專利名稱：雞新城疫病毒保藏劑的制配方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及家禽生物制品，更具體涉及一種雞新城疫病毒保藏劑的制配方法。
背景技術(shù)：
雞新城疫病毒(Newcastle disease virus NDV)一直被人們用于雞瘟疫苗的生產(chǎn)，對雞病毒性疾病的防治具有舉足輕重的作用。二十世紀八十年代，作為誘生劑被廣泛應(yīng)用于人白細胞干擾素和抗腫瘤藥物仙霉素(BC369)的生產(chǎn)。2001年2月長江日報報導(dǎo)，武漢協(xié)和醫(yī)院普外科使用雞新城疫病毒改變被俘癌細胞20％的表面抗原，制備腫瘤疫苗。現(xiàn)在國內(nèi)外雞新城疫病毒(NDV)一般采用冷凍干燥法和-30℃低溫冰箱法保減，保藏期為2-3年，在上述條件下進行保藏，病毒血凝效價(HA)比較穩(wěn)定。但問題是隨著對雞新城疫病毒資源的開發(fā)利用，需要該病毒溶液在4～8℃冰箱內(nèi)保藏一個月或一個月以上的時間，但此病毒液在4～8℃條件下保藏3-4天后，病毒血凝效價即會迅速下降，雞新城疫病毒血凝效價不夠穩(wěn)定發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供一種雞新城疫病毒保藏劑的制配方法，工藝簡單，操作方便，能使病毒液保藏時間長，病毒效價保持穩(wěn)定。
為了達到上述目的，本發(fā)明采用以下技術(shù)措施，其步驟是(1)將9-10日齡雞胚在無菌條件下，接種雞新城疫病毒-F株(NDV-F)(該毒株血凝效價為640，用無菌生理鹽水稀釋20倍)，每個雞胚接種0.2ml于尿囊腔中，封口后置36℃培養(yǎng)箱孵化4-5天，培養(yǎng)結(jié)束后在4℃冰箱放置過夜，并在無菌室取出尿囊液，即為增殖的NDV-F病毒。
(2)將上述病毒液用0.45μ微孔濾膜(上海市集成藥廠產(chǎn)品)，加壓過濾，濾液無菌試驗為陰性，測定病毒血凝效價在640-1280之間。
(3)配制一定濃度的核酸酶溶液，核酸酶溶液分別由核糖核酸酶和脫氧核糖核酸酶配制。具體配法是稱1g脫氧核糖核酸酶，加雙蒸水100ml溶解、濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為脫氧核糖酸酶濃液，濃度為10mg/ml；稱0.5g核糖核酸酶，加雙蒸水100ml溶解、濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為核糖核酸酶濃液，濃度為5mg/ml。分別取脫氧核糖酸酶液和核糖核酸酶液0.5-2.5ml加到95-99ml病毒溶液中，使脫氧核糖核酸酶與核糖核酸酶的最終濃度分別為50-250μg/ml和25-125μg/ml。搖勻后置4～8℃冰箱內(nèi)保藏。
(4)分別保藏15～35天，測定病毒血凝效價，結(jié)果顯示效價為640-1280。
本發(fā)明與現(xiàn)有技術(shù)相比，具有以下優(yōu)點和效果采用本方法保藏雞新城疫病毒，在4～8℃溫度下，保藏時間為15～35天。保藏之后，病毒血凝效價保持不變，原來測定結(jié)果為640或者1280，保藏之后能夠保持相對穩(wěn)定。此法對雞新城疫病毒的進一步開發(fā)和利用是非常有利的，在生物制品的生產(chǎn)過程中有較大的應(yīng)用潛力。
具體實施例方式
(b)增殖的尿囊液用0.45μ微孔濾膜過濾除菌，用肉湯培養(yǎng)液檢測是否有細菌污染，無菌試驗應(yīng)為陰性。測定血凝效價為640。
(c)稱脫氧核糖核酸酶(DNase)1g加雙蒸水100ml，溶解，濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為脫氧核糖核酸酶濃液，濃度為10mg/ml。取核糖核酸酶(RNase)0.5g加雙蒸水100ml，溶解，濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為核糖核酸酶濃液，濃度為5mg/ml。
(d)分別取脫氧核糖核酸酶濃液1ml和核糖核酸酶濃液1ml加入到上述病毒液98ml中，此時病毒液中脫氧核糖核酸酶(DNase)的最終濃度為100μg/ml。核糖核酸酶(RNase)的最終濃度為50μg/ml。
(e)混合均勻后，置4～8℃冰箱中保藏。
(f)分別保藏15天、35天后，取樣，測定血凝效價，效價均為640。
(b)增殖的尿囊液用0.45μ微孔濾膜過濾除菌，用肉湯培養(yǎng)液檢測是否有細菌污染，無菌試驗應(yīng)為陰性。測定血凝效價為640。
(c)稱脫氧核糖核酸酶(DNase)1g加雙蒸水100ml，溶解，濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為脫氧核糖核酸酶濃液，濃度為10mg/ml。取核糖核酸酶(RNase)0.5g加雙蒸水100ml，溶解，濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為核糖核酸酶濃液，濃度為5mg/ml。
(d)分別取脫氧核糖核酸酶濃液0.5ml和核糖核酸酶濃液0.5ml加入到上述病毒液99ml中，此時病毒液中脫氧核糖核酸酶(DNase)的最終濃度為50μg/ml。核糖核酸酶(RNase)的最終濃度為25μg/ml。
