專利名稱：生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及醫(yī)用配制品，尤其涉及含有生物血紅細(xì)胞的醫(yī)用配制品，特別涉及制備血液細(xì)胞分析中所用含血紅細(xì)胞的質(zhì)控物。
背景技術(shù)：
紅細(xì)胞體積的長(zhǎng)期穩(wěn)定在生物學(xué)研究中具有非常大的應(yīng)用價(jià)值。以血液細(xì)胞分析儀為例，儀器的質(zhì)量控制、校準(zhǔn)都需要使用體積準(zhǔn)確穩(wěn)定的細(xì)胞例子實(shí)現(xiàn)，而紅細(xì)胞是生物血液中含量最大的成分，其影響能力往往是白細(xì)胞粒子的1000倍，在體積參數(shù)的控制中是最關(guān)鍵的因素。血液細(xì)胞分析儀可以分析細(xì)胞的數(shù)量、體積、血紅蛋白等多個(gè)信息，如果體積參數(shù)測(cè)試不準(zhǔn)確，則會(huì)導(dǎo)致很多相關(guān)參數(shù)的測(cè)試錯(cuò)誤，對(duì)臨床診斷工作造成極大影響，比如對(duì)于紅細(xì)胞的血紅蛋白濃度、含量等與貧血治療特別相關(guān)的參數(shù)就影響非常明顯，所以必須建立可靠的質(zhì)量控制體系和校準(zhǔn)體系。實(shí)現(xiàn)質(zhì)量控制和校準(zhǔn)體系所使用的材料主要依靠質(zhì)控物和校準(zhǔn)物進(jìn)行。質(zhì)控物和校準(zhǔn)物本身是變化很小的多種粒子混合體。其中類白細(xì)胞粒子和類血小板粒子多為完全固定的細(xì)胞粒子或者塑料微球等物質(zhì)，含量不高，并且不用與儀器的溶血素(表面活性劑)進(jìn)行反應(yīng)。質(zhì)控物、校準(zhǔn)物更多的細(xì)胞成分為紅細(xì)胞。紅細(xì)胞必須保持與溶血素的反應(yīng)能力，否則就會(huì)表現(xiàn)出與類白細(xì)胞一樣的物理化學(xué)性質(zhì)，成為1000倍數(shù)量級(jí)的假白細(xì)胞粒子而干擾測(cè)定，這點(diǎn)是紅細(xì)胞與白細(xì)胞存在的一個(gè)重大差別。所以對(duì)紅細(xì)胞的要求如下必須保持與儀器溶血素的反應(yīng)能力，不可以成為假白細(xì)胞粒子干擾其他參數(shù)測(cè)定；必須保持體積的長(zhǎng)期穩(wěn)定，在質(zhì)控物和校準(zhǔn)物要求的有效期內(nèi)平均紅細(xì)胞體積變化微?。滑F(xiàn)有的紅細(xì)胞處理技術(shù)，關(guān)于體積穩(wěn)定的內(nèi)容非常稀少，可供參考的有中國(guó)專利ZL94192671公開(kāi)的一種細(xì)胞的制備和穩(wěn)定化方法，而關(guān)于質(zhì)控物的制備技術(shù)，有較多的文獻(xiàn)記載，如中國(guó)專利申請(qǐng)99116350公開(kāi)的一種血液學(xué)細(xì)胞三分類全血質(zhì)控物，美國(guó)專利申請(qǐng)?zhí)枮?0030104631的文件公開(kāi)了一種血液質(zhì)控的制備方法，美國(guó)專利US 6514763公開(kāi)的一種血液質(zhì)控物及其制備方法，US 4704364公開(kāi)的一種血白細(xì)胞三分類質(zhì)控組合物及其制備方法和用途，更多的知識(shí)集中在如何保護(hù)紅細(xì)胞的生理活性以及白細(xì)胞的處理上。我們通過(guò)長(zhǎng)期收集資料，總結(jié)出紅細(xì)胞的常見(jiàn)處理技術(shù)，分為使用固定試劑和固定方法進(jìn)行處理以及使用紅細(xì)胞的各種保存試劑技術(shù)兩個(gè)大類。固定技術(shù)常見(jiàn)各種醛類、酸類、酯類、酮類和放射線等技術(shù)；保存試劑技術(shù)多為血庫(kù)和生物免疫類的的試劑保存技術(shù)。