專利名稱：一種植物抗逆性相關(guān)蛋白及其編碼基因與應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種植物抗逆性相關(guān)蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。
背景技術(shù)：
全球干旱、半干旱地區(qū)約占土地總面積的36％，占耕地面積的43％。我國的干旱、半干旱地區(qū)主要分布在華北、西北、內(nèi)蒙古和青藏高原等地區(qū)，其面積約占全國土地面積的二分之一。隨著人口增加、社會經(jīng)濟(jì)發(fā)展及自然氣候條件變化，水資源短缺形勢日益加劇，嚴(yán)重影響農(nóng)業(yè)生產(chǎn)。干旱脅迫常常影響植物生長發(fā)育，造成作物嚴(yán)重減產(chǎn)。干旱對農(nóng)作物造成的損失在所有的非生物脅迫中占首位，僅次于生物脅迫病蟲害造成的損失。為了解決這些難題，對作物抗旱機(jī)制的研究在國際上備受關(guān)注，抗旱性已成為評價(jià)作物品種的重要指標(biāo)之一。開展作物抗旱機(jī)制的研究，提高作物的抗旱性是解決水資源短缺、實(shí)現(xiàn)農(nóng)業(yè)節(jié)水、保障農(nóng)業(yè)可持續(xù)發(fā)展的重要選擇。作物抗旱機(jī)制的研究可揭示植物適應(yīng)干旱環(huán)境的生命本質(zhì)，是最終實(shí)現(xiàn)人為操縱植物生命活動的基礎(chǔ)，因此，也是生命科學(xué)領(lǐng)域中的一個(gè)重大的科學(xué)問題。開展作物抗旱機(jī)制的研究可提高我國生命科學(xué)的基礎(chǔ)研究水平、增強(qiáng)我國科技競爭力。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種植物抗逆性相關(guān)蛋白及其編碼基因。
本發(fā)明所提供的植物抗逆性相關(guān)蛋白，名稱為TCTP類似蛋白(translationallycontrolled tumor family protein similar to translationally controlled tumorprotein，簡寫為TCTP)，其來源于水稻，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQ ID №1；2)將序列表中SEQ ID №1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗逆性相關(guān)的蛋白質(zhì)。
其中，序列表中的序列1由168個(gè)氨基酸殘基組成。
所述一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加是指不多于十個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加。
上述植物抗逆性相關(guān)蛋白編碼基因(TCTP)及其啟動子也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
上述植物抗逆性相關(guān)蛋白的cDNA基因，可具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID №2的DNA序列；2)編碼序列表中SEQ ID №1蛋白質(zhì)序列的多核苷酸；3)與序列表中SEQ ID №2的DNA序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；4)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中SEQ ID No2限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。
上述高嚴(yán)謹(jǐn)條件可為在0.1×SSPE(或0.1×SSC)，0.1％SDS的溶液中，在65℃下雜交并洗膜。
其中，序列表中的SEQ ID №1由970個(gè)脫氧核苷酸組成，自5′端第113位至619位脫氧核苷酸為編碼序列。
本發(fā)明所提供的植物抗逆性相關(guān)蛋白的基因組基因，可具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID №3的核苷酸序列；2)編碼序列表中SEQ ID No1蛋白質(zhì)序列的DNA；3)與序列表中SEQ ID №3的DNA序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；4)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中的SEQ ID No3限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。
