一種利用高溫脅迫鑒定油菜不育株基因型的方法
【專(zhuān)利摘要】本發(fā)明公開(kāi)了一種利用高溫脅迫鑒定油菜不育株基因型的方法，其通過(guò)一定的高溫脅迫處理，根據(jù)處理后兩種不育株不育性穩(wěn)定性的差異來(lái)判別待測(cè)不育株的基因型，綜合了測(cè)交法和分子標(biāo)記法的優(yōu)點(diǎn)，即操作簡(jiǎn)單，實(shí)現(xiàn)當(dāng)代檢測(cè)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件和技術(shù)要求低，結(jié)果可靠。
【專(zhuān)利說(shuō)明】一種利用高溫脅迫鑒定油菜不育株基因型的方法

【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及油菜不育株基因型領(lǐng)域，確切地說(shuō)是一種利用高溫脅迫鑒定油菜不育 株基因型的方法。

【背景技術(shù)】
[0002] 隱性上位互作核不育是油菜雜種優(yōu)勢(shì)利用的一種重要途徑，該利用途徑已于 2003年獲得國(guó)家技術(shù)發(fā)明專(zhuān)利（ZL97125803. 1)，該專(zhuān)利方法成功實(shí)現(xiàn)油菜隱性核不育純 合兩用系、臨時(shí)完全保持系和恢復(fù)系三系配套制種，制種時(shí)首先用純合兩用系中的不育株 與臨時(shí)完全保持系生產(chǎn)全不育系，再用全不育系和恢復(fù)系生產(chǎn)雜交種。因此在隱性上位互 作核不育系統(tǒng)中有兩種基因型不育株，即純合兩用系中不育株基因型是純合的，為純合型 不育株；全不育系基因型是雜合的，為雜合型不育株。
[0003] 理論上純合兩用系中的不育株為純合型不育株，其與完全臨時(shí)保持系測(cè)交可以生 產(chǎn)出不育株率為100%的全不育系。由于油菜是常異花授粉作物，在繁殖過(guò)程中極易混雜， 因此純合兩用系中極易混入雜合型不育株。這兩種基因型不育株在外觀上難以區(qū)分，無(wú)法 在生產(chǎn)全不育系時(shí)將雜合型不育株拔出，造成生產(chǎn)出來(lái)的全不育系不育株率下降，嚴(yán)重影 響制種效率和純度。因此鑒別這兩種不育株類(lèi)型在育種和生產(chǎn)上非常重要，目前鑒定這兩 種基因型不育株的方法有測(cè)交法和分子標(biāo)記法。
[0004] 測(cè)交法通常用臨時(shí)完全保持系與待鑒定不育株測(cè)交，根據(jù)測(cè)交后代的育性分離比 來(lái)判別不育株基因型，如果測(cè)交后代全部為不育株，待鑒定不育株則為純合型不育株；如果 測(cè)交后代可育株與不育株分離比為1:1，待鑒定不育株則為雜合型不育株。這種鑒定方法優(yōu) 點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，缺點(diǎn)是需要測(cè)交，而且需要第二季（年）才能知道不育株的基因型，花費(fèi)時(shí) 間長(zhǎng)。
[0005] 分子標(biāo)記法是要先找到與上位抑制基因位點(diǎn)緊密連鎖的分子標(biāo)記，然后用該分子 標(biāo)記對(duì)不育株進(jìn)行檢測(cè)，根據(jù)特征譜帶的有無(wú)來(lái)判定基因型。該方法優(yōu)點(diǎn)是檢測(cè)速度快，可 以實(shí)現(xiàn)當(dāng)代檢測(cè)。缺點(diǎn)是對(duì)實(shí)驗(yàn)室和操作人員要求比較高，目前只在少數(shù)單位應(yīng)用。


