專利名稱：：用于制備加工人參以獲得增加的人參皂甙rg5含量的新穎方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及一種用于制備新穎的加工人參以獲得增加的人參皂武Rg5含量的方法。更具體地說，本發(fā)明涉及一種通過在特定的壓力和溫度范圍內(nèi)處理人參而制備含有更多人參皂甙Rg5的加工人參產(chǎn)品及其提取物的方法。
背景技術(shù)：
：已發(fā)現(xiàn)，人參對(duì)心理壓力具有非特異性的抵抗力，并且顯示出對(duì)人體內(nèi)平衡的保持效果以及其他有效藥理學(xué)活性，例如，高血壓的減輕、胰島素的加強(qiáng)活性、血糖降低活性、肝臟RNA合成的刺激效果、蛋白質(zhì)、葡萄糖及類脂化合物代謝作用或抗癌活性。有很多種屬于五加科的人參屬植物，例如，分布于遠(yuǎn)東地區(qū)或在遠(yuǎn)東地區(qū)培植的人參、北美和加拿大的西洋參、中國(guó)的田七、北美東部地區(qū)的三葉參、日本、中國(guó)和尼泊爾的竹節(jié)參、尼泊爾的喜馬拉雅參、越南的峨嵋參、PanaxElegatior、狹葉竹節(jié)參和羽葉三七等。有三種人參產(chǎn)品已在市場(chǎng)上銷售，即四年參齡、五年參齡和六年參齡人參，并且有報(bào)告稱，秋季培植的六年參齡人參產(chǎn)品是這三種人參中最有效的。具體地說，未去皮人參的皮含有許多皂角苷，其顯示了有效活性。從具有與幾種糖類連接的達(dá)瑪烷骨架的人參分離的人參皂甙皂角苷不同于從其他植物分離的人參皂甙皂角苷。具體地說，有報(bào)告稱，人參含有大約30種皂角苷成分，尤其是人參皂甙Rbl、Rb2、Rc、Rd、Rg、Re等，作為主要的成分。那些皂角苷化合物顯示了各種基于其化學(xué)結(jié)構(gòu)的藥理學(xué)活性和效力，其中，人參皂甙Rg5最近己經(jīng)作為一種藥物而突現(xiàn)了其作用，這是因?yàn)槠渚哂杏行У拿庖咴鰪?qiáng)活性以及血管舒張活性、抗癌活性、神經(jīng)元細(xì)胞保護(hù)活性等。目前，已嘗試加工傳統(tǒng)的人參，以通過在加工過程中改變?nèi)藚⒃斫擒盏慕Y(jié)構(gòu)而獲得更強(qiáng)的功效或效用。韓國(guó)專利注冊(cè)第10-0192678號(hào)公開了一種通過進(jìn)行高溫處理來制備加工人參的工藝，該人參產(chǎn)品具有高含量的人參皂甙Rg5，以獲得經(jīng)加工的人參，其具有不同于原始人參形式的改進(jìn)的效力。但這種加工方法無法就人參皂甙Rg5的含量變化與溫度及內(nèi)部壓力變化之間的關(guān)系提供相關(guān)的信息，并且這種方法需要有毒的有機(jī)溶劑，例如丁醇。為了獲得安全、一致的人參產(chǎn)品，本發(fā)明的發(fā)明人己就新的加工方法進(jìn)行了深入的科學(xué)研究。通過研究，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)了用于制備藥理學(xué)上有效的人參產(chǎn)品的新穎加工方法，通過與傳統(tǒng)的人參及現(xiàn)有技術(shù)中公開的加工人參產(chǎn)品比較證實(shí)，本發(fā)明的人參產(chǎn)品具有更高的人參皂甙Rg5含量，并且他們最終完成了本發(fā)明。