其中，序列表中序列3由4245個(gè)脫氧核苷酸組成，含有5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子。
含有本發(fā)明基因的表達(dá)載體、細(xì)胞系及宿主菌均屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。
逆境脅迫實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明的植物抗逆性相關(guān)蛋白的編碼基因轉(zhuǎn)入水稻中，可增強(qiáng)水稻的抗逆性，特別是增強(qiáng)對鹽、寒和旱的抗性。


圖1為TCTP類似蛋白編碼基因的結(jié)構(gòu)簡2為TCTP過量表達(dá)載體TCTP-pHOS的結(jié)構(gòu)簡3為30％PEG6000模擬干旱脅迫后轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻植株和對照(中花十一)復(fù)水后照片圖4A為寒冷脅迫后中花十一水稻品種(對照)的照片圖4B為寒冷脅迫后轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻植株的照片圖5A為鹽脅迫后中花十一水稻品種(對照)的照片圖5B為鹽脅迫后轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻植株的照片具體實(shí)施方式
實(shí)施例中的方法如無特別說明，均為常規(guī)方法。
實(shí)施例1、水稻抗逆相關(guān)蛋白及其編碼基因的獲得及其功能驗(yàn)證一、水稻抗逆相關(guān)蛋白及其編碼基因的獲得通過酵母雙雜交技術(shù)，篩選得到水稻抗逆相關(guān)蛋白TCTP。酵母雙雜交系統(tǒng)(CLONGTECH公司)是研究蛋白質(zhì)間相互作用的一種分子生物學(xué)方法，它是基于轉(zhuǎn)錄因子可被分為獨(dú)立的區(qū)，即DNA-結(jié)合域和轉(zhuǎn)錄活化域，而實(shí)現(xiàn)人工模擬轉(zhuǎn)錄的自然過程。采用的誘餌蛋白是DREB轉(zhuǎn)錄因子，即干旱應(yīng)答元件結(jié)合蛋白質(zhì)，它能特異結(jié)合啟動子中含有DRE/CRT順式元件，激活許多逆境誘導(dǎo)基因的表達(dá)，增強(qiáng)植物對逆境的忍耐力。通過酵母雙雜交篩選與DREB轉(zhuǎn)錄因子相互作用的蛋白，推測這些蛋白可能會與DREB轉(zhuǎn)錄因子一樣，與抗逆相關(guān)。通過實(shí)驗(yàn)，篩選得到了TCTP類似蛋白(translationally controlled tumor family protein similar totranslationally controlled tumor protein)。TCTP基因位于水稻第11號染色體上。TCTP基因全長4245bp其中啟動子區(qū)域1990bp，基因2255bp。TCTP基因含有5個(gè)外顯子和4個(gè)內(nèi)含子。外顯子分別為143bp、71bp、130bp、157bp和469bp。外顯子1包括mRNA 5’端非翻譯區(qū)和編碼蛋氨酸起始密碼(翻譯起始點(diǎn))，48個(gè)氨基酸的密碼子，外顯子2由編碼TCTP蛋白24個(gè)氨基酸的核苷酸組成。外顯子3包括編碼TCTP蛋白的43個(gè)氨基酸的核苷酸順序構(gòu)成。外顯子4包括編碼成熟TCTP蛋白的52個(gè)氨基酸的核苷酸順序構(gòu)成。外顯子5包括終止密碼子及3’端非編碼區(qū)。在3’非編碼區(qū)有2個(gè)poly A信號。內(nèi)含子分別為312bp、687、79bp和191bp。其結(jié)構(gòu)簡圖見圖1。
經(jīng)測序表明該蛋白具有序列表中序列1的氨基酸序列，其cDNA基因具有序列表中序列2的核苷酸序列。
擴(kuò)增TCTP類似蛋白的編碼基因TCTP的eDNA基因的特異引物TCTP-F5′-CACCCTCTCTCTCCGTCCGTCCGCGCC -3′和TCTP-R5′-CAATACAAAGGTTGCTTCTAAAG-3′，在TCTP-F引物的5′端附加了一個(gè)“CACC”接頭，作為TOPO clone的接頭。以水稻中花十一(湖南亞華種業(yè))的cDNA作為模板，用PCR方法(Invitrogen公司)擴(kuò)增出TCTP的cDNA基因片段；其中，擴(kuò)增體系為10×pfu buffer(含有Mg2+)5ul，10mM dNTPs 1ul，10uM引物TCTP-F 1ul，10uM引物TCTP-R 1ul，水稻cDNA5ul，pfu DNA聚合酶2ul，加水至50ul。擴(kuò)增程序?yàn)?5℃預(yù)變性5分鐘；95℃20秒，58℃30秒，72℃1分鐘30個(gè)循環(huán)；72℃延伸7分鐘。擴(kuò)增得到974bp片段，將其連接到pENTRTR/D-TOPO載體(Invitrogen公司)得到重組載體，經(jīng)測序表明該擴(kuò)增片段具有序列表中序列2的核苷酸序列，該擴(kuò)增片段即為TCTP的cDNA基因。自序列表中序列2的5′端113-619位為TCTP的cDNA基因的編碼序列，編碼序列表中序列1的氨基酸序列。將該重組載體命名為PENTR/D-TCTP。
