專利名稱：一種利用益生菌和雜粕生產(chǎn)微生物飼料添加劑的方法
一種利用益生菌和雜粕生產(chǎn)微生物飼料添加劑的方法技術(shù)領(lǐng)域
本發(fā)明是關(guān)于一種利用益生菌和雜柏生產(chǎn)微生物飼料添加劑的方法，屬于微生物 飼料添加劑領(lǐng)域。
背景技術(shù)：
隨著畜牧養(yǎng)殖業(yè)的快速發(fā)展，人畜爭(zhēng)糧的矛盾日趨突出，為了解決這一問(wèn)題，世界 各國(guó)科技界和工業(yè)界都在尋找和研究新的飼料資源，其中，益生菌固態(tài)發(fā)酵飼料尤其受到 重視。應(yīng)用益生菌固態(tài)發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)蛋白飼料、單細(xì)胞蛋白和菌體蛋白，不僅可以提供大量 優(yōu)質(zhì)的飼料蛋白源，而且還能開(kāi)發(fā)出具特殊功能的飼料添加劑。采用益生菌固態(tài)發(fā)酵技術(shù) 處理糧食加工副產(chǎn)品如餅柏類和纖維類飼料原料，不但可以提高其消化利用率，同時(shí)還可 以對(duì)原料中所含有的抗?fàn)I養(yǎng)因子、農(nóng)藥殘留及其他有毒有害物質(zhì)起到有效的降解作用。積 極利用糧食加工副產(chǎn)品為原料，進(jìn)行益生菌固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)蛋白飼料，滿足飼料業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)的 需求，緩解飼料供需矛盾，同時(shí)也能解決農(nóng)副產(chǎn)品利用率低下造成的浪費(fèi)。隨著農(nóng)業(yè)生物技 術(shù)的發(fā)展，用生物技術(shù)特別是微生物發(fā)酵手段來(lái)處理糧食加工副產(chǎn)品，使其成為家畜綠色 飼料來(lái)源，不僅能促進(jìn)我國(guó)畜牧業(yè)的發(fā)展，而且也會(huì)改善農(nóng)業(yè)生態(tài)環(huán)境，實(shí)現(xiàn)資源的充分利 用，變廢為寶。同時(shí)，近些年來(lái)由于抗生素飼料添加劑的濫用和動(dòng)物的不規(guī)范飼養(yǎng)管理，飼 料安全問(wèn)題層出不窮。從2005年蘇丹紅事件到2008年三聚氰胺事件再到2011年的瘦肉精 事件，接踵而來(lái)的飼料安全問(wèn)題使我國(guó)畜牧業(yè)、養(yǎng)殖業(yè)以及乳品業(yè)不斷受到重創(chuàng)，同時(shí)也使 食品安全受到了嚴(yán)重的挑戰(zhàn)和威脅。因此，要想從根本上保證食品安全，只有從食物鏈的角 度綜合考慮，才能獲得徹底解決。而運(yùn)用益生菌固態(tài)發(fā)酵技術(shù)生產(chǎn)的飼料產(chǎn)品因其所具備 的營(yíng)養(yǎng)豐富、促進(jìn)快速生長(zhǎng)、綠色環(huán)保等多種優(yōu)點(diǎn)正受到廣大養(yǎng)殖戶的大力的推廣和使用。發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于，適應(yīng)上述形式，提供一種利用益生菌和雜柏生產(chǎn)微生物飼料 添加劑的方法。
為實(shí)現(xiàn)上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)方案
一種利用益生菌和雜柏生產(chǎn)微生物飼料添加劑的方法，其特征在于
( I)將發(fā)酵底物分別加水拌料，然后蒸煮滅菌；
(2)滅菌后的發(fā)酵底物溫度降至28 35°C時(shí)，將混合菌液加入滅菌后的發(fā)酵底物 中拌均勻，在恒溫條件下好氧發(fā)酵；
(3)發(fā)酵底物發(fā)酵完畢后，混合后接入乳酸菌，然后進(jìn)行二次發(fā)酵；
(4)發(fā)酵完畢的物料經(jīng)低溫烘干后進(jìn)行粉碎即得所述微生物飼料添加劑成品；
步驟(I)中，所述的發(fā)酵底物包括胚芽柏、玉米噴漿纖維、菜柏以及米糠柏；
步驟(2)中，所述的混合菌液為產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)、地衣芽孢桿菌 (Bacillus licheniformis)和白地霉(Geotrichum candidum)的菌液混合得到的混合菌 液；5
步驟(3)中所述的乳酸菌為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum),接種量為發(fā)酵底物重量的5 10%。
如上所述的方法，優(yōu)選地，步驟(I)中所述的加水拌料，是對(duì)發(fā)酵底物按料水比1:1 2加水后進(jìn)行拌料，拌料后發(fā)酵底物的水分在45 55%之間；
步驟(I)中所述的蒸煮滅菌，是在115 121°C、0. 07 O.1lMPa條件下蒸煮滅菌 20 30min。
如上所述的方法，優(yōu)選地，所述的產(chǎn)朊假絲酵母菌液是按以下方法制成的