這些技術(shù)在制備質(zhì)控物這個(gè)應(yīng)用領(lǐng)域中，存在以下缺陷固定的紅細(xì)胞如果強(qiáng)度過(guò)高則容易產(chǎn)生和白細(xì)胞一樣的性質(zhì)，特別是不會(huì)被表面活性劑溶解或不完全溶解；如果固定程度不足則紅細(xì)胞體積和其他參數(shù)的穩(wěn)定性不足，不滿足長(zhǎng)期穩(wěn)定性要求；使用保存技術(shù)保存的紅細(xì)胞可以具備或部分具備生理活性，可以在短期內(nèi)保持參數(shù)的穩(wěn)定性，但隨著測(cè)試時(shí)間的延長(zhǎng)，紅細(xì)胞內(nèi)外條件產(chǎn)生變化，將出現(xiàn)失效情況。
可見(jiàn)，如何才能簡(jiǎn)單、快速地對(duì)紅細(xì)胞進(jìn)行處理，使得它能夠在保持與儀器溶血素的反應(yīng)能力，不會(huì)成為假白細(xì)胞粒子干擾其他參數(shù)測(cè)定的同時(shí)，保持體積的長(zhǎng)期穩(wěn)定，在質(zhì)控物和校準(zhǔn)物要求的有效期內(nèi)平均紅細(xì)胞體積變化微小，現(xiàn)有技術(shù)并沒(méi)有提供現(xiàn)成的解決方案。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的技術(shù)問(wèn)題在于避免上述現(xiàn)有技術(shù)的不足之處，而提出一種能夠保持與儀器溶血素的反應(yīng)能力，并且在要求的有效期內(nèi)平均紅細(xì)胞體積變化微小的紅細(xì)胞處理辦法。
本發(fā)明解決上述技術(shù)問(wèn)題采用的技術(shù)方案是，提出一種生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，用于制備血液細(xì)胞分析用質(zhì)控物和標(biāo)準(zhǔn)物，包括步驟(1).將紅細(xì)胞的代謝終止或減低；(2).穩(wěn)定紅細(xì)胞膜的磷脂成分處理；(3).穩(wěn)定紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)的處理。
所述步驟(2)用到化學(xué)試劑，該化學(xué)試劑的有效成分包括錳酸、鎘酸、鉻酸、苦味酸或與這些酸相對(duì)應(yīng)的金屬鹽類物質(zhì)。
所述步驟(3)用到化學(xué)試劑，該化學(xué)試劑的的有效成分包括醛類物質(zhì)。
所述步驟(1)用到化學(xué)試劑，該化學(xué)試劑的有效成分包括步驟(2)所用化學(xué)試劑的有效成分，還包括步驟(3)所用化學(xué)試劑的有效成分。
所述步驟(1)、(2)和(3)融合為一步完成，而處理過(guò)程中也只用到一種化學(xué)試劑，該化學(xué)試劑中包含有效成分的錳酸、鎘酸、鉻酸、苦味酸或與這些酸相對(duì)應(yīng)的金屬鹽類物質(zhì)和有效成分的醛類物質(zhì)，并用基礎(chǔ)試劑將PH值控制在7.1至8.5，整個(gè)處理過(guò)程在室溫下進(jìn)行，處理過(guò)程控制在30分鐘到3個(gè)小時(shí)內(nèi)。
所述生物紅細(xì)胞為人紅細(xì)胞、動(dòng)物紅細(xì)胞或多個(gè)體的混合樣本。
所述金屬鹽類物質(zhì)優(yōu)選濃度為0.02％～0.5％的重鉻酸鉀。
所述醛類物質(zhì)為甲醛、聚甲醛、戊二醛、烯醛或多種醛類的混合物，這里多種醛類的混合物指包含有至少兩種醛類物質(zhì)的混合物；優(yōu)選濃度為0.02％～0.3％的甲醛。
同現(xiàn)有技術(shù)相比，本發(fā)明的生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，為簡(jiǎn)單、快速地實(shí)現(xiàn)紅細(xì)胞的體積長(zhǎng)期穩(wěn)定，以保證血液細(xì)胞分析結(jié)果有效提供了可能。


