本發(fā)明屬于植物的組織培養(yǎng)領(lǐng)域，具體涉及一種快速繁殖蘋果砧木SH6的方法。
背景技術(shù)：
：蘋果矮砧栽培方式長(zhǎng)期以來(lái)受到國(guó)際上高度重視，歐美等大多數(shù)國(guó)家90％以上蘋果栽培采用矮砧栽培方式，矮砧栽培也是今后我國(guó)蘋果生產(chǎn)的發(fā)展方向。SH6是我國(guó)培育出的蘋果矮化砧木，具有抗逆性強(qiáng)、結(jié)果早、產(chǎn)量高和品質(zhì)優(yōu)等特點(diǎn)，由于它自生根難等問(wèn)題，在包括北京在內(nèi)的我國(guó)主要蘋果產(chǎn)區(qū)仍以矮化中間砧方式種植。采用植物組織培養(yǎng)技術(shù)可以在短時(shí)間內(nèi)獲得大量的組培苗，目前在花卉等物種已獲得較多的實(shí)際應(yīng)用成功案例，由于其具有不受時(shí)間和外界環(huán)境條件控制、節(jié)約土地、快捷高效的優(yōu)點(diǎn)，已成為廣泛應(yīng)用的一種育苗手段，有助于實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)。但現(xiàn)有技術(shù)中，蘋果矮化砧木品種SH6組培苗繼代培養(yǎng)增殖系數(shù)低，不定根發(fā)生困難，大田移栽成活率較低，限制了其在組培工廠化育苗中的應(yīng)用。技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：針對(duì)蘋果矮化砧木品種SH6組培中存在的增殖系數(shù)低、不定根發(fā)生困難、大田移栽成活率低的現(xiàn)狀，本發(fā)明提供一種快速繁殖蘋果砧木SH6的方法，包括如下步驟：1)初代和繼代培養(yǎng)：將蘋果砧木SH6經(jīng)滅菌消毒的含單個(gè)的葉芽莖段以初代培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基先后進(jìn)行初代培養(yǎng)和擴(kuò)繁繼代培養(yǎng)；2)生根培養(yǎng)：切取步驟1)培養(yǎng)后的含單芽的莖段，接種到生根培養(yǎng)基上進(jìn)行生根培養(yǎng)；3)煉苗和大田移栽：生根培養(yǎng)的組培苗根長(zhǎng)達(dá)到2～3厘米時(shí)，進(jìn)行煉苗和大田移栽；所述初代培養(yǎng)基是以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有6-芐氨基嘌呤的濃度為0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1～0.6mg/L、聚乙烯吡咯烷酮濃度為200～400mg/L、蔗糖的濃度為25～30g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養(yǎng)基；所述繼代培養(yǎng)基是以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有6-芐氨基嘌呤的濃度為0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1～0.6mg/L、蔗糖的濃度為25～30g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養(yǎng)基；所述生根培養(yǎng)基是以1/2MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有吲哚丁酸的濃度為0.1～1.2mg/L、蔗糖的濃度為15～25g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養(yǎng)基。其中，所述初代培養(yǎng)基，聚乙烯吡咯烷酮濃度優(yōu)選為400mg/L。其中，所述生根培養(yǎng)基，吲哚丁酸的濃度優(yōu)選為0.5～1.0mg/L，更優(yōu)選為0.7～0.9mg/L，進(jìn)一步優(yōu)選為0.7～0.8mg/L，最優(yōu)選為0.8mg/L。其中，步驟1)所述滅菌消毒，具體方法為：以水沖洗30分鐘，體積百分濃度70％的酒精消毒10～60秒，無(wú)菌水沖洗2～4次，質(zhì)量百分濃度0.1％的升汞消毒3～10分鐘，無(wú)菌水沖洗2～4次。