二、TCTP基因功能驗(yàn)證1、過量表達(dá)載體的構(gòu)建通過pENTR/D-TOPO載體上LR反應(yīng)位點(diǎn)attL1和attL2，經(jīng)過LR反應(yīng)(Invitrogen公司)將重組載體pENTR/D-TCTP中的TCTP的cDNA基因片段重組到過量表達(dá)載體pHOS(Invitrogen公司)上，轉(zhuǎn)化大腸桿菌，進(jìn)行酶切和菌落PCR鑒定，將鑒定正確的含有TCTP基因的質(zhì)粒命名為TCTP-pHOS(結(jié)構(gòu)簡圖如圖2所示)。
2、轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻的獲得及其抗逆性過表達(dá)檢測將TCTP-pHOS通過根癌農(nóng)桿菌(Agrobacterium tumefaciens)LBA 4404(TIANGEN公司)的介導(dǎo)轉(zhuǎn)入中花十一號水稻中，用50mg/L Hygmycin篩選，然后對表現(xiàn)Hygmycin抗性的植株，用PCR方法檢測hpt基因，實(shí)驗(yàn)結(jié)果呈陽性，證明基因已經(jīng)整合到水稻基因組中，為篩選得到的轉(zhuǎn)TCTP-pHOS的水稻，即T0代轉(zhuǎn)基因植株。播種T0代轉(zhuǎn)基因植株所結(jié)的種子(T1代)，用50mg/L Hygmycin篩選，然后對表現(xiàn)Hygmycin抗性的植株，用PCR方法檢測hpt基因，結(jié)果表明100粒發(fā)芽種子中篩選到93株轉(zhuǎn)TCTP-PHOS陽性幼苗，對該陽性幼苗分別進(jìn)行了抗旱、抗寒、抗鹽方面的實(shí)驗(yàn)。
(1)抗旱實(shí)驗(yàn)用30％PEG6000來模擬干旱的環(huán)境。將T0代轉(zhuǎn)基因植株所結(jié)的種子(T1代)，直接放在含篩選劑Hygmycin 50mg/L的水中篩選十天。轉(zhuǎn)基因種子因攜帶hpt基因而可以抗Hygmycin。挑選抗性幼苗轉(zhuǎn)到水中培養(yǎng)，3天后進(jìn)行抗旱試驗(yàn)。野生型水稻中花十一用水發(fā)種子，生長至13天的幼苗，作為此次實(shí)驗(yàn)的對照。將篩選得到的T1代轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻和中花十一(對照)用30％PEG6000溶液處理。脅迫4天后，中花十一嚴(yán)重脫水變干，而轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻植株只是部分葉片卷曲。4天后復(fù)水，即將被處理幼苗根部的PEG洗凈后轉(zhuǎn)到水中培養(yǎng)3天。中花十一復(fù)水后不能恢復(fù)，死亡。轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻植株復(fù)水后立即恢復(fù)，結(jié)果如圖3所示(圖左為對照，圖右為轉(zhuǎn)基因植株)。轉(zhuǎn)基因抗旱植株轉(zhuǎn)入營養(yǎng)土中進(jìn)行正常培養(yǎng)。
(2)抗寒實(shí)驗(yàn)將T0代轉(zhuǎn)基因植株所結(jié)的種子(T1代)，直接放在含篩選劑Hygmycin 50mg/L的水中篩選十天。挑選抗性幼苗轉(zhuǎn)到水中培養(yǎng)，一周后進(jìn)行抗寒試驗(yàn)。野生型水稻中花十一于同期用水發(fā)種子，作為此次實(shí)驗(yàn)的對照。將中花十一品種(對照)和篩選得到的T1代轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻移至4度冷庫中培養(yǎng)。兩周后對照植株死亡，轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻植株所受的影響很小。結(jié)果如圖4A和圖4B所示(圖4A為對照植株，圖4B為轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻植株)(3)抗鹽實(shí)驗(yàn)將T0代轉(zhuǎn)基因植株所結(jié)的種子(T1代)，放入含篩選劑Hygmycin 50mg/L的水中篩選十天。挑選抗性幼苗轉(zhuǎn)到水中培養(yǎng)，一周后進(jìn)行抗鹽試驗(yàn)。野生型水稻中花十一于同期用水發(fā)種子，作為此次實(shí)驗(yàn)的對照。將中花十一品種(對照)和篩選得到的T1代轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻幼苗放入100mM NaCl溶液中培養(yǎng)，經(jīng)過一個(gè)月的處理，轉(zhuǎn)TCTP-pHOS水稻相對對照植株(中花十一)明顯生長狀況好。結(jié)果見圖5A和圖5B(圖5A為對照植株，圖5B為轉(zhuǎn)基因植株)。
