度2005年2月之前在200-300IJs/100mL土壤左右波動，之后迅速上升，在4月份達(dá)到1561IJs/100mL，與2月相比增長了6.8倍；施加小桿線蟲后，植物寄生線蟲種群密度在2005年1月之前與對照組無明顯差異，也在每毫升土壤200-300條線蟲之間；2月之后，與以前相比，植物線蟲的種群密度略微有些升高，達(dá)到392IJs/100mL；在3月和4月，施加小桿線蟲的處理組中的植物線蟲種群密度僅為對照組的1/2倍和1/4倍，差異極為顯著(P＜0.01)。
在河南省開封市通許縣練城鄉(xiāng)黃瓜根際土壤中，根結(jié)屬線蟲和矮化屬線蟲是最主要的植物寄生線蟲類群(謝文聞等，2004)。小桿線蟲Rhabditis(Oscheius)sp.(Bn)對二者的抑制作用分別見圖3和圖4。
2.2.1根結(jié)屬線蟲的動態(tài)對照組的根結(jié)屬線蟲Meloidogyne sp在2005年1月之前種群密度在20IJs/100mL左右波動，至2月，種群密度逐漸增高，接近200IJs/100mL，與1月相比，增加近10倍，雖然以后種群密度有所降低，但在4月份根結(jié)線蟲的種群密度迅速猛增，達(dá)到712IJs/100mL，增加了35倍。而在施加小桿線蟲的處理組，根結(jié)線蟲種群密度在2005年3月之前始終處在較低水平(20IJs/100mL左右)，直至4月根結(jié)線蟲的種群密度才緩慢增長到213IJs/100mL，但不及對照組的1/3，二者的差異極顯著(P＜0.01)(圖3)。
2.2.2矮化線蟲屬線蟲的動態(tài)矮化屬線蟲Tylenchorhynchus sp.在2005年1月之前種群密度在150IJs/100mL左右波動，然后對照組的種群密度迅速增高，至4月份達(dá)到830IJs/100mL，比1月之前增長了5.5倍。施加小桿線蟲的處理組，矮化線蟲在2005年1月之前與對照沒有明顯區(qū)別。但之后，與對照組有極顯著差異(P＜0.01)(圖4)，至4月份，矮化線蟲的種群密度在200IJs/100mL左右波動，僅為對照組的1/4。
2.2.3根結(jié)屬線蟲的根結(jié)指數(shù)如圖5，到2005年4月，施用小桿線蟲的處理組的黃瓜根結(jié)指數(shù)與對照相比顯著降低(P＜0.05)。單株黃瓜的I-IV級根結(jié)數(shù)分別降低了75％、65％、47％和54％。
3.結(jié)論小桿線蟲對根結(jié)線蟲的有效性應(yīng)該受施用時間的影響，一般在植物線蟲侵入植物根系之前施用效果好。為保證足夠的作用時間，本研究在黃瓜移栽前10天(9月底)施用小桿線蟲。但從本實驗結(jié)果看(圖1-4)，在2005年2月之前，所有線蟲的種群密度都不高(這可能與溫室土壤溫度較低有關(guān))，在2月以后，對照組的植物線蟲種群密度才迅速增高，據(jù)此，是否可以將第一次施用小桿線蟲的時間安排在翌年1月、而不是當(dāng)年9月底，有待于進(jìn)一步驗證。
從本研究的結(jié)果分析，小桿線蟲Rhabditis(Oscheius)sp.(Bn)對植物線蟲的抑制作用非常顯著(P＜0.01)。2月份之后，對照組的植物線蟲密度迅速上升，而處理組的植物線蟲種群密度基本沒變化(圖2)，此時的小桿線蟲的密度卻迅速增大(圖1)，尤其在4月份，處理組的黃瓜根結(jié)線蟲和矮化線蟲的種群密度較對照組分別降低了70％和87％(圖3、4)，由此表明小桿線蟲Rhabditis(Oscheius)sp.對植物寄生線蟲有明顯的抑制作用(圖2-4)，這為應(yīng)用對環(huán)境和人畜友好的生物制劑防治植物線蟲開辟了生物防治新途徑。本研究的實驗方法還表明小桿線蟲Rhabditis(Oscheius)sp.使用方便，無化學(xué)農(nóng)藥的殘毒，可以作為生物新農(nóng)藥。另外，小桿線蟲具有分布廣泛、資源豐富、在自然界容易獲得等優(yōu)勢，這些特性作為生物防治制劑尤為重要，由此認(rèn)為小桿線蟲極具開發(fā)價值和推廣前景。
權(quán)利要求
1.小桿線蟲在防治植物線蟲的應(yīng)用。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的應(yīng)用，其特征是在植物線蟲侵入作物根系之前向田間施用小桿線蟲制劑。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，所述的作物為黃瓜。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，所述小桿線蟲制劑施用量為1.0×108-1.0×1011條/公頃。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，所述小桿線蟲制劑施用量為1.0×1010條-5.0×1010條/公頃。
全文摘要
本發(fā)明涉及“小桿線蟲在防治植物線蟲中的應(yīng)用”。本發(fā)明通過田間試驗結(jié)果表明小桿線蟲Rhabditis(Oscheius)spp.能抑制植物線蟲的種群密度增長，對溫室黃瓜根際植物寄生線蟲具有明顯的抑制作用，可以作為生物生態(tài)防治制劑，防治植物線蟲的危害。本研究結(jié)果還表明小桿線蟲使用方便，無化學(xué)農(nóng)藥的殘毒，可以作為生物新農(nóng)藥。另外，小桿線蟲具有分布廣泛、資源豐富、在自然界容易獲得等優(yōu)勢，這些特性作為生物防治制劑尤為重要，由此認(rèn)為小桿線蟲極具開發(fā)價值和應(yīng)用前景。
文檔編號A01P5/00GK1883274SQ20061001206
公開日2006年12月27日 申請日期2006年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月31日
發(fā)明者劉奇志 申請人:劉奇志