圖1為采用本發(fā)明生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法進(jìn)行質(zhì)控物制備的流程示意圖。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，用于制備血液細(xì)胞分析用質(zhì)控物和標(biāo)準(zhǔn)物，包括步驟(1).將紅細(xì)胞的代謝終止或減低；(2).穩(wěn)定紅細(xì)胞膜的磷脂成分處理；(3).穩(wěn)定紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)的處理。
通過(guò)長(zhǎng)期研究我們認(rèn)為，紅細(xì)胞的代謝過(guò)程在短期內(nèi)對(duì)紅細(xì)胞的穩(wěn)定性有幫助，可以盡量維持紅細(xì)胞的各種參數(shù)的穩(wěn)定性，但在離體后目前還缺乏長(zhǎng)期提供模擬體內(nèi)環(huán)境的保存方法，所以經(jīng)過(guò)較長(zhǎng)期保存后，紅細(xì)胞的代謝必然會(huì)失去平衡，此時(shí)代謝對(duì)紅細(xì)胞的保存作用將是消極的，會(huì)很快導(dǎo)致紅細(xì)胞溶血等跡象發(fā)生。根據(jù)這個(gè)分析結(jié)果，可以推斷如果對(duì)紅細(xì)胞體積穩(wěn)定性有長(zhǎng)期的要求則最好將紅細(xì)胞代謝終止或者減緩，這樣體積的穩(wěn)定性可以通過(guò)合適的固定和保存技術(shù)實(shí)現(xiàn)。
根據(jù)生物紅細(xì)胞膜的機(jī)構(gòu)分析，除了大量的磷脂內(nèi)容外，還有大量的蛋白成分，而且在紅細(xì)胞膜內(nèi)側(cè)還存在一層支架蛋白，由此，可以設(shè)想以下處理路線使用化學(xué)處理方法將紅細(xì)胞代謝終止或者減低；使用膜固定試劑作用于磷脂，穩(wěn)定磷脂成分；使用蛋白固定試劑作用于膜蛋白，穩(wěn)定蛋白質(zhì)成分；使用中性或者堿性環(huán)境控制化學(xué)物質(zhì)彼此間的反應(yīng)和處理紅細(xì)胞膜的速度，使整個(gè)過(guò)程更溫和更充分，同時(shí)避免過(guò)度反應(yīng)出現(xiàn)完全固定情況，保留與表面活性劑的反應(yīng)特性；可以使用室溫反應(yīng)條件進(jìn)行處理，加速紅細(xì)胞的代謝終止或者減緩過(guò)程，并縮短反應(yīng)時(shí)間，盡量保證細(xì)胞膜的完整性。
需要說(shuō)明的是，為了制備質(zhì)控物，還要涉及諸如使用合適的保存試劑保存得到強(qiáng)化的紅細(xì)胞，使其的穩(wěn)定期盡量加長(zhǎng)。由于本發(fā)明只涉及紅細(xì)胞的處理，在這里對(duì)保存試劑的有關(guān)內(nèi)容不進(jìn)行展開(kāi)討論。
處理過(guò)程減少了紅細(xì)胞生物學(xué)特性差異，可以將不同樣本混合在一起增加樣本的總體積，滿足更多的應(yīng)用要求。
使細(xì)胞的代謝終止或減低可以有很多化學(xué)和物理方法，考慮到處理過(guò)程本身使用了化學(xué)試劑，而且試劑中無(wú)細(xì)胞代謝的主要營(yíng)養(yǎng)成分，所以處理過(guò)程本身也是紅細(xì)胞代謝的終止或減低過(guò)程。
作用于紅細(xì)胞膜的固定試劑常見(jiàn)的有鋨酸、錳酸、鎘酸、鉻酸、苦味酸或與這些酸對(duì)應(yīng)的金屬鹽類物質(zhì)，考慮到鋨酸毒性強(qiáng)不予采用，其他物質(zhì)不同程度都可以改善紅紅細(xì)胞的穩(wěn)定性，這里主要以重鉻酸鉀為例進(jìn)行介紹。
作用于蛋白質(zhì)的固定試劑比較多，特別是醛類有非常長(zhǎng)期的應(yīng)用，調(diào)整不同的反應(yīng)條件都可以配合重鉻酸鉀類金屬鹽類在紅細(xì)胞處理方面進(jìn)行應(yīng)用，這里以甲醛與重鉻酸鉀配合為例進(jìn)行介紹。
