專利名稱：：晶型5(s)-(2’-羥基乙氧基)-20(s)-喜樹堿的制作方法晶型5(S)-(2'-羥基乙IL^)-20(S)-喜樹堿相關(guān)專利和專利申請的交叉引用本發(fā)明主題涉及2001年1月23日出版的美國專利No.6,177,439，和與本申請同一天遞交的共同待決且共同擁有的美國非臨時專利申請，名稱為5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿及其制備和治療癌癥的用途，律師代理案件號為DRF3.0-031US,它們都通過整體引用而并入本文。本發(fā)明是專利合作條約申請，并要求獲得2006年5月24日遞交的印度臨時申請No.897/CHE/2006和2007年1月31日遞交的美國臨時申請No.60/887,416的權(quán)益，它們都被本文所參考，并通過整體引用而并入本文。
背景技術(shù)：
：(1)發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明總體來講涉及晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其制備方法，及其使用方法和組合物。(2)相關(guān)技術(shù)描述喜樹堿(CPT)是五環(huán)植物生物堿，最早由Wall等人從中國喜樹(Camptothecaacuminate)中分離得到，J.Am.Chem.Soc,88:3888(1966)。喜樹堿的結(jié)構(gòu)如式I所示未經(jīng)修飾的喜樹堿，親脂性高而水溶性差。早期使用溶于氫氧化鈉水溶液的喜樹堿鈉進(jìn)行臨床試驗(yàn)，表明該化合物具有抗腫瘤活性，其它研究證明活性歸因于化合物作為DNA拓樸異構(gòu)酶I抑制劑的作用。然而，由于喜樹堿的毒性問題和有限的水溶性，其潛在治療作用遠(yuǎn)未得以充分實(shí)現(xiàn)。為改善該化合物的性質(zhì)進(jìn)行了嘗試，包括合成和檢測許多喜樹堿類似物。例如，美國專利No.5,004,758描述了水溶性喜樹堿類似物，US5,734,056描述了喜樹堿類似物。美國專利No.5,004,758和美國專利出版物US2007/0105885討論了喜樹石咸的類似物，托泊替康(Topotecan)。美國專利No.6,177,439描述了20(S)-喜樹堿的各種C-5取代的類似物。其中一種類似物，5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的結(jié)構(gòu)如式II所示專利6,177,439，公開了該類似物的非對映異構(gòu)體混合物的制備方法，一本文稱作5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，或者5-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿。5(RS)-(2'-輕基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，是5-烷氧基取代的具五環(huán)結(jié)構(gòu)的20(S)-喜樹堿類似物。其手性中心位于C-5和C-20。C-20手性中心對應(yīng)于天然S-構(gòu)型。然而，C-5取代表現(xiàn)為比例大致相等的R和S非對映異構(gòu)體。5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的分子式為C22H2oN206?；衔锏姆肿恿繛?08.41克/摩爾，熔點(diǎn)為190°C。非對映異構(gòu)體混合物5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，或5-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的水溶性不好。5(RS)-(2，-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的5(S)-(2，-幾基乙氧基)-20(S)-喜樹堿非對映異構(gòu)體，化學(xué)上描述為5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，而5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿非對映異構(gòu)體，化學(xué)上描述為5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿。5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，還可化學(xué)上描述為4-(S)-乙基-4-羥基-12(S)-(2-羥基乙氧基)-1,12-二氫-4H-2-氧雜-6,12a-二氮雜二苯并[b,h]芴-3,13-二酮，其具有如式III所示的下列化學(xué)結(jié)構(gòu)<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>(III)5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿非對映異構(gòu)體的化學(xué)結(jié)構(gòu)如式IV所示<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>一般來講，作為對映體的異構(gòu)體，當(dāng)以對稱形式存在時，除能夠使平面偏振光旋轉(zhuǎn)角度相同但方向相反之外，具有相同的化學(xué)和物理性質(zhì)。另一方面，作為非對映異構(gòu)體的異構(gòu)體是立體異構(gòu)體，而不是對映體。非對映異構(gòu)體可以具有不同的物理性質(zhì)和不同的反應(yīng)性，且通常如此。另一種定義，非對映異構(gòu)體是在一處或多處手性中心具有相反構(gòu)型，但互相不為鏡象的成對異構(gòu)體。眾所周知，不同固態(tài)形式的化合物可以具有不同的物理性質(zhì)。在藥用化合物中，這種差異對商業(yè)化合物的成功具有重要的影響。例如，具有不同固相形態(tài)的化合物，可以具有不同的充填性質(zhì)(packingproperty),例如摩爾體積、密度和吸濕性，不同的熱力學(xué)性質(zhì)，例如熔融溫度和溶解度，不同的動力學(xué)性質(zhì)，例如溶解速率和穩(wěn)定性(包括在周圍條件下的穩(wěn)定性，特別是對濕度的穩(wěn)定性，和在貯藏條件下的穩(wěn)定性)，不同的表面性質(zhì)，例如表面積、可濕性、界面張力和形狀，不同的機(jī)械性質(zhì)，例如硬度、抗張強(qiáng)度、壓塑性、處理、流動和混合性質(zhì)，和/或不同的過濾性質(zhì)。物理性質(zhì)上的這些差異，可以影響藥用化合物的制備、加工、配方或給予。藥用化合物的另一個重要固態(tài)性質(zhì)，是其在水性液體中的溶解速率?；钚猿煞衷诨颊呶敢褐械娜芙馑俾?，可以對治療產(chǎn)生影響，因?yàn)樗o出了口服給藥的活性成分可到達(dá)患者血流的速率上限。因此，溶解速率可以對給予藥物的治療效果產(chǎn)生重要影響。通常，藥用化合物的溶解速率取決于其穩(wěn)定的晶型。同樣，藥用化合物的這個性質(zhì)，在配制糖漿、酏劑，及其它液體藥物時，應(yīng)作為重要特性加以考慮。化合物的固態(tài)形式也可影響其壓制行為及其貯藏穩(wěn)定性。因此，由上清楚可知，期望提供5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的穩(wěn)定晶型的活性5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿藥用成分，其具有所需的批量處理(bulkhandling)和溶解特性。發(fā)明概述簡而言之，因此本發(fā)明涉及新的晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其特征在于X射線粉末衍射圖包含一個或多個選自7.2±0.1,9,4±0.1,11.02±0.1,12.00±0.1，14.54±0.1,15.2±0.1,18.92士0.1，21.86±0.1,22.74±0.1和26.42±0.1。29的峰強(qiáng)(peakintensity)。本發(fā)明還涉及包含上述晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿和藥學(xué)上可接受載體的新藥用組合物。本發(fā)明還涉及用晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿生產(chǎn)藥用組合物的新方法，所述方法包括將上述晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿與藥學(xué)上可接受載體混合。本發(fā)明還涉及新的制備上述晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的方法，所述方法包括(a)使5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿與選自正丁醇或四氫呋喃的溶劑混合；(b)回流混合物約1至約4小時；(c)使混合物冷卻至約40。C至約50°C;和(d)將固體^S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿從混合物中分離。本發(fā)明還涉及用晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿治療患者癌癥的新方法，所述方法包括給予患者有效量的上述晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿。本發(fā)明發(fā)現(xiàn)取得了幾個有益之處，尤其是提供了5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿具有所需的批量處理(bulkhandling)和溶解特性的穩(wěn)定晶型的活性5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿藥用成分。附圖簡述圖1為本發(fā)明固態(tài)5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿實(shí)施方式的差示掃描量熱法(DSC)溫諳圖2為本發(fā)明固態(tài)5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿實(shí)施方式的X射線粉末衍射(XRPD)圖3為本發(fā)明固態(tài)化合物晶胞中5(SH2'-羥基乙氣基)-20(S)-喜樹堿的兩個獨(dú)立分子I&II的空間關(guān)系；圖4為單晶5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的模擬X射線衍射圖與本發(fā)明晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿實(shí)施方式實(shí)驗(yàn)粉末X射線衍射圖的比較；圖5為本發(fā)明固態(tài)5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿實(shí)施方式的傅立葉變換紅外(FT-IR)光譜圖6為5(S)-(2'-羥基乙MO-20(S)-喜樹堿在DMS0-d6中的質(zhì)子核磁共振譜('HNMR)圖7為5(SH2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿在DMS0-d6中的D20交換譜圖。