發(fā)明內(nèi)容技術(shù)問題因此，本發(fā)明的目的是提供一種用于制備藥理學(xué)上有效的人參產(chǎn)品的加工方法，這種人參產(chǎn)品具有增加的人參皂甙Rg5含量。技術(shù)方案[10]本發(fā)明提供了一種用于制備藥理學(xué)上有效的人參產(chǎn)品及其提取物的加工方法，其可以最大程度地提高人參皂甙Rg5的含量，該方法的特征在于，以選定范圍的壓力和溫度處理人參。[11]明確地說，本發(fā)明提供了一種用于制備藥理學(xué)上有效的人參產(chǎn)品的加工方法，其由以下步驟所組成將重量大約相當(dāng)于人參重量的1到3倍的水添加到五到七年參齡的人參材料中，優(yōu)選地是六年參齡的人參材料；在1.10到4.00kgf/cm2的內(nèi)部壓力范圍內(nèi)，優(yōu)選地，在未去皮人參的情況下是1.20到1.50kgf/cm2，而在去皮人參的情況下是2.30至lj3.00kgf/cm2，并且在約70到150°C的溫度范圍內(nèi)，優(yōu)選地是110到H0。C，處理1至lj5小時(shí)的時(shí)間，優(yōu)選地是大約2小時(shí)，以獲得具有大量人參皂甙Rg5的目標(biāo)加工人參。[12]在未去皮人參的情況下，通過上述加工方法，本發(fā)明的最終人參產(chǎn)品含有多得多的人參皂甙Rg5含量，大約兩到五倍，明確地說，大約是通過韓國(guó)專利注冊(cè)第10-0192678號(hào)公開的方法制備的加工人參的4.4倍。[13]在去皮人參的情況下，通過上述加工方法，本發(fā)明的最終人參產(chǎn)品含有多得多的人參皂甙Rg5含量，大約兩到五倍，明確地說，大約是通過韓國(guó)專利注冊(cè)第10-0192678號(hào)公開的方法制備的加工人參的3.3倍。[14]本發(fā)明還提供了一種用于提取加工人參的提取物的方法，其由以下步驟所組成采用回流提取法以有機(jī)溶劑的混合物提取通過上述步驟制備的加工人參材料，優(yōu)選地是采用甲醇和二氯甲烷的混合物，更優(yōu)選地是以0.60:1.40到1.20:0.80的混合比率混合的甲醇和二氯甲烷的混合物，更優(yōu)選地是大約l:l(v/v)的甲醇和二氯甲烷混合物，持續(xù)時(shí)間為1小時(shí)到兩天，優(yōu)選地是1小時(shí)以上；進(jìn)行過濾，以獲得濾液，將濾液濃縮，以除去剩余的溶劑，并進(jìn)行干燥，以獲得具有大量人參皂甙Rg5的有效人參提取物。[15]本發(fā)明優(yōu)選地使用本文公開的六年參齡"人參材料"，因?yàn)榱陞g人參顯示了比四年參齡人參更高的人參皂甙Rg5含量，這一點(diǎn)可以通過本發(fā)明人執(zhí)行的以下實(shí)驗(yàn)予以確認(rèn)。[16]本文公開的"人參材料"包括其葉子(有報(bào)告稱葉子是無用的)以及本發(fā)明的人參的根部，因?yàn)榻?jīng)確認(rèn)，本發(fā)明的人參的經(jīng)加工的葉子顯示了與人參根部同等的人參皂甙Rg5含量，這一點(diǎn)可以通過木發(fā)明人執(zhí)行的以下實(shí)驗(yàn)予以確認(rèn)。[17]如此加工的人參或其提取物可以通過已知的方式干燥，以獲得干燥的加工人參，例如，在低溫下干燥，即低于70°C的溫度，干燥時(shí)間為48至'J60小時(shí)或采用冷凍干燥方法，并且如有必要，其可以通過本領(lǐng)域眾所周知的方法進(jìn)一歩加工，以粉碎或粉化成更小的尺寸，優(yōu)選地，尺寸范圍為50到200微米，以通過醫(yī)藥上可接受的載劑或佐劑制備市售的最終產(chǎn)品，例如膠囊劑、片劑等。[18]本發(fā)明的新穎加工人參含有豐富的人參皂甙Rg5，其顯示了有效藥理學(xué)活性，例如血管舒張活性、免疫增強(qiáng)活性、抗癌活性、神經(jīng)元細(xì)胞保護(hù)活性等，尤其是抗癌活性。[19]因此，本發(fā)明還提供了一種醫(yī)藥組成物，其包括通過上述加工方法制備的人參提取物以及醫(yī)藥上可接受的載劑或佐劑，用于治療或預(yù)防癌病，并且本發(fā)明的方法可以通過采用選定范圍的壓力和溫度而最大程度地提高人參皂甙Rg5的含量。