一種合柱金蓮木的組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001] 本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種合柱金蓮木的組織培養(yǎng)快速繁殖方 法。
【背景技術(shù)】
[0002] 合柱金蓮木，拉丁學(xué)名為Sauvagesiarhodoleuca(Diels)M.C.E?，又名辛木，屬金 蓮木科（Ochnaceae)落葉小灌木，為我國特有的單種屬植物。合柱金蓮木以根莖入藥，具有 止癢殺蟲等功效。由于合柱金蓮木形態(tài)特征與南美洲產(chǎn)的Wallacea屬植物很接近，因此， 它的存在對于進(jìn)一步研究本科植物的區(qū)系、地理分布及其發(fā)生與演化等具有重要的科學(xué)意 義。
[0003] 合柱金蓮木主要分布于廣西金秀、龍勝、融水、德保和廣東的封開、連山、懷集等 地。常生長在海拔200_1000m的中、低山區(qū)，呈片狀生于密林或疏林下。由于森林砍伐，生 境破壞和挖取根莖入藥，致使植株日趨減少，有面臨絕滅的危險(xiǎn)，因此于1999年被列入《國 家重點(diǎn)保護(hù)野生植物名錄（第1批）》中，為國家一級重點(diǎn)保護(hù)野生植物。在自然條件下， 合柱金蓮木主要依靠種子進(jìn)行繁育，但種子微小，且果實(shí)成熟后即開裂散落的特性常造成 種子產(chǎn)量低，生產(chǎn)上難以實(shí)現(xiàn)大面積栽培。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004] 本發(fā)明的目的是提供一種合柱金蓮木的組織培養(yǎng)快速繁殖方法，能夠有效快速地 提高合柱金蓮木種苗的繁殖速度和質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)合柱金蓮木優(yōu)質(zhì)種苗的工廠化育苗，以滿足 生產(chǎn)上的需要。
[0005] 本發(fā)明通過以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的：一種合柱金蓮木組織培養(yǎng)快速繁殖方 法，包括以下步驟：
[0006] (1)外植體的選擇與消毒：選取合柱金蓮木種子作為外植體，依次用2%洗潔精水 溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15-30min、添加了 2-3滴吐溫-20的100毫升0. 1 %升汞消 毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，所述無菌水為 經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0007] (2)種子萌發(fā)獲得無菌試管苗：將步驟⑴得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在 培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天，種 子發(fā)芽后獲得無菌試管苗，所述MS培養(yǎng)基中添加1. 5mg/L靈發(fā)素LFS、0. 5mg/L的6-芐基 腺嘌呤6-BA、0. lmg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和4. 5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5. 8 ;
[0008] (3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng)：將步驟（2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培 養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng) 30天得到試管苗叢生芽，所述MS繁殖培養(yǎng)基中添加1. 0-2.Omg/L靈發(fā)素LFS、0. 5-1. 5mg/L 的6-芐基腺嘌呤6-BA、0. 3-0. 5mg/L的激動素KT、30g/L蔗糖、4. 5g/L的瓊脂和lg/L的活 性炭，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0009] (4)叢生芽壯苗培養(yǎng)：將步驟（3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中， 在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)30天得 到健壯植株，所述MS壯苗培養(yǎng)基中添加1. Omg/L靈發(fā)素LFS、1. Omg/L的萘乙酸NAA、0. 5mg/ L的吲哚乙酸IAA、30g/L蔗糖、4. 5g/L的瓊脂和lg/L的活性炭，培養(yǎng)基的pH值為5. 8 ;