圖8為5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿在DMSO-d6中的C-13核磁共振。CNMR)鐠圖9為固態(tài)5(S)-(2'-羥基乙氡基)-20(S)-喜樹堿實(shí)施方式的紫外(UV)語圖。圖10為5(RS)-(2'-羥基乙MO-20(S)-喜樹堿的DSC溫譜圖；圖11為固態(tài)5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的DSC溫譜圖；圖12為5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的X-射線粉末衍射圖；和圖13為5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的X-射線粉末衍射優(yōu)選實(shí)施方式的詳述本發(fā)明涉及5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的固態(tài)物理性質(zhì)，晶型在制劑中的用途，和藥物活性。依照本發(fā)明，現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的新晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿非對映異構(gòu)體，具有優(yōu)于外消旋形態(tài)化合物和5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿形態(tài)化合物的優(yōu)勢。此外，作為本發(fā)明的一個實(shí)施方式，本文所述晶型還提供了在制備、加工、配方和/或給予化合物方面優(yōu)于其它固態(tài)形式的好處。在其它實(shí)施方式中，本晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿可以是無水的。本晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿可以是非吸濕性的，具有高度物理穩(wěn)定性，并且在正常室溫環(huán)境下具有可接受的固態(tài)性質(zhì)。此外，本晶型組合物可用于治療和/或預(yù)防癌癥疾患。本發(fā)明還提供了新晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的制備方法。本發(fā)明還涉及包含新晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿和藥學(xué)上可接受載體的藥用組合物，本發(fā)明的各種實(shí)施方式可適合于經(jīng)口服、注射、吸入、滴眼液、靜脈內(nèi)及其它途經(jīng)給予，如下討論。在另一個實(shí)施方式中，晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的含水量小于約l%w/w，或者小于約0.5%w/w，或者更小于約0.25%w/w，用庫侖卡爾費(fèi)歇爾(KF)滴定法測定。(見，例如Poynter，W.G.和R丄Barrios,OilandGasJournal,92:15(1994)。選擇在生產(chǎn)加工(例如粉碎以獲得降低粒徑和增大表面積的物料)期間物理穩(wěn)定的固態(tài)形式的5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，可以避免特殊的加工條件，以及常與這種特殊加工條件相關(guān)的成本增加。類似地，選擇在一定范圍的貯藏條件下物理穩(wěn)定的固態(tài)形式的5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，可有助于避免化合物產(chǎn)生多晶型或其它降解變化，而這些變化會導(dǎo)致產(chǎn)品損失或者產(chǎn)品效力退化。因此，選擇具有更好物理穩(wěn)定性的固態(tài)形式的5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，具有優(yōu)勢。在一個實(shí)施方式中，本晶型5(S)-CPT的全相(overallphase)純度超過約90%,或超過約95%，或超過約97%，或超過約98%,或超過約99%。本文描述了新晶型5(S)-CPT。在某些實(shí)施方式中，晶體5(S)-CPT基本不含5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿。當(dāng)本晶體5(S)-CPT被描述為基本不含5(R>CPT時，這是指CPT中5(R)-CPT的量，小于約2。/。w/wCPT總量；或小于約1.5。/。w/w;或小于約r/。w/w;或小于約0.5。/。w/w;或小于約0.r/。w/w。本晶體5(S)-CPT是有益的，因?yàn)槠涫欠俏鼭裥缘?，其是穩(wěn)定的，其以晶體形態(tài)存在，且可以無水形態(tài)存在。由于其物理穩(wěn)定性的增加，與非對映異構(gòu)體混合物5(RS)-CPT相比，本晶體5(S)-CPT更易處理和貯藏。本申請說明書通篇討論了本發(fā)明的其它方面和實(shí)施方式。如本文所用，術(shù)語"DSC"指差示掃描量熱法。如本文所用，術(shù)語"XRPD"指X射線粉末衍射。如本文所用，關(guān)于核磁共振CHNMR)，符號"5"指^NMR化學(xué)位移；縮寫"d"指'HNMR雙峰；縮寫"m"指^NMR多重峰；縮寫"q"指HNMR四重峰；縮寫"s，，指HNMR單峰；縮寫"t，，指&NMR三重峰。如本文所用，關(guān)于喜樹堿，術(shù)語"C-5位，，指如上式I1所示，存在于5(S)-(2-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)第5位上的碳原子，術(shù)語"C-20位"指如上式II所示，存在于5(S)-(2-羥基乙氡基)-20(S)-喜樹堿的化學(xué)結(jié)構(gòu)的第20位上的碳原子。如本文所用，在本說明書全文中，"5(S)-CPT"是指"5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿"，其化學(xué)名稱為"4-(3)-乙基-4-羥基-12-(3)-(2-羥基乙氧基)-1，12-二氫-41"1-2-氧雜-6,123-二氮雜-二苯并[1)，11]芴-3，13-二酮"。如本文所用，在本說明書全文中，"5(R)-CPT，，是指"5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿"，其化學(xué)名稱為"4-(S)-乙基-4-羥基-12-(R)-(2-羥基乙氧基)-l,12-二氫-4H-2-氧雜-6,12a-二氮雜-二苯并[b,h]芴-3,13-二酮"。如本文所用，在本說明書全文中，"5(118)^丁"是指"5(115)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿"或"5-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿"，其化學(xué)名稱為"4-(S)-乙基-4-輕基-l2-(RSH2-羥基乙氧基)-l,12-二氫-4H-2-氧雜-6,12a-二氮雜-二苯并[b,h]藥-3，13-二酮"。如本文所用，術(shù)語"組合物"是指通過混合或結(jié)合多于一種的元素或成分而得到的產(chǎn)品。如本文所用，術(shù)語"單個晶體"，也稱作單晶，是指結(jié)晶固體，其中整個樣品的晶格是連續(xù)且完整的，直到樣品的邊緣，而沒有晶界。如本文所用，關(guān)于5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，術(shù)語"晶型"是指固態(tài)形式，其中5(S)-(2'-羥基乙IU0-20(S)-喜樹堿分子的排列形成可區(qū)別的晶格，其(i)包含可區(qū)別的晶胞，和(ii)在受X射線輻射時產(chǎn)生衍射峰。如本文所用，術(shù)語"相純度"是指相對于其它固態(tài)形式5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的純度，而不一定是指相對于其它組分的高度化學(xué)純度。術(shù)語"約"，用于本文指測定量時，是指測定量的正規(guī)變分(normalvariation),可由實(shí)施測量的技術(shù)人員根據(jù)測量目的和測量設(shè)備精度進(jìn)行預(yù)測。如本文所用，術(shù)語"無水的"，是指物質(zhì)基本不含水，并且物質(zhì)可以包含小于約1.0。/。w/w水，且物質(zhì)可以包含小于約0.5。/。w/w水。如本文所用，術(shù)語"無水的"和"無水物"可替換使用。術(shù)語"非吸濕性"，用于本文指物質(zhì)時，是指在正常室溫、壓力和濕度條件下，不吸收空氣中濕氣的物質(zhì)。如本文所用，術(shù)語"藥學(xué)上可接受的載體"，是指與組合物中其它成分相適合且不會有害于患者的載體。這種載體可以是藥學(xué)上可接受的物質(zhì)、組合物或々某介物，例如液體或固體填充劑、稀釋劑、賦形劑、溶劑或膠嚢成形材料(encapsulatingmaterial),參予運(yùn)載或輸送化學(xué)物質(zhì)。如下面更加詳細(xì)的論述，優(yōu)選的組合物依賴于給藥方法。如本文所用，術(shù)語"治療有效量"，是指可引發(fā)研究者或臨床醫(yī)生正尋求的組織、系統(tǒng)或動物的生物學(xué)或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的藥物或藥用物質(zhì)的量。如本文所用，術(shù)語"治療"(和相應(yīng)的術(shù)語"治療的"和"治療性")，是指對患者緩解、恢復(fù)和預(yù)防性的治療。如本文所用，術(shù)語"預(yù)防"，是指采取措施以維持健康并防止患者疾病擴(kuò)散。如本文所用，下列術(shù)語/符號的意義為"kg"指"千克""mg"指"毫克""Hi"指"微升""嗎"指"微克""KBr"指"溴化鉀""DMSO"指"二甲基亞砜"晶體5(S)-CPT的表征卡爾費(fèi)歇爾滴定法測定水4分使用卡爾費(fèi)歇爾試劑在MettlerDL31KF儀器上測定晶體5(S)-CPT的水份。將稱定量的晶體5(S)-CPT轉(zhuǎn)移至卡爾費(fèi)歇爾儀器的滴定容器中，其內(nèi)裝有約40ml事先中和好的曱醇。攪拌下使樣品溶解，然后在劇烈攪拌下用卡爾費(fèi)歇爾試劑滴定至終點(diǎn)。