(e)混合均勻后，置4～8℃冰箱中保藏。
(f)分別保藏15天、35天后，取樣，測定血凝效價，效價均為640。
(b)增殖的尿囊液用0.45μ微孔濾膜過濾除菌，用肉湯培養(yǎng)液檢測是否有細菌污染，無菌試驗應(yīng)為陰性。測定血凝效價為640。
(c)稱脫氧核糖核酸酶(DNase)1g加雙蒸水100ml，溶解，濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為脫氧核糖核酸酶濃液，濃度為10mg/ml。取核糖核酸酶(RNase)0.5g加雙蒸水100ml，溶解，濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為核糖核酸酶濃液，濃度是5mg/ml。
(d)分別取脫氧核糖核酸酶濃液2.5ml和核糖核酸酶濃液2.5ml加入到上述病毒液95ml中，此時病毒液中脫氧核糖核酸酶(DNase)的最終濃度為250μg/ml。核糖核酸酶(RNase)的最終濃度為125μg/ml。
(e)混合均勻后，置4～8℃冰箱中保藏。
(f)分別保藏15天、35天后，取樣，測定血凝效價，效價均為640。
(b)增殖的尿囊液用0.45μ微孔濾膜過濾除菌，用肉湯培養(yǎng)液檢測是否有細菌污染，無菌試驗應(yīng)為陰性。測定血凝效價為1280。
(c)稱脫氧核糖核酸酶(DNase)1g加雙蒸水100ml，溶解，濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為脫氧核糖核酸酶濃液，濃度為10mg/ml。取核糖核酸酶(RNase)0.5g加雙蒸水100ml，溶解，濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為核糖核酸酶濃液，濃度為5mg/ml。
(d)分別取脫氧核糖核酸酶濃液2.5ml和核糖核酸酶濃液0.5ml加入到上述病毒液97ml中，此時病毒液中脫氧核糖核酸酶(DNase)的最終濃度為250μg/ml。核糖核酸酶(RNase)的最終濃度為25μg/ml。
(e)混合均勻后，置4～8℃冰箱中保藏。
(f)分別保藏15天、35天后，取樣，測定血凝效價，效價均為1280。
(b)增殖的尿囊液用0.45μ微孔濾膜過濾除菌，用肉湯培養(yǎng)液檢測是否有細菌污染，無菌試驗應(yīng)為陰性。測定血凝效價為1280。
(c)稱脫氧核糖核酸酶(DNase)1g加雙蒸水100ml，溶解，濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為脫氧核糖核酸酶濃液，濃度為10mg/ml。取核糖核酸酶(RNase)0.5g加雙蒸水100ml，溶解，濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為核糖核酸酶濃液，濃度為5mg/ml。
(d)分別取脫氧核糖核酸酶濃液0.5ml和核糖核酸酶濃液2.5ml加入到上述病毒液97ml中，此時病毒液中脫氧核糖核酸酶(DNase)的最終濃度為50μg/ml。核糖核酸酶(RNase)的最終濃度為125μg/ml。
(e)混合均勻后，置4～8℃冰箱中保藏。
(f)分別保藏15天、35天后，取樣，測定血凝效價，效價均為1280。
權(quán)利要求
1.一種雞新城疫病毒保藏劑的制配方法，將9-10日齡雞胚在無菌條件下，接種雞新城疫病毒-F株，每個雞胚接種于尿囊腔中，封口后置36℃培養(yǎng)箱孵化4-5天，培養(yǎng)結(jié)束后在4℃冰箱放置，在無菌室取出尿囊液，將病毒液用0.45μ微孔濾膜，加壓過濾，其特征是配制核酸酶溶液，首先是稱脫氧核糖核酸酶，加雙蒸水溶解、濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為脫氧核糖核酸酶濃液，濃度為10mg/m；其次是稱核糖核酸酶，加雙蒸水溶解、濃配，并經(jīng)0.45μ微孔濾膜過濾，濾液為核糖核酸酶濃液，濃度為5mg/ml；第三是分別取脫氧核糖核酸酶濃液和核糖核酸酶濃液0.5-2.5ml加到95-99μg/ml病毒溶液中，使脫氧核糖核酸酶與核糖核酸酶的濃度為50-250μg/ml和25-125μg/ml，搖勻后置4-8℃冰箱內(nèi)保藏。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種雞新城疫病毒保藏劑的制配方法，其特征是首先稱脫氧核糖核酸酶，加雙蒸水溶解、濃配，過濾；其次是稱核糖核酸酶，加雙蒸水溶解、濃配，過濾；第三是分別取脫氧核糖核酸酶濃液和核糖核酸酶濃液加到病毒溶液中，使?jié)舛确謩e為50－250μg/ml和25－125μg/ml，搖勻內(nèi)保藏。本發(fā)明工藝簡單，操作方便，使病毒液保藏時間長，病毒效價保持穩(wěn)定。
文檔編號C12N7/01GK1392255SQ0213871
公開日2003年1月22日 申請日期2002年6月27日 優(yōu)先權(quán)日2002年6月27日
發(fā)明者陳繩亮, 李天憲, 嚴哲, 熊克娟, 范兆軍, 張忠, 王瑤 申請人:中國科學院武漢病毒研究所