制備一級(jí)種子培養(yǎng)基麥芽汁培養(yǎng)基130.1g和蒸餾水IOOOmL混合均勻，在溫度 115 121 °C 下滅菌 15 30min ；
制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基玉米粉10kg、蔗糖蜜100kg、葡萄糖10kg、麥芽浸粉10kg、大豆蛋白胨5kg、MgSO4 WH2OlkgaH2PO4L 5kg，無(wú)菌純水1000L，pH自然，在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；
一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將菌種斜面按環(huán)/50 IOOmL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，28 30°C下以100 130r/min振蕩培養(yǎng)24 48h ；
二級(jí)種子培養(yǎng)將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌、培養(yǎng)24 48h ；
液體發(fā)酵培養(yǎng)將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng) 24h 48h。
如上所述的方法，優(yōu)選地，所述的地衣芽孢桿菌菌液是按以下方法制成的
制備一級(jí)種子培養(yǎng)基蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、NaC15g,蒸懼水IOOOmL混合均勻， 在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；
制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10kg、麩皮10kg、豆餅粉6kg、酵母浸粉5kg、MgS04 ·7Η200· 5kg，無(wú)菌純水1000L, pH自然，在溫度115 121 °C下滅菌20 30min ；
一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將菌種斜面按環(huán)/50 70mL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，30 32°C下以100 130r/min振蕩培養(yǎng)24 48h ；
二級(jí)種子培養(yǎng)將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，在30 32°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng)24h 48h ；
液體發(fā)酵培養(yǎng)將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，在30 32°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng) 24h 48h。
如上所述的方法，優(yōu)選地，所述的白地霉菌液是按以下方法制成的
制備一級(jí)種子培養(yǎng)基5° Β 麥芽汁1000mL，PH自然，在溫度115 121°C下滅菌 20min 30min ；
制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10kg、大豆蛋白胨5kg、酵母浸粉5kg、 玉米粉10kg，無(wú)菌純水1 000L，PH自然，在溫度115 12rC下滅菌20min 30min ；
一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將菌種斜面按環(huán)/50 IOOmL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，28 30°C、100 130r/min、振蕩培養(yǎng)24h 48h ；
二級(jí)種子培養(yǎng)將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng)24h 48h ；
液體發(fā)酵培養(yǎng)將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng) 24h 48h0
如上所述的方法，優(yōu)選地，所述的植物乳桿菌菌液是按以下方法制成的
制備一級(jí)種子培養(yǎng)基酪蛋白胨10g、牛肉浸粉10g、酵母浸粉10g、葡萄糖5g、乙酸鈉 5g、檸檬酸銨 2g、Tween801g、K2HP042g、MgS04 ·7Η200· 2g,MnSO4 ·Η200. 05g，蒸餾水 IOOOmL 混合均勻，pH6. 8,在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；