[20]本文所述的術(shù)語(yǔ)"癌"包括各種癌，例如胃癌、肝癌、肺癌、宮頸癌、皮膚癌或胸癌，特別是皮膚癌。[21]本發(fā)明的人參提取物具有有效的抗癌活性，因此，本發(fā)明的醫(yī)藥組成物可以用于治療或預(yù)防各種癌病。[22]本發(fā)明還將通過上述加工方法制備的人參提取物用于制造治療或預(yù)防各種癌癥用的藥物，例如胃癌、肝癌、男性肺癌和宮頸癌、皮膚癌、胸癌。[23]根據(jù)本發(fā)明的另一方面，還提供了種治療或預(yù)防各種癌癥的方法，例如胃癌、肝癌、男性肺癌和宮頸癌、胸癌，其中，該方法包括服用通過上述加工方法制備的一定量有療效的人參提取物。[24]本發(fā)明的組成物可以根據(jù)使用方法額外地包括傳統(tǒng)的載劑、佐劑或稀釋劑。優(yōu)選地，根據(jù)用途及應(yīng)用方法將該載劑用作適當(dāng)?shù)奈镔|(zhì)，但不限于此。Remington'sPharmaceuticalScience(賓夕》去尼亞州伊其j屯頁(yè)MackPublishing公司)的書面文本中列出了適當(dāng)?shù)南♂寗?。[25]下文的配制方法及賦形劑只是舉例說明，絕非限制本發(fā)明。[26]根據(jù)本發(fā)明的組成物可以作為醫(yī)藥組成物提供，其含有醫(yī)藥上可接受的載劑、佐劑或稀釋劑，例如，乳糖、右旋糖、蔗糖、山梨糖醇、甘露醇、木糖醇、赤藻糖醇、麥芽糖醇、淀粉、阿拉伯樹膠、藻酸鹽、明膠、磷酸鈣、硅酸鈣、纖維素、甲基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮、水、羥苯甲酯、羥苯丙酯、滑石、硬脂酸鎂及礦物油。配方可以額外地包括填充物、抗粘劑、潤(rùn)滑劑、潤(rùn)濕劑、調(diào)味劑、乳化劑、防腐劑等。可以通過本領(lǐng)域眾所周知的任何過程配制本發(fā)明的組成物，以便在病人服用這些組成物之后，快速、持續(xù)或延遲釋放活性組分。[27]例如，本發(fā)明的組成物可以溶解在油、丙二醇或其他常用于生產(chǎn)注射劑的溶劑。.載劑的適當(dāng)例子包括生理鹽水、聚乙二醇、乙醇、植物油、豆蔻酸異丙酯等，但不限于這些物質(zhì)。對(duì)于局部給藥，本發(fā)明的化合物可以以軟膏和霜?jiǎng)┑男问脚渲啤28]含有本組成物的醫(yī)藥配方可以任何形式制備，例如，口服劑型(散劑、粉劑、顆粒、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、液體藥劑、糖漿、酏劑丸劑、溶液、香囊、顆粒)或局部制劑(霜?jiǎng)?、軟膏、洗劑、凝膠、香油、貼片、糊劑、噴霧液、氣溶膠等)，或可注射制劑(溶液、懸浮劑、乳劑、注射劑)。[29]本發(fā)明的醫(yī)藥劑型組成物可以以其醫(yī)藥上可接受的鹽的形式使用，也可以單獨(dú)或者適當(dāng)組合使用，以及與其他具有醫(yī)藥活性的化合物結(jié)合使用。[30]本發(fā)明的提取物或組成物的所需劑量根據(jù)病人的狀況和體重、嚴(yán)重性、藥物劑型、給藥途徑和周期而變化，并且可以由本領(lǐng)域的技術(shù)人員選擇。但是，為了獲得理想的效果，一般建議以0.2-200mg/kg的劑量給藥，優(yōu)選地是2到100mg/kg，這是以單位體重每天服用的本發(fā)明的新穎提取物或化合物計(jì)算的。該劑量可以每天一次或者每天分成幾次給藥。就組成物而言，應(yīng)存在以重量計(jì)占0.01到80%的復(fù)合草本組成物，優(yōu)選地是以組成物的總重量計(jì)占0.5到50%。[31]本發(fā)明的醫(yī)藥組成物可以通過各種途徑向患病的動(dòng)物給藥，例如，哺乳動(dòng)物(老鼠、家畜或人)。