水份的計(jì)算如下滴定值xKF因子x100%水份(w/w)=----------------------------------樣品重量(g)xi000在40°C±2°C/765%RH±5%RH加速穩(wěn)定性條件下6個月，用卡爾費(fèi)歇爾分析法測定，未觀察到水份變化，且發(fā)現(xiàn)產(chǎn)品是非吸濕性的。產(chǎn)品在6個月加速條件下穩(wěn)定。差示掃描量熱法(DSCD分析用ShimadzuDSC-50量熱計(jì)進(jìn)行晶體5(S)-CPT的DSC分析。將樣品放置在鋁盤上，精密記錄重量，用蓋子把盤子蓋上，使夾鉗松開。使每個樣品平衡，并在氮?dú)庀乱?。C/分鐘的速率加熱。熔融吸熱峰的溫度報告為熔點(diǎn)。來自DSC分析的數(shù)據(jù)取決于幾個因素，包括加熱速率、樣品的純度、晶體大小和樣品量。本晶體5(S)-CPT的特征還在于用DSC測量，如圖1所示，約234。C至238°C，或約234°C至236"C有單熔融吸熱峰。X射線粉末衍射法(XRPD):用X射線粉末衍射法("XRPD")分析5(S)-CPT的晶體結(jié)構(gòu)。使用配有水平角度計(jì)(e/20幾何學(xué))的RigakuD/Maz2200衍射儀，測量X射線粉末衍射光譜。所用X射線管為CuK-a,50KV和34mA下的波長為1.5418A。發(fā)散和散射狹縫設(shè)置在0.5。，接收狹縫設(shè)置在0.15毫米。用閃爍計(jì)數(shù)檢測法檢測衍射的輻射，以37分鐘從3至45。進(jìn)行e至2e連續(xù)掃描。晶體5(S)-CPT的例證性XRPD圖如圖2所示。表1列出了晶體5(S)-CPT相應(yīng)的主要衍射峰(20)值和強(qiáng)度。表l:晶體5(S)-CPT的特征XRPD峰<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>應(yīng)該認(rèn)識到，在晶體5(S)-CPT與其它相的混合物中，不是表1列出的所有峰都會在混合物的粉末衍射圖中明顯可見?？赡艿漠悩?gòu)現(xiàn)象和立體化學(xué)的鑒別用5(S)-CPT樣品進(jìn)行單晶衍射研究，目的在于確定5(S)-CPT的C-5位上的絕對立體化學(xué)。適于X射線衍射研究的晶體從二甲基亞砜中長大。5(S)-CPT在單斜晶空間群P21中結(jié)晶，晶胞參數(shù)為a=6.308(l)A,b=15.924(3)A,c=18.771(4)A，|3=95.519(5)A;V=1876.8(7)A3和Z=4。用CCD面積檢測器(area-detector)石墨單色MoKa輻射(X).7107A)在RigakuAFC-7S單晶衍射儀上收集X射線強(qiáng)度數(shù)據(jù)。用直接方法(SIR92軟件)得出結(jié)構(gòu)，并用最小平方法細(xì)化(refine)。對于3713觀測的反射(3713observedreflections),最終R(Rw)為0.041(0.044)。晶胞中兩個獨(dú)立分子I&II(圖3),在5(S)-CPT的C-5位側(cè)鏈上的構(gòu)象有所不同。根據(jù)C-20位上的已知構(gòu)型是S立體中心，確定C-5位上的絕對立體化學(xué)為S立體中心。單晶X射線衍射的模擬粉末X射線圖與實(shí)驗(yàn)粉末X射線衍射的數(shù)據(jù)相符很好(圖4)。傅立葉變換紅外(TT-IR)光鐠法晶體5(S)-CPT的特征還在于傅立葉變換紅外(FT-IR)光譜，在固態(tài)KBr分散體中記錄。使用Perkin-Elmer1650傅立葉變換紅外分光光度儀進(jìn)行結(jié)構(gòu)確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)誤差，除非另有說明，為士2cm人晶體5(S)-CPT的紅外光鐠顯示，在約3271，2927,1743,1669,1607,1504,1465,1405,1342,1225,1158,1188,1080,1120,1043,992,893,838，796,772,和659cm"處具有吸收帶。紅外光譜基本如圖5所示。核磁共振fNMR)研究在400MHz的VarianMercuryPlusFourierTransform(FT)NMR波譜儀上檢測5(S)-CPT(DMSOd6)的&和13CNMR。和13CNMR化學(xué)位移以5(ppm)標(biāo)度報告，分別相對于內(nèi)標(biāo)TMS(SO.OO)和DMSO-d6(539.50)。5(S)-CPT的！H和13CNMR波譜分別如圖6和圖8所示。發(fā)現(xiàn)54.82和6.55ppm處的信號歸屬于D20交換波譜的可交換質(zhì)子(見圖7)。紫外分光光度法(UV光譜)5(S)-CPT(甲醇中，濃度=0.001。/aw/v)的UV光譜在Shimadzu2100紫外可見分光光度儀上記錄。所得光譜如圖9所示，顯示在X357,293，257和207nm處有四個最大峰。5(SVCPT的晶型在一個實(shí)施方式中，5(S)-CPT以晶體形式獲得分離，其基本不含水(即，基本無水)。術(shù)語"基本不含水"是指存在少于約1.0y。水w/w,且特別少于約0.5。/。水w/w，用卡爾費(fèi)歇爾分析法或TGA法測量。在這種形式中，5(S)-CPT的有利性質(zhì)是，在40。C士2。C/75o/oRH士5o/oRH條件下6個月加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)中，水份用卡爾費(fèi)歇爾分析法測量，未發(fā)現(xiàn)明顯變化，且發(fā)現(xiàn)為非吸濕性的。產(chǎn)品在40。C±2°C/75%RH±5%RH的加速穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)條件下可穩(wěn)定6個月，在30°C±2°C/65%RH±5%RH的長期穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)條件下可穩(wěn)定24個月。本發(fā)明的另一個實(shí)施方式，提供了晶體5(S)-CPT，其差示掃描量熱法溫諸圖、X射線粉末衍射圖、X射線晶體結(jié)構(gòu)、傅立葉變換紅外光譜、質(zhì)子核,茲共振譜、D20交換譜、C-13核》茲共振譜、UV光譜分別如圖l、圖2、圖3、圖5、圖6、圖7、圖8和圖9所示。本發(fā)明的一個方面，提供了晶體5(S)-CPT，其差示掃描量熱法溫譜圖、X射線粉末衍射圖、傅立葉變換紅外光譜分別如圖1、圖2和圖5所示。本發(fā)明的另一個方面，提供了晶體5(S)-CPT，其差示掃描量熱法溫譜圖和X射線粉末衍射圖分別如圖1和圖2所示。本發(fā)明的另一個實(shí)施方式，提供了晶體5(S)-CPT,其X射線粉末衍射圖如圖2所示。本發(fā)明的另一個實(shí)施方式，提供了無水晶型5(S)-CPT,其XRPD圖具有至少一個選自7.2±0.1,9.4±0.1,U.02士0.1,12.00±0.1,14.54士0.1,15.20±0.1,和18.92士0.1。2e的衍射峰。在一個實(shí)施方式中，該晶型的XRPD圖在7.2±0.1。2e處具有衍射峰。在另一個實(shí)施方式中，該晶型的XRPD圖在7.2士0.1。2e處具有衍射峰，此外具有至少一個選自9.4±0.1,11.02±0.1，12.00±0.1,14.54土0.1,15.20±0.1,和18.92±0.1。26的另外的衍射峰。本發(fā)明的另一個實(shí)施方式，提供了晶體5(S)-CPT,其FT-IR光譜具有至少一個選自3271±2，1743±2,1669±2,1607±2，1225±2,1158±2,1043士2和992士2cm"的吸收帶。在一個實(shí)施方式中，該晶型的FT-IR光鐠在1743土2cm"處具有吸收帶。在另一個實(shí)施方式中，該晶型的FT-IR光鐠在1743土2cm"處具有吸收帶，此外還具有至少一個選自3271±2,1669±2,1607±2,1225±2,1158±2,1043±2和992士2cm"的吸收帶。在一個適當(dāng)?shù)膶?shí)施方式中，晶體5(S)-CPT的XRPD圖在7.2±0.1°20處具有衍射峰，且FT-IR光譜在1743±2cnT1處具有吸收帶。在另一個實(shí)施方式中，晶體5(S)-CPT的XRPD圖在7.2±0.1°20處具有衍射峰，且FT-IR光語在3271±2和1743±2cm"處具有吸收帶。在另一個實(shí)施方式中，本晶體5(S)-CPT的XRPD圖在7.2士0.1和9.4±0.1。20處具有衍射峰，且FT-IR光譜在1743±2cm"處具有吸收帶。在另一個實(shí)施方式中，晶體5(S)-CPT的XRPD圖在7.2±0.1和9.4±0.1。26處具有衍射峰，且FT-IR光譜在3271±2和1743±2cm"處具有吸收帶。在另一個實(shí)施方式中，晶體5(S)-CPT的XRPD圖在7.2±0.1,9.4±0.1,11.02±0.1,12.00±0.1,14.54±0.1,15.20±0.1和18.92±0.1°20處具有衍射峰，且FT-IR光譜在3271±2,1743±2,1669±2,1607±2,1225±2,1158±2,1043±2和992±2cm"處具有吸收帶。在另一個實(shí)施方式中，晶體5(S)-CPT的XRPD圖在7.2±0.1，9.4±0.1,11.02±0.1,12.00士0.1,14.54±0.1,15.20±0.1和18.92±0.1020處具有衍射峰，且熔點(diǎn)范圍為約234。C至約238°C。為了對比之目的，依照美國專利No.6，177,439制備的5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，和5(R)-CPT的X射線粉末衍射圖分別如圖12和圖13所示。本發(fā)明的另一個實(shí)施方式，提供了基本不含5(R)-CPT的晶體5(S)-CPT。該物質(zhì)的特征還在于DSC測量的單熔融吸熱峰在約236。C處，如圖1所示。相比而言，依照美國專利No.6,177,439制備的非對映異構(gòu)體混合物5-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的DSC圖(如圖10所示)要復(fù)雜得多，在約39。C處具有吸熱峰，第二個吸熱峰在約173°C處，且第三個吸熱峰在約207。C處，與美國專利No.6,177,439所列該化合物的190。C熔點(diǎn)一致。此外，5(R)-CPT的DSC圖如圖11所示，在約63。C處有吸熱峰，第二個吸熱峰在約186°C，且笫三個吸熱峰在約205°C。這再一次確定了5(S)-CPT和5(R)-CPT的不同固態(tài)結(jié)構(gòu)。此外，晶體5(S)-CPT的較高熔點(diǎn)，表明該晶型比5(R)-CPT更穩(wěn)定。本發(fā)明的另一個實(shí)施方式，提供了晶體5(S)-CPT,其NMR圖如表2所給出數(shù)值所示。表2:5(S)-CPT的^和"CNMR歸屬。<table>tableseeoriginaldocumentpage21</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage22</column></row><table>*指以上結(jié)構(gòu)式編號。#該列給出了多重性(multiplicity)和偶合常數(shù)。S-單峰，t-三重峰，dd-兩組兩重峰，m-多重峰?