專利名稱：：逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及在醫(yī)學(xué)、藥劑學(xué)、農(nóng)業(yè)、林業(yè)和餘以及食物科學(xué)領(lǐng)fe加于通過基因轉(zhuǎn)移轉(zhuǎn)化細胞的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的純化或儲存的方法，以及與此相關(guān)的一系列技術(shù)。
背景技術(shù)：
：逆轉(zhuǎn)錄病毒載體可用于確保目的基因整合入宿主她體。因此，這些載體廣泛應(yīng)用于集中于耙向造血干細胞敬卜周血淋巴細胞的先體外后體內(nèi)基因治療方案的基因治療領(lǐng)域。它們也作為基因表達分析的工具，廣泛應(yīng)用于基5她開究領(lǐng)域。這是因為它們可以用于實S^凍(插入的)基因的穩(wěn)定^ii7K平。通常，將生產(chǎn)細胞的培養(yǎng)物上清液用過濾器過濾，并將濾液用作逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。若要將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體用于先體外后體內(nèi)的基因治療方案，則濾液可能要進行進一步純化。但是，由于純化病毒載體是復(fù)雜的，而且回收率低，因此上述方法存在問題。還未發(fā)現(xiàn)有描述純化的病毒載體的穩(wěn)定性的科學(xué)文獻。逆轉(zhuǎn)錄病毒載體生產(chǎn)細胞的培養(yǎng)物上清液通常用過濾器過濾后以冷凍狀態(tài)儲存在深度冷凍機中。在溶液狀態(tài)的解凍載體的穩(wěn)定性低。已報道了半衰期為在《C下92小時、在(TC下18-64小時、在32。C下11-39小時或在37。C下7-9小時(非專利文獻1、非專利文獻2)。由于如上所述，逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的穩(wěn)定性低，所以冷藏的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體通常在f頓時才解凍，并且要立即fOT。專利文獻1描述了一種凍T^后儲存重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的方法。此方法要求凍干設(shè)備，，求在〗OT時重構(gòu)儲存的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒的步驟。專利文獻2、專利文獻3或非專利文獻3描述了在一種具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)(特別是纖連蛋白片段)存在的情況下，感染逆轉(zhuǎn)錄病毒的基因轉(zhuǎn)移方法。但該物質(zhì)對逆轉(zhuǎn)錄病毒穩(wěn)定性的影響尚屬未知。專利文獻l:US5792643專利文獻2:WO95/26200專利文獻3:WO97/18318非專利文獻l:McTaggart，S.，Al-Rubeai，M.，Biotechnol.Prog.，16(5):859-865(2000)非專利文獻2:Kaptein丄C.，等人，GeneTher.，4(2):172-176(1997)非專利文獻3:H醒beig，H.等人，Nat.Med.，2(8):876~882(1996)
發(fā)明內(nèi)容發(fā)明解決的問題如上所述，人們必須在將冷藏的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體解凍后迅速對其進行處理，并立即用它感染細胞。因此，如果感染步驟的進度表由于某種原因被打亂了(例如，要用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體感染的細胞的延遲生長)且解凍之后不旨泣即將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體用于感染細胞，則可能不能實現(xiàn)充分感染的效率。因此，需要一種將逆轉(zhuǎn)錄病毒載體以準備著立即使用的狀態(tài)穩(wěn)定地儲存的方法。解決問題的方式本發(fā)明的發(fā)明人試圖開發(fā)出一種將逆轉(zhuǎn)錄病毒穩(wěn)定儲存在未冷凍的低溫中同時保持基因轉(zhuǎn)移活性的方法。作為充分研究的結(jié)果，本發(fā)明的發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)通過在低溫將逆轉(zhuǎn)錄病毒維持結(jié)合于涂有具病毒結(jié)合活性物質(zhì)的固體支持體，可使逆緑病毒以準備著立即i頓的狀態(tài)，甚至在解凍狀態(tài)穩(wěn)定地儲存。因此，已經(jīng)完成了本發(fā)明。本發(fā)明的第一個方面涉及一種儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的方法，該方&^含在固定在固體支持體上的具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)存在的條件下維持逆轉(zhuǎn)錄病毒。根據(jù)第一個方面，逆轉(zhuǎn)錄病毒會,以解凍狀態(tài)維持。例如，在儲存方法的一個實施方案中逆轉(zhuǎn)錄病毒可被維持在溶液中，該溶液不與空氣接觸。根據(jù)第一個方面，逆轉(zhuǎn)錄病毒可與期ti^轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞衍生的組分相分離。例如，在該實施方案中逆轉(zhuǎn)錄病毒可維持在含有磷酸鹽作為緩沖組分的緩沖液中。另外，逆轉(zhuǎn)錄病毒可i柳作為緩沖液的包含選自蛋白質(zhì)和糖類的物質(zhì)的溶液維持。根據(jù)第一個方面的逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存方法所使用的具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)的實例包括具有纖連蛋白的肝素-n結(jié)構(gòu)域的多肽、成纖維細胞生長因子、具有V型膠原的胰島素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽、DEAE-葡聚糖和^氨酸。