本發(fā)明涵蓋所有給藥模式，例如，口服、直腸投藥或通過靜脈、肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、胸內(nèi)、硬膜外或側(cè)腦室注射給藥。[32]因此，本發(fā)明的另一個(gè)目的是提供一種保健食品，其含有通過以上加工方法制備的上述提取物以及營(yíng)養(yǎng)學(xué)上可接受的添加劑，以防止各種疾病。[33]上述組成物可以用于預(yù)防或減輕各種癌病。為了預(yù)防或減輕各種癌病，其中，上述提取物的含量一般可以為保健食品組成物的食品總重量的約0.1到15w/w%，優(yōu)選地為1至U10w/w%，并且以100g的保健飲料組成物的比率計(jì)算為1到30g，優(yōu)選地為3到10g。本發(fā)明的組成物可以通過各種途徑向患病的動(dòng)物給藥，例如，哺乳動(dòng)物(老鼠、家畜或人)。本發(fā)明涵蓋所有給藥模式，例如，口服、直腸投藥或通過任何形式的靜脈、肌內(nèi)、皮下、皮內(nèi)、胸內(nèi)、硬膜外或側(cè)腦室注射給藥，例如口服劑型(散劑、粉劑、顆粒、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、糖漿、酏劑丸劑、溶液或香囊)。[34]假如本發(fā)明的保健飲料組成物含有指定比率的上述提取物作為必要成分，則對(duì)其他液體成分沒有特別限制，其中，其他成分可以是各種除臭劑或天然糖等，例如傳統(tǒng)的飲料。上述天然糖的例子是單糖，例如葡萄糖、果糖等；二糖，例如麥芽糖、蔗糖等；傳統(tǒng)糖類，例如糊精、環(huán)式糊精；以及糖醇，例如木糖醇、赤藻糖醇等。作為除上述除臭劑以外的其他除臭劑，可以使用天然除臭劑，例如Taumatin;甜葉菊提取物，例如LevaudiosideA、甘草甜素等；以及合成除臭劑，例如糖精、阿斯巴甜等。以100g本發(fā)明的飲料組成物的比率計(jì)算，上述天然糖的含量一般為約1到20g，優(yōu)選地為5到12g。[35]除上述成分以外的其他成分為各種營(yíng)養(yǎng)、維生素、礦物質(zhì)或電解液、合成調(diào)味劑、著色劑和改良劑(在干酪巧克力等的情況下)、果膠酸及其鹽、褐藻酸及其鹽、有機(jī)酸、保護(hù)性膠粘劑、pH控制劑、穩(wěn)定劑、防腐劑、甘油、酒精、碳酸飲料等所用的增碳劑。除上述成分以外的其他成分可以是用于制備天然果汁、果汁飲料和蔬菜飲料的果汁，其中，該成分可以單獨(dú)或結(jié)合使用。該成分的比率不是很重要，但其范圍一般為每100w/w%本組成物約0到20w/w%。[36]含有上述提取物的可添加食品的例子是各種食品、飲料、口香糖、復(fù)合維生素、保健食品等。[37]本領(lǐng)域的技術(shù)人員應(yīng)明白，可以在不脫離本發(fā)明的主旨或范圍的情況下，對(duì)本發(fā)明的組成、使用及制備進(jìn)行各種修改和變化。有利效果[38]根據(jù)本發(fā)明的用于制備加工人參的方法可以通過施加選定的特定壓力和溫度而提供豐富的人參皂甙Rg5，其顯示了各種藥理學(xué)活性，并且含有加工人參及其提取物的組成物可以用作藥劑或保健食品，以預(yù)防或治療各種疾病，尤其是癌癥。