制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基全脂奶粉10kg、牛肉浸粉10kg、酵母浸粉 10kg、葡萄糖 5kg、乙酸鈉 5kg、朽1 檬酸銨 2kg、Tween801kg、K2HP042kg、MgSO4 · 7H200. 2kg、 MnSO4 .H2OO. 05kg，蒸餾水IOOOmL混合均勻，PH6. 8，在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；
一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基IOOOmL,將菌種斜面按環(huán) /50 IOOmL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，35 37°C靜置培養(yǎng)24h 48h ；
二級(jí)種子培養(yǎng)將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5% 10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24h 48h ；
液體發(fā)酵培養(yǎng)將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5% 10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24h 48h。
如上所述的方法，優(yōu)選地，步驟(2)中，所述混合菌液中的3種菌液在各種發(fā)酵底物中的接種量和混合比例為
胚芽柏中產(chǎn)朊假絲酵母、地衣芽孢桿菌、白地霉的混合比例為1:1:1，按發(fā)酵底物重量的5 10%接種；
玉米噴漿纖維中地衣芽孢桿菌、白地霉、產(chǎn)朊假絲酵母的混合比例為2:4:4，按發(fā)酵底物重量的5 10%接種；
菜柏中地衣芽孢桿菌、白地霉、產(chǎn)朊假絲酵母的混合比例為4:1:5，按發(fā)酵底物重量的5 10%接種；
米糠柏中地衣芽孢桿菌、白地霉、產(chǎn)朊假絲酵母的混合比例為3:4:3，按發(fā)酵底物重量的5 10%接種；
步驟(2)中所述的好氧發(fā)酵，是將各種發(fā)酵底物接種后分別混合均勻后平鋪在發(fā)酵床上，發(fā)酵物料堆高厚度為25 30cm，控制溫度在28 32°C，相對(duì)濕度在85 90%的條件下發(fā)酵48 72h，發(fā)酵期間每隔24h將物料翻動(dòng)一次。
如上所述的方法，優(yōu)選地，步驟(3)中的各發(fā)酵底物首次發(fā)酵完畢后的混合，是按以下比例
胚芽柏180 200重量份、玉米噴漿纖維180 200重量份、菜柏280 320重量份、米糠柏280 320重量份；
步驟(3)中所述的二次發(fā)酵，是將發(fā)酵底物接種植物乳桿菌后，均勻平鋪在發(fā)酵床上，發(fā)酵物料堆高厚度為25 30cm，控制溫度在35 37°C，相對(duì)濕度在85 90%的條件下發(fā)酵24 48h，發(fā)酵過(guò)程中物料用塑料布全部苫蓋進(jìn)行厭氧發(fā)酵。
如上所述的方法，優(yōu)選地，步驟(4)中所述的低溫烘干的溫度為100 120°C，所述烘干后物料的粉碎的粒度為至少95%通過(guò)80目篩且100%通過(guò)60目篩。
如上所述方法制備得到的微生物飼料添加劑。如上所述方法制備得到的微生物飼料添加劑，其中的粗蛋白質(zhì)含量(DM) ^ 21. 50%，真蛋白含量(DM) ^ 20. 00%，粗纖維含量 (DM) ( 2. 85%，硫代葡萄糖苷總量(DM) ( 10. 50 μ mol/g，粗灰分(DM) ( 2%，地衣芽孢桿菌 (CFU/g)彡8X108，產(chǎn)朊假絲酵母(CFU/g)彡2. 5X 108、白地霉(CFU/g)彡3. OX 107、植物乳桿菌(CFU/g)彡 8. OXlO80
本發(fā)明的有益效果在于
本發(fā)明選用性能優(yōu)良的生產(chǎn)菌種，采用先進(jìn)的益生菌固態(tài)發(fā)酵技術(shù)，以胚芽柏、菜柏、米糠柏、噴漿纖維為原料，經(jīng)蒸煮、滅菌后分別接種由產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)、 地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)、白地霉(Geotrichum candidum)組成的混合菌液進(jìn)行首次固態(tài)發(fā)酵，發(fā)酵完畢后將各種發(fā)酵原料按比例進(jìn)行混合然后接入植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)再進(jìn)行二次固態(tài)發(fā)酵,發(fā)酵完畢進(jìn)行烘干、粉碎，從而能夠獲得優(yōu)質(zhì)的益生菌固態(tài)發(fā)酵飼料產(chǎn)品。
更具體地說(shuō)，本發(fā)明提供的利用益生菌和雜柏生產(chǎn)微生物飼料添加劑的方法具有以下優(yōu)點(diǎn)