以上實(shí)驗(yàn)，證明此TCTP基因具有提高植物抗旱、抗寒、抗鹽等能力的生物功能，可以增強(qiáng)植物對逆境的忍耐力。
序列表<160>3<210>1<211>168<212>PRT<213>稻屬水稻(Oryza sativa var.Lansheng)<400>1Met Leu Val Tyr Gln Asp Leu Leu Thr Gly Asp Glu Leu Leu Ser Asp1 5 10 15Ser Phe Pro Tyr Arg Glu Ile Glu Asn Gly Ile Leu Trp Glu Val Asp20 25 30Gly Lys Trp Val Val Gln Gly Ala Ile Asp Val Asp Ile Gly Ala Asn35 40 45Pro Ser Ala Glu Gly Gly Gly Asp Asp Glu Gly Val Asp Asp Gln Ala50 55 60Val Lys Val Val Asp Ile Val Asp Thr Phe Arg Leu Gln Glu Gln Pro65 70 75 80Pro Phe Asp Lys Lys Gln Phe Val Thr Phe Met Lys Arg Tyr Ile Lys85 90 95Asn Leu Ser Ala Lys Leu Asp Ala Glu Lys Gln Glu Glu Phe Lys Lys100 105 110Asn Ile Glu Gly Ala Thr Lys Tyr Leu Leu Gly Lys Leu Lys Asp Leu115 120 125Gln Phe Phe Val Gly Glu Ser Met His Asp Asp Gly Gly Leu Val Phe130 135 140Ala Tyr Tyr Lys Asp Gly Ala Thr Asp Pro Thr Phe Leu Tyr Phe Ser145 150 155 160His Gly Leu Lys Glu Val Lys Cys165
<210>2<211>970<212>DNA<213>稻屬水稻(Oryza sativa var.Lansheng)<400>2ctctctctcc gtccgtccgc gccgctactc ccccctcgcc gagagagctc tagggtttcc60gctgccgaat ttttttttta attcgggggg agagatttga agaggcggca ccatgttggt120ctaccaggat ctgcttaccg gtgacgagct cctgtcggat tcgttcccct acagagagat180cgagaacggc atcctctggg aagtcgatgg caagtgggtc gttcaaggag ctattgatgt240ggacattggt gccaacccat ctgctgaggg tggtggtgat gatgagggtg ttgatgacca300agctgtgaag gtggtcgaca ttgtggacac cttccgtctt caggagcaac ctccttttga360caagaagcag tttgtgacct tcatgaagcg ctacatcaag aacctctccg ccaagctgga420tgcggaaaag caagaggaat tcaagaagaa cattgagggt gccaccaagt acttgcttgg480aaagctcaag gaccttcagt tctttgttgg tgagagcatg catgatgatg gcggcttggt540gtttgcctac tacaaggacg gagccaccga cccaaccttc ctttacttct ctcatgggct600gaaggaggtc aagtgctgag cggttccttc tgctcgacac tgatgtttta tctatgcagt660ccgccgtatt tttggtctag tctatggttg tcagttgact cgatatggtc taatgttggt720gtcggaaaca actatcgttt gcttgttatg gatgttgaga tgagtccttt taaaaaaacc780tccggattat tggattcatg agctccttaa atgtttggaa cgatattaat ttgctttgtg840atggctggag aaagataatg atgaaattgt tgtgctagct atgttgctta cacttaaaac900atacctttgg tgtgttctgt cagactgatg cccaaaaaaa aaaaaacctt tagaagcaac960ctttgtattg 970<210>3<211>4245<212>DNA<213>稻屬水稻(Oryza sativa var.Lansheng)<400>3ggtacgggca cggagttttg cccgctaact ctagtaggta gggtttgggc gggcaatgtc 60