；静缓?(R)-CPT的晶體5(S)-CPT，可通過下述方法獲得，這構(gòu)成了本發(fā)明的又一個方面。本發(fā)明的又一個方面，提供了無水晶型5(S)-CPT的制備方法。在該方法中，將通過美國專利No.6,17入439或類似方法獲得的5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，懸浮于適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中，例如正丁醇(n-BuOH)、四氫呋喃(THF)、乙酸乙酯(EtOAc)、異丙醇(IPA)、丙酮、曱基異丁基酮(MIBK)、乙基曱基酮(EMK)、乙睛(ACN)、乙酸正丁酯、甲醇(MeOH)、乙醇(EtOH)、正丙醇(n-PrOH)、異丙醇(i-PrOH)、戊醇等，或其混合物，回流約2至6小時。將懸浮液緩慢冷卻至約40至45。C,使沉淀完全。用常規(guī)技術(shù)分離沉淀，例如過濾，并且可以用相同或其它適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑洗滌，真空干燥以得到基本不含5(R)-CPT的固體5(S)-CPT。該產(chǎn)物可通過在相同或其它適當(dāng)?shù)挠袡C(jī)溶劑中反復(fù)回流約2至4次而得以富集。在本發(fā)明的另一個實(shí)施方式中，提供的晶體5(S)-CPT包含少于約1.5%式V所示的喜樹堿二聚體，或少于約1%式V所示的喜樹堿二聚體，或少于約0.8%的喜樹堿二聚體，或少于約0.5%的喜樹堿二聚體，或少于約0.1%的喜樹堿二聚體，全都是基于w/w。晶型5(S)-CPT與非對映異構(gòu)體混合物5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，在許多重要性質(zhì)方面都不同，包括，例如，毒性、體內(nèi)抗腫瘤活性、生物利用度和拓樸異構(gòu)酶I抑制性。此外，目前還發(fā)現(xiàn)，基本不含5(R)-CPT的晶體5(S)-CPT是理想的抗腫瘤藥用化合物。在本發(fā)明中，依照本領(lǐng)域普通技術(shù)人員周知的治療癌癥的標(biāo)準(zhǔn)給藥途經(jīng)，來給予患者晶體5(S)-CPT。提供的晶體5(S)-CPT,可以是純化合物或者藥學(xué)上的活性鹽。例證性的藥學(xué)上可接受的鹽，可由曱酸、乙酸、丙酸、琥珀酸、乙醇酸、葡糖酸、乳酸、蘋果酸、酒石酸、桿檬酸、抗壞血酸、葡萄糖醛酸、馬來酸、富馬酸、丙酮酸、天冬氨酸、谷氨酸、苯甲酸、鄰^J^苯甲酸、曱磺酸、硬脂酸、水楊酸、對-羥基苯曱酸、苯基乙酸、扁桃酸、雙羥萘酸、甲烷磺酸、乙烷磺酸、苯磺酸、泛酸、曱苯磺酸、2-羥基乙烷磺酸、磺胺酸、環(huán)己基氨基磺酸、藻酸、b-羥基丁酸、半乳糖二酸、半乳糖醛酸制得。本發(fā)明化合物的適當(dāng)藥學(xué)上可接受的堿加成鹽，包括金屬離子鹽和有機(jī)離子鹽。更優(yōu)選的金屬離子鹽包括但不限于，適當(dāng)?shù)膲A金屬(Ia族)鹽、堿土金屬(IIa族)鹽和其它生理學(xué)上可接受的金屬離子。這種鹽可由鋁、鈣、鋰、鎂、鉀、鈉和鋅離子制得。優(yōu)選的有機(jī)鹽可以由叔胺和季銨鹽制得，部分包括三甲基胺、二乙基胺、N,N'-二千基乙二胺、氯普魯卡因、膽堿、二乙醇胺、乙二胺、葡曱胺(N曱基葡糖胺)和普魯卡因。所有上述鹽，都可以通過本領(lǐng)域技術(shù)人員采用常規(guī)方法由本發(fā)明相應(yīng)的化合物制得。提供的本晶體5(S)-CPT，可以與藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑(其中所有"載體"和"賦形劑"可用任一術(shù)語來描述)形成藥用組合物。藥學(xué)上可接受的載體和賦形劑包括但不限于，生理鹽水、Ringer's溶液、磷酸鹽溶液或緩沖液、緩沖鹽水及本領(lǐng)域周知的其它栽體。藥用組合物還可以包含穩(wěn)定劑、抗氧化劑、著色劑和稀釋劑。選擇藥學(xué)上可接受的載體和添加劑，使藥用化合物的副作用降至最低，同時化合物的性能不被消除或者不^皮抑制到治療無效的程度。在本發(fā)明的實(shí)施方式中，含5(S)-CPT的藥用組合物，任選基本不含5(R)-CPT。藥用組合物通常包含0.1至50%w/w，或1至20%w/w的活性晶體5(S)-CPT化合物，組合物的其余部分為藥學(xué)上可接受的載體、稀釋劑或溶劑。優(yōu)選地，藥用組合物為單位劑型，包含適量的活性化合物，例如，獲得預(yù)期目的之有效量。本藥用組合物，可經(jīng)腸道和/或非腸道給藥?？诜?胃內(nèi))是優(yōu)選的給藥途經(jīng)。藥學(xué)上可接受的載體，可以在適于本發(fā)明方法的固體劑型中，包括片劑、膠嚢劑、丸劑和顆粒劑，其可用涂層和外殼來制備，例如腸溶包衣及本領(lǐng)域周知的其它技術(shù)。適于口服給藥的液體劑型包括藥學(xué)上可接受的乳劑、溶液、懸浮劑、糖漿劑和酏劑。非腸道給藥包括皮下、肌內(nèi)、皮內(nèi)、乳房內(nèi)、靜脈內(nèi)，及本領(lǐng)域周知的其它給藥方式。腸道給藥包括溶液、片劑、緩釋膠嚢、腸溶包衣膠嚢和糖漿劑。給藥時，藥用組合物的溫度可以為體溫或接近體溫。擬口服使用的組合物，可以依照本領(lǐng)域周知的適于生產(chǎn)藥用組合物的任何方法來制備，這種組合物可以包含一種或多種選自以下的物質(zhì)甜味劑、芳香劑、著色劑和防腐劑，以提供藥學(xué)上優(yōu)良且口感良好的制劑。片劑包含活性成分，混有適合于片劑生產(chǎn)的非毒性藥學(xué)上可接受的賦形劑。這些賦形劑可以是，例如，惰性稀釋劑，例如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖、磷酸釣或磷酸鈉；成粒劑和崩解劑，例如玉米淀粉或褐藻酸；粘合劑，例如淀粉、凝膠或阿拉伯膠，以及潤滑劑，例如，硬脂酸鎂、硬脂酸或滑石粉。片劑可以是無涂層的，或者它們可經(jīng)周知技術(shù)進(jìn)行涂層，以延遲胃腸道內(nèi)的崩解和吸收，從而可在較長時期內(nèi)持續(xù)有效。例如，可以使用延時物質(zhì)，例如單硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯。適于口服使用的制劑，還可以是硬凝膠膠嚢，其中晶體5(S)-CPT與惰性固體稀釋劑(如碳酸4丐、磷酸輛或高呤土)混合，或者軟凝膠膠嚢，其中活性成分直控"使用(presentassuch),或者與水或油介質(zhì)(如花生油、液體石蠟，或橄欖油)混合。生產(chǎn)的水性懸浮劑，可以包含晶體5(S)-CPT,混有適于水性懸浮劑生產(chǎn)的賦形劑。這些賦形劑是助懸劑，例如羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥基丙基甲基-纖維素、藻酸鈉、聚乙烯吡咯烷酮、黃蓍膠和阿拉伯膠；分散劑或潤濕劑，可以是天然存在的磷脂，如卵磷脂，或環(huán)氧烷與脂肪酸的縮合產(chǎn)物，例如聚氧乙烯硬脂酸酯，或者環(huán)氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合物，例如heptadecaethyleneoxycetanol，或者環(huán)氧乙烷與偏酯(來自脂肪酸和己糖醇)的縮合物，例如聚氧乙烯山梨醇單油酸酯，或者環(huán)氧乙烷與偏酯(得自脂肪酸和己糖醇酐)的縮合物，例如聚氧乙烯山梨醇酐單油酸酯。水性懸浮劑還可以包含一種或多種防腐劑，如乙基或正丙基對-幾基苯甲酸酯，一種或多種著色劑，一種或多種芳香劑，或一種或多種甜味劑，例如蔗糖或糖精。油性懸浮液的制備，可以將晶體5(S)-CPT懸浮于co-3脂肪酸、植物油(如，花生油、橄欖油、芝麻油或椰子油)或礦物油(如液體石蠟)中。油性懸浮液可以包含增稠劑，例如蜂蠟、硬石蠟或十六烷醇。適于通過加入水制備水性懸浮液的可分散粉末和顆粒，得到晶體5(S)-CPT與分散劑或潤濕劑、懸浮劑和一種或多種防腐劑的混合物。適當(dāng)?shù)姆稚┗驖櫇駝┖蛻腋┑睦?，上面已論述過。其它賦形劑，例如甜味劑、芳香劑和著色劑，也可以存在。晶體5(S)-CPT和包含晶體5(S)-CPT的組合物，還可以無菌注射水性或olagenous懸浮液的形式經(jīng)非腸道給藥，或皮下，或靜脈內(nèi)，或肌內(nèi)，或膜內(nèi)(intrasteraally)，或者經(jīng)輸注技術(shù)給藥。這些懸浮液的制備，可依照周知技術(shù)使用上述那些適當(dāng)?shù)姆稚?、潤濕劑和懸浮劑，或其它可接受的物質(zhì)。無菌注射制劑，還可以是在非毒性非腸道可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌注射溶液或懸浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。在可接受的媒介和溶劑之中，可以使用水、Ringer's溶液和等滲氯化鈉溶液。此外，無菌、非揮發(fā)性油是常用的溶劑或懸浮介質(zhì)。為達(dá)此目的，可以使用任何溫和的非揮發(fā)性油，包括合成的單或二甘油酯。此外，發(fā)現(xiàn)n-3聚不飽和脂肪酸可用于注射劑的制備。還可以氣霧劑或噴霧器溶液的形式，經(jīng)吸入給藥，或者以栓劑形式經(jīng)直腸給藥，通過將藥物與適當(dāng)?shù)姆谴碳ば再x形劑(常溫下為固體而在直腸溫度下為液體)混合而制成栓劑，因此栓劑在直腸中融化以釋放藥物。這種物質(zhì)是可可油和聚乙二醇。本發(fā)明還包括口腔或"舌下"給藥，其包括含本文所述化合物的錠劑或咀嚼口香糖?？蓪⒒衔锍练e在調(diào)p木基質(zhì)中，常為蔗糖和阿拉伯膠或黃芪膠，還有惰性基質(zhì)(例如凝膠和甘油或蔗糖和阿拉伯膠)中包含化合物的錠劑。本發(fā)明還包括局部給藥系統(tǒng)，包括膏劑、粉末劑、噴霧劑、霜劑、凝膠劑、洗眼劑、溶液或懸浮劑。粉末劑的優(yōu)點(diǎn)是，粘附在濕潤表面之上，從而可以較長時間持續(xù)有效。因此，粉末劑特別適于治療例如耳道內(nèi)的癌癥。同理，霜劑也是有效的藥學(xué)上可接受的栽體。本發(fā)明的組合物可以任選加入其它的物質(zhì)，例如粘性增強(qiáng)劑、防腐劑、表面活性劑和滲透促進(jìn)劑。這種粘性強(qiáng)化劑包括，例如，聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、甲基纖維素、羥基丙基曱基纖維素、羥基乙基纖維素、羧甲基纖維素、羥26基丙基纖維素或本領(lǐng)域技術(shù)人員周知的其它物質(zhì)。這些物質(zhì)的使用量通常為0.01%至2%重量。任選使用防腐劑，以防止使用期間的微生物污染。適當(dāng)?shù)姆栏瘎┌ň奂句@鹽-l(polyquaternium-l)、苯扎氯銨、硫柳汞、氯丁醇、尼伯金甲酯、尼伯金丙酯、苯乙醇、依地酸二鈉、山梨酸，或本領(lǐng)域技術(shù)人員周知的其它物質(zhì)。優(yōu)選使用聚季銨鹽-l作為抗菌防腐劑。通常，這種防腐劑的使用量為0.001%至1.0%重量。本組合物組分的溶解度，可因組合物中的表面活性劑或其它適當(dāng)?shù)闹軇┒靡栽黾印＿@種助溶劑包括聚山梨醇酯20、60和80，聚氧乙烯/聚氧丙烯表面活性劑(如，PluronicF-68、F-84和P-103),環(huán)糊精，或本領(lǐng)域技術(shù)人員周知的其它物質(zhì)。