I、利用本發(fā)明方法，經(jīng)益生菌固態(tài)發(fā)酵后的雜柏粗蛋白和真蛋白等營(yíng)養(yǎng)成分大幅提高，粗纖維、粗灰分以及某些抗?fàn)I養(yǎng)因子得到了有效的降解，并且本發(fā)明的生產(chǎn)工藝簡(jiǎn)單、生產(chǎn)成本低，易于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。
2、采用本發(fā)明方法，經(jīng)益生菌固態(tài)發(fā)酵后的雜柏消化利用率較未發(fā)酵前有較大的提高，其中富含的有益菌活菌和菌體代謝產(chǎn)物為動(dòng)物胃腸道微生物提供了充足的營(yíng)養(yǎng)，同時(shí)對(duì)調(diào)節(jié)動(dòng)物消化吸收功能起到了重要作用。
3、采用本發(fā)明方法生產(chǎn)的微生物飼料添加劑營(yíng)養(yǎng)均衡、益生菌活菌數(shù)較高，本發(fā)明產(chǎn)品中的粗蛋白質(zhì)含量(DM)彡21. 50%，真蛋白含量(DM)彡20. 00%，粗纖維含量(DM) (2. 85%，硫代葡萄糖苷總量(DM)彡10. 50ymol/g，粗灰分(DM)彡2%，地衣芽孢桿菌(CFU/ g)彡8X108，產(chǎn)朊假絲酵母(CFU/g)彡2. 5X 108、白地霉(CFU/g)彡3. OX 107、植物乳桿菌 (CFU/g)彡 8. OXlO80


圖1為本發(fā)明方法的流程示意圖。
具體實(shí)施方式
以下通過(guò)具體實(shí)施例詳細(xì)說(shuō)明本發(fā)明的技術(shù)及特點(diǎn)，但這些實(shí)施例并非用以限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。
本發(fā)明以下實(shí)施例中所用產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)、白地霉(Geotrichum candidum)和植物乳桿菌 (Lactobacillus plantarum)是分別購(gòu)買(mǎi)于中國(guó)普通微生物菌種保藏管理中心(CGMCC)和中國(guó)農(nóng)業(yè)微生物微生物保藏管理中心(ACCC)的野生菌種。保藏號(hào)分別為CGMCC2. 1180、 ACCCl1090,CGMCC2. 0498、CGMCC1. 555。
實(shí)施例I
參見(jiàn)圖1，按照以下方法制備本實(shí)施例的益生菌固態(tài)發(fā)酵飼料
1.分別準(zhǔn)備胚芽柏1000kg、菜柏1000kg、米糠柏1000kg、噴漿纖維IOOOkg作為發(fā)酵底物，其中，胚芽柏經(jīng)粗粉碎過(guò)40目篩。
2.發(fā)酵底物按料水比1:1進(jìn)行加水拌料，將物料水分調(diào)節(jié)到50%左右，然后在 121°C、0.1lMPa條件下蒸煮滅菌30min。
3.將產(chǎn)朊假絲酵母(Candida utilis)、地衣芽孢桿菌(Bacillus licheniformis)、白地霉(Geotrichum candidum)和植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)分別按以下方法進(jìn)行增菌培養(yǎng)和液態(tài)發(fā)酵
(I)產(chǎn)瓶假絲酵母(Candida utilis)
A.制備一級(jí)種子培養(yǎng)基麥芽汁培養(yǎng)基130.1g,蒸懼水IOOOmL混合均勻,在溫度 ΙΙδ 下滅菌 15min。
B.制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基玉米粉10kg、蔗糖蜜100kg、葡萄糖10kg、 麥芽浸粉10kg、大豆蛋白胨5kg、MgS04 WH2OlkgaH2PO4L 5kg，無(wú)菌純水1000L，pH自然，在溫度115 121°C下滅菌20 30min。
C.培養(yǎng)條件
一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將菌種斜面按環(huán) /IOOmL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，28°C、130r/min、振蕩培養(yǎng)24h。
二級(jí)種子培養(yǎng)10L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝二級(jí)種子培養(yǎng)基5L，將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的質(zhì)量比接種到二級(jí)種子罐中，28°C、通風(fēng)量體積比1:1、機(jī)械攪拌IOOr/ min、培養(yǎng) 24h。
液體發(fā)酵培養(yǎng)50L自動(dòng)發(fā)酵罐裝發(fā)酵培養(yǎng)基25L，將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的質(zhì)量比接種到發(fā)酵罐中，28°C、通風(fēng)量體積比1:1、機(jī)械攪拌100r/min、培養(yǎng)24h。
