專利名稱：用于生物細(xì)胞的固定溶液的制作方法
用于生物細(xì)胞的固定溶液本發(fā)明涉及用于生物細(xì)胞的固定溶液，其用于在體外保存細(xì)胞學(xué)樣品，該固定溶液的類型為包含醇以用于固定所述細(xì)胞。更特別地，本發(fā)明適用于細(xì)胞學(xué)領(lǐng)域。固定溶液，或固定劑，用于保存或保持包含細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)取樣物或樣品，以便由細(xì)胞學(xué)家以后對(duì)其進(jìn)行分析。這些細(xì)胞樣品可以例如通過在患者中進(jìn)行針穿刺、清洗、刷擦或小便采集來獲得。所述細(xì)胞可以來自任何器官，例如子宮、肝臟、胃、乳房等。細(xì)胞樣品可以例如為液體取樣物，例如尿、腹水、胸膜液或心包液；涂片，例如宮頸涂片、陰道涂片...；器官(例如，淺表腺體例如乳腺、甲狀腺，或者深層腺體例如胰腺或肝臟，等等)的穿刺物?！凹?xì)胞學(xué)固定劑”或“細(xì)胞學(xué)固定溶液”是指通常在細(xì)胞學(xué)分析中使用以實(shí)現(xiàn)細(xì)胞固定的溶液。
固定是這樣的操作，所述操作g在使細(xì)胞的形態(tài)盡可能地保持于在其取樣之前它們所處的狀態(tài)。最好的固定劑是那些固定劑，所述固定劑通過快速作用，產(chǎn)生盡可能少的可能妨礙細(xì)胞內(nèi)部形態(tài)的分析的二次修飾或人為現(xiàn)象。こ酸福爾馬林醇(alcool formol6ac6tique)或AFA是已知的并且很久以來尤其用于農(nóng)業(yè)科學(xué)和獸醫(yī)學(xué)環(huán)境。AFA包含甲醇或こ醇、福爾馬林和冰醋酸。福爾馬林由甲酸、甲醛、低聚甲醛和甲醇組成。ー個(gè)實(shí)例為Locquin的AFA，其組成如下-80。こ醇IOOcc，-38%的實(shí)驗(yàn)室福爾馬林10cc，-冰醋酸5cc，-蔗糖10g，-蒸餾水20cc。然而，冰醋酸破壞紅細(xì)胞并且裂解其內(nèi)容物，其中涉及血紅蛋白沉積，這在標(biāo)準(zhǔn)染色例如帕帕尼古拉烏(Papanicolaou)染色或梅-格-吉(May-Griinwald Giemsa)染色(MGG)之后的分析中是非常有妨礙的，或者對(duì)于免疫細(xì)胞化學(xué)研究來說是非常有妨礙的，等等。此外，在該濃度下，こ醇從規(guī)定角度來看被認(rèn)為是易燃的，并且福爾馬林被認(rèn)為是有毒的和致癌的。本發(fā)明的目標(biāo)是提供用于生物細(xì)胞的固定溶液，其使得能夠良好地保持具核細(xì)胞和紅細(xì)胞的完整性以為了其分析，但對(duì)于使用者來說危險(xiǎn)性更小。為此，本發(fā)明的目標(biāo)在于上述類型的用于生物細(xì)胞的固定溶液，其包含生理鹽水以便避免在細(xì)胞壁處的滲透壓休克，福爾馬林和聚こニ醇以用于保持在所述溶液中進(jìn)行固定的具核細(xì)胞和紅細(xì)胞的大小和完整性。根據(jù)本發(fā)明的其他方面，所述用于生物細(xì)胞的固定溶液包含ー個(gè)或多個(gè)下述特征-所述固定溶液不包含丙酮或酮類化合物，也不包含こ酸，以便保護(hù)紅細(xì)胞的完整性；-所述醇為こ醇或異丙醇；-所述醇為こ醇和異丙醇的混合物；
-醇的量大致小于該固定溶液的45體積％；-福爾馬林的量大致為該固定溶液的大約0.2-1體積％ ；-所述固定溶液包含保證該固定溶液的pH大致為6.4-7. 4的緩沖液；和
-所述固定溶液包含80體積％至95體積％的-590ml的生理鹽水，-IOmi 的 peg (Carbowax )，-203ml 的異丙醇，-193ml 的純こ醇， -0. 01體積％的疊氮化鈉，以及20體積％至5體積％的經(jīng)緩沖的4%福爾馬林。因此，該溶液使得能夠更好地保持細(xì)胞的比例，特別是相對(duì)于細(xì)胞尺寸而言的細(xì)胞核尺寸，并且尤其是極好地保持紅細(xì)胞。此外，該固定溶液是不太易燃的、非毒性的和非致癌的。經(jīng)由閱讀僅作為實(shí)例而給出并通過參考附圖