gggcatcggg tcgggcatgg ttttgctcta cccgtgcccg acccgatcca ttgccatccc120taccctcttc ctcctatctc gccggtgcgg tgacggggag gggaccttgc cggttcccct180cggccactcc cttccccttc ctcacggcaa cgggacactg tcgattcccc tcgcccgctc240cctccccatt actccacggc aacggggagg ggatccaccg gcagcgccgc ttcccctcgg300ccactccctc acccatcctc caccagctcc accggcggcg ctctccctct cggcacagag360tcggcggccc tccgcccctt ctcgccttct tcccgcgcca gatcaggcgg gtggaggagt420cggtggcggt ggcttcctcc gccccctctc gccttccttc cgccacagat cgggcggcgg480tggcggccgc ggctggattc ggtggcggag aacggattcg gcggcagtgg cggcggctcc540ttccaccctc gcctccctcc ctcggcagaa acgacagcgg tggcgagcgg cggcggcgta600gctcggcaag ccacgactgg cggccactcc atgccccctc ctcgtcagat ctggccatgg660gagacggtgg cggctgcggc aaactccgct cgatttttgg tcaatttgtt ttttttaatc720tccgtttgct gttcttctat tcttgtattt gggatcaaac ttgattaaaa ctttgtgtgt780tatttgctgc ggactctgga tgatttgttg tgtgttcgga cttatgatgt tgtggacaaa840aataggtgaa gacggacgaa acacctcacg gaatccttgt gttatttgat gcggaccctg900gatgattttt ttatgaacat tatggactgt ttttaatcgg acagattcgg ttttttttcg960ccctttcttt ttaccatgtc gcatataatc ggattccatt tttttgcccg attcttttgt1020cgcctatttt ttcacggacg gatgacggaa acactcgtaa ttttgtaagt ggtagagatt1080ttttcctttt ttacataaga cggaaactct tttttcgcac tcctttttaa tcgaccagaa1140ttttttttgc actttttttg gatcttggtt ttttttggca cagacgacgg atttttttaa1200tcggacagaa ataatttttc gcgttatttt ttcctttttt acggaagaca gaaacccttt1260ttttgccttt ttttaatcgg acagaaattt ttcgcacttt cttttgtcgc ttgttttttc1320gtacaaaaat cttttttttg gcactctttt ttgaagtcgg aaaccgtttt tcgcaccttt1380ttttttctgg gaatcggaca gaaaatattt ttcgcacttt tttttggaaa tttttcttaa1440ctttttaagt agcagagata gagatatatg cacgtgttct cctggtgatg ctaaccgaat1500aggacccgga ttttctagat cggacagttt tggtttttct tttctttttc cgcacttctt1560tttcgcccgg ttttttatcg gacaaacctg atttttttcg ttcggttttt ttgatgaacg1620atggaagcac ctctttttta agtagtagag gtagagattc atgatccttt aacactgaat1680gatggcgaaa gcggacaagt ccaaacgatt ccgtgccgcc cccgctgacc tcccttcggc1740cgccacaaac gcatctgagc cgtccgcctc cgaatatccg tccccaatat cccgatcgga1800cggcaggcaa tcaaccacgt actcctcccg gcttctcccc cactcaaaag cccaaaccgg1860cacaaatcgg agatctgggc cgtccatcgg taatattccc acggcatcag ccagatcgga1920