本發(fā)明的第二方面涉及包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的組合物，其中該組合物包含于帶有固體支持體的容器中，所述的固體支持體上固定有具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)，并且iM轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合在具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)上。例如，第二方面的組^t/中的逆轉(zhuǎn)錄病毒可包含于容器內(nèi)的溶液中，該溶液不與空氣接觸。在第二方面的組合物中，可包含從其jt!^轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞衍生的組分分離出的逆轉(zhuǎn)錄病毒。該組合物可包含含有磷te作為緩沖組分的緩沖液。另外，該組合物可包含在溶液中的選自蛋白質(zhì)和糖類的物質(zhì)。用于根據(jù)第二個方面儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)的實例包括具有纖連蛋白的肝素-n結(jié)構(gòu)域的多肽、成纖維細胞生長因子、具有v型膠原的胰島素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽、DEAE-葡聚糖和，氨酸。本發(fā)明的效果根據(jù)本發(fā)明，可以儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒，從而使其可以立即進行基因轉(zhuǎn)移。有可能進行可重復(fù)的基因轉(zhuǎn)移，因為相同質(zhì)量的逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合容器可被穩(wěn)定地儲存。此外，如果《頓透氣的細胞培養(yǎng)袋或分離袋作為儲存容器來保持封閉系統(tǒng)，那么本發(fā)明可使在低溫下運輸成為可能。附圖簡述圖1顯示相對于對照所觀察至啲轉(zhuǎn)移效率的基因轉(zhuǎn)移效率值。圖2顯示相對于對照所觀察到的轉(zhuǎn)移效率的基因轉(zhuǎn)移效率值。實施本發(fā)明的最佳方式對于根據(jù)本發(fā)明所用的逆轉(zhuǎn)錄病毒沒有特別的限制。為了進行基因轉(zhuǎn)移，根據(jù)本發(fā)明通常使用人工修飾的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒(即逆轉(zhuǎn)錄病毒載體)。特別地，對于防止無限制的感染或基因轉(zhuǎn)移，復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒載體是雌的。這樣的載體被制成復(fù)制缺陷型，從而使其在感染的細胞內(nèi)不能自主復(fù)制，并因而無毒性。這樣的載體可侵入宿主細胞，例如脊椎動物的細胞(尤其是哺乳動物的細胞)，以穩(wěn)定姻繊Alt匕載體的夕卜，因^到染色體的DNA中。已知的復(fù)制缺陷型逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的實例包,轉(zhuǎn)錄病毒載體(例如MFG載體、a-SGC載體(WO92/07943)、pBabe(MoiBenstem，J.R，Land,H.，NucleicAcidsResearch,18(12):3587-3596(1990))、pLXIN(clontech)或pDON畫AI(TakaraBio))、慢病毒載體(人免疫缺陷病毒(HIV)衍生載體、猿猴免疫缺陷病毒(SIV)衍生載體等)及其斷布。對于逆轉(zhuǎn)錄病毒載體攜帶的外來基因沒有特別的限制。在目的細胞中想要敲的樹可基因都可被插入。其實例包彌碼多肽(酶、生長因子、細胞因子、受體、結(jié)構(gòu)蛋白等)的基因、反義RNA、核酶、誘殺劑和弓胞RNA干擾的RNA。根據(jù)本發(fā)明，可能〗OT在適當(dāng)啟動子(例如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體中的LTR啟動子或外來啟動子)的控制下插A^轉(zhuǎn)錄病毒載體的外來基因。載體中可存在另一種與啟動子和轉(zhuǎn)錄起始位點(例如增強子序列)協(xié)同的調(diào)節(jié)元件，以完戯卜來基因的轉(zhuǎn)錄。im地，轉(zhuǎn)移的基因可包含在其下游的終止子序列。此外，可包括適當(dāng)?shù)臉?biāo)記基因(例如，抗藥性基因，編碼熒光蛋白的基因，編碼可起報道分子例如3-半乳糖苷酶或螢光素酶作用的酶的基因)，所述標(biāo)記基因使得育繼擇具有轉(zhuǎn)移的基因的細胞?？砂凑找阎椒ㄖ苽淠孓D(zhuǎn)錄病毒，并根據(jù)本發(fā)明使用該病毒。對制備方法沒有特別的限制。如果4頓逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，則根據(jù)本發(fā)明可4頓從適合于逆轉(zhuǎn)錄病毒的逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞培養(yǎng)物中收集的上清液。逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞可為上清液中穩(wěn)定產(chǎn)轉(zhuǎn)錄病毒顆粒的細胞，或在用逆轉(zhuǎn)錄病毒載體質(zhì)粒轉(zhuǎn)染后短暫產(chǎn)頓轉(zhuǎn)錄病毒顆粒的細胞。已知的包裝細胞系，例如PG13(ATCCCRL-10686)、PA317(ATCCCRL誦9078)、GP+E-86或GP+envAm-12(US5,278,056)或Psi畫Crip(Danos，O.，Mulligan,R.C，Proc.Natl.AcadSci.USA，85(17):6460-6464(1988))可用來制備逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞。轉(zhuǎn)染效率高的293細胞或293T細胞可用來制備逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞。根據(jù)本發(fā)明也可能j頓艦假型包裝制備的逆轉(zhuǎn)錄病毒，其具有來源于病毒的被膜，所述病毒不同于得到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體基因組的病毒。例如可使用具有來源于莫洛尼鼠白血病病毒(MoMLV)、長臂猿白血病病毒(GaLV)、水泡性口膜炎病毒(vsv)或貓內(nèi)源性病毒的被膜或可作為被膜起作用的蛋白質(zhì)的假型逆轉(zhuǎn)錄病毒。