【發(fā)明內(nèi)容】

[0006] 本發(fā)明的目的在于解決隱性上位互作核不育系統(tǒng)中兩種不育株基因型鑒定的技 術(shù)問(wèn)題，
[0007] 上述目的通過(guò)以下方案實(shí)現(xiàn)：
[0008] -種利用高溫脅迫鑒定油菜不育株基因型的方法，其特征在于：
[0009] 包括以下步驟：
[0010] ⑴、大田種植：待測(cè)油菜正常季節(jié)種植；
[0011] (2)、移栽：現(xiàn)蕾期將油菜移入帶有底孔的盆缽，每盆一株，油菜連同盆缽一起栽入 大田；
[0012] (3)、高溫脅迫：抽薹期當(dāng)肉眼清晰可辨油菜可育株和不育株時(shí)，將帶盆缽的不育 株放置人工氣候室或光照培養(yǎng)箱里，控制在34_36°C的光照條件下處理14-16小時(shí)，隨即去 除盆缽，將不育株移栽大田；
[0013] (4)、育性調(diào)查：從不育株第一朵花開(kāi)放開(kāi)始，逐日調(diào)查每棵不育株主花序和上部 四個(gè)一次分枝主序開(kāi)放的單花育性，調(diào)查完后隨即摘除，持續(xù)調(diào)查一個(gè)星期；按7級(jí)育性分 級(jí)統(tǒng)計(jì)法，單花育性根據(jù)其可育雄蕊的數(shù)目分為0-6級(jí)，其中0級(jí)為6個(gè)雄蕊全不育，1-6級(jí) 分別依次具有1-6個(gè)可育雄蕊；
[0014] 育性指數(shù)MFI計(jì)算：合并計(jì)算一星期內(nèi)出現(xiàn)1級(jí)及以上花的那幾天所有被調(diào)查花 朵的平均育性指數(shù)MFI =平均雄蕊數(shù)=(1 X 1級(jí)花數(shù)+2 X 2級(jí)花數(shù)+......+6 X 6級(jí)花數(shù)）/ 調(diào)查花朵數(shù)；若一星期內(nèi)所有被調(diào)查的花均為0級(jí)，則MFI為0。
[0015] (5)、基因型判定：當(dāng)MFI = 0,則待測(cè)不育株為純合型不育株；當(dāng)MFI>1，則待測(cè)不 育株為雜合型不育株。
[0016] 所述的一種利用高溫脅迫鑒定油菜不育株基因型的方法，其特征在于：所述步驟 (3)的光照溫度為35°C，處理時(shí)間為15小時(shí)。
[0017] 本發(fā)明的工作原理為：研究發(fā)現(xiàn)在油菜隱性上位互作核不育系統(tǒng)中兩種類(lèi)型不育 株不育性對(duì)溫度的敏感性存在差異，在較低溫度下，兩種類(lèi)型不育株均表現(xiàn)徹底不育，難以 區(qū)分，而在一定高溫脅迫下，純合型不育株的不育性比雜合型不育株的不育性更加穩(wěn)定，根 據(jù)這一現(xiàn)象（原理），就可以鑒別出這兩種類(lèi)型不育株的基因型。
[0018] 本發(fā)明的有益效果為：通過(guò)一定的高溫脅迫處理，根據(jù)處理后兩種不育株不育性 穩(wěn)定性的差異來(lái)判別待測(cè)不育株的基因型，綜合了測(cè)交法和分子標(biāo)記法的優(yōu)點(diǎn)，即操作簡(jiǎn) 單，實(shí)現(xiàn)當(dāng)代檢測(cè)，對(duì)實(shí)驗(yàn)室條件和技術(shù)要求低，結(jié)果可靠。