cggccagaat cgcggcccag atatttcggc ccgcttataa ataccggctg gtcgcctcca1980cctcaaaccc tctctctccg tccgtccgcg ccgctactcc cccctcgccg agagagctct2040agggtttccg ctgccgaatt ttttttttaa ttcgggggga gagatttgaa gaggcggcac2100catgttggtc taccaggatc tgcttaccgg tgcgtgaatt gatcataatt ttctctggtt2160tttttcgggg gtaattttgt tgtttttgga gtcggggatg tggggatttt gggaattgga2220ggtggcgcgg ttagatctgg gcgttttccg tgtttgaatc ggatgatcta accgagaatt2280attactggta ggaggttgtg gtttctgatt gttttttttt ttatcgaatc gtcagatctg2340cttgtgtgtg gggatcgagt ttgaactcgt gggggattat gtgttgtgtg tttgctgatg2400cgattggttt gactgaaatc tgatttgttt gatttggatg tgttgcaggt gacgagctcc2460tgtcggattc gttcccctac agagagatcg agaacggcat cctctgggaa gtcgatggca2520aggtatgtcg ctttctgttt agtaggcgga ttcaccagct gtatgctttt gctagctttt2580gattgatctg ttgccgtcct cgattagatt cagtgtaaca tggttatgtg aaattcgatc2640attccgtttg gtgaacactt cgatctttag tggatatgtc attgcatgtt aaattattca2700ctgcttgctt ggcacaacat atttgtgcag agttagctta attatgagcc ttttgggcat2760ttcgtaaaaa aagatgaagt gcttgtctat gcttctgagg ctttaaatat catgcatact2820cgtggatgct gtgctacgtg gcttttgacc ttattaattg ttgcaatgca tgaggattag2880aaagatttgc gttgaggatt ctaggttgat tgatatttcc aatgtatcga tttatttagt2940tgtatcaatg aaacatgttt ttcaaatcag agatcattat aatatgttcc taaccagtga3000aacaatcttg ctttcgtttt gagtattaat ttgatgtttg ctttcctttc aaatttcaat3060accaatggat gttttgatca actgcatata tgaattattg caacagaatg cagctgtgga3120tatcttttga gataaccacg attttgtcta ttaccttgtg aagatgtcat ttgattctgt3180ttggttactt atattatgtt gtatccttgc agtgggtcgt tcaaggagct attgatgtgg3240acattggtgc caacccatct gctgagggtg gtggtgatga tgagggtgtt gatgaccaag3300ctgtgaaggt ggtcgacatt gtggacacct tccgtcttca ggttgctctc acttccatta3360ccttggctct tgtatatgat actatctgca ctttattttt gtgcttaaat tccatgtgtg3420tttggcagga gcaacctcct tttgacaaga agcagtttgt gaccttcatg aagcgctaca3480tcaagaacct ctccgccaag ctggatgcgg aaaagcaaga ggaattcaag aagaacattg3540agggtgccac caagtacttg cttggaaagc tcaaggacct tcagttgtaa gttcactaat3600tgcttgccac aggtccagga aatagtaaca tatgtgatgc catgaacatg tctcaccatt3660agtgcctaca aattccagtt taaatgattt gctatgttct atcacattaa attcttgaag3720caataagact tgtattcaaa cctgcttctt atgctgtctc ttatgatctg tttcagcttt3780
