一種姜黃組織培養(yǎng)快速繁殖方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ]本發(fā)明涉及一種植物繁殖方法，特別是一種姜黃組織培養(yǎng)快速繁殖方法。
【背景技術(shù)】
[0002]藥材姜黃又名寶鼎香、黃姜，為姜科植物，姜黃(Curcumalonga L.)的干燥根莖，具有破血、行氣、通經(jīng)、止痛的功效，用于治療風(fēng)濕、肩臂酸痛、胸脅疼痛、痛經(jīng)以及損傷瘀痛等。
[0003]現(xiàn)代研究表明，姜黃根莖以姜黃素類為主，含有倍半萜類化合物、酸性多糖、揮發(fā)油類、菜油甾醇厚等多種復(fù)雜成分，具有保護(hù)免疫系統(tǒng)(抗炎、創(chuàng)傷愈合等)、消化系統(tǒng)(抗?jié)?、解痙)、心血管系統(tǒng)(降壓、降血脂、抗血凝)和保肝利膽作用，以及興奮子宮、抗生育、抗氧化、抗突變、抗腫瘤、抗艾滋病、抗老年癡呆、抗病原微生物及原蟲等廣泛藥理活性，且無(wú)毒副作用。
[0004]我國(guó)己經(jīng)開發(fā)出多種以姜黃為主要原料的中成藥，如:馬應(yīng)龍麝香痔瘡膏、舒肝片、珊瑚癬凈等。美國(guó)國(guó)立腫瘤研究所將姜黃素列為第三代癌化學(xué)預(yù)防藥。除了用于臨床中藥配方、作為多種傳統(tǒng)中成藥和抗菌消炎、抗腫瘤類新藥開發(fā)的重要原料外，姜黃色素還被廣泛用作食品添加劑、飲料原料、染料添加劑，以及香水等日化用品，出口東南亞和歐美等國(guó)家，表現(xiàn)廣闊的開發(fā)潛力和市場(chǎng)前景。因此，隨著規(guī)模開發(fā)利用的需求，姜黃的種植面積不斷擴(kuò)大。
[0005]植物姜黃主要分布于四川、福建、江西、在廣西、湖北、陜西、臺(tái)灣、云南等地也有栽培。但是，姜黃開花很少，大多數(shù)種子不充實(shí)，栽培上主要利用根莖繁殖，稱為“種姜”，即“老母姜”，但不能使用老母姜作種，要待子姜繁殖出的長(zhǎng)成后的母姜，即“二母姜”才行，因此，姜黃和繁殖速度慢、效率低下。迄今尚無(wú)姜黃組織培養(yǎng)研究的報(bào)道。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0006]本發(fā)明通過(guò)以下技術(shù)方案達(dá)到上述目的，一種姜黃組織培養(yǎng)快速繁殖方法，包括如下步驟:
[0007](I)外植體的選擇與消毒:取姜黃地下塊莖作外為植體，先用2v/v%的洗潔精水溶液浸泡20min，線狀自來(lái)水沖洗15-20min，再用添加了2-3滴吐溫-20的0.lm/v%的升汞消毒10-15min，無(wú)菌水沖洗3-5次，最后用消毒濾紙吸去除外植體表面水份，其中，無(wú)菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水；
[0008](2)塊莖發(fā)芽培養(yǎng)和獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(I)中獲得的外植體接種到MS發(fā)芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)得到無(wú)菌試管苗，其中MS發(fā)芽培養(yǎng)基中添加IAA 0.1-0.5mg/L、6-BA 0.5-
2.0mg/L、鹿糖30mg/L、瓊脂5mg/L，pH值5.8 ；
[0009](3)試管苗快速繁殖和獲得叢生芽:將步驟(2)中得到的試管苗接種至MS叢芽培養(yǎng)基中培養(yǎng)25-30d，獲得叢生芽，其中，MS叢芽培養(yǎng)基中添加ZT 0.1-1.0mg/L、IBA 0.1-
1.0mg/L、鹿糖30mg/L、瓊脂5mg/L，pH值5.8 ；
[0010](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的叢生芽轉(zhuǎn)接至MS壯苗培養(yǎng)基中培養(yǎng)25-35d，得到健壯植株，其中MS壯苗培養(yǎng)基中添加6-BA 0.5-1.5mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、瓊脂5mg/L，pH值5.8 ；
[0011](5)生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株轉(zhuǎn)接至I/2MS生根培養(yǎng)基中培養(yǎng)25-35d，得到帶根完整植株，其中1/2MS培養(yǎng)基中添加NAA 0.1-1.0mg/L ,I BA 0.1-0.5mg/L、蔗糖 15mg/L、瓊脂 5mg/L，pH值5.8 ；