(2)地衣芽抱桿菌(Bacillus licheniformis)
A.制備一級(jí)種子培養(yǎng)基蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、NaC15g,蒸懼水IOOOmL混合均勻，在溫度115 121°C下滅菌20 30min。
B.制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10kg、麩皮10kg、豆餅粉6kg、酵母浸粉5kg、MgSO4 · 7H200. 5kg，無(wú)菌純水1000L，pH自然，在溫度115 121 °C下滅菌20 30mino
C.培養(yǎng)條件
一級(jí)種子培養(yǎng)IOOOmL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將菌種斜面按環(huán)/50mL 的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，30°C、130r/min、振蕩培養(yǎng)24h。
二級(jí)種子培養(yǎng)10L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝二級(jí)種子培養(yǎng)基5L，將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，30°C、通風(fēng)量體積比1:1、機(jī)械攪拌IOOr/ min、培養(yǎng) 24h。
液體發(fā)酵培養(yǎng)50L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝發(fā)酵培養(yǎng)基25L，將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的質(zhì)量比接種到發(fā)酵罐中，30°C、通風(fēng)量體積比1:1、機(jī)械攪拌100r/min、培養(yǎng)24h。
(3)白地霉(Geotrichum candidum)
A.制備一級(jí)種子培養(yǎng)基5° Β 麥芽汁1000mL，PH自然，在溫度115 121°C下滅菌 20 30min。
B.制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10kg、大豆蛋白胨5kg、酵母浸粉 5kg、玉米粉IOkg,無(wú)菌純水1000L, pH自然,在溫度115 121°C下滅菌20 30min。
C.培養(yǎng)條件
一級(jí)種子培養(yǎng)IOOOmL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將菌種斜面按環(huán)/50mL 的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，30°C、130r/min、振蕩培養(yǎng)24h。
二級(jí)種子培養(yǎng)10L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝二級(jí)種子培養(yǎng)基5L，將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的質(zhì)量比接種到二級(jí)種子罐中，30°C、通風(fēng)量體積比1:1、機(jī)械攪拌IOOr/ min、培養(yǎng) 24h。
液體發(fā)酵培養(yǎng)50L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝發(fā)酵培養(yǎng)基25L，將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的質(zhì)量比接種到發(fā)酵罐中，30°C、通風(fēng)量體積比1:1、機(jī)械攪拌100r/min、培養(yǎng) 24h。
(4)植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)
A.制備一級(jí)種子培養(yǎng)基酪蛋白胨10g、牛肉浸粉10g、酵母浸粉10g、葡萄糖5g、 乙酸鈉 5g、檸檬酸銨 2g、Tween801g、K2HP042g、MgSO4 · 7Η200· 2g、MnSO4 · H2OO. 05g，蒸餾水 IOOOmL混合均勻，pH6. 8，在溫度115 121°C下滅菌20 30min。
B.制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基全脂奶粉10kg、牛肉浸粉10kg、酵母浸粉 10kg、葡萄糖 5kg、乙酸鈉 5kg、朽1 檬酸銨 2kg、Tween801kg、K2HP042kg、MgSO4 · 7H200. 2kg、 MnSO4 .H2OO. 05kg，蒸餾水IOOOmL混合均勻，pH6. 8，在溫度115 121°C下滅菌20 30min。
C.培養(yǎng)條件