gttggtgaga gcatgcatga tgatggcggc ttggtgtttg cctactacaa ggacggagcc3840accgacccaa ccttccttta cttctctcat gggctgaagg aggtcaagtg ctgagcggtt3900ccttctgctc gacactgatg ttttatctat gcagtccgcc gtatttttgg tctagtctat3960ggttgtcagt tgactcgata tggtctaatg ttggtgtcgg aaacaactat cgtttgcttg4020ttatggatgt tgagatgagt ccttttaaaa aaacctccgg attattggat tcatgagctc4080cttaaatgtt tggaacgata ttaatttgct ttgtgatggc tggagaaaga taatgatgaa4140attgttgtgc tagctatgtt gcttacactt aaaacatacc tttggtgtgt tctgtcagac4200tgatgcccaa aaaaaaaaaa acctttagaa gcaacctttg tattg424權(quán)利要求
1.一種植物抗逆性相關(guān)蛋白，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQ ID №1；2)將序列表中SEQ ID №1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗逆性相關(guān)的蛋白質(zhì)。
2.權(quán)利要求1所述植物抗逆性相關(guān)蛋白的編碼基因。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的編碼基因，其特征在于所述植物抗逆性相關(guān)蛋白的編碼基因的編碼序列為自序列2的5′端第113位至619位脫氧核苷酸。
4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的編碼基因，其特征在于所述植物抗逆性相關(guān)蛋白的cDNA基因，具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID №2的核苷酸序列；2)編碼序列表中SEQ ID №1蛋白質(zhì)序列的DNA；3)與序列表中SEQ ID №2的DNA序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；4)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中的SEQ ID №2限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。
5.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的編碼基因，其特征在于所述植物抗逆性相關(guān)蛋白的基因組基因，具有下述核苷酸序列之一1)序列表中SEQ ID №3的核苷酸序列；2)編碼序列表中SEQ ID №1蛋白質(zhì)序列的DNA；3)與序列表中SEQ ID №3的DNA序列具有90％以上同源性，且編碼相同功能蛋白質(zhì)的DNA序列；4)在高嚴(yán)謹(jǐn)條件下可與序列表中的SEQ ID №3限定的DNA序列雜交的核苷酸序列。
6.含有權(quán)利要求2-5任一所述的基因的表達(dá)載體或細(xì)胞系。
7.含有權(quán)利要求2-5任一所述的基因的宿主菌。
8.權(quán)利要求2-5任一所述的基因在培育抗逆性植物中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于所述抗逆性是抗鹽性和/或抗旱性和/或抗寒性。
10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的應(yīng)用，其特征在于所述植物為水稻。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種植物抗逆性相關(guān)蛋白及其編碼基因與應(yīng)用。該植物抗逆性相關(guān)蛋白，是具有下述氨基酸殘基序列之一的蛋白質(zhì)1)序列表中的SEQ ID №1；2)將序列表中SEQ ID №1的氨基酸殘基序列經(jīng)過一個(gè)或幾個(gè)氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且與植物抗逆性相關(guān)的蛋白質(zhì)。將本發(fā)明的植物抗逆性相關(guān)蛋白的編碼基因轉(zhuǎn)入水稻中，可增強(qiáng)水稻的抗逆性，特別是增強(qiáng)對鹽、寒和旱的抗性。
文檔編號C12N15/29GK1850856SQ200610083450
公開日2006年10月25日 申請日期2006年5月31日 優(yōu)先權(quán)日2006年5月31日
發(fā)明者張會新, 路發(fā)隆, 夏勉, 辛莉, 王喜萍, 曹曉風(fēng) 申請人:北京未名凱拓農(nóng)業(yè)生物技術(shù)有限公司