對(duì)于處理?xiàng)l件，經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期研究，得到以下注意事項(xiàng)反應(yīng)要充分，而且要快，由此，可以選用室溫反應(yīng)，這樣也可降低對(duì)環(huán)境的要求；反應(yīng)時(shí)間不可以太長(zhǎng)，溫度越高，則處理時(shí)間的越短，處理時(shí)間超過(guò)3小時(shí)并不會(huì)帶來(lái)更好的穩(wěn)定效果，相反對(duì)于一些樣本紅細(xì)胞的傷害更大；避免酸性環(huán)境，酸性環(huán)境可能會(huì)使反應(yīng)速度過(guò)快，對(duì)細(xì)胞損傷加強(qiáng)，由此，可以選用中性偏堿環(huán)境。
本發(fā)明方法采用的技術(shù)和現(xiàn)有的技術(shù)路線的出發(fā)點(diǎn)完全不同，主要體現(xiàn)在如下方面文獻(xiàn)上對(duì)于紅細(xì)胞的保存更多是集中在如何增強(qiáng)紅細(xì)胞的活性，保留代謝能力，而本發(fā)明方法方面則對(duì)紅細(xì)胞代謝進(jìn)行終止或者減低，從而避免了紅細(xì)胞體積變化的細(xì)胞代謝因素，將體積的穩(wěn)定性更多受控于處理和保存環(huán)節(jié)；傳統(tǒng)的細(xì)胞膜固定多不對(duì)細(xì)胞膜上磷脂進(jìn)行處理，因?yàn)樘幚砹字瑫?huì)帶來(lái)細(xì)胞傷害，損傷免疫學(xué)特征，而本發(fā)明方法主要要求細(xì)胞體積穩(wěn)定，所以使用磷脂處理試劑，加強(qiáng)了細(xì)胞膜的穩(wěn)定性，同時(shí)磷脂依舊可以被表面活性劑所溶解導(dǎo)致細(xì)胞溶解；本發(fā)明方法使用了傳統(tǒng)醛類固定試劑，但濃度很低，主要作用是稍微固定強(qiáng)化細(xì)胞蛋白質(zhì)成分，這樣可以減少由于蛋白質(zhì)變化帶來(lái)的體積影響。同時(shí)由于濃度很低不會(huì)出現(xiàn)對(duì)表面活性劑的抵抗作用；本發(fā)明方法操作方法簡(jiǎn)單快速，可以在室溫下進(jìn)行，縮短了化學(xué)試劑對(duì)細(xì)胞膜的作用時(shí)間，對(duì)細(xì)胞膜的完整性有良好的作用，而其他固定方法要么完全固定，要么低溫長(zhǎng)時(shí)間，效果都不良好；本發(fā)明方法的特點(diǎn)還在于，當(dāng)使用過(guò)程中混入測(cè)試用試劑(這種情況常常發(fā)生)時(shí)，所制備的細(xì)胞懸浮物的各項(xiàng)參數(shù)(尤其是紅細(xì)胞體積)可以保持穩(wěn)定。
下面，具體描述本發(fā)明的處理過(guò)程，以及所用化學(xué)試劑。
本發(fā)明方法的處理過(guò)程，是在室溫下進(jìn)行；由于基礎(chǔ)試劑含有防腐劑和抗生素，不需要嚴(yán)格無(wú)菌環(huán)境；但不可以存在過(guò)高的粉塵干擾，以免落入樣本內(nèi)形成假的細(xì)胞粒子干擾；處理過(guò)程中的離心條件以上清清晰，無(wú)過(guò)多細(xì)胞懸浮，無(wú)溶血跡象等條件為準(zhǔn)。
試劑配制基礎(chǔ)試劑和處理試劑配制如以下例子檸檬酸鈉1-10g疊氮鈉 1-5g氯化鉀 0.1-5g硫酸鈉 0.5-2g青霉素 0.1-2g鏈霉素 0.1-2g新霉素 0.1-2g瓊脂糖或纖維素 1g/10-500萬(wàn)氯化鈉 1-8g加蒸餾水1L以上試劑滲透壓使用氯化鈉調(diào)節(jié)為300mOsm，該值是以人紅細(xì)胞為例，其他動(dòng)物根據(jù)動(dòng)物種類不同進(jìn)行調(diào)節(jié)。使用Hcl和NaOH調(diào)節(jié)Ph值為7.1～8.5，然后使用上面的基礎(chǔ)試劑配制以下處理試劑重鉻酸鉀 0.02～0.5％甲醛 0.02～0.3％再次使用Hcl和NaOH調(diào)節(jié)Ph為7.1～8.5。