一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基IOOOmL,將菌種斜面按環(huán) /50mL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，37°C靜置培養(yǎng)24h。
二級(jí)種子培養(yǎng)10L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝二級(jí)種子培養(yǎng)基5L，將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的質(zhì)量比接種到二級(jí)種子罐中，37°C靜置培養(yǎng)24h。
液體發(fā)酵培養(yǎng)50L自動(dòng)種子發(fā)酵罐裝發(fā)酵培養(yǎng)基25L，將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照10%的質(zhì)量比接種到發(fā)酵罐中，37°C靜置培養(yǎng)24h。
4.在滅菌后的各種發(fā)酵底物溫度降到30°C時(shí)，即開(kāi)始進(jìn)行接種，產(chǎn)朊假絲酵母、 地衣芽孢桿菌和白地霉3種菌液在各種發(fā)酵底物中的接種量和混合比例為
胚芽柏產(chǎn)朊假絲酵母、地衣芽孢桿菌、白地霉混合比例1:1:1，按發(fā)酵底物重量百分比接種量10%。
玉米噴漿纖維地衣芽孢桿菌、白地霉、產(chǎn)朊假絲酵母合比例2:4:4，按發(fā)酵底物重量百分比接種量10%。
菜柏地衣芽孢桿菌、白地霉、產(chǎn)朊假絲酵母混合比例4:1:5，按發(fā)酵底物重量百分比接種量10%。
米糠柏地衣芽孢桿菌、白地霉、產(chǎn)朊假絲酵母比例3:4:3，按發(fā)酵底物重量百分比接種量10%。
5.各種發(fā)酵底物接種后，分別混合均勻平鋪在發(fā)酵床上，發(fā)酵物料堆高厚度為 25cm,控制溫度30°C，相對(duì)濕度85 90%條件下發(fā)酵72h，發(fā)酵期間每隔24h將物料翻動(dòng)一次。
6.各發(fā)酵底物首次發(fā)酵結(jié)束后，按以下比例配比并混合進(jìn)行二次發(fā)酵
胚芽柏200重量份、玉米噴漿纖維200重量份、菜柏300重量份、米糠柏300重量份。
二次發(fā)酵所用菌種為植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum),接種量為發(fā)酵底物重量的8%。
發(fā)酵條件發(fā)酵底物接種植物乳桿菌后均勻平鋪在發(fā)酵床上，發(fā)酵物料堆高厚度為30cm，控制溫37 °C，相對(duì)濕度85 90%條件下發(fā)酵48h，發(fā)酵過(guò)程中物料用塑料布全部苫蓋進(jìn)行厭氧發(fā)酵。
7.發(fā)酵完畢的物料經(jīng)100°C低溫烘干后進(jìn)行細(xì)粉碎即得到微生物飼料添加劑成品，粉碎粒度為至少95%通過(guò)80目篩、100%通過(guò)60目篩。
8.按照以上方法制備得到的微生物飼料添加劑，粗蛋白質(zhì)含量(DM)彡26. 13%, 真蛋白含量(DM)彡24. 38%，粗纖維含量(DM) ( 2. 90%,硫代葡萄糖苷總量(DM) (10. 02ymol/g，粗灰分(DM) (1. 85%，地衣芽孢桿菌(CFU/g)彡1. 5 X 109，產(chǎn)朊假絲酵母 (CFU/g)彡 6. OX 108、白地霉(CFU/g)彡 5. OX 107、植物乳桿菌(CFU/g)彡 5. OXlO80 底物發(fā)酵前和發(fā)酵后營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)變化見(jiàn)表I。
表I底物發(fā)酵前與發(fā)酵后營(yíng)養(yǎng)指標(biāo)比對(duì)表
權(quán)利要求
1.一種利用益生菌和雜柏生產(chǎn)微生物飼料添加劑的方法，其特征在于， (1)將發(fā)酵底物分別加水拌料，然后蒸煮滅菌； (2)滅菌后的發(fā)酵底物溫度降至28 35°C時(shí)，將混合菌液加入滅菌后的發(fā)酵底物中拌均勻，在恒溫條件下好氧發(fā)酵； (3)發(fā)酵底物發(fā)酵完畢后，混合后接入乳酸菌，然后進(jìn)行二次發(fā)酵； (4)發(fā)酵完畢的物料經(jīng)低溫烘干后進(jìn)行粉碎即得所述微生物飼料添加劑成品； 步驟(I)中，所述的發(fā)酵底物包括胚芽柏、玉米噴漿纖維、菜柏以及米糠柏； 步驟(2)中，所述的混合菌液為產(chǎn)朊假絲酵母、地衣芽孢桿菌和白地霉的菌液混合得到的混合菌液； 步驟(3)中所述的乳酸菌為植物乳桿菌，接種量為發(fā)酵底物重量的5 10%。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(I)中所述的加水拌料，是對(duì)發(fā)酵底物按料水比I: I 2加水后進(jìn)行拌料，拌料后發(fā)酵底物的水分在45 55%之間； 步驟(I)中所述的蒸煮滅菌，是在115 121 °C、0. 07 0. IIMPa條件下蒸煮滅菌20 30mino