此外，人們可制備在其表面具有進行擗連傲布的蛋白質(zhì)的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體?？捎镁哂袇⑴c糖基化作用等的酶的轉(zhuǎn)移基因的逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞，來制備逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。這樣的逆録病毒載體也可根據(jù)本發(fā)明^頓。(A)本發(fā)明逆轉(zhuǎn)錄病毒的儲存方法本發(fā)明提供了一種用于儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的方法，該方法包含以解凍狀態(tài)在固定在固體支持體上的具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)存在的條件下維持逆轉(zhuǎn)錄病毒。對根據(jù)本發(fā)明的方齒頓的用于儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的容器沒有特別柳蹄lj，只要其適于儲存生物學(xué)材料(例如細胞或，樣品)或可用于培養(yǎng)細胞即可。其實例包括培養(yǎng)平板、培養(yǎng)瓶、分離袋和3tn的培養(yǎng)袋。根據(jù)本發(fā)明，對固定有具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)的固體支持體沒有特別的限制。可以使用各種形式的固體支持體，包括珠和纖維。本發(fā)明使用由在細胞培養(yǎng)期間當(dāng)與細胞接觸時對細胞維持或生長無有害影響的材料制成的固體支持體。在一個的實施方案中，將以上所述用于儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的容器用作固定具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)的固體支持體。在該實施方案中，與內(nèi)容物接觸的容器表面涂上具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)。具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)包括纖連蛋白、具有肝素-n結(jié)構(gòu)域的纖連蛋白片段(CH-296(RetroNectin)，CH-271,H-296等)、成纖維細胞生長因子、具有V型膠原的胰島素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽、DEAE-葡聚糖和聚賴氨酸。對將具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)固定在固體支持體表面的方法沒有特別柳蹄U。可選擇適于要使用的具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)的方法。在示例的方法中，使包含該物質(zhì)的緩沖液與用i頓的固體支持體接觸靜置一定時間段。專利文件2和3也描述了固定該物質(zhì)的方法。雖然不預(yù)期限制本發(fā)明，但根據(jù)本發(fā)明tm斷氐與包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的溶液接觸的空氣量。本發(fā)明的一個實施方案以一種方法為例，其中使用的容器具有裝盛溶液的結(jié)構(gòu)，從而使溶液不與空氣接觸。如果4頓固定體積的容器，那么該實施方案可通過用包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的溶液裝滿容器來實現(xiàn)。選擇性地，可以容納任意體積的溶液，從而溶液不與空氣接觸。根據(jù)溶液的體積，通過使用由薄膜樣的基體組成的內(nèi)體積可以改變的囊或袋形式的容器可以實現(xiàn)這一點。根據(jù)本發(fā)明使用的容器可以裝盛在密封或不透氣狀態(tài)的包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的溶液。更^[，地，根據(jù)本發(fā)明可JOT市場上可買到的細胞培養(yǎng)袋。^ffi逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞收集的上清液、從上清液中純化的逆轉(zhuǎn)錄病毒等可用作根據(jù)本發(fā)明儲存的逆轉(zhuǎn)錄病毒。例如，根據(jù)本發(fā)明的方法可將以前冷藏的上清液或純化的逆轉(zhuǎn)錄病毒在解凍狀態(tài)下儲存。在本發(fā)明的一個實施方案中，儲存從其^^轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞衍生的組分中分離出來的逆轉(zhuǎn)錄病毒。該實施方案通常按以下步驟進行(1)將在其上固定有具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)的固體支持體與包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞培養(yǎng)物上清液接觸的步驟；(2)洗滌步驟(1)的固體支持體的步驟；以及(3)將步驟(2)所獲得的固體支持體維持與緩沖液相接觸的步驟。如果利用預(yù)先已純化的逆轉(zhuǎn)錄病毒代替逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞的上清液，則步驟(2)可省略。在該實施方案中，逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染力保持在較高的水平，因為阻抑了由逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細11±清^^含組分弓l起的逆轉(zhuǎn)錄病毒的滅活。對逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)的方法沒有特別的限制。例如，結(jié)合可按如下所皿行；將逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞培養(yǎng)物上清液與在其上固定有該物質(zhì)的固體支持體接觸靜置；利用離心力使逆轉(zhuǎn)錄病毒沉淀在固體支持體表面；或搖動裝有固體支持體和逆轉(zhuǎn)錄病毒的容器。從容器中取出上清液，作為戰(zhàn)方法的結(jié)果，逆轉(zhuǎn)錄病毒M31結(jié)激轉(zhuǎn)錄病毒物質(zhì)與所述容器相結(jié)合，任選地洗滌固體支持體(例如，容器本身)，并將適于儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的溶液加入容器中。