血液樣本處理血液樣本使用生理鹽水洗滌2次以上，離心條件以上清清澈無(wú)過(guò)多懸浮細(xì)胞為準(zhǔn)。多個(gè)體混合樣本需要洗滌后再混合，防止血型差異的凝集。如果需要單類純紅細(xì)胞制品可以進(jìn)行過(guò)濾、離心等措施去白細(xì)胞和血小板。然后樣本使用基礎(chǔ)試劑洗滌2次以上，去上清留壓積紅細(xì)胞備用。
洗滌后樣本處理取處理試劑和樣本壓積紅細(xì)胞按照X∶1的體積比例混合搖勻，其中X的值不小于1。放置于室溫下靜置不小于30分鐘的時(shí)間，并且一般不超過(guò)3小時(shí)，然后再次使用生理鹽水洗滌2次，基礎(chǔ)試劑洗滌2次，壓積紅細(xì)胞使用其他保存試劑再次洗滌2次以上，最后使用其他的保存試劑搖散懸浮，按照需要稀釋分裝后于2～8度低溫保存。
樣本的變化過(guò)程剛剛加工完畢的紅細(xì)胞會(huì)存在一個(gè)變化時(shí)期，本方法的這個(gè)過(guò)程一般在30天以內(nèi)，然后紅細(xì)胞進(jìn)入穩(wěn)定期，按照臨床使用的進(jìn)口質(zhì)控物變化參數(shù)為參比，穩(wěn)定時(shí)間可以在90天以上。
處理流程圖如圖1所示，整個(gè)質(zhì)控物制備的處理過(guò)程包括準(zhǔn)備工作、紅細(xì)胞預(yù)處理、紅細(xì)胞處理和紅細(xì)胞后期處理。本發(fā)明方法主要涉及到紅細(xì)胞處理過(guò)程中的使用處理試劑處理紅細(xì)胞。
本發(fā)明進(jìn)行了大量的試驗(yàn)測(cè)試工作，我們將部分測(cè)試結(jié)果介紹如下紅細(xì)胞參數(shù)的穩(wěn)定期變化情況，穩(wěn)定性測(cè)試包括整個(gè)穩(wěn)定期的變化情況和批次內(nèi)瓶間差異情況，有效期內(nèi)日間變化情況，測(cè)試穩(wěn)定期變化情況的方法如下(1)加工完畢的樣本分裝后放置2～8度冰箱保存；(2)留取1支樣本每日或者隔日進(jìn)行連續(xù)測(cè)試，記錄結(jié)果；測(cè)試方法如下A.樣本從冰箱取出后放置室溫15分鐘使其復(fù)溫到室溫；B.樣本使用混勻器混勻3分鐘；C.樣本上機(jī)測(cè)試；D.樣本返回2～8度冰箱保存，整個(gè)過(guò)程在20分鐘到120分鐘不等。
(3)連續(xù)測(cè)試觀察變化期情況；(4)30天后進(jìn)入穩(wěn)定期，可以開(kāi)始其他樣本進(jìn)行測(cè)試；(5)進(jìn)入穩(wěn)定期后的測(cè)試根據(jù)以下原則開(kāi)啟新樣本進(jìn)行測(cè)定A.樣本測(cè)試耗盡或者剩余樣本不足；B.樣本紅細(xì)胞分布開(kāi)始明顯變化；C.樣本變化測(cè)試結(jié)果開(kāi)始變大。
(6)新開(kāi)啟樣本和第1支一樣進(jìn)行連續(xù)測(cè)定。
樣本的日間變化，如表1所示



總計(jì)X95.4077 95.72596.5955 96.85 97.064796.396SD 0.59944 0.73854 0.49036 0.579660.532610.77341CV 0.62830.77152 0.50764 0.598510.548720.80233天數(shù) 30.93156.02657.64 40.557 36.36 120.57最小值2004-9-1 9:21 第2支94.6最大值2004-10 21 0:00 第5支98.5最大絕對(duì)差異 3.9測(cè)試系統(tǒng)深圳邁瑞公司BC-3000血球儀及原廠試劑測(cè)試地點(diǎn)北京從上述結(jié)果，可以看出以下結(jié)論樣本加工完畢后存在變化期，需要放置一定時(shí)間后才會(huì)逐步穩(wěn)定；樣本進(jìn)入穩(wěn)定期后每個(gè)樣本自身的變化很小，而且開(kāi)瓶測(cè)試的周期也比較長(zhǎng)，均在30天以上，如果只選取前14天的測(cè)試結(jié)果進(jìn)行計(jì)算，那么變化會(huì)更?。粶y(cè)試的結(jié)果為整個(gè)系統(tǒng)表達(dá)的差異情況，即包含了儀器的精密度和穩(wěn)定性、試劑穩(wěn)定性、溫度、環(huán)境等等可能變化條件。特別是溫度在120天的穩(wěn)定期內(nèi)變化從28度到16度，說(shuō)明樣本本身的變化會(huì)更小。