[39]根據(jù)以下結(jié)合附圖所作的詳細(xì)說明，可以更清楚地了解本發(fā)明的上述及其他目的、特征和其他優(yōu)點(diǎn)，所附圖形包括[40]圖1顯示了人參提取物(Gl-1)[41]圖2顯示了人參提取物(Gl-2)[42]圖3顯示了人參提取物(Gl-3)[43]圖4顯示了人參提取物(Gl-4)[44]圖5顯示了人參提取物(Gl-5)[45]圖6顯示了人參提取物(Gl-6)[46]圖7顯示了人參提取物(Gl-7)[47]圖8顯示了人參提取物(G2-l)[48]圖9顯示了人參提取物(G2-2)[49]圖10顯示了人參提取物(G2-3)的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果；[50]圖11顯示了人參提取物(G3)的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果；[51]圖12顯示了人參提取物(G4)的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果；[52]圖13顯示了人參提取物(STD)的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果；[53]圖14表示人參提取物的抗癌活性。具體實(shí)施方式[54]本發(fā)明將通過以下示例予以更明確地說明。但應(yīng)了解，本發(fā)明不以任何方式限于這些示例。["]比較示例1:根據(jù)韓國(guó)專利注冊(cè)第10-0192678號(hào)公開的過程制備加工人[56]將非干燥及切片的lkg人參根部放入天然藥提取裝置(20L/Kukje-kigong，韓國(guó))中，然后以130°C的蒸汽加熱2小時(shí)。將受蒸的人參在50-60。C下干燥，并粉碎成粉末尺寸為50-200微米的細(xì)粉，以獲得195g人參粉末，用作比較樣本(下稱"STD")。的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果的液相色譜和質(zhì)譜分析的結(jié)果[57]示例1:制備本發(fā)明的未去皮人參提取物[58]1-1.制備人參提取物(Gl-1)[59]將浸入600mL蒸餾水中的風(fēng)干及切片的300g六年參齡未去皮人參根部放入天然藥提取裝置(20L/Kukje-kigong，韓國(guó))，然后加熱2小時(shí)，同時(shí)保持內(nèi)部溫度范圍126。C妾lj130°C及內(nèi)部壓力范圍1.4至U1.5kgf/cm2。將加工人參與水分離，并在60-70。C下干燥，并且粉碎成粉末尺寸為50-200微米的細(xì)粉，以獲得255g人參粉末(產(chǎn)率85.0%)，以用作樣本(下稱"Gl-l")。[60]1-2.制備人參提取物(Gl-2)[61]除了將內(nèi)部溫度改為103°C至U107。C以及將內(nèi)部壓力改為1.40至lj1.50kgf/cm2之外，所有過程都類似于示例1-1中所述的情況，以獲得280g人參粉末(產(chǎn)率93.3%)，以用作樣本(下稱"Gl-2")。[62]1-3.制備人參提取物(Gl-3)[63]除了將內(nèi)部溫度改為110°C至U114°C以及將內(nèi)部壓力改為1.40到1.50kgf/cm2之外，所有過程都類似于示例1-1中所述的情況，以獲得260g人參粉末(產(chǎn)率86.7%)，以用作樣本(下稱"Gl-3")。[64]1-4.制備人參提取物(Gl-4)[65]除了將內(nèi)部溫度改為126°C至lj130°C以及將內(nèi)部壓力改為1.85到2.00kgf/cm2之外，所有過程都類似于示例1-1中所述的情況，以獲得245g人參粉末(產(chǎn)率81.7%)，以用作樣本(下稱"Gl-4")。[66]1-5.制備人參提取物(Gl-5)[67]除了將內(nèi)部溫度改為126°C到130°C以及將內(nèi)部壓力改為2.30到2.50kgf/cm2之外，所有過程都類似于示例1-1中所述的情況，以獲得240g人參粉末(產(chǎn)率:80.0°/。)，以用作樣本(下稱"G1畫5")。[68]1-6.