對用來洗滌結(jié)合有逆轉(zhuǎn)錄病毒的固體支持體的溶液沒有特別柳蹄U，只要它不顯著地降低儲存的逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染力。例如，可以使用生S^水、磷酸緩沖鹽水或與用于培養(yǎng)逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞的相同的培養(yǎng)基。特別是，使用如下所述用來儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的溶液。由于逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞的上清液包含抑制細胞被逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的物質(zhì)，所以與其他逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞衍生的組分分開保存的逆轉(zhuǎn)錄病毒有利于用于感染細胞。根據(jù)本發(fā)明，通過與結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄病毒物質(zhì)相結(jié)合并與適當(dāng)溶液相接觸來儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒。雖然對該步驟所用的溶液沒有特別的限制，只要其不顯著降低儲存的逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染力即可，但tt^MCT包含磷酸鹽(磷酸鈉、磷酸鉀等)作為緩沖組分的緩沖液。該溶液可進一步包含糖類(葡萄糖、半乳糖、乳糖、甘露糖醇等)、蛋白質(zhì)(清蛋白、膠原(明膠)等)或另一種組分(無機鹽、多元醇、AifiL清等)作為穩(wěn)^轉(zhuǎn)錄病毒的組分。根據(jù)以上戶;M儲存方法可將逆轉(zhuǎn)錄病毒在解凍狀態(tài)下儲存。然而，儲存的逆轉(zhuǎn)錄病毒感染細胞的能力保持在比儲存的逆轉(zhuǎn)錄病毒培養(yǎng)物上清液更高的水平上。雖然對本發(fā)明沒有特別的限制，但是根據(jù)本發(fā)明低溫儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的時間段為24小時或以上，48小時或以上，更優(yōu)選72小時或以上。如此處所《頓的，低溫指15'C或以下，在戶服鵬要儲存的溶液不冷凍。tt將逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存于O-l(TC。根據(jù)本發(fā)明的方t封諸存在容器中的逆轉(zhuǎn)錄病毒可按照原樣用于感染。如果該逆轉(zhuǎn)錄病毒為攜帶外來基因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒，則可通過該方法將基因轉(zhuǎn)移到細胞中。例如，可以通過在將容器中的溶液更換成適于用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染細胞的溶液之后(或者，如果儲存的溶液適于用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的話，則無須更換)，將想要感染的細胞加入容器來進行逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染。替代地，可通過向取出了所裝溶液的儲存容器中加^胞懸浮液行逆轉(zhuǎn)錄病毒的感染。可在靜置培養(yǎng)中進行感染步驟?？蛇x擇地，可根據(jù)方法進行感染步驟，在戶，方法中通過施用離心力將細胞沉淀到固定有具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)的固體支持體表面上使逆轉(zhuǎn)錄病毒與細胞相接觸。用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染的耙細胞可以按照原樣在容器中培養(yǎng)，或者也可在進行上述方法之后將其轉(zhuǎn)移至拐一個容器中且然后培養(yǎng)。如果結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄病毒的物質(zhì)對耙細胞也有親和力，則作為上述方法的結(jié)果，耙細胞與逆轉(zhuǎn)錄病毒共定位在容器表面。然后，高效發(fā)生逆轉(zhuǎn)錄病毒對耙細胞的感染。例如，可通過使用攜帶目的外因的重組逆轉(zhuǎn)錄病毒和具有造血干細胞結(jié)合活性的多肽CH-296,來高效地將基因方便地轉(zhuǎn)移到造血干細胞中。本發(fā)明的另一個實施方案以一種逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存方法為例，其中4頓了固定有具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)和具有耙細胞結(jié)合活性的物質(zhì)的固體支持體。根據(jù)該方法，使用在其中與具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)及具有耙細胞結(jié)合活性的物質(zhì)一起儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的容器，作為用于用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染耙細胞的容器。因此，該方法對于需要高效和減細IM擇性的基因轉(zhuǎn)移的基因治療領(lǐng)鄉(xiāng)其有用。用于上述實施方案的具有耙細胞結(jié)合活性的物質(zhì)的實例包括但不限于，能識別靶細胞的蛋白質(zhì)或肽(識別耙細胞表面組分的抗體或受體、耙細胞表面受體的配體(生長因子、激素、細胞因子等))、凝集素、辦連和糖脂。在非專利文獻3中也描述了此類物質(zhì)和其固定方法。(B)本發(fā)明的組合物本發(fā)明提供了適于儲存形式的包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的組合物。該組合物中的逆轉(zhuǎn)錄病毒包含于容器中，與在固體支持體上固定的具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)結(jié)合?？