瓶間差異情況和室溫穩(wěn)定性樣本的瓶間差異是指儲(chǔ)存的一批樣本中瓶與瓶之間的差異。從表1和圖1已經(jīng)體現(xiàn)出不同時(shí)期的變化情況，這里指相同時(shí)間情況下開(kāi)啟的5支樣本的測(cè)試情況，如表2所示



測(cè)試系統(tǒng)深圳邁瑞公司BC-3000plus血球儀及原廠試劑 測(cè)試地點(diǎn)深圳*對(duì)照(產(chǎn)地美國(guó))質(zhì)控未進(jìn)行瓶間差測(cè)定，僅作為日間參考從上述結(jié)果，可以看出以下結(jié)論按照本發(fā)明方法處理的樣本瓶間差異很小，和一支樣本本身的變化接近；按照本發(fā)明方法處理的樣本在室溫(25度)下可以穩(wěn)定48小時(shí)；按照本發(fā)明方法處理的樣本對(duì)少量的混入的試劑無(wú)明顯的反應(yīng)，穩(wěn)定性良好；按照本發(fā)明方法處理的樣本參數(shù)變化和對(duì)照商品質(zhì)控(產(chǎn)地美國(guó))產(chǎn)品接近；結(jié)合表1可以看出按照本發(fā)明方法處理的樣本對(duì)測(cè)試體系差異、地點(diǎn)差異和操作人員差異反應(yīng)不明顯。
本發(fā)明方法除可用于上述血紅細(xì)胞的處理，還可擴(kuò)展使用于任何其它意在保存細(xì)胞(包括血小板)，對(duì)細(xì)胞進(jìn)行滅活處理的技術(shù)領(lǐng)域，比如對(duì)非人源性的白細(xì)胞或紅細(xì)胞及血小板的處理；意在穩(wěn)定細(xì)胞形態(tài)和體積的處理；制備穩(wěn)定的單組分的細(xì)胞(包括血小板)懸浮物，這種懸浮物可以用作數(shù)量測(cè)量或體積測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品或其它用途；制備穩(wěn)定的單組分的細(xì)胞(包括血小板)懸浮物，這種懸浮物可以用作數(shù)量測(cè)量或體積測(cè)定的標(biāo)準(zhǔn)品或質(zhì)控品或其它用途，同時(shí)可以保留紅細(xì)胞內(nèi)含的血紅蛋白的與測(cè)定試劑的正常反應(yīng)能力。
本發(fā)明主要思路在于從將紅細(xì)胞的代謝終止或減低、穩(wěn)定紅細(xì)胞膜的磷脂成分處理和穩(wěn)定紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)的處理三方面著手來(lái)保持紅細(xì)胞的體積長(zhǎng)期穩(wěn)定。基于這些思路而對(duì)本發(fā)明所公開(kāi)之最佳實(shí)施例進(jìn)行沒(méi)有創(chuàng)造性的簡(jiǎn)單替換、更改，或是作進(jìn)一步的發(fā)明，都屬于本發(fā)明之實(shí)施。
權(quán)利要求
1.一種生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，用于制備穩(wěn)定的細(xì)胞懸浮物，其特征在于，包括步驟(1).將紅細(xì)胞的代謝終止或減低；(2).穩(wěn)定紅細(xì)胞膜的磷脂成分處理；(3).穩(wěn)定紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)的處理。
2.如權(quán)利要求1所述的生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，其特征在于所述步驟(2)用到化學(xué)試劑，該化學(xué)試劑的有效成分包括錳酸、鎘酸、鉻酸、苦味酸或與這些酸相對(duì)應(yīng)的金屬鹽類物質(zhì)。
3.如權(quán)利要求1所述的生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，其特征在于所述步驟(3)用到化學(xué)試劑，該化學(xué)試劑的的有效成分包括醛類物質(zhì)。