通常，這種助溶劑的使用量為0.01%至2°/。重量。藥學(xué)上可接受的賦形劑和載體包括所有前述及類似物質(zhì)。上面關(guān)于有效配方和給藥方式的考慮，是本領(lǐng)域眾所周知的且描述于標(biāo)準(zhǔn)教科書中。見例如GennaroA.R.，Remington:TheScienceandPracticeofPharmacy(藥學(xué)科學(xué)與實(shí)線)，第20版，(Lippincott,Williams和Wilkins),2000;Hoover,JohnE.,Remington'sPharmaceuticalSciences(雷氏藥物科學(xué))，MackPublishingCo.,EastonPennsylvania,1975;Liberman，等人，Eds.,PharmaceuticalDosageForms(藥物劑型)，MarcelDecker,NewYork,N.Y.，1980;以及Kibbe,等人，Eds.,HandbookofPharmaceuticalExcipients(藥物賦形齊'j手冊)(第三版)，AmericanPharmaceuticalAssociation(美國制藥協(xié)會)，Washington,1999。為了本發(fā)明的目的，優(yōu)選晶體5(S)-CPT的量包含有效量的化合物。因此本發(fā)明包括預(yù)防或治療癌癥、腫瘤，和/或腫瘤相關(guān)疾病或病患(在本文中統(tǒng)稱為"癌癥")的方法，這種治療可給予需要這種預(yù)防或治療的患者，該方法包括給予患者有效量的本文所迷晶體5(S)-CPT。在確定晶體5(S)-CPT的有效量或劑量時，主治診斷醫(yī)生會考慮多種因素，包括但不限于，所用化合物的療效和作用持續(xù)時間、受治疾病的性質(zhì)和嚴(yán)重程度，以及受治患者的性別、年齡、體重、總體健康狀態(tài)和個體反應(yīng)，及其它相關(guān)的情況?？梢岳斫獾氖?，用于治療或預(yù)防癌癥所需晶體5(S)-CPT的量，可在較寬限度內(nèi)變化，且可根據(jù)每個具體病例的個體需要進(jìn)行調(diào)整。對于任何化合物，治療有效劑量最初可在細(xì)胞培養(yǎng)或動物沖莫型中估計(jì)。治療有效劑量是指改善病情或其癥狀的活性化合物的量。細(xì)胞培養(yǎng)或動物才莫型中的療效和毒性，可用標(biāo)準(zhǔn)藥學(xué)方法來確定(例如，ED5G:總體的50%治療有效的劑量；LD5G:總體的50%致死劑量)。然后可以使用來自細(xì)胞培養(yǎng)和動物模型的數(shù)據(jù)，得到患者使用化合物的劑量范圍。通常，對于成人給藥，適當(dāng)?shù)娜沼脛┝咳绫疚乃?，但確定的優(yōu)選限度在有利的情況下可以被超過。日用劑量可以作為單次劑量或者分次劑量給予。本領(lǐng)域技術(shù)人員會理解，劑量的確定還可參考指南Goodman&Goldman'sThePharmacologicalBasisofTherapeutics,第九版(1996)，附錄II，頁碼1707-1711。通常推薦的日用劑量方案，一般為約0.01mg/kg/天至約50mg/kg/天，或約0.05mg/kg/天至約25mg/kg/天，或約0.1mg/kg/天至約10mg/kg/天，或約0.1mg/kg/天至約5mg/kg/天，乃至為約0.2mg/kg/天至約3mg/kg/天。在一個實(shí)施方式中，提供的晶體5(S)-CPT是可供口服給予的硬凝膠膠嚢，每個膠嚢含5(S)-CPT約1mg至約1000mg，或者每個膠嚢含5(S)-CPT約2mg至約500mg，或約5mg至約250mg。當(dāng)給予平均體重約70kg的成人患者5(S)-CPT時，5(S)-CPT的日用劑量可為約0.01mg/kg/天至約50mg/kg/天，或約0.05mg/kg/天至約25mg/kg/天，或約0.1mg/kg/天至約10mg/kg/天，或約0.1mg/kg/天至約5mg/kg/天，乃至為約0.2mg/kg/天至約3mg/kg/天。如本文所用，治療目的的術(shù)語"患者"包括任何患者，且可以是需要治療癌癥的患者。如本文所用，術(shù)語"需要的患者"是指患有或易患癌癥的任何患者。術(shù)語"需要的患者，，還指需要低劑量常規(guī)癌癥治療物質(zhì)的任何患者。此外，術(shù)語"需要的患者"是指需要減少常規(guī)治療物質(zhì)28的副作用的任何患者。此外，術(shù)語"需要的患者"是指需要改善對癌癥治療的任何常規(guī)治療物質(zhì)耐受性的任何患者。所述患者通常是動物，而更通常為哺乳動物。"哺乳動物"，如本文所用的術(shù)語，是指分類為哺乳動物的任何動物，包括人類、家養(yǎng)或農(nóng)場動物、動物園、運(yùn)動或?qū)櫸飫游?，例如狗、馬、貓、牛等。所述患者還可以是有患癌癥風(fēng)險或癌癥復(fù)發(fā)風(fēng)險的人類患者。本發(fā)明的方法和組合物可用于治療或預(yù)防幾種癌癥，包括但不限于，卵巢癌、骨肉瘤、白血病、淋巴瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、腎癌、膀胱癌、乳腺癌、表皮樣癌、肺癌、黑素瘤、前列腺癌、子宮癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和橫紋肌肉瘤。本發(fā)明的化合物和制劑還可用于治療結(jié)腸癌、卵巢癌和骨肉瘤。本發(fā)明的化合物和制劑還可用于治療骨肉瘤、結(jié)腸直腸癌和胰腺癌。以下實(shí)施例描述了本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式。本文權(quán)利要求書范圍之內(nèi)的其它實(shí)施方式，對于考慮本文所公開的發(fā)明說明書或?qū)嵺`的本領(lǐng)域技術(shù)人員來講是顯而易見的。說明書和實(shí)施例只作例證性考慮，實(shí)施例之后的權(quán)利要求書，指明了本發(fā)明的范圍和精神。實(shí)施例中給出的所有百分?jǐn)?shù)都是基于重量，除非另有說明。實(shí)施例1該實(shí)施例闡述5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的制備。將如美國專利No.6,177,439實(shí)施例-26中所述制備的5(RS)-(2'誦羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿(75克)，懸浮于正丁醇(約600ml)中，回流約2至3小時。在1至4小時內(nèi)使反應(yīng)物料溫度降至約40至50°C,過濾所得固體物質(zhì)，用正丁醇(約15至20ml)洗滌并在約50至55°C下真空干燥，得到基本不含5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的固體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿。通過在正丁醇中反復(fù)回流，使產(chǎn)物得到進(jìn)一步富集(通常2至4次，產(chǎn)量25至35克)。最終干燥產(chǎn)物的特征在于X-射線粉末衍射，XRPD圖如圖2所示，在約4.68,7.22,9.4，11.02,12.00，14.14,14.54,15.20，16.22，17.10,17.32,17.94,18.92,19.16,19.70，21.86,22.22，22.74,23.28,23.72,24.22,24.4,25.36,26.42,27.12,27.66,28.58,29.12,29.46,30.62,30.78,31.42,31.94,32.46,32.78,33.30,33.54,33.98,35.18，36.74,37.62，38.28，38.92,39.82,40.38,42.08,42.22和43.98。20處具有峰。實(shí)施例2該實(shí)施例闡述5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的任選制備方法。將如美國專利No.6,177,439實(shí)施例-26中所述制備的5(RS)-(2，-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿樣品(75克)，懸浮于四氫呋喃(THF)(1125ml)中，回流2至3小時。在約1至4小時內(nèi)使反應(yīng)物料溫度降至40至45°C,過濾所得固體，用THF(15至20ml)洗滌并在50至55"C下真空干燥，得到固體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿。通過在THF中反復(fù)回流，使產(chǎn)物得到進(jìn)一步富集(通常2至4次，產(chǎn)量15至20克)。最終干燥產(chǎn)物的特征在于圖2所示的X-射線粉末衍射圖。實(shí)施例3該實(shí)施例說明與5(RS)-CPT非對映異構(gòu)體混合物和5(R)-CPT非對映異構(gòu)體相比，5(S)-CPT具有出乎意料高的拓樸異構(gòu)酶I抑制活性。5(S)-CPT，5(R)-CPT和5(HS)-CPT的制備:—將如美國專利No.6,177,439實(shí)施例-26中所述制備的5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿樣品(75克)，懸浮于正丁醇(約600ml)中，回流約2至3小時。在1至4小時內(nèi)使反應(yīng)物料溫度降至約40至50°C,過濾所得固體物質(zhì)，用正丁醇(約15至20ml)洗滌并在約50至55°C下真空干燥，得到基本不含5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的固體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿。通過在正丁醇中反復(fù)回流，使產(chǎn)物得到進(jìn)一步富集，得到基本不含5(R)-CPT的5(S)-CPT(通?；亓?至4次，產(chǎn)量25至35克)。通過逐滴加入正庚烷，再用10pNutehe過濾器過濾，使5(R)-CPT從母液中分離。得到如美國專利No.6,177,439實(shí)施例26中所述的5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿。拓樸異構(gòu)酶I分析拓樸異構(gòu)酶I在特定部位在DNA中引入瞬時切口(transientnicks)。這些瞬時DNA切口的檢測需要用蛋白質(zhì)變性劑將酶捕獲在帶切口的中間復(fù)合物(nickedintermediatecomplex)中的DNA上。所得的共價DNA/拓樸I復(fù)合物包含帶切口的開環(huán)DNA,其可以用瓊脂糖凝膠電泳(含溴化乙啶)檢測。捕荻帶切口的中間體效率相對較低，然而，抑制劑，例如天然產(chǎn)物喜樹石咸，使中間體穩(wěn)定并使帶切口的DNA產(chǎn)物增加。這就構(gòu)成了機(jī)械藥物篩選的基礎(chǔ)，設(shè)計(jì)用于檢測通過使切開的中間體復(fù)合物穩(wěn)定化來影響拓樸異構(gòu)酶I的物質(zhì)。