3.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述的產(chǎn)朊假絲酵母菌液是按以下方法制成的 制備一級(jí)種子培養(yǎng)基麥芽汁培養(yǎng)基130. Ig和蒸餾水IOOOmL混合均勻，在溫度115 121°C 下滅菌 15 30min ； 制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基玉米粉10kg、蔗糖蜜100kg、葡萄糖10kg、麥芽浸粉10kg、大豆蛋白胨5kg、MgSO4 7H201kg、KH2PO4L 5kg，無(wú)菌純水1000L, pH自然，在溫度115 121°C 下滅菌 20 30min ； 一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將菌種斜面按環(huán)/50 IOOmL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，28 30°C下以100 130r/min振蕩培養(yǎng)24 48h ； 二級(jí)種子培養(yǎng)將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌、培養(yǎng)24 48h ； 液體發(fā)酵培養(yǎng)將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng)24h 48h。
4.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述的地衣芽孢桿菌菌液是按以下方法制成的 制備一級(jí)種子培養(yǎng)基蛋白胨10g、牛肉浸膏3g、NaC15g,蒸懼水IOOOmL混合均勻,在溫度115 121°C下滅菌20 30min ； 制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10kg、麩皮10kg、豆餅粉6kg、酵母浸粉5kg、MgSO4 7H200. 5kg，無(wú)菌純水 1000L, pH 自然，在溫度 115 121°C下滅菌 20 30min ； 一級(jí)種子培養(yǎng)1000mL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將菌種斜面按環(huán)/50 70mL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，30 32°C下以100 130r/min振蕩培養(yǎng)24 48h ； 二級(jí)種子培養(yǎng)將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，在30 32°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng) 24h 48h ； 液體發(fā)酵培養(yǎng)將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，在30 32°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng)24h 48h。
5.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述的白地霉菌液是按以下方法制成的制備一級(jí)種子培養(yǎng)基5° B6麥芽汁lOOOmL，pH自然，在溫度115 121 °C下滅菌20min 30min ； 制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基葡萄糖10kg、大豆蛋白胨5kg、酵母浸粉5kg、玉米粉IOkg,無(wú)菌純水1000L, pH自然,在溫度115 121°C下滅菌20min 30min ；一級(jí)種子培養(yǎng)=IOOOmL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基500mL，將菌種斜面按環(huán)/50 IOOmL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，28 30°C、100 130r/min、振蕩培養(yǎng)24h 48h ；二級(jí)種子培養(yǎng)將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比為1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng) 24h 48h ； 液體發(fā)酵培養(yǎng)將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5 10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，在28 30°C、通風(fēng)量體積比1:0. 5 I的條件下、以100 120r/min機(jī)械攪拌，培養(yǎng)24h 48h。