4.如權(quán)利要求1至3任一所述的生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，其特征在于所述步驟(1)用到化學(xué)試劑，該化學(xué)試劑的有效成分包括步驟(2)所用化學(xué)試劑的有效成分。
5.如權(quán)利要求4所述的生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，其特征在于所述步驟(1)用到化學(xué)試劑的有效成分，還包括步驟(3)所用化學(xué)試劑的有效成分。
6.如權(quán)利要求5所述的生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，其特征在于所述步驟(1)、(2)和(3)融合為一步完成，而處理過(guò)程中也只用到一種化學(xué)試劑，該化學(xué)試劑中包含有效成分的錳酸、鎘酸、鉻酸、苦味酸或與這些酸相對(duì)應(yīng)的金屬鹽類物質(zhì)和有效成分的醛類物質(zhì)，并用基礎(chǔ)試劑將PH值控制在7.1至8.5，整個(gè)處理過(guò)程在室溫下進(jìn)行，處理過(guò)程控制在30分鐘到3個(gè)小時(shí)內(nèi)。
7.如權(quán)利要求6所述的生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，其特征在于所述生物紅細(xì)胞為人紅細(xì)胞、動(dòng)物紅細(xì)胞或多個(gè)體的混合樣本。
8.如權(quán)利要求6所述的生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，其特征在于所述金屬鹽類物質(zhì)優(yōu)選濃度為0.02％～0.5％的重鉻酸鉀。
9.如權(quán)利要求6所述的生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，其特征在于所述醛類物質(zhì)為甲醛、聚甲醛、戊二醛、烯醛或多種醛類的混合物。
10.如權(quán)利要求9所述的生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，其特征在于所述醛類物質(zhì)優(yōu)選濃度為0.02％～0.3％的甲醛。
全文摘要
一種生物紅細(xì)胞體積長(zhǎng)期穩(wěn)定的處理方法，用于制備血液細(xì)胞分析用質(zhì)控物和標(biāo)準(zhǔn)物，包括步驟(1).將紅細(xì)胞的代謝終止或減低；(2).穩(wěn)定紅細(xì)胞膜的磷脂成分處理；(3).穩(wěn)定紅細(xì)胞膜蛋白質(zhì)的處理。所述步驟(2)所用化學(xué)試劑的有效成分包括錳酸、鎘酸、鉻酸、苦味酸或與這些酸相對(duì)應(yīng)的金屬鹽類物質(zhì)，所述步驟(3)所用化學(xué)試劑的有效成分包括醛類物質(zhì)，而所述步驟(1)所用化學(xué)試劑包括步驟(2)和(3)所用化學(xué)試劑的有效成分。所述步驟(1)、(2)和(3)融合為一步完成，并只用到一種化學(xué)試劑，pH值控制在7.1至8.5，在室溫下進(jìn)行，處理過(guò)程控制在30分鐘到3個(gè)小時(shí)內(nèi)。本方法為簡(jiǎn)單、快速地實(shí)現(xiàn)紅細(xì)胞的體積長(zhǎng)期穩(wěn)定，以保證血液細(xì)胞分析結(jié)果有效提供了可能。
文檔編號(hào)C12N5/08GK1824770SQ20051003334
公開(kāi)日2006年8月30日 申請(qǐng)日期2005年2月25日 優(yōu)先權(quán)日2005年2月25日
發(fā)明者張暉, 徐祖越, 劉牧龍 申請(qǐng)人:深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司