其中，所述初代培養(yǎng)和擴(kuò)繁繼代培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為，溫度20-28℃，濕度55-75％，光照14～18小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800-2200Lx。其中，所述生根培養(yǎng)，分為兩個(gè)階段：暗培養(yǎng)階段：6～12天，溫度18-26℃，濕度55-75％；光培養(yǎng)階段：6～10天，溫度18-26℃，濕度55-75％，光照16～20小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800-2200Lx。其中，所述煉苗，為在溫室大棚內(nèi)閉瓶煉苗3天，開瓶煉苗3天。其中，所述大田移栽，為洗去生根組培苗的培養(yǎng)基，采用質(zhì)量百 分濃度0.2％的多菌靈進(jìn)行根部消毒，移栽入泥炭：珍珠巖：蛭石體積比為1：1：1的基質(zhì)中，待根系發(fā)育完全后移栽到大田。本發(fā)明還提供所述的快速繁殖蘋果砧木SH6的方法，在蘋果繁育中的應(yīng)用。本發(fā)明的有益效果在于：本發(fā)明可以實(shí)現(xiàn)蘋果矮化砧木SH6的組培快速繁殖，繼代培養(yǎng)周期25天時(shí)，增值系數(shù)達(dá)到8～10倍，生根時(shí)間不長(zhǎng)于15天，生根率達(dá)到90％以上，煉苗馴化后大田移栽成活率大于85％，為蘋果矮化砧木品種SH6組培工廠化繁育提供簡(jiǎn)單快捷高效的技術(shù)方法。附圖說(shuō)明圖1是實(shí)施例1中蘋果矮化砧木SH6繼代培養(yǎng)照片；圖2是實(shí)施例1中蘋果矮化砧木SH6生根培養(yǎng)瓶底照片；圖3是實(shí)施例1中蘋果矮化砧木SH6生根苗照片；圖4是實(shí)施例1中蘋果矮化砧木SH6組培生根苗穴盤生長(zhǎng)照片。具體實(shí)施方式以下實(shí)施例用于說(shuō)明本發(fā)明，但不用來(lái)限制本發(fā)明的范圍。在不背離本發(fā)明精神和實(shí)質(zhì)的情況下，對(duì)本發(fā)明方法、步驟或條件所作的修改或替換，均屬于本發(fā)明的范圍。若未特別指明，實(shí)施例中所用的技術(shù)手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。實(shí)施例1在北京市順義區(qū)楊鎮(zhèn)蘋果組織培養(yǎng)實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)了本發(fā)明的方法，建立蘋果矮化砧木無(wú)菌系，進(jìn)行繼代培養(yǎng)和生根培養(yǎng)，生根組培苗經(jīng)馴化后進(jìn)行了大田移栽，具體如下：1)蘋果矮化砧木SH6無(wú)菌系的建立選擇蘋果矮化砧木SH6的單株?duì)I養(yǎng)枝，剪取帶頂芽或側(cè)芽的莖段，外植體消毒用自來(lái)水沖洗30分鐘，70％酒精消毒10～60s，無(wú)菌 水沖洗2～4次，0.1％升汞消毒3～10分鐘，無(wú)菌水沖洗2～4次。進(jìn)行初代培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為：溫度20-28℃，濕度55-75％，光照14～18小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800-2200Lx。篩選聚乙烯吡咯烷酮濃度(PVP-40)濃度，在MS+6-BA0.4mg/L+IBA0.3mg/L+蔗糖25g/L+瓊脂糖5g/L的培養(yǎng)基上設(shè)置PVP-40的濃度為0mg/L、200mg/L、400mg/L、600mg/L、800mg/L、1000mg/L，結(jié)果如表1所示：表1PVP-40濃度對(duì)褐化率的抑制作用PVP-40濃度(mg/L)污染率(％)褐化率(％)成活率(％)032.65±1.3691.03±1.9426.87±1.5620035.32±2.6536.37±2.8433.18±2.4140034.41±2.0721.68±1.8341.36±2.0460036.85±1.6741.83±2.3730.25±1.9880037.16±1.8363.85±3.0429.41±2.31100033.82±2