制備人參提取物(Gl-6)[69]除了將內(nèi)部溫度改為126°C到130°C以及將內(nèi)部壓力改為2.80到3.00kgf/cm2之外，所有過程都類似于示例1-1中所述的情況，以獲得235g人參粉末(產(chǎn)率78.3%)，以用作樣本(下稱"Gl-6")。[70]1-7.制備人參提取物(Gl-7)[71]除了將內(nèi)部溫度改為133°C到137°C以及將內(nèi)部壓力改為3.30到3.50kgPCm2之外，所有過程都類似于示例1-1中所述的情況，以獲得162g參粉末(產(chǎn)率:54.0%)，以用作樣本(下稱"G1畫7")。[72]示例2:制備本發(fā)明的去皮人參提取物[73]2-1.制備人參提取物(G2-l)[74]將浸入600mL蒸餾水中的風(fēng)干及切片的300g六年參齡去皮人參根部放入天然藥提取裝置(20L/Kukje-kigong，韓國(guó))，然后加熱2小時(shí)，同時(shí)保持內(nèi)部溫度范圍126°C到130°C及內(nèi)部壓力范圍2.80至U3.00kgf/cm2。將加工人參與水分離，并在60-70°C下干燥，并且粉碎成粉末尺寸為50-200微米的細(xì)粉，以獲得249g人參粉末(產(chǎn)率83.0%)，以用作樣本(下稱"G2-1")。[75]2-2.制備人參提取物(G2-2)[76]除了將內(nèi)部溫度改為126°C到130°C以及將內(nèi)部壓力改為1.40到1.50kgf/cm2之外，所有過程都類似于示例2-1中所述的情況，以獲得260g人參粉末(產(chǎn)率86.7%)，以用作樣本(下稱"G2-2")。[77]2-3.制備人參提取物(G2-3)[78]除了將內(nèi)部溫度改為133°C到137°C以及將內(nèi)部壓力改為3.30到3.50kgf/cm2之外，所有過程都類似于示例2-1中所述的情況，以獲得220g人參粉末(產(chǎn)率73.3%)，以用作樣本(下稱"G2-3")。[79]示例3:制備本發(fā)明的人參(G3)[80]除了使用300g四年參齡未去皮圓形人參及將提取條件中的內(nèi)部溫度和內(nèi)部壓力調(diào)整為126°C至lj130°C及1.40至U1.50kgf/cm2以外，所有過程都類似于示例1中所述的情況，以獲得236g人參粉末(產(chǎn)率78.7%)，以用作樣本(下稱"G3")。[81]示例6:制備本發(fā)明的人參(G4)[82]除了使用300g六年參齡未去皮二級(jí)人參及將提取條件中的內(nèi)部溫度和內(nèi)部壓力調(diào)整為126°C至lj130°C及1.40至lj1.50kgf/cm2以外，所有過程都類似于示例1中所述的情況，以獲得250g人參粉末(產(chǎn)率83.3%)，以用作樣本(下稱"G4")。[83]實(shí)驗(yàn)示例1:成分及含量分析[84]樣本制備[85]將20ml甲醇和20ml二氯甲烷添加到每2g從比較示例及示例制備的樣本中并執(zhí)行回流提取60分鐘。對(duì)溶液進(jìn)行冷卻、過濾以除去不可溶的物質(zhì)并將上層清液濃縮，以獲得其殘留物。每種最終樣本提取物的重量分別為0.183g(Gl-l)、0.110(Gl畫2)、0.160(Gl-3)、0.154g(Gl陽(yáng)4)、0.131g(Gl-5)、0.192g(Gl-6)、0.079g(Gl-7)、0.148g(G2-l)、0.070(G2畫2)、0.061g(G2畫3)、0.079g(G3)、0.083g(G4)及0.124g(STD)。[86]液相色譜-質(zhì)譜分析[87]將甲醇和二氯甲烷的溶劑混合物(1:1)添加到步驟1-1制備的測(cè)試樣本中，其用量分別為18.3ml(Gl-1)、11.0ml(Gl-2)、16.0ml(Gl-3)、15.4ml(Gl-4)、13.1ml(Gl-5)、19.2ml(Gl-6)、7.9ml(Gl-7)、14.8mL(G2畫l)、7.0ml(G2-2)、6.1ml(G2-3)、7.9ml(G3)、8.3ml(G4)禾Q12.4ml(STD)，以確保將每種樣本的最終樣本濃度調(diào)整為彼此相同。