[0012](6)煉苗與移栽:室溫下打開組培瓶蓋，加入少量自來(lái)水，煉苗7天;待培養(yǎng)基表面形成角質(zhì)后，取出幼苗，洗凈根部培養(yǎng)基，移栽到沙床中；在沙床中生長(zhǎng)27-33d，移栽到大田。
[0013]本發(fā)明突出的優(yōu)點(diǎn)在于:
[0014](I)通過(guò)姜黃組織培養(yǎng)，在短時(shí)間內(nèi)培育出大量適合移栽的姜黃種苗，顯著提高姜黃種苗的增殖系數(shù)和種苗質(zhì)量，實(shí)現(xiàn)規(guī)?；a(chǎn)，滿足市場(chǎng)需求。
[0015]在MS發(fā)芽誘導(dǎo)培養(yǎng)基中添加6-BA 0.5_2.0mg/L，可顯著促使芽萌動(dòng)，添加IAA0.1_0.5mg/L，可促使芽伸展，從而產(chǎn)生大量叢生芽;在MS壯苗培養(yǎng)基添加NAA0.1-0.5mg/L可促進(jìn)叢生芽長(zhǎng)高和展葉。
[0016](2)采用本發(fā)明培養(yǎng)所得到的組培苗增殖系數(shù)達(dá)到10-15倍，獲得組培苗生根率在98 %以上，移栽苗床成活率在95 %以上，有效解決了姜黃工廠化育苗的問(wèn)題。
【具體實(shí)施方式】
[0017]下面結(jié)合實(shí)施例對(duì)本發(fā)明的技術(shù)方案進(jìn)一步說(shuō)明，
[0018]實(shí)施例1
[0019]本發(fā)明所述的姜黃組織培養(yǎng)快速繁殖方法的一個(gè)實(shí)例，包括如下步驟:
[0020](I)外植體的選擇與消毒:取姜黃地下塊莖作外植體，依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡20分鐘，用毛刷仔細(xì)刷掉塊莖上的泥土，用解剖刀切取帶芽的塊莖，用線狀自來(lái)水沖洗
15-20分鐘，添加了 2-3滴吐溫-20的0.lm/v %升汞消毒10_15分鐘，無(wú)菌水沖洗3_5次，在超凈工作臺(tái)上用無(wú)菌解剖刀切取芽點(diǎn)，剝?nèi)パ奎c(diǎn)外層，最后用消毒濾紙去除表面水份，得到外植體。其中，無(wú)菌水為經(jīng)高溫高壓滅菌的蒸餾水。
[0021](2)芽點(diǎn)萌發(fā)，獲得無(wú)菌試管苗:將步驟(I)中獲得的外植體接種到MS培養(yǎng)基中，在溫度為22-26°C，光照強(qiáng)度15001uX，光照時(shí)間8-10h/d的條件下培養(yǎng)30d，獲得無(wú)菌試管苗。其中，MS培養(yǎng)基中添加NAA 0.1-0.5mg/L、6-BA0.5-2.0mg/L、蔗糖30mg/L、瓊脂5mg/L，培養(yǎng)基pH值5.8。
[0022](3)試管苗叢生芽快速地繁殖培養(yǎng):將步驟(2)中得到的試管苗置于MS繁殖培養(yǎng)基中，在溫度為22-26°(:，光照強(qiáng)度150011?，光照時(shí)間8-1011/(1的條件下培養(yǎng)30(1，獲得無(wú)菌試管苗叢生芽。其中，MS繁殖培養(yǎng)基中添加ZT0.5-2.0mg/L IBA 0.2-1.0mg/L、蔗糖30mg/L、瓊脂511^/1，培養(yǎng)基?!1為5.8。
[0023](4)叢生芽壯苗培養(yǎng):將步驟(3)中得到的試管苗叢生芽置于MS壯苗培養(yǎng)基中，在溫度為22-26°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間8-10h/d的條件下培養(yǎng)30d，得到健壯植株。其中，MS壯苗培養(yǎng)基中添加6-BA 0.5-1.5mg/L、NAA 0.1-0.5mg/L、蔗糖30mg/L、瓊脂5mg/L，培養(yǎng)基pH為5.8。
[0024](5)健壯植株生根培養(yǎng):將步驟(4)中得到的健壯植株置于1/2MS生根培養(yǎng)基中，在溫度為22-26°C，光照強(qiáng)度15001ux，光照時(shí)間8-10h/d的條件下培養(yǎng)30d，得到帶根完整植株。其中，1/2MS生根培養(yǎng)基中添加NAA0.1-1.0mg/L、IBA0.1-0.5mg/L、蔗糖15mg/L、瓊月旨511^/1，培養(yǎng)基?!1為5.8。
[0025](6)煉苗與移栽:在室溫下打開瓶蓋，瓶中加入少量自來(lái)水，煉苗7天，待表面角質(zhì)形成后，取出幼苗，洗凈根部培養(yǎng)基，立即移栽到沙床中，在沙床中生長(zhǎng)一個(gè)月后移栽到大田。
[0026]實(shí)施例2
[0027]本發(fā)明所述的姜黃組織培養(yǎng)快速繁殖方法的另一個(gè)實(shí)例，包括如下步驟:
[0028](I)外植體的選擇與消毒:取姜黃地下塊莖作外植體，依次用2v/v%洗潔精水溶液浸泡20min，用毛刷仔細(xì)刷掉塊莖上的泥土，線狀自來(lái)水沖洗15-20min，用添