筛鶕?jù)關(guān)于逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存方法的上述說明制備該組合物。具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)可由根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄病毒的儲存方法艦的戰(zhàn)物質(zhì)示例。在本發(fā)明的一個實施方案中，示例的組合物包含溶液中的逆轉(zhuǎn)錄病毒，該溶液不與空氣相接觸。可將組合物從其他逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞衍生的組分中分離出來。這樣，雌組合物進一步包含適于逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存的溶液。根據(jù)逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存的方法可^ffi的，溶液可用作適于逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存的溶液。盡管根據(jù)本發(fā)明4頓的容器沒有特別的限制，只要它適于生物學(xué)材料的儲存(例如，細胞或體液樣品)或可用于培養(yǎng)細胞，但該容器能以密封或不透氣狀態(tài)來容納包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的溶液。例如，可使用市場上可買到的細胞培養(yǎng)袋。本發(fā)明的包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的組合物具有極好的儲存穩(wěn)定性，并可立即用于用逆轉(zhuǎn)錄病毒感染細胞。因此，它對逆轉(zhuǎn)錄病毒的研究以及在醫(yī)學(xué)領(lǐng)域，尤其是在{頓重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的基因治療領(lǐng)域中很有用。實施例下列實施例對本發(fā)明進行了更詳細的說明，但不l鵬釋為限制了其范圍。實施例11.涂有CH-296的平板的制備將濃度為20iug/ml的500iLU纖連蛋白片段CH-296(產(chǎn)品名RetroNectin;TakamBio)加入到?jīng)]有進行表面處理的2冬孔平板(Falcon)的旨孔中。使該平板在4。C靜置過夜，在室，2%BSA/PBS封閉30射中，并用PBS洗滌。該平板ICT作涂有CH-296的平板，且在需要時制備。2.逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的制備如下所述構(gòu)，轉(zhuǎn)錄病毒載體質(zhì)粒pDOG-polH。首先，利用限制酶Nhel和Notl切割rsGFP皿載體pQBI25(Qbiogene)以得到775-bpGFP基因片段。然后，利用限制酶NheI和NotI切割pQBIpoin(Qbiogene)，來取出rsGFP-NeoR融合基因。將此前獲得的775-bpbGFP基因片段插入，以得到載體pQBIpoin(neo-)，其中在poin啟動子控制下魏rsGFP基因。禾,限制酶Xho1消化pQBIpolH(neo-)，以獲得包含在polH啟動子控制下的GFP皿單位的DNA片段。用DNA平端化試劑盒(TakamBio)使末端平端化。將用限制酶Xhol和Sphl消化逆轉(zhuǎn)錄病毒載體質(zhì)粒pDON-AI(TakaraBio)獲得的4.58kbp載體片段的末端利用DNA平端化試劑盒(TakamBio)平端化，然后用堿性磷酸酶(TakamBio)去磷酸化。4頓DNA連接試劑盒(TakaraBio)，將此前平端化的包含在polH啟動子控制下的rsGFP皿單位的DNA片段插入該平端化載體，以獲得rsGFP韃重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體pDOG畫poin。利用載體pDOG-polH和逆,病毒包裝i式劑盒Eco(TakaraBio)進行瞬時病毒生產(chǎn)，來獲得親嗜性病毒DOG-poin。利用親嗜性病毒DOG-polH，在RetroNectin(TakaraBio)存在的情況下，感染GaLV逆轉(zhuǎn)錄病毒^細胞PG13(ATCCCRL-10686),以獲得基因-轉(zhuǎn)化的細胞PG13/DOG-poin。將PG13/DOG-polH在包含10%胎牛血清(ThermoTrace)的Dulbecco氏改進Eagle培養(yǎng)基(DMEM，Sigma)中培養(yǎng)。當(dāng)細胞生長到半?yún)R合時，將培養(yǎng)基更換成0.1ml/cm2的包含10。/。胎牛血清的il羊DMEM。24小時之后，將上清液M:0.45|Lim過濾器(Mllipore)過濾，以獲得GaLV/DOG-poin病毒的上清液。將如此得到的病毒上清液的等分試樣保存在-8(TC的冷凍機中，并進行以后的儲存和基因轉(zhuǎn)移實驗。3.病毒上清液效價的測量根據(jù)標(biāo)準方法(Markowitz，D,等人，J.Virol.，62(4):1120-1124(1988))，利用HT-1080細胞(ATCCCCL-121)測量病毒上清液的效價。具體地說，將含有10%胎牛血清的2毫升DMEM中的5xl04HT-1080細胞加入到6孔組織培養(yǎng)平板的每個孔中，并在5%C02，37。C條件下培養(yǎng)過夜。通過吸取除去培養(yǎng)基將1毫升連續(xù)稀釋的病毒上清液加入L中，另外向其中加入終濃度為8|ag/ml的海地美溴銨(溴化己二甲銨，Aldrich)。在5%C02、37。C條件下培養(yǎng)細胞4到6小時。另外向其中加入1毫，含10%胎牛血清的DMEM，并繼纟彭咅養(yǎng)72小時。用'M細胞儀FACSVantage(Becton-Dickinson)對從平ISJ:收集的細M行分析，并測定皿rsGFP的HT-1080細胞的比率。根據(jù)由每L輸/iffl胞的數(shù)目乘以，rsGFP的細胞的比率和病毒上清液的稀釋比率所獲得的值，計算在1毫升上清液中感染tW粒的數(shù)目(I.VP./ml)，來測定病毒效價。實施例1-2制備的病毒上清液的效價在1.9xl05I.VP./ml到4.5xl05I.VPyml范圍內(nèi)。實施例2《OT涂有CH-296的平ltt儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒(1)利用K-562細胞(ATCCCCL-243)估定GaLV/DOG-polH病毒上清液的活性。將K-562細胞在包含10。