對(duì)3ml的每種樣本進(jìn)行微離心過濾，轉(zhuǎn)速為1300rpm，持續(xù)時(shí)間為15分鐘。在表1所示的條件下將5微升的每種上層清液注入液相色譜質(zhì)譜分析裝置，并且結(jié)果顯示于圖1至13中。網(wǎng)表1液相色譜-質(zhì)譜分析模型AGILENT:1100SeriesLC/MSD色譜柱MicrobondaPak-NH2;3.0x390mm(水)流動(dòng)相CH3CN:H20:i-PrOH=80:5:15流速1.5ml/min檢測(cè)波長(zhǎng)280■[89]與每種樣本的比較結(jié)果顯示于表2中。[90]如表1所示，可以確認(rèn)，示例中制備的人參皂甙Rg5的含量與比較示例相比要高出大約4.4及3.3倍。[91]因此，可以確認(rèn)，本發(fā)明的制備方法優(yōu)于現(xiàn)有技術(shù)中公開的方法。[92]表2<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>[93]另外，本發(fā)明人研究發(fā)現(xiàn)了最佳的提取條件，尤其是通過在0.60:1.40至1.20:0.80的范圍內(nèi)改變甲醇和二氯甲垸的混合物體積比而研究提取溶劑系統(tǒng)的混合物比率，并最終發(fā)現(xiàn)，其中最有效的提取條件是導(dǎo)電常數(shù)為20.75的甲醇和二氯甲垸(1:1)的溶劑混合物。[94]因此，我們已經(jīng)確認(rèn)，用于獲得豐富人參皂甙Rg5的最有效的提取溶劑系統(tǒng)是用于獲得豐富人參皂甙Rg5的甲醇和二氯甲烷(1:1)的溶劑混合物。[95]實(shí)驗(yàn)示例2:抗癌活性的確定[96]通過以下實(shí)驗(yàn)確定實(shí)驗(yàn)示例1中制備的富含人參皂甙Rg5的人參提取物的抗癌活性。[97]樣本制備[98]將通過根據(jù)示例2-1所述的過程的方法制備、使用甲醇和二氯甲烷溶劑混合物(1:1)提取的本發(fā)明的人參提取物通過溶解于蒸餾水(5mg/ml)而用作測(cè)試樣本(下稱"GMM")。[99〗測(cè)試動(dòng)物[100]將在相同環(huán)境下飼養(yǎng)的重10-15g的四周齡C57BL/6老鼠分成兩組，即80只老鼠作為測(cè)試組，20只老鼠作為對(duì)照組。以B16黑素瘤細(xì)胞株對(duì)測(cè)試組進(jìn)行注射，以使其發(fā)生癌癥，而對(duì)照組不進(jìn)行這種注射。將測(cè)試組進(jìn)一步分成兩組，即僅以蒸餾水治療的測(cè)試組(1)以及在第5周以等量本發(fā)明GMM提取物治療的測(cè)試組(2);并且將對(duì)照組也分成兩組，即僅以蒸餾水治療的對(duì)照組(1)以及在第5周以等量本發(fā)明的提取物治療的對(duì)照組(2)。[101]測(cè)試過程[102]在對(duì)照組(2)和測(cè)試組(2)中，在相同環(huán)境下飼養(yǎng)的重10-15g的四周齡C57BL/6老鼠在斷乳之后(出生后四周)可以自由地飲用含有通過上述步驟制備的本發(fā)明的溶液。在發(fā)生癌癥的組中，以B16黑素瘤細(xì)胞對(duì)老鼠的腹部進(jìn)行皮下注射。[103]在C02培養(yǎng)器中對(duì)B16黑素瘤細(xì)胞進(jìn)行次培養(yǎng)1周，并將含有胎牛血清的浮動(dòng)細(xì)胞稀釋RMPI1640培養(yǎng)基(調(diào)整為1x106個(gè)細(xì)胞/ml)注入O.lml。