6.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，所述的植物乳桿菌菌液是按以下方法制成的 制備一級(jí)種子培養(yǎng)基酪蛋白胨log、牛肉浸粉10g、酵母浸粉10g、葡萄糖5g、乙酸鈉5g、檸檬酸銨 2g、Tween801g、K2HP042g、MgSO4 7H200. 2g、MnSO4 H2OO. 05g，蒸餾水 IOOOmL混合均勻，pH6. 8,在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；制備二級(jí)種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基全脂奶粉10kg、牛肉浸粉10kg、酵母浸粉10kg、葡萄糖 5kg、乙酸鈉 5kg、梓檬酸銨 2kg、Tween801kg、K2HP042kg、MgSO4 7H200. 2kg、MnSO4 .H2OO. 05kg，蒸餾水IOOOmL混合均勻，PH6. 8，在溫度115 121°C下滅菌20 30min ；一級(jí)種子培養(yǎng)=IOOOmL三角瓶中裝一級(jí)種子培養(yǎng)基IOOOmL,將菌種斜面按環(huán)/50 IOOmL的比例接種入一級(jí)種子培養(yǎng)基中，35 37°C靜置培養(yǎng)24h 48h ； 二級(jí)種子培養(yǎng)將經(jīng)所述一級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5% 10%的重量比接種到二級(jí)種子罐中，35 37°C靜置培養(yǎng)24h 48h ； 液體發(fā)酵培養(yǎng)將經(jīng)所述二級(jí)種子培養(yǎng)的菌液按照5% 10%的重量比接種到發(fā)酵罐中，35 37 °C靜置培養(yǎng)24h 48h。
7.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(2)中，所述混合菌液中的3種菌液在各種發(fā)酵底物中的接種量和混合比例為 胚芽柏中產(chǎn)朊假絲酵母、地衣芽孢桿菌、白地霉的混合比例為1:1:1，按發(fā)酵底物重量的5 10%接種； 玉米噴漿纖維中地衣芽孢桿菌、白地霉、產(chǎn)朊假絲酵母的混合比例為2:4:4，按發(fā)酵底物重量的5 10%接種； 菜柏中地衣芽孢桿菌、白地霉、產(chǎn)朊假絲酵母的混合比例為4:1:5，按發(fā)酵底物重量的5 10%接種； 米糠柏中地衣芽孢桿菌、白地霉、產(chǎn)朊假絲酵母的混合比例為3:4:3，按發(fā)酵底物重量的5 10%接種； 步驟(2)中所述的 好氧發(fā)酵，是將各種發(fā)酵底物接種后分別混合均勻后平鋪在發(fā)酵床上，發(fā)酵物料堆高厚度為25 30cm，控制溫度在28 32°C，相對(duì)濕度在85 90%的條件下發(fā)酵48 72h，發(fā)酵期間每隔24h將物料翻動(dòng)一次。
8.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(3)中的各發(fā)酵底物首次發(fā)酵完畢后的混合，是按以下比例 胚芽柏180 200重量份、玉米噴漿纖維180 200重量份、菜柏280 320重量份、米糠柏280 320重量份； 步驟(3)中所述的二次發(fā)酵，是將發(fā)酵底物接種植物乳桿菌后，均勻平鋪在發(fā)酵床上，發(fā)酵物料堆高厚度為25 30cm，控制溫度在35 37°C，相對(duì)濕度在85 90%的條件下發(fā)酵24 48h，發(fā)酵過(guò)程中物料用塑料布全部苫蓋進(jìn)行厭氧發(fā)酵。
9.根據(jù)權(quán)利要求I所述的方法，其特征在于，步驟(4)中所述的低溫烘干的溫度為100 120°C，所述烘干后物料的粉碎的粒度為至少95%通過(guò)80目篩且100%通過(guò)60目篩。
10.按照權(quán)利要求I 9中任一項(xiàng)所述方法制備得到的微生物飼料添加劑。
全文摘要
一種利用益生菌和雜粕生產(chǎn)微生物飼料添加劑的方法，是將發(fā)酵底物分別加水拌料，然后蒸煮滅菌；待溫度降至28～35℃時(shí)，將混合菌液加入滅菌后的發(fā)酵底物中拌均勻，在恒溫條件下好氧發(fā)酵；發(fā)酵底物發(fā)酵完畢后，混合后接入乳酸菌，然后進(jìn)行二次發(fā)酵；發(fā)酵完畢的物料經(jīng)低溫烘干后進(jìn)行粉碎即得所述微生物飼料添加劑成品。所述的發(fā)酵底物包括胚芽粕、玉米噴漿纖維、菜粕以及米糠粕；所述的混合菌液為產(chǎn)朊假絲酵母、地衣芽孢桿菌和白地霉的菌液混合得到的混合菌液；所述的乳酸菌為植物乳桿菌，接種量為發(fā)酵底物重量的5～10%。
文檔編號(hào)A23K1/16GK102972635SQ20121049471
公開(kāi)日2013年3月20日 申請(qǐng)日期2012年11月28日 優(yōu)先權(quán)日2012年11月28日
發(fā)明者張有聰, 史彬林, 郝永清, 岳彥, 任宏偉 申請(qǐng)人:張有聰