/。胎牛血清(ThemioTrace)的RPMI-1640培養(yǎng)基(Sigma)中培養(yǎng)。將250!xl的GaLV/DOG-polH病毒上清液(原始濃度)加入24孑L涂有CH-296的平板的^孔中，在37匸條件下在5%0)2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)該平板4小時，以結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。用500nl的PBS(磷酸緩沖S7jO、0.1%牛血清清蛋白(BSA，F(xiàn)ractionV，Sigma)的PBS溶液、1%牛血清清蛋白的PBS溶液、X-VIVO15(Cambrex)、X-VIVO10(Cambrex)、IMDM(Invitrogen)或RPMI1640(Sigma)洗滌*孔兩次。用500pl相同的溶液充滿孔，并將該平板在4°C溫育7天。另外，向針孔加入病毒上清液，并溫育該平板7天，其中不進行洗滌(病毒上清液按照原#^顯育)。在第7天，取出溶液，加入500W包含密度為4xl04個細lfi/ml的K-62細胞的懸浮液，并在5%C02，37。C^f牛下培養(yǎng)細胞，以用于基因轉(zhuǎn)移。作為對照，用相同批次的病毒上清液和相同方法制備病毒結(jié)合的平板，并為了基因轉(zhuǎn)移立即加入K-562細胞，而不在4X:溫育。使用rsGFP基因的皿作為指標(biāo)，測定細胞的基因轉(zhuǎn)移效率。圖1顯示了溫育7M后，相對于對照所觀察到的轉(zhuǎn)移效率的病毒基因轉(zhuǎn)移效率的值。如圖1戶標(biāo)，i頓所有溶液的比按照原樣靜置的病毒上清^^觀察到的保持更高的活性。因此，表明對從逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞上清液分離出來的逆轉(zhuǎn)錄病毒的儲存是有效的。特別地，證明了包含牛血清清蛋白的溶液在穩(wěn)定儲存上是有效的。實施例34OT涂有CH-296的平板儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒(2)在實施例2中表明通過洗滌逆轉(zhuǎn)錄病毒-結(jié)合的容器增加了儲存穩(wěn)定性。接下來，檢查下列物質(zhì)對逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存的影響以尋找能更有助于增加儲存穩(wěn)定性的溶液，這，質(zhì)包括無機鹽(磷酸鈉；氯化f丐和硫勝美的混合物；磷酸鈉、氯化鈣和硫酸鎂的混合物)；糖類(葡萄糖；D"山梨糖醇；精制白糖；麥芽糖；果糖；乳糖；D-甘露糖醇)；大分子化合物(羧甲基纖維素鈉；甲基纖維素；羥丙基纖維素；丙二醇；聚乙二醇400);蛋白質(zhì)(純化的明膠；AifiL清清蛋白(HSA))。戰(zhàn)物質(zhì)中，無機鹽溶于注射用水，且其他物質(zhì)溶于PBS。然后，測試其對逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存穩(wěn)定性的作用。除了在37"C進行逆轉(zhuǎn)錄病毒-結(jié)合的容器的儲存溫育3小時外，研究方法謝盾實施例2。結(jié)果，與只用PBS相比，使用下列物質(zhì)觀察到逆轉(zhuǎn)錄病毒載體儲存的穩(wěn)定性增加，這些物質(zhì)為40mM磷勝內(nèi)緩沖液(pH7);0.5mM氯化轉(zhuǎn)和1mM硫酸鎂的20mM磷酸緩沖液溶液(pH7);1.5-20。/。AJL清清蛋白的PBS溶液；0.5-2.5%純化的明膠的PBS溶液；或5。/。乳糖的PBS溶液。作為上述觀賦的結(jié)果，禾,40mM磷M緩沖液作為基碰凝懼有優(yōu)于PBS的傾向，而且蛋白質(zhì)和糖類也增加了穩(wěn)定性。然后，利用下列物質(zhì)按照實施例2描述的方法在4。C進行7天的逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存的穩(wěn)定性觀賦，這働質(zhì)為P/。牛血清清蛋白的PBS溶液；1.5G/。Aifil清清蛋白的40mM磷酸緩沖液溶液；0.5%純化的明膠的40mM磷髒內(nèi)緩沖液溶液；或5。/o乳糖的40mM磷酸鈉緩沖液溶液。在所有情況中磷,緩沖液的pH均為7.0。計算了7天溫育后，相對于對照所觀察到的轉(zhuǎn)移效率的病毒基因轉(zhuǎn)移效率的值，并在圖2顯示。如圖所示，表明在更換成各個溶液之后，與按照原樣進t，轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞上清液的儲存相比，儲存的儲存穩(wěn)定性有了顯著增加。實施例4在各種功能性物質(zhì)存在下儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒在該實施例中，用顯^轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性和細鵬占著活性的功能性物質(zhì)估定儲存穩(wěn)定性。除了CH-296之外，可使用下列物質(zhì)作為顯示逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性和細胞粘著活性的功能性物質(zhì)CH-271或H-296(Kimizuka，F(xiàn).等人，J.Biochem.，110(2);284-291(1991));DEAE-葡聚糖(Sigma);聚畫L-賴氨酸(平均分子量30,000到70,000，ICN);DEAE-葡聚糖和纖連蛋白片段C-CS1的混合物(Kimizuka，F(xiàn).等人，J.Biochem.，110(2):284-291(1991));或聚-L國賴氨酸和C-CS1的混合物。向未進行表面處理的24孑L平板(Falcon)的旨孔中加入500pl的纖連蛋白片段CH-296、CH-271或H-296(20|ug/ml)、DEAE-葡聚糖的PBS溶液(0.9mg/ml)或聚-L-賴氨酸的PBS溶液(40pg/ml)。ffl31向終濃度為4.4fig/ml的DEAE-葡聚糖溶液或聚-L-賴氨酸溶液中加入C-CS1，來制備DEAE-葡聚糖和C-CS1的混合物以及聚-L-賴氨酸和C畫CSl的混恤將平板在4。C靜置過夜，在室溫利用2%BSA/PBS封閉30倂中，并用PBS洗滌。將此平板用作涂有功能性物質(zhì)的平板，并用于逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存穩(wěn)定性測試。根據(jù)如實施例2戶艦方法用涂有各種功能性物質(zhì)的平,t彌轉(zhuǎn)錄病毒儲存穩(wěn)定性測試。