[104]每隔五天，在每個(gè)組的注射及存活期之后，通過癌的尺寸確定癌生長(zhǎng)率及存活期。將癌生長(zhǎng)率與癌的重量進(jìn)行比較，并通過以下數(shù)學(xué)公式1計(jì)算結(jié)果。[105]數(shù)學(xué)公式17'/w"^gA/Q/ow究/ewg^i二^^C^"乂zAQ^"》"K^^wg"^m柳)s^^dewgW,^/^^"'^^"g,A(附"o[106]測(cè)試結(jié)果[107]如圖14所示，第1周，測(cè)試組(1)有55%的老鼠發(fā)生癌癥，而測(cè)試組(2)有25%的老鼠發(fā)生癌癥。在第12天和第17天，測(cè)試組(1)屮分別有80%和95%的老鼠發(fā)生癌癥，同時(shí)測(cè)試組(2)中分別有35%和42.5%發(fā)生癌癥。在第24天，測(cè)試組(1)中有100%的老鼠發(fā)生癌癥，而測(cè)試組(2)中有52.5%的老鼠發(fā)生癌癥。[108]如表3所示，在注射癌細(xì)胞株之后1周，平均癌重量未顯示顯著的差異(平均癌重量O.lg)，但測(cè)試組之間的平均癌重量的差異逐漸增加，即測(cè)試組(1)和(2)中的平均癌重量在第12天時(shí)為0.4g和0.3g，在第17天時(shí)為L(zhǎng)8士0.3g和1.5士0.2g，在第22天時(shí)為5.1士0.2g禾n3.3士1.0g，而在第57天時(shí)為22.4士5.3g和9.8士2.1g。[109]另外，在第12天時(shí)，測(cè)試組(1)和(2)中未顯示死老鼠，而在第17天，測(cè)試組(1)中死了一只老鼠。在注射了癌細(xì)胞之后，測(cè)試組(2)中85%的老鼠存活了42天以上，而測(cè)試組(1)中大約50%的老鼠存活。在第60天，測(cè)試組(1)中的所有老鼠都死了，而測(cè)試組(2)中60%的老鼠存活。<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>[111]因此，可以確認(rèn)，通過本發(fā)明的新穎方法制備的人參提取物顯示了有效的抗癌活性，因?yàn)楸景l(fā)明的方法可以提供豐富的人參皂甙Rg5，其顯示了有效的抗癌活性。[112]實(shí)驗(yàn)示例3:毒性測(cè)試[113]方法[114]適用本發(fā)明的提取物對(duì)SD老鼠(平均體重25士5g)及Sprague-Dawley大鼠(235±10g)進(jìn)行急性毒性測(cè)試。每個(gè)由3只老鼠或大鼠組成的組分別口月艮lg/kg的測(cè)試樣本或溶劑(0.2g，i.p.)并觀察24小時(shí)。[115]結(jié)果[116]在任何組或性別中，對(duì)死亡率、臨床征象、體重變化及重大發(fā)現(xiàn)沒有與治療相關(guān)的影響，并且己經(jīng)確認(rèn)，口服的本發(fā)明的提取物的LD50超過lg/kg。這些結(jié)果表明，本發(fā)明制備的新穎提取物是有效的、安全的。[117]下文說明了配制方法及多種賦形劑，但不發(fā)明不限于此。以下說明了代表性的制備示例。[118]粉劑制備[119]示例1的干燥粉末(Gl-l)20mg[120]乳糖100mg[121]滑石10mg[122]通過混合上述成分并填充密封包裝來制備粉末制劑。[123]片劑制備[124]示例1的干燥粉末(Gl-1)10mg[125]玉米淀粉100mg[126]乳糖100mg200680011768.2說明書第13/15頁(yè):127:i28:129no:i3i:132:133■134劑':135:136137:1381392m:140"I143:144:145146147148制:149150硬脂酸鎂2mg通過混合上述成分并做成藥片來制備片劑。膠囊劑制備示例1的干燥粉末(Gl-1