來進(jìn)行的下面的描述，將會(huì)更好地理解本發(fā)明，在所述附圖中-圖I為取自乳房的細(xì)胞樣品的照片，所述樣品保持在根據(jù)本發(fā)明的固定溶液中，-圖2為取自甲狀腺的細(xì)胞樣品的照片，所述樣品保持在根據(jù)本發(fā)明的固定溶液中。本發(fā)明涉及用于在體外保存細(xì)胞學(xué)樣品的固定溶液，所述細(xì)胞學(xué)樣品包含準(zhǔn)備供由細(xì)胞學(xué)家進(jìn)行分析之用的生物細(xì)胞。所述固定溶液包含等滲的氯化鈉水溶液或生理鹽水，以代替習(xí)慣上作為通常使用的固定溶液的基質(zhì)而使用的蒸餾水或去離子水。生理鹽水很久以來就是已知的，并且包含按照9克氯化鈉/I升水稀釋在蒸餾水中的氯化鈉。生理鹽水是等滲的，這使細(xì)胞維持在合適的滲透性狀態(tài)下，以避免對(duì)于其造成的在細(xì)胞壁處的任何滲透壓休克并因此避免由于細(xì)胞質(zhì)膜和核膜破裂而引起的細(xì)胞破壞。生理鹽水的滲透性等于308毫滲透壓摩爾/升。滲透性是介質(zhì)的濃度。這借助了滲透的概念，滲透是溶劑穿越分隔兩種具有不同濃度的溶液(例如固定溶液和細(xì)胞的細(xì)胞質(zhì)液體)的半透膜而進(jìn)行的擴(kuò)散。此外，所述固定溶液包含醇以用于通過在該含醇介質(zhì)中固定細(xì)胞來使所述細(xì)胞保持在其狀態(tài)。優(yōu)選地，醇的量大致小于該固定溶液的45體積％，以便是不太易燃的。因此，該低的醇含量使得更容易運(yùn)輸和儲(chǔ)存，因?yàn)樵摴潭ㄈ芤旱奈ｋU(xiǎn)性更小?！安惶兹嫉摹碧貏e是指，根據(jù)本發(fā)明的溶液不需要在該溶液的包裝上使用標(biāo)明產(chǎn)品易燃性的安全象形符號(hào)。所述醇為例如こ醇或異丙醇。根據(jù)ー個(gè)變化形式，所述醇為こ醇和異丙醇的混合物。然而，単獨(dú)的醇是脫水性還原劑，因此通過細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)的收縮而改變細(xì)胞的大小。為了克服該缺點(diǎn)，所述固定溶液還包含福爾馬林以用于保持細(xì)胞的大小。以已知的和已經(jīng)由Saccomanno等人發(fā)表的方式,所述固定溶液還可以包含Carbowax 或聚こニ醇。以已知的和已經(jīng)發(fā)表的方式，所述福爾馬林可以與脫鈣劑或抗聚集劑例如こニ胺四こ酸(EDTA)及其鹽相聯(lián)合。以也是已知的和已經(jīng)發(fā)表的方式，可以向包含粘液的取樣物添加粘液溶解試劑例如ニ硫蘇糖醇(DTT)或こ酰半胱氨酸。福爾馬林使得能夠保持紅細(xì)胞和具核細(xì)胞而不裂解它們，這保證了在大小方面的參考，從而允許細(xì)胞學(xué)家作更確切的診斷。特別地，正如可以在根據(jù)本發(fā)明的固定溶液中保持的細(xì)胞取樣物的圖I和2中看到的，在所述圖中標(biāo)注為I的紅細(xì)胞被完好地保持并且是完整的，這使得能夠進(jìn)行這些取樣物的確切分析。優(yōu)選地，福爾馬林的量大致為該固定溶液的大約0. 2-1體積％。在該濃度下，根據(jù)由國家研究和安全研究所(Institut National de Recherche et de Securite, INRS)所編訂的毒理學(xué)記錄卡，福爾馬林或甲醛被認(rèn)為僅是刺激性的，這與1-25%的通常所使用的濃度(在該濃度下，福爾馬林是腐蝕性的和致癌的)不同。因此，根據(jù)本發(fā)明的溶液的包裝也 不需要使用標(biāo)明腐蝕性產(chǎn)品的安全象形符號(hào)。因此，在低于1%的濃度下，可以毫無危險(xiǎn)地操作該溶液，其中關(guān)于操作它的預(yù)防措施水平是不太高的。以已知的方式，所述固定溶液可以包含抗微生物剤。