以下列三種病毒儲存方式進行測試按照原樣儲存病毒上清液;將其儲存在40mM磷勝內(nèi)緩沖液(pH7.0)中；及將其儲存在1.5。/。Aifl清清蛋白的40mM磷聯(lián)內(nèi)緩沖液溶液(pH7.0)中。計算了7天溫育后，相對于對照所觀察到的轉(zhuǎn)移效率的病毒基因轉(zhuǎn)移效率的值，并在表1顯示。不僅^ffi涂有具有纖連蛋白的肝素-n結(jié)構(gòu)域的多肽(CH-296、CH-271或H-296)的平板，而且j頓涂有DEAE-葡聚糖或繊氨酸的平板，來保持高水平的基因轉(zhuǎn)移效率。表明用這樣的物質(zhì)儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒是有效的。另外，與具有細胞-結(jié)合活性的物質(zhì)(C-CS1)共存不影響使用，物質(zhì)進行的儲存。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>實施例5用透氣培養(yǎng)袋儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒把CH-296用于未經(jīng)表面處理的24孑L平板(Falcon)皿氣培養(yǎng)袋(X-FOLD，85cm2，Nexell)中，并進行下列實驗。如下戶;fii用CH-296涂布X-FOLD。首先，向齡袋中加入9mlCH-296(20|ag/ml)，并使袋在4。C靜置過夜。然后用30ml的PBS洗滌^H次，來獲f縣有CH-296的袋。根據(jù)如實施例1戶腿的方法用CH-296涂布24孑L平板。向涂有CH-296的24孑L平板的^h孔中加入500|iilGaLV/DOG-polU病毒上清液的4倍##物，并在37。C在5%C02培養(yǎng)箱中溫育平板4小時以結(jié)激轉(zhuǎn)錄病毒載體。向X-FOLD中加入22ml相同的GaLV/polD病毒上清液稀釋物，從袋中除去空氣，給袋密封，并在5%C02，37X:溫育4小時以結(jié)傻轉(zhuǎn)錄病毒載體。用40mM磷勝內(nèi)緩沖液(pH7.0)或1.5。/oAlfil清清蛋白的40mM磷勝內(nèi)緩沖液溶液(pH7.0)(24孑L平板艦500^U，袋艦30ml)洗滌容器兩次。用相同溶液充滿L或袋；如果是袋，在排出空氣后密封袋；在4。C溫育該平板或袋7天。另外，向涂有CH-296的平板或涂有CH-296的袋中加入相同的病毒上清液稀釋物；如果是袋，在排出空氣后密封袋；并仍然在4"C溫育該平板職7天。在第7天，從容器中取出溶液，加入包含密度為4xl04個細胸ml的K-562細胞的懸浮液(24孑L平板4頓500|il，袋{頓22ml)，并在5%C02，37。C溫育此平板或袋，皿行基因轉(zhuǎn)移。作為對照，用相同批次的病毒上清液和同樣的方法制鍋眷結(jié)合的容器，并立即加入K-562細胞，而不在4'C下溫育，鄉(xiāng)行基因轉(zhuǎn)移。計算了7天溫育后，相對于對照所觀察至啲基因轉(zhuǎn)移效率的基因轉(zhuǎn)移效率的值。當(dāng)按原樣將逆轉(zhuǎn)錄病毒上清液稀釋物保存在平板中時，與對照相比，觀察到基因轉(zhuǎn)移效率僅為10%#低。另一方面，當(dāng)在密封袋中進行儲存或當(dāng)將逆轉(zhuǎn)錄病毒與CH-296結(jié)合后洗滌容器(平板或袋)來更換溶液時，觀察到基因轉(zhuǎn)移效率與對照相比超過了60%。根據(jù)這些結(jié)果，表明當(dāng)轉(zhuǎn)錄病毒在具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)存在下儲存時，通過防止包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的溶液接觸空氣和/劍每逆轉(zhuǎn)錄病毒與逆轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細紙清液分離，顯著阻抑了逆轉(zhuǎn)錄病毒感染力的降低。實施例6逆轉(zhuǎn)錄病毒的長期儲存利用包含10%胎牛血清的RPM-1640培養(yǎng)^釋GaLV/DOG-poin病毒上清液(3.3xl0M.VP./ml)，來制備2倍，物。向按照實施例1所述制備的涂有CH-296的24孑L平板的針孔中加入500##物，在37°。在5%(302培養(yǎng)箱中溫育此平板4小時以結(jié)合逆轉(zhuǎn)錄病毒載體。用500的40mM磷,緩沖液(pH7.0)或1.5。/。Ml清清蛋白的40mM磷,緩沖液溶液(pH7.0)來洗》評板的每個孑L兩次。用相同的緩沖液充滿孔，在4"C溫育該平板。另外，向每個孔中加入病毒上清液的2倍##物，并在4'C溫育該平板，不進份先滌(按照原樣溫育病毒上清液)。在溫育開始后l、2、3或4周取出溶液，加入500W包含密度為4xl04個細鵬ml的K-562細胞的懸浮液，并在5%C02，37。C培養(yǎng)細胞，5j6i行基因轉(zhuǎn)移。對于按照原樣與病毒上清液溫育的孔，用500(al的40mM磷酸鈉緩沖液(pH7.0)洗滌L一次，加入500^1的包含密度為4xl04個細鵬ml的K-562細胞的懸浮液，并在5%0)2，37'C培養(yǎng)細胞，^S行基因轉(zhuǎn)移。作為對照，用相同批次的病毒上清液和同樣方法制鍋^"結(jié)合的平板，并立即加入K-562細胞，其中不在4匸進行溫育，鄉(xiāng)行基因轉(zhuǎn)移。測定接受基因轉(zhuǎn)移的細胞的基因轉(zhuǎn)移效率。計算各自實驗組的相對于對照所觀察到的轉(zhuǎn)移效率的病毒基因轉(zhuǎn)移效率(即剩余效價(remainingtiters))的值，并在表2顯示。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>(表格中顯示百分比值)如表2所示，當(dāng)按照原樣儲存病毒上清液時，兩周后效價減少了1/10或更低。另一方面，當(dāng)從培養(yǎng)物上清液(用另一種緩沖液替代培養(yǎng)物上清液)中分離出逆轉(zhuǎn)錄病毒時，儲存4周后{親40%或更高的效價。當(dāng)4柳包含蛋白質(zhì)(AlfiL清清蛋白)的緩沖液時，觀察至腫寺別優(yōu)良的儲存穩(wěn)定性。實施例7^f華的逆轉(zhuǎn)錄病毒的儲存利用包含10%胎牛血清的RPM-1640培養(yǎng)^釋GaLV/DOG-poin病毒上清液(3.3x105I.VPyml)，來制備2、4、8或16倍^f鞭。向按照實施例1所述制備的涂有CH-296的24孔平板的每個孔中加入500稀釋物，在37'C在5%C02培養(yǎng)箱中溫育此平板4小時以結(jié)，轉(zhuǎn)錄病毒載體。用500|al的40mM磷勝內(nèi)緩沖液(pH7.0)或1.5。