TopoGENTopoIDrugScreeningKit(拓樸異構(gòu)酶I藥物篩選試劑盒)(Topogen,Inc.,PortOrange,FL)的設(shè)計(jì)，使得研究者能快速識別新的拓樸異構(gòu)酶I抑制劑。該試劑盒可以檢測新的化合物，其或者穩(wěn)定帶切口的中間體，或者抑制拓樸異構(gòu)酶I的催化活性。所用分析試劑盒:Topogen⑧藥物篩選試劑盒廠家TOPOGEN,CatNo:1018每一反應(yīng)混合物包含a<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>方案使上述反應(yīng)混合物在37。C下培養(yǎng)30分鐘。通過加入2^1的10%SDS使反應(yīng)終止，使混合物迅速渦旋(應(yīng)在37。C下加入SDS,因?yàn)槔鋮s試管可以重新封住帶切口的DNA)。每管加入約的10x染料，再加入等體積的氯仿和異戊醇(24:1)混合物，以13000rpm離心10分鐘。加樣于1%瓊脂糖凝膠上，在80伏特下電泳1小時。在UV透射儀上觀察凝膠，并計(jì)算帶的密度估值。戰(zhàn).....，用密度儀測定超螺旋型和松弛型DNA的DNA帶密度。記錄處理后(用單一濃度供試藥物)和無藥物(即，對照)的帶密度。計(jì)算所有通道(包括處理后和對照)的相比于超螺旋型DNA的松弛型DNA百分?jǐn)?shù)。拓樸異構(gòu)酶活性抑制率％的計(jì)算為=(100-(100x(l/對照抑制率％)x處理后抑制率％))表3為這些測試的結(jié)果以及基本互不包含的5(S)-CPT和5(R)-CPT的體外拓樸異構(gòu)酶I活性，與5(RS)-CPT的活性相比。表3:5(S)-CPT、5(R)-CPT和5(RS)-CPT的拓樸異構(gòu)酶I活性化合物ICso(iiM)5(S)-CPT1.065(R)-CPT225(RS)畫CPT12.5結(jié)果顯示，5(S)-CPT抑制拓樸異構(gòu)酶I的活性，是5(R)-CPT的約21倍，是5(RS)-CPT的約12倍。這種活性上的差異，無法根據(jù)非對映異構(gòu)體之間結(jié)構(gòu)上的差異來預(yù)期，眾所周知，特別是考慮到E-環(huán)在酶活性中的重要性。實(shí)施例4該實(shí)施例說明與5(RS)-CPT的活性相比，5(S)-CPT對抗棵鼠中NCI-H460(人小細(xì)胞肺癌)異種移植物的抗腫瘤活性。如實(shí)施例3中所述，提供5(S)-CPT和5(RS)-CPT樣品。5(SVCPT和5fRSVCPT對抗棵鼠中NCI-H460異種移植物的對比為了進(jìn)行NCI-H460異種移植物的研究，將NCI-H460胂瘤塊(tumorpieces)(約60mm3)植入雌性無胸腺棵鼠的背側(cè)脅(dorsallateralflank)空間內(nèi)以引發(fā)胂瘤生長。當(dāng)腫瘤長至約150至1000mn^時，啟動治療之前將動物隨機(jī)分成5組。每克5(RS)-CPT配方包含102.65mg32活性化合物、801.62mg羥基丙基卩-環(huán)糊精、80.62mg無水右旋糖和13.33mg碳酸鈉。每克5(S)-CPT配方包含105.57mg活性化合物、800.99mg羥基丙基(3-環(huán)糊精、80.13mg無水右旋糖和13.34mg碳酸鈉。每克安慰劑配方包含895.2mg羥基丙基l3-環(huán)糊精、89.52mg無水右旋糖和14.9mg碳酸鈉。將每種配方溶于2ml無菌水中，經(jīng)口服途徑(dx5)2方聿給予。用游標(biāo)卡尺一周兩次測量腫瘤直徑。假定腫瘤為橢圓體，用下式計(jì)算腫瘤體積V=(Dxd2)/2,其中V(mmS)是腫瘤體積，D是最長直徑(mm)，d是最短直徑(mm)。用具體觀察日的平均腫瘤體積，減去治療第一天(起始日)的平均腫瘤體積，來計(jì)算各治療組(T)與對照組(C)腫瘤體積的變化(A)。這些值用于下式中計(jì)算生長百分率(。/。T/C)%T/C=(AT/AC)x100,其中AT>0,或%T/C=(AT/ATi)x羅，其中AT<0且Ti是平均胂瘤體積。然后用下式計(jì)算腫瘤生長抑制百分率(。/。TGI):%TGI=100-%TC。所有患約150至800mm3的皮下腫瘤的小鼠，用供試化合物經(jīng)口管伺法(dx5)2方案治療。用游標(biāo)卡尺一周兩次測量腫瘤直徑，假定腫瘤為橢圓體，用式V=(Dxd2)/2計(jì)算腫瘤體積，其中V(mmS)是腫瘤體積，D是最長直徑(mm)，d是最短直徑(mm)。用具體觀察日的平均腫瘤體積，減去治療第一天(起始日)的平均腫瘤體積，來計(jì)算各治療組(T)與對照組(C)肺瘤體積的變化(A體積)。這些值用于下式中計(jì)算生長百分率。/。T/C):%T/C=(AT/AC)xlOO,其中AT>0，或=(AT/ATi)x100,其中AT<0,其中Ti是治療開始時的平均胂瘤體積。用下式計(jì)算腫瘤生長抑制百分率腫瘤生長抑制百分率=100-%TC。如果腫瘤體積減至治療開始時腫瘤體積的50%或更小而不小于63mm3，則定為肺瘤部分衰退。如果腫瘤體積降至測量限以下(<63mm3),則定為完全衰退。用下式計(jì)算與各動物起始日體重相比的體重變化百分比體重變化百分比=[(具體觀察日體重-起始日體重)/起始日體重〗x謂。其它觀察參數(shù)是死亡率。檢測結(jié)果如表4所示，其中兩種供試化合物和對照，各顯示胂瘤生長抑制率和死亡率。表4:5(S)-CPT和5(RS)-CPT對患NCI-H460(人小細(xì)胞肺癌)異種移植物的棵鼠的胂瘤生長抑制和死亡率的影響。<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>該檢測數(shù)據(jù)表明，5(S)-CPT對抗棵鼠NCI-H460(人小細(xì)胞肺癌)異種移植物的體內(nèi)活性，優(yōu)于非對映異構(gòu)體混合物5(RS)-CPT。如表4所示，與給予5(RS)-CPT相比，給予相同劑量的5(S)-CPT，產(chǎn)生出乎意料更好的腫瘤生長抑制作用(2mg/kg時68%對比60%，4mg/kg時76%對比64%),而無死亡率增加。實(shí)施例5該實(shí)施例闡述在Sulphorhodamine(硫代羅丹明)B(SRB)分析中5(S)-CPT對比5(R)-CPT的體外抑制細(xì)胞增殖效果如實(shí)施例3中所述，提供5(S)-CPT和5(R)-CPT樣品。體外細(xì)胞生長分析方案用Sulphorhodamine(硫代羅丹明)B(SRB)分析來評估細(xì)胞增殖，染色后與細(xì)胞結(jié)合的染料量，可測出細(xì)胞生長。參考JNCI，第83巻，第11期，1991年6月5日，其通過參考而并入本文。簡而言之，將細(xì)胞(膀胱癌、乳腺癌、CNS癌、結(jié)腸癌、表皮狀癌、肺癌、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、腎癌和子宮癌代表的34人類癌細(xì)胞系)，以每孔10000個細(xì)胞的濃度接種在96孔細(xì)胞培養(yǎng)板上，并在C02培養(yǎng)箱中37°C下培養(yǎng)。24小時之后，用溶于DMSO的不同濃度的供試化合物來處理細(xì)胞，使培養(yǎng)基中的終濃度為0.05%，并暴露48小時。通過加入冰冷的50。/。三氯乙酸(TCA)，并在4°C下培養(yǎng)1小時使細(xì)胞固定。培養(yǎng)板用蒸餾水洗滌，風(fēng)干，并在室溫下用SRB溶液(0.4。/c)重量/體積，于1%乙酸中)染色I(xiàn)O分鐘。用1%乙酸徹底洗去未結(jié)合的SRB,并使培養(yǎng)板風(fēng)千。用10mMTris緩沖液使結(jié)合的SRB染劑溶解，在分光光度板讀數(shù)器515nm單波長處讀出光密度。在藥物加入時，細(xì)胞生長的單獨(dú)的參考板在0小時(藥物加入時)也如上所述被終止。用下式由光密度計(jì)算生長百分率如果T大于或等于TG,生長百分率-lOOx[(T-T。)/(C-To)],如果T小于To,生長百分率-100x[(T-T。)/To〗,這里T是供試品的光密度，C是對照的光密度，To是0時的光密度。由生長百分率數(shù)據(jù)，得出劑量響應(yīng)曲線，并且由生長曲線內(nèi)插Gl5o值。表5為結(jié)果。表5:5(S)-CPT對比5(R)-CPT的GI5Q值?；衔?(S)-CPT5.05(R)-CPT14.6該檢測結(jié)果表明試驗(yàn)中5(S)-CPT非對映異構(gòu)體對抗細(xì)胞增殖的活性幾乎是5(R)-CPT非對映異構(gòu)體的3倍。實(shí)施例6該實(shí)施例闡述5(S)-CPT在幾種骨肉瘤模型中的效力。如實(shí)施例3所述，提供5(S)-CPT和5(RS)-CPT樣品。試驗(yàn)方案見CancerRes.,10月.15:64(2)7491-9(2004),和Clin.CancerRes.,11月.15:9(15):5442-53(2003)。35所有患約0.2至1厘米直徑的皮下("sc)腫瘤的小鼠，用供試化合物經(jīng)口管銅法[(dx5)2]3方案治療。用游標(biāo)卡尺每七天測量一次腫瘤直徑，假定腫瘤為球體，用式[兀/6)xdS]計(jì)算胂瘤體積，其中d是平均直徑。腫瘤對供試化合物的響應(yīng)，如下規(guī)定對于單個腫瘤，若體積衰退>50%但始終有可測量的腫瘤，則定為PR。若在治療開始后12周內(nèi)的某點(diǎn)，可測量的腫瘤塊消失，則定為CR。若在12周研究時限內(nèi)沒有腫瘤再生長，則定為持續(xù)CR。選擇該時間點(diǎn)，是因?yàn)樗醒芯繛槠谥辽?2周。在12周研究時間結(jié)束之前且獲得響應(yīng)前死亡的小鼠，被認(rèn)為是腫瘤響應(yīng)失敗。結(jié)果(劑量為28mg/kg)如表6所示。表6:5(S)-CPT對比5(RS)-CPT在小鼠腫瘤衰退模型中的效力。異種移植物5(S)-CPT5(RS)曙CPT骨肉瘤-296+5+骨肉瘤-176+4+骨肉瘤-26+5+骨肉瘤-326+3+6+:持續(xù)完全衰退5+:完全衰退4+:部分衰退3+:穩(wěn)定疾病如表6數(shù)據(jù)所示，與給予5(RS)-CPT相比，給予5(S)-CPT產(chǎn)生了出乎意料更好的結(jié)果，用5(S)-CPT的所有四個異種移植物系都獲得了持續(xù)完全衰退(6+)。實(shí)施例5和6提供的數(shù)據(jù)證明，5(S)-CPT在幾種試驗(yàn);溪型中具有出乎意料更好的活性/效力特征。此外，5(S)-CPT的效力明顯高于5(R)-CPT，但出乎意料的是，該效力增加的同時，毒性沒有相應(yīng)增加。實(shí)施例7該實(shí)施例說明5(S)-CPT對比5(R)-CPT的人骨髓毒性。如實(shí)施例3所述，提供5(S)-CPT和5(R)-CPT樣品。人骨髓分析方案36包含甲基纖維素/Iscove'sMDM、胎牛血清、牛血清白蛋白、2-巰基乙醇、L-谷氨酰胺(glutamine)、rhStem細(xì)胞因子、rhGM-CSF和rhlL-3的MethocultGF(CatNo:H4534,Poietics,Biowhittakar,USA)培養(yǎng)基用于分析。將人骨髓單核細(xì)胞(CatNo.2M-125C,Poietics,Biowhittakar,USA)與MethocultGF混合，調(diào)整細(xì)胞密度為3xl05細(xì)胞/ml。