所述固定溶液包含保證該固定溶液的pH大致為6. 4-7. 4的緩沖液。該pH范圍相應(yīng)于保持人體細(xì)胞和血液的最佳條件。下面的實(shí)施例舉例說明了本發(fā)明而不限制其范圍。實(shí)施例I :由下列組分形成的溶液80 體積 ％ 的-590ml的生理鹽水，-IOmi 的 peg (Carbowax )，-203ml 的異丙醇，-193ml 的純こ醇，-0. 01體積％的疊氮化鈉，以及20體積％的經(jīng)緩沖的4%福爾馬林。備選地，所述溶液可以由90體積％的上述混合物和10體積％的經(jīng)緩沖的4%福爾馬林形成，或者由95體積％的上述混合物和5體積％的經(jīng)緩沖的4%福爾馬林形成。進(jìn)ー步地，將會(huì)注意到，根據(jù)本發(fā)明的固定溶液不包含丙酮或酮類化合物，也不包含こ酸。因?yàn)檫@些產(chǎn)品裂解紅細(xì)胞，其通過破裂而釋放結(jié)合在所述細(xì)胞上的血紅蛋白。某些類型的染色，例如帕帕尼古拉烏染色，由于聯(lián)合了數(shù)種核染料的染色試劑的復(fù)雜性和血紅蛋白，因而致使細(xì)胞學(xué)分析(尤其是細(xì)胞核分析)非常困難甚至不可能。同樣地，免疫細(xì)胞化學(xué)研究經(jīng)常受到血紅蛋白沉積妨礙。根據(jù)本發(fā)明，通過帕帕尼古拉烏染色來進(jìn)行的樣品的以后分析，或者在本文所描述的并且不包含丙酮或酮類化合物也不包含こ酸的固定溶液中進(jìn)行固定的取樣物的免疫細(xì)胞化學(xué)研究，得到了改善。因此，上面所描述的固定溶液使得能夠極好地保持具核細(xì)胞和紅細(xì)胞的完整性以為了其分 析。
權(quán)利要求
1.用于在體外保存包含具核細(xì)胞和紅細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)樣品的固定溶液，其包含醇以用于固定所述細(xì)胞，生理鹽水以便避免在細(xì)胞壁處的滲透壓休克，福爾馬林和聚こニ醇以用于保持在所述溶液中進(jìn)彳丁固定的具核細(xì)胞和紅細(xì)胞的大小和完整性；所述固定溶液的特征在干，不包含丙酮或酮類化合物，也不包含こ酸，以便保護(hù)紅細(xì)胞的完整性。
2.根據(jù)權(quán)利要求I的固定溶液，其特征在于，所述醇為こ醇或異丙醇。
3.根據(jù)權(quán)利要求I的固定溶液，其特征在于，所述醇為こ醇和異丙醇的混合物。
4.根據(jù)權(quán)利要求I至3中任ー項(xiàng)的固定溶液，其特征在于，醇的量大致小于該固定溶液的45體積％。
5.根據(jù)權(quán)利要求I至4中任ー項(xiàng)的固定溶液，其特征在于，福爾馬林的量大致為該固定溶液的大約0. 2-1體積％。
6.根據(jù)權(quán)利要求I至5中任ー項(xiàng)的固定溶液，其特征在于，它包含保證該固定溶液的PH大致為6. 4-7.4的緩沖液。
7.根據(jù)權(quán)利要求3至6中任ー項(xiàng)的固定溶液，其特征在于，它包含80體積％至95體積％的 -590ml的生理鹽水， -IOmi 的 peg (CarbowaX )， -203ml的異丙醇， -193ml的純こ醇， -0. 01體積％的疊氮化鈉， 以及20體積％至5體積％的經(jīng)緩沖的4%福爾馬林。
全文摘要
該固定溶液用于在體外保存包含具核細(xì)胞和紅細(xì)胞的細(xì)胞學(xué)樣品，并且包含醇以用于固定所述細(xì)胞。它包含生理鹽水以便避免在細(xì)胞壁處的滲透壓休克，福爾馬林和聚乙二醇以用于保持在所述溶液中進(jìn)行固定的具核細(xì)胞和紅細(xì)胞的大小和完整性。該溶液不包含丙酮或酮類化合物，也不包含乙酸。
文檔編號(hào)A01N1/02GK102791124SQ201180013370
公開日2012年11月21日 申請(qǐng)日期2011年1月20日 優(yōu)先權(quán)日2010年1月27日
發(fā)明者E·佩爾蒂埃 申請(qǐng)人:諾瓦賽特公司