/。AlfiL清清蛋白的40mM磷,內(nèi)緩沖液溶液(pH7.0)來微評板的^孔兩次。用500W相同的緩沖液充滿孔，并在4。C溫育該平板。另外，向每個孔中加入病毒上清液的一種稀釋物，并在4'C溫育該平板，不進t節(jié)先滌(按照原樣溫育病毒上清液)。在溫育開始后1、2、3或4周取出溶液，加入500iol包含密度為4xl04個細胞/ml的K-562細胞的懸浮液，并在5%C02，37"C培養(yǎng)細胞，皿行基因轉(zhuǎn)移。對于按照原樣與病毒上清液溫育的孔，用500pi的40mM磷勝內(nèi)緩沖液(pH7.0)洗滌孔一次，加入500pl的包含密度為4xl04個細胞/ml的K-562細胞的懸浮液，并在5%C02，37卩培養(yǎng)細胞，，行基因轉(zhuǎn)移。作為對照，用相同批次的病毒上清液和同樣方法制鍋眷結(jié)合的平板，并立即加入K-562細胞，而不在4'C溫育，^3t行基因轉(zhuǎn)移。測定接受基因轉(zhuǎn)移的細胞的基因轉(zhuǎn)移效率。計算了各自實驗組的病毒基因轉(zhuǎn)移效對目對于對照所觀察到的轉(zhuǎn)移效率的值，如表2所示。計算儲存后相對于對照所觀察到的轉(zhuǎn)移效率的病毒基因轉(zhuǎn)移效率(即剩余效價)的值，并在表3顯示。3<table>tableseeoriginaldocumentpage18</column></row><table>如表3所示，當(dāng)按照原樣儲存病毒上清液的,物時，不管稀釋比率如何，觀察到的效價都fflil斷氐。另一方面，當(dāng)將病毒上清液的,物結(jié)合在平板上，并用另一種緩沖液替代培養(yǎng)物上清液時，效價的降低被顯著阻抑了。使用的病毒上清液的稀釋比率對于病毒效價的儲存穩(wěn)定性沒有明顯影響。特別地，當(dāng)使用包含蛋白質(zhì)(AifiL清清蛋白)的緩沖液時，根本觀察不到稀釋比率的影響。根據(jù)這些結(jié)果，表明本發(fā)明的方法對于儲剤氐效^^轉(zhuǎn)錄病毒或##的病毒上清液是有效的。工M用性本發(fā)明提供了一種儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的方法和包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的組合物。根據(jù)該儲存方法，可將逆轉(zhuǎn)錄病毒以準備著立即用于感染細胞的狀態(tài)來保存。因此，它頓轉(zhuǎn)錄病毒研究和包括基因治療在內(nèi)的醫(yī)學(xué)領(lǐng)域中是有用的。組合物在相同領(lǐng)域中也是有用的。權(quán)利要求1.一種儲存逆轉(zhuǎn)錄病毒的方法，該方法包含在固定在固體支持體上的具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)存在下維持逆轉(zhuǎn)錄病毒。2.根據(jù)權(quán)利要求i的方法，其中戶;M^轉(zhuǎn)錄病毒以解凍狀態(tài)維持。3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所，轉(zhuǎn)錄病毒維持在溶液中，該溶液不與空氣接觸。4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中所，轉(zhuǎn)錄病毒與其^M轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞衍生的組分分開維持。5.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中朋，轉(zhuǎn)錄病毒維持在包含磷酸鹽作為緩沖組分的緩沖液中。6.根據(jù)權(quán)利要求4的方法，其中所^M轉(zhuǎn)錄病毒維持在包含選自蛋白質(zhì)和糖類的物質(zhì)的溶液中。7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中戶脫具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)選自具有纖連蛋白的肝素-n結(jié)構(gòu)域的多肽、成纖維細胞生長因子、具有V型膠原的胰島素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽、DEAE-葡聚糖和HM氨酸。8.包含逆轉(zhuǎn)錄病毒的組合物，其中該組合物包含于帶有固體支持體的容器中，所述的固體支持體上固定有具有逆轉(zhuǎn)錄病審結(jié)合活性的物質(zhì)，并且該逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合在具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)上。9.根據(jù)權(quán)利要求8的組合物，其中戶/f^轉(zhuǎn)錄病毒包含于容器內(nèi)的溶液中，該溶液不與空氣接觸。10.根據(jù)權(quán)利要求8的組合物，其中所，轉(zhuǎn)錄病毒包含于容器內(nèi)，與其fe^轉(zhuǎn)錄病毒生產(chǎn)細胞衍生的組分分離。11.根據(jù)權(quán)利要求10的組合物，其進一步包含含有磷酸鹽作為緩沖組分的緩沖液。12.根據(jù)權(quán)利要求10的組合物，其進一步包含溶液中的選自蛋白質(zhì)和糖類的物質(zhì)。13.根據(jù)權(quán)利要求8的組合物，其中戶脫具有逆轉(zhuǎn)錄病^"結(jié)合活性的物質(zhì)是選自具有纖連蛋白的肝素-n結(jié)構(gòu)域的多肽、成纖維細胞生長因子、具有V型膠原的胰島素結(jié)合結(jié)構(gòu)域的多肽、DEAE-葡聚糖和繊氨酸的物質(zhì)。全文摘要一種逆轉(zhuǎn)錄病毒儲存方法，其特征在于在固定在固相上的具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)存在下維持逆轉(zhuǎn)錄病毒。進一步地，提供了一種逆轉(zhuǎn)錄病毒組合物，其特征在于將以結(jié)合到具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)上的形式的逆轉(zhuǎn)錄病毒密封在容器中，所述容器中帶有在其上固定有具有逆轉(zhuǎn)錄病毒結(jié)合活性的物質(zhì)的固相。文檔編號C12N15/09GK101115830SQ20068000420公開日2008年1月30日申請日期2006年2月6日優(yōu)先權(quán)日2005年2月7日發(fā)明者加藤郁之進,奧山洋美,峰野純一,淺田起代藏,片山康,蝶野英人申請人:寶生物工程株式會社