將該制備液制成50(^1的小份，向每份中加入2.5|iil的20x藥物溶液或媒介物(vehicle),并充分混合。將100^1克隆源(cbnogenic)培養(yǎng)基注入每個孔中，使板在4"C下膠化15分鐘。板在培養(yǎng)箱中5%032全濕空氣中37°C下培養(yǎng)14天。在倒置顯微鏡下計(jì)數(shù)CFU-GM集落，以50個或更多細(xì)胞的聚集體計(jì)。用下式計(jì)算集落(colony)抑制百分率100-[(藥物處理孔內(nèi)的集落^t/對照孔內(nèi)的集落數(shù))x100]。將兩種非對映異構(gòu)體(分別為5(S)-CPT和5(R)-CPT)對抗腫瘤細(xì)胞系的體外效力，與其在健康細(xì)胞內(nèi)的體外毒性進(jìn)行比較。表7為人細(xì)胞內(nèi)骨髓毒性比較研究的結(jié)果。表7:5(S)-CPT和5(R)-CPT對體外人骨髓細(xì)胞的GI9Q值。化合物Gl9。闊5(S)-CPT0.695(R)畫CPT0.89參考表5中所示數(shù)據(jù)，可以看出，出乎意料的是，5(S)-CPT對抗代表膀胱癌、乳腺癌、CNS癌、結(jié)腸癌、表皮狀癌、肺癌、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、腎癌和子宮癌的34人腫瘤細(xì)胞系的效力，幾乎是5(R)-CPT的3倍，而兩種非對映異構(gòu)體的毒性相當(dāng)。事實(shí)上，如果用人細(xì)胞毒性GIw與抗癌活性GI5o的比值來估計(jì)安全范圍(safetymargin),如表8所示，顯然作為治療癌癥的藥用化合物，5(S)-CPT要出乎意料地優(yōu)于5(R)-CPT和5(RS)-CPT。換句話說，在治療癌癥方面，相比5(R)-CPT以及5(S)-CPT和5(R)-CPT的混合物，5(S)-CPT化合物的效力有所增加。事實(shí)上，最大程度地減少給予患者的5(S)-CPT中5(R)-CPT的存在量具有出乎意料的重要性。表8:5(S)-CPT和5(R)-CPT的人細(xì)胞毒性GIto與抗癌活性GIs。之比。<table>tableseeoriginaldocumentpage38</column></row><table>實(shí)施例8該實(shí)施例說明5(R)-CPT的存在對大鼠和小鼠體內(nèi)5(S)-CPT生物利用度的影響。如實(shí)施例3所述，提供5(S)-CPT和5(RS)-CPT樣品。雄性Wistar大鼠體內(nèi)的生物利用度:......給予雄性Wistar大鼠5(S)-CPT(2.5mg/kg)和5(RS)-CPT(5mg/kg,混合物中含有2.5mg/kg的5(S)-CPT),以評估口服藥代動力學(xué)。將6至8周齡，體重205至218克的雄性Wistar大鼠分組，每組四只大鼠。在過夜禁食情況下進(jìn)行口服藥代動力學(xué)試驗(yàn)，在進(jìn)食情況下進(jìn)行靜脈內(nèi)藥代動力學(xué)試驗(yàn)。供試藥物作為溶液經(jīng)口管飼法給予或經(jīng)側(cè)尾靜脈注射給予。在規(guī)定時間點(diǎn)從眼眶靜脈叢(retro-orbitalplexus)收集約250微升的少量血樣，置于含25微升EDTA的微量離心管中。以12，800rpm離心血液2分鐘分離血漿，并冷凍直至分析。如下檢測樣品中是否存在供試藥物。取100(il血漿(8。C下^藏)，用400pl冷曱醇沉淀，以估算總量(內(nèi)酯+羧酸酯)?；旌?分鐘，并以12,800ipm離心4分鐘后，分出澄清上清液，置于300pl自動進(jìn)樣器小瓶中，取該混合物20nl注入分析柱進(jìn)行HPLC分析。通過在空白大鼠血漿中加入已知濃度的供試藥物來繪制線性圖，由此計(jì)算供試藥物的濃度。用非房室模型分析計(jì)算供試藥物的藥代動力學(xué)。研究結(jié)果如表9所示。表9:雄性Wistar大鼠體內(nèi)5(S)-CPT的口服藥代動力學(xué)參數(shù)<table>tableseeoriginaldocumentpage39</column></row><table>SwissAlbino小鼠體內(nèi)的生物利用度給予SwissAlbino小鼠5(S)-CPT(2.5mg/kg)和5(RS)-CPT(5mg/kg,混合物中含有2.5mg/kg的5(S)-CPT),以評估口服藥代動力學(xué)。研究中使用3至6周齡，體重28至34克的SwissAlbino小鼠。每次研究使用12只小鼠。在過夜禁食情況下進(jìn)行口服藥代動力學(xué)試驗(yàn)，在進(jìn)食情況下進(jìn)行靜脈內(nèi)藥代動力學(xué)試驗(yàn)。供試藥物作為溶液經(jīng)口管祠法給予或經(jīng)側(cè)尾靜脈注射給予。在規(guī)定時間點(diǎn)從眼眶靜脈叢收集約250微升的少量血樣，置于含25微升EDTA的微量離心管中。以12,800rpm離心血液2分鐘分離血漿，并冷凍直至分析。如下檢測樣品中是否存在供試藥物。取100pl血漿(8。C下貯藏)，用400pl冷甲醇沉淀，以估算總量(內(nèi)酯+羧酸酯)。混合2分鐘，并以12,800rpm離心4分鐘后，分出澄清上清液，置于300pl自動進(jìn)樣器小并瓦中，取該混合物20nl注入分析柱進(jìn)行HPLC分析。通過在空白小鼠血漿中加入已知濃度的供試藥物來繪制線性圖，由此計(jì)算供試藥物的濃度。用非房室模型分析計(jì)算供試藥物的藥代動力學(xué)。研究結(jié)果如表10所示。表10:SwissAlbino小鼠體內(nèi)5(S)-CPT的口服藥代動力學(xué)參數(shù)化合物劑量AUC(o-t)MM*h5(S)畫CPT5mg/kg5.185(RS)-CPT5mg/kg(2.5mg/kg5(S)-CPT+2.5mg/kg5(R)-CPT)5.205(RS)畫CPT中5(S)-CPT的貢獻(xiàn)2.5mg/kg1.10參考表9和10，"5(S)-CPT的貢獻(xiàn)"是可歸因于5(RS)-CPT非對映異構(gòu)體混合物中5(S)-CPT的曲線下面積("AUC")。從表9和10可以看出，5(R)-CPT的存在出乎意料地降低了所需5(S)-CPT非對映異構(gòu)體的生物利用度。此外，認(rèn)為在人類患者中可以觀察到所需非對映異構(gòu)體生物利用度的這種意外降低?；谝陨希浅ＯＭ麑?(S)-CPT中的5(R)-CPT量降至最低。實(shí)施例9該實(shí)施例闡述與5(R)-CPT和5(RS)-CPT相比，5(S)-CPT對抗BCRP突變和乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)過度表達(dá)Saos-2細(xì)胞的效力。如實(shí)施例3所述，提供5(S)-CPT、5(R)-CPT和5(RS)-CPT樣品。乳腺癌耐藥蛋白〖BCRF)分析方案對比非對映異構(gòu)體混合物5(RS)-CPT,評估5(S)-CPT&5(R)-CPT對過度表達(dá)功能性BCRP#4和非功能性BCRPmu說lO的Saos-2細(xì)胞的抗癌作用。人骨肉瘤細(xì)胞系，Saos-2,來自ATCC(AmericanTypeCultureCollection,Cat#HTB-85,Manassas,VA),保存在含有10%胎牛血清、1%青霉素/鏈霉素和2毫摩爾/升谷氨酰胺的DMEM中。Saos-2細(xì)胞或者用BCRP糾轉(zhuǎn)染以過度表達(dá)功能性BCRP,或者用BCRP#10轉(zhuǎn)染以過度表達(dá)非功能性BCRP運(yùn)載體(transporter)。以每孔1000個細(xì)胞的密度將細(xì)胞注入96孔板0.1ml培養(yǎng)基中，使結(jié)合過夜。第二天早上，輕微抽吸培養(yǎng)基，并加入供試化合物的連續(xù)稀釋液。細(xì)胞在5%。02培養(yǎng)箱中37。C下培養(yǎng)。與供試藥物接觸6天之后，以無菌方式向每個孔中加入10plAlamar藍(lán)(Alamarblue),再把板放回培養(yǎng)箱40中6小時。在Cytofluor2300(Millipore,Bedford,MA)上使用530nm激發(fā)波長和590nm發(fā)射波長，測量產(chǎn)生的熒光染料量。所得的相對熒光單位用于計(jì)算各個濃度下相對于未處理對照值的生長百分率。由生長百分率值，得到IC5o(與對照細(xì)胞生長相比，抑制50%細(xì)胞生長所需的抑制濃度)值。所得IC5G值如表11所示。表ll:5(S)-CPT、5(R)-CPT和5(RS)-CPT對抗BCRP突變和乳腺癌耐藥蛋白(BCRP)過度表達(dá)Saos-2細(xì)胞的1(350值。<table>tableseeoriginaldocumentpage41</column></row><table>如表11所示，5(S)-CPT在其對BCRP突變和BCRP過度表達(dá)Saos-2細(xì)胞的細(xì)胞毒活性方面，優(yōu)于5(R)-CPT和5(RS)-CPT。這些結(jié)果表明，對BCRPmut#10和BCRP#4的細(xì)胞毒性排序?yàn)?(S)-CPT>5(RS)-CPT>5(R)-CPT。5(S)-CPT對BCRPmut#10和BCRP#4過度表達(dá)Saos-2細(xì)胞的細(xì)胞毒性，分別是5(R)-CPT的約6倍和>2.5倍。盡管在這里參考具體實(shí)施方式描述了本發(fā)明，但應(yīng)明白的是，這些實(shí)施方式僅僅是本發(fā)明原理和應(yīng)用的例證。因此應(yīng)明白，可以對例證實(shí)施方式做各種修改，并且可以設(shè)計(jì)出其它安排(arrangements)，而不脫離下列權(quán)利要求書所規(guī)定的本發(fā)明精神和范圍。說明書中引用的所有出版物，包括專利出版物和非專利出版物，說明了與本發(fā)明相關(guān)的本領(lǐng)域技術(shù)人員的技術(shù)水平。所有這些出版物通過引用而完全并入本文，其相同程度好像每個單獨(dú)出版物都作了專門且個別的"通過引用而并入"的說明。這里對參考文獻(xiàn)的討論，只是想概述其作者的主張，未承認(rèn)任何參考文獻(xiàn)構(gòu)成了現(xiàn)有技術(shù)。申請者保留質(zhì)疑(challenge)所引用參考文獻(xiàn)之準(zhǔn)確度和相關(guān)性的權(quán)利。鑒于以上，可以看出本發(fā)明取得的幾個優(yōu)勢，并獲得了其它有利的結(jié)果。由于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員可以對上述方法和組合物，做出各種改變而不脫離本發(fā)明的范圍，因此期望，在上述說明書中所含的和附圖中所示的所有內(nèi)容，應(yīng)被解釋為例證性而不具有限制性意義。此外，應(yīng)該明白，各種實(shí)施方式的方面可以全部或部分地被j卓換。權(quán)利要求1.晶型5(S)-(2′-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其具有結(jié)構(gòu)2.