【具體實(shí)施方式】
[0019] 一種利用高溫脅迫鑒定油菜不育株基因型的方法，包括以下步驟：
[0020] (1)、大田種植：待測(cè)油菜正常季節(jié)種植；
[0021] (2)、移栽：現(xiàn)蕾期將油菜移入帶有底孔的直徑10cm的塑料盆缽，每盆一株，油菜 連同盆缽一起栽入大田；
[0022] (3)、高溫脅迫：抽薹期當(dāng)肉眼清晰可辨油菜可育株和不育株時(shí)，將帶盆缽的不育 株放置在人工氣候室或光照培養(yǎng)箱，在35°C光照條件下處理15小時(shí)，隨即去除盆缽，將不 育株移栽大田；
[0023] (4)、育性調(diào)查：從不育株第一朵花開(kāi)放開(kāi)始，逐日調(diào)查每棵不育株主花序和上部 四個(gè)一次分枝主序開(kāi)放的單花育性，調(diào)查完后隨即摘除，持續(xù)調(diào)查一個(gè)星期；按7級(jí)育性分 級(jí)統(tǒng)計(jì)法，單花育性根據(jù)其可育雄蕊的數(shù)目分為0-6級(jí)，其中0級(jí)為6個(gè)雄蕊全不育，1-6級(jí) 分別依次具有1-6個(gè)可育雄蕊；
[0024] 育性指數(shù)MFI計(jì)算：合并計(jì)算一星期內(nèi)出現(xiàn)1級(jí)及以上花的那幾天所有被調(diào)查花 朵的平均育性指數(shù)MFI =平均雄蕊數(shù)=(1 X 1級(jí)花數(shù)+2 X 2級(jí)花數(shù)+......+6 X 6級(jí)花數(shù)）/ 調(diào)查花朵數(shù)；若一星期內(nèi)所有被調(diào)查的花均為0級(jí)，則MFI為0。
[0025] (5)、基因型判定：當(dāng)MFI = 0,則待測(cè)不育株為純合型不育株；當(dāng)MFI>1，則待測(cè)不 育株為雜合型不育株。
[0026] 將需要鑒定的油菜在大田中正常季節(jié)種植。在油菜現(xiàn)蕾期將其移入帶有底孔的直 徑10cm的塑料盆缽中，每盆一株，再將油菜連同盆缽一起栽入大田里。在油菜抽薹期通過(guò) 觀察將雄蕊敗育的不育株挑出40株，將前20株放置在35°C條件下處理15小時(shí)（人工氣候 室，光照培養(yǎng)箱），后20株作為對(duì)照組在常溫下處理15小時(shí)，之后去除盆缽，移栽進(jìn)大田。 從不育株的第一朵花開(kāi)放開(kāi)始，逐日調(diào)查每棵不育株主花序和上部四個(gè)一次分枝主序開(kāi)放 的單花育性，調(diào)查完后隨即摘除，持續(xù)調(diào)查一個(gè)星期。測(cè)得一星期內(nèi)出現(xiàn)1級(jí)及以上花的那 幾天所有被調(diào)查花朵的平均育性指數(shù)（MFI);若一星期內(nèi)所有被調(diào)查的花均為0級(jí)，則MFI 為0。結(jié)果見(jiàn)表1。
[0027]
【權(quán)利要求】
1. 一種利用高溫脅迫鑒定油菜不育株基因型的方法，其特征在于： 包括以下步驟： (1) 、大田種植：待測(cè)油菜正常季節(jié)種植； (2) 、移栽：現(xiàn)蕾期將油菜移入帶有底孔的盆缽，每盆一株，油菜連同盆缽一起栽入大 田； (3) 、高溫脅迫：抽薹期當(dāng)肉眼清晰可辨油菜可育株和不育株時(shí)，將帶盆缽的不育株放 置人工氣候室或光照培養(yǎng)箱里，控制在34-36°C的光照條件下處理14-16小時(shí)，隨即去除盆 缽，將不育株移栽大田； (4) 、育性調(diào)查：從不育株第一朵花開(kāi)放開(kāi)始，逐日調(diào)查每棵不育株主花序和上部四個(gè) 一次分枝主序開(kāi)放的單花育性，調(diào)查完后隨即摘除，持續(xù)調(diào)查一個(gè)星期；按7級(jí)育性分級(jí)統(tǒng) 計(jì)法，單花育性根據(jù)其可育雄蕊的數(shù)目分為0-6級(jí)，其中0級(jí)為6個(gè)雄蕊全不育，1-6級(jí)分別 依次具有1-6個(gè)可育雄蕊； 育性指數(shù)MFI計(jì)算：合并計(jì)算一星期內(nèi)出現(xiàn)1級(jí)及以上花的那幾天所有被調(diào)查花朵的 平均育性指數(shù)MFI =平均雄蕊數(shù)=(1 X 1級(jí)花數(shù)+2 X 2級(jí)花數(shù)+……+6 X 6級(jí)花數(shù)）/調(diào)查 花朵數(shù)；若一星期內(nèi)所有被調(diào)查的花均為〇級(jí)，則MFI為0 ; (5) 、基因型判定：當(dāng)MFI = 0,則待測(cè)不育株為純合型不育株；當(dāng)MFI>1，則待測(cè)不育株 為雜合型不育株。
2. 根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種利用高溫脅迫鑒定油菜不育株基因型的方法，其特征在 于：所述步驟（3)的光照溫度為35°C，處理時(shí)間為15小時(shí)。
【文檔編號(hào)】A01G7/00GK104082054SQ201410231271
【公開(kāi)日】2014年10月8日 申請(qǐng)日期:2014年5月28日 優(yōu)先權(quán)日:2014年5月28日
【發(fā)明者】吳新杰, 陳鳳祥, 胡寶成, 李強(qiáng)生, 江瑩芬, 榮松柏, 梅新全, 費(fèi)維新, 侯樹(shù)敏, 范志雄, 雷偉俠, 吳浩博, 郝仲萍, 阮懷明 申請(qǐng)人:安徽省農(nóng)業(yè)科學(xué)院作物研究所