[0010] (5)健壯植株生根培養(yǎng)：將步驟⑷中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中， 在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)25天得 到帶根的完整植株，所述1/2MS生根培養(yǎng)基中添加0. 1-1. Omg/L靈發(fā)素LFS、0. 5-2. Omg/L 的吲哚丁酸IBA、0. 1-0. 3mg/L的ABT 1號生根粉、30g/L蔗糖、4. 5g/L的瓊脂和lg/L的活 性炭，培養(yǎng)基的pH值為5.8 ;
[0011] (6)煉苗與移栽：步驟（5)獲得帶根的完整植株后，在室溫為25°C的室內(nèi)打開瓶 蓋，在瓶中加入少量自來水，煉苗2-4天，表面角質(zhì)形成后將苗取出，洗凈根部培養(yǎng)基，立即 移栽到細(xì)河沙：泥炭土 = 1:2的苗床中，在苗床中生長一個(gè)月后移栽大田，移栽后一個(gè)星期 內(nèi)，每天早8點(diǎn)到晚6點(diǎn)噴霧3-5次，每次lOmin，此后每天早8點(diǎn)、晚6點(diǎn)各噴霧1次，每次 lOmin;移栽時(shí)的溫度條件為20-25°C，相對濕度75-90%，遮陽率為60-80%。
[0012] 本發(fā)明的突出優(yōu)點(diǎn)在于：
[0013] (1)采用生物技術(shù)對合柱金蓮木進(jìn)行組織培養(yǎng)快速繁殖，保持了原有品種的優(yōu)良 性狀，在短時(shí)間內(nèi)培育出大量可供大田栽培的合柱金蓮木幼苗，具有繁育速度快、種苗質(zhì)量 均一，且不受時(shí)間、空間和季節(jié)限制等突出優(yōu)點(diǎn)，縮短了種苗繁育周期，提高了種苗質(zhì)量和 種苗繁殖系數(shù)，適用于工廠化生產(chǎn)，從而滿足生產(chǎn)上的需要。
[0014] (2)在MS誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加靈發(fā)素、6-芐基腺嘌呤和萘乙酸，能夠誘導(dǎo)不定芽萌 發(fā)；在MS增殖培養(yǎng)基中添加靈發(fā)素、6-芐基腺嘌呤和激動素可促進(jìn)不定芽的分化和生長； 在MS壯苗培養(yǎng)基中添加靈發(fā)素、萘乙酸和吲哚乙酸可促進(jìn)苗壯和芽的再次增殖；在1/2MS 生根培養(yǎng)基中添加靈發(fā)素、吲哚丁酸和ABT 1號生根粉可獲得完整的帶根苗，經(jīng)煉苗后可 直接移栽至苗床中。
[0015] (3)采用本發(fā)明所述的培養(yǎng)方法得到的叢生芽增殖系數(shù)高達(dá)16倍，經(jīng)過擴(kuò)繁、壯 苗和生根培養(yǎng)，組培苗生根率達(dá)78. 87%以上，移栽苗床后成活率在91. 7%以上。本發(fā)明提 供的合柱金蓮木的組織培養(yǎng)方法能夠快速、便捷、高效地繁殖出大量適合移栽的優(yōu)良合柱 金蓮木種苗，滿足生產(chǎn)上的需要。
【具體實(shí)施方式】
[0016] 下面結(jié)合實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說明。
[0017] 本發(fā)明所述的合柱金蓮木組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括以下步驟：
[0018](1)外植體的選擇與消毒：選取合柱金蓮木種子作為外植體，依次用2%洗潔精水 溶液浸泡5min、線狀自來水沖洗15-30min、添加了 2-3滴吐溫-20的100毫升0. 1 %升汞消 毒8-10min、無菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙除去表面水分，得到外植體，所述無菌水為 經(jīng)高壓滅菌的蒸餾水；
[0019] ⑵種子萌發(fā)獲得無菌試管苗：將步驟⑴得到的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在 培養(yǎng)溫度為23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng)20天，種 子發(fā)芽后獲得無菌試管苗。所述MS培養(yǎng)基中添加1. 5mg/L靈發(fā)素LFS、0. 5mg/L的6-芐基 腺嘌呤6-BA、0.lmg/L的萘乙酸NAA、30g/L蔗糖和4. 5g/L的瓊脂，培養(yǎng)基的pH值為5. 8 ;
[0020] (3)試管苗叢生芽快速繁殖培養(yǎng)：將步驟（2)中得到的無菌試管苗置于MS繁殖培 養(yǎng)基中，在培養(yǎng)溫度23-27°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間為12-14小時(shí)/天的條件下培養(yǎng) 30天得到試管苗叢生芽。所述MS繁殖培養(yǎng)基中添加如表1所示的