權(quán)利要求1的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-M堿，其特征在于X射線粉末衍射圖包含一個或多個選自7.2士0.1,9.4±0.1，11.02±0.1,12.00±0.1,14.54±0.1,15.2±0.1,18.92士0.1，21.86±0.1,22.74±0.1和26.42±0.1。20的峰強(qiáng)。3.權(quán)利要求1和2中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其具有單斜晶空間群P2！內(nèi)的晶體，晶胞參數(shù)a=6.308(l)A,b=15.924(3)A,c=18.771(4)A，卩=95.519(5)A;V=1876.8(7)人3和Z=4，所述參數(shù)用CCD面積檢測器石墨單色MoKa輻射(>=0.7107人)通過單晶衍射計(jì)測量。4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙絲)-20(S)-喜樹堿，其特征在于差示掃描量熱法測量的單熔融吸熱峰在約234°C至238。C之間。5.權(quán)利要求1至4中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹》成，其是無水的。6.權(quán)利要求1至5中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其全相純度超過97%。7.權(quán)利要求1至6中任一項(xiàng)的晶體5(SH2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其基本不含5(R)-(2'-羥基乙lLiO-20(S)-喜樹堿。8.權(quán)利要求1至7中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其在7.2士O.1。20處具有X射線粉末衍射峰。9.權(quán)利要求1至8中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其還具有至少一個選自9.4±0.1,11.02±0.1,12.00士0.1，14.54±0.1,15.20±0.1,和18.92±0.1。20的另外的X射線粉末衍生峰。10.權(quán)利要求1至9中任一項(xiàng)的晶體5(3)-(2'-羥基乙|1&)-20(3)-喜樹堿，其FT-IR光譜包含至少一個選自3271±2，1743±2,1669±2,1607±2，1225±2,1158±2,1043±2和992±2cm"的吸收帶。11.權(quán)利要求1至10中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其FT-IR光譜在1743±2cm"處包含吸收帶。12.權(quán)利要求1至11中任一項(xiàng)的晶體5(5)-(2'-羥基乙氧基)-200喜樹堿，其FT-IR光譜還包含至少一個選自3271±2,1669±2,1607±2,1225土2,1158±2，1043±2和992±2cm"的吸收帶。13.權(quán)利要求1至12中任一項(xiàng)的晶體5(3)-(2'-羥基乙氧基)-20(3)-喜樹堿，其X射線衍射圖在7.2士0.1。2e處具有衍射峰，且FT-IR光語在1743±2cm"處具有吸收帶。14.權(quán)利要求1至13中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其X射線衍射圖在7.2士O.1。20處具有衍射峰，且FT-IR光譜在3271±2和1743土2cm"處具有吸收帶。15.權(quán)利要求1至14中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙M0-20(S)-喜樹堿，其X射線粉末衍射圖在7.2士0.1和9.4±0.1。20處具有衍射峰，且FT-IR光譜在1743士2cm"處具有吸收帶。16.權(quán)利要求1至15中任一項(xiàng)的晶體5(5)-(2'-羥基乙氧基)-20(3)-喜樹堿，其X射線粉末衍射圖在7.2±0.1和9.4±0.1。29處具有衍射峰，且FT-IR光語在3271±2和1743±2cm"處具有吸收帶。17.權(quán)利要求1至16中任一項(xiàng)的晶體5(SH2'-羥基乙M0-20(S)-喜樹堿，其X射線粉末衍射圖在7.2±0.1,9.4±0.1，11.02±0.1,12.00±0.1,14.54±0.1,15.20±0.1和18.92土0.1。20處具有衍射峰，且FT-IR光譜在3271士2,1743±2,1669±2,1607±2,1225±2,1158±2,1043±2和992士2cm"處具有吸收帶。18.權(quán)利要求l至17中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其X射線粉末衍射圖在7.2士0.1,9.4士0.1,11.02±0.1,12.00±0.1，14.54±0.1,15.20±0.1和18.92±0.1。29處具有衍射峰,且熔點(diǎn)范圍為約234"C至約238°C。19.權(quán)利要求1至18中任一項(xiàng)的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其包舍作為雜質(zhì)的式V喜樹堿二聚體20.權(quán)利要求19的晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其中喜樹堿二聚體的含量小于約1.5%w/w。21.權(quán)利要求19的晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其中喜樹堿二聚體的舍量小于約0.8%w/w。22.權(quán)利要求19的晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其中喜樹堿二聚體的含量小于約0.5%w/w。23.權(quán)利要求19的晶型5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，其中喜樹堿二聚體的含量小于約0.1%w/w。24.—種藥用組合物，其包含權(quán)利要求1至24中任一項(xiàng)所述的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿和藥學(xué)上可接受的栽體。25.權(quán)利要求24的藥用組合物，其中所述組合物的成人單次劑量包含約5mg至約25mg的5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿。26.用晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿制備藥用組合物的方法，所述方法包括將權(quán)利要求1至24中任一項(xiàng)所述的晶體5(5)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿與藥學(xué)上可接受的載體混合。27.制備權(quán)利要求l中所述晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的方法，所述方法包括以下步驟(a)將5(RS)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿與選自正丁醇或四氳呋喃的溶劑混合；(b)回流混合物約1至約4小時；(c)使混合物冷卻至約4(TC至約50°C;和(d)將固體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹石彭人混合物中分離。28.權(quán)利要求27的方法，其還包括步驟(e)用選自正丁醇或四氫呋喃的溶劑洗滌固體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿；和(d)干燥固體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿，得到基本不含5(R)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹減。29.用晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿治療患者癌癥的方法，所述方法包括給予患者有效量的權(quán)利要求1至24中任一項(xiàng)所述的晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿。30.權(quán)利要求29的方法，其中所述患者是哺乳動物。31.權(quán)利要求30的方法，其中所述患者是人。32.權(quán)利要求30的方法，其中晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿是口服給予患者。33.權(quán)利要求30的方法，其中所述癌癥選自卵巢癌、骨肉瘤、白血病、淋巴瘤、小細(xì)胞肺癌、非小細(xì)胞肺癌、中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)癌、乳腺癌、結(jié)腸直腸癌、腎癌、膀胱癌、乳腺癌、表皮樣癌、肺癌、黑素瘤、前列腺癌、子宮癌、軟組織肉瘤、胰腺癌和橫紋肌肉瘤。34.權(quán)利要求30的方法，其中所述癌癥選自結(jié)腸癌、卵巢癌和骨肉瘤。35.權(quán)利要求30的方法，其中所述癌癥選自骨肉瘤、結(jié)腸直腸癌和胰腺癌。36.權(quán)利要求30的方法，其中所述癌癥選自膀胱癌、乳腺癌、CNS癌、結(jié)腸癌、表皮樣癌、肺癌、卵巢癌、黑素瘤、前列腺癌、腎癌和子宮癌。37.權(quán)利要求30的方法，其中晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿給予患者的量為約0.1至約5mg/kg/天。38.權(quán)利要求30的方法，其中晶體5(S)-(2'-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿給予患者的量為約0.2至約3mg/kg/天。39.5(RH2"-羥基乙M0-20(S)-喜樹堿，其具有結(jié)構(gòu)全文摘要本發(fā)明描述了5(RS)-(2′-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿的晶型5(S)-(2′-羥基乙氧基)-20(S)-喜樹堿非對映異構(gòu)體，其特征在于X射線粉末衍射圖包含一個或多個選自7.2±0.1，9.4±0.1，11.02±0.1，12.00±0.1，14.54±0.1，15.2±0.1，18.92±0.1，21.86±0.1，22.74±0.1和26.42±0.1°2θ的峰強(qiáng)。還描述了所述化合物的制備和使用方法。文檔編號A01N43/42GK101511188SQ200780027684公開日2009年8月19日申請日期2007年5月24日優(yōu)先權(quán)日2006年5月24日發(fā)明者R·西里西拉,R·阿賈亞庫馬,R·馬蘭吉,S·拉賈戈帕爾,S·杜伍里,S·阿利昆于,V·阿克拉申請人:雷迪博士實(shí)驗(yàn)室有限公司;雷迪博士實(shí)驗(yàn)室有限公司