.1789.73±2.5727.21±2.09由表1可以看到褐化率在PVP-40200～400mg/L時(shí)能得到很好的抑制，尤其是PVP-40400mg/L時(shí)，褐化率僅為(21.68±1.83)％最終根據(jù)篩選結(jié)果，初代培養(yǎng)采用的培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1～0.8mg/L+IBA0.1～0.6mg/L+PVP-40200～400mg/L+蔗糖25～30g/L+瓊脂糖5～7g/L的培養(yǎng)基(即以MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有6-芐氨基嘌呤的濃度為0.1～0.8mg/L、吲哚丁酸的濃度為0.1～0.6mg/L、聚乙烯吡咯烷酮濃度為200～400mg/L、蔗糖的濃度為25～30g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養(yǎng)基)2)蘋果矮化砧木SH6的擴(kuò)繁繼代培養(yǎng)初代培養(yǎng)后30天進(jìn)行繼代培養(yǎng)，蘋果矮化砧木SH6的初代培養(yǎng)試驗(yàn)材料，采用培養(yǎng)基為MS+6-BA0.1～0.8mg/L+IBA0.1～0.6mg/L+蔗糖25～30g/L+瓊脂糖5～7g/L的培養(yǎng)基進(jìn)行繼代培養(yǎng)(見(jiàn)圖1)，培養(yǎng)條件為：溫度20-28℃，濕度55-75％，光照14～18小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800-2200Lx，進(jìn)行快速增殖；繼代培養(yǎng)30～35天后就可以進(jìn)行 生根培養(yǎng)；3)蘋果矮化砧木SH6的生根培養(yǎng)篩選吲哚丁酸(IBA)濃度，在1/2MS固體培養(yǎng)基上分別添加0mg/L、0.1mg/L、0.2mg/L……1.2mg/L的吲哚丁酸，其對(duì)生根率的影響如表2所示。表2IBA濃度對(duì)生根培養(yǎng)的影響結(jié)果表明，在培養(yǎng)基上添加0.1～1.2mg/L的吲哚丁酸相比不添加能提高生根率，尤其是吲哚丁酸的濃度為0.5～1.0mg/L時(shí)生根率能達(dá)到55％以上，吲哚丁酸的濃度為0.7～0.9mg/L時(shí)生根率達(dá)到80％以上，吲哚丁酸的濃度為0.7～0.8mg/L時(shí)生根率高達(dá)85％以上，當(dāng)吲哚丁酸的濃度為0.8mg/L時(shí)生根率最高。因此，蘋果矮化砧木SH6的生根培養(yǎng)的具體步驟為將蘋果矮化砧木SH6的繼代培養(yǎng)材料切分為單芽，采用培養(yǎng)基為1/2MS+IBA0.1～1.2mg/L+蔗糖15～25g/L+瓊脂糖5～7g/L的培養(yǎng)基(即以1/2MS固體培養(yǎng)基為基本培養(yǎng)基，含有吲哚丁酸的濃度為0.1～1.2mg/L、蔗糖的濃度為15～25g/L、瓊脂糖的濃度為5～7g/L的培養(yǎng)基)進(jìn)行生根 培養(yǎng)(見(jiàn)圖2、圖3)，分為兩個(gè)階段，暗培養(yǎng)階段：6～12天，溫度18-26℃，濕度55-75％，光培養(yǎng)階段：6～10天，溫度18-26℃，濕度55-75％，光照16～20小時(shí)/天，光照強(qiáng)度1800-2200Lx。4)蘋果矮化砧木SH6生根苗的煉苗和大田移栽生根培養(yǎng)的蘋果矮化砧木SH6組培苗根長(zhǎng)達(dá)到2～3厘米時(shí)，移至溫室大棚閉瓶煉苗3天，開瓶煉苗3天，然后取出瓶?jī)?nèi)生根組培苗，洗去培養(yǎng)基，采用0.2％多菌靈進(jìn)行根部消毒處理，移栽入穴盤中(見(jiàn)圖4)，穴盤填充基質(zhì)為泥炭：珍珠巖：蛭石(1：1：1)混合物，待根系發(fā)育完全后移栽到大田。以上所述僅是本發(fā)明的優(yōu)選實(shí)施方式，應(yīng)當(dāng)指出，對(duì)于本
技術(shù)領(lǐng)域：
的普通技術(shù)人員來(lái)說(shuō)，在不脫離本發(fā)明技術(shù)原理的前提下，還可以做出若干改進(jìn)和潤(rùn)飾，這些改進(jìn)和潤(rùn)飾也應(yīng)視為本發(fā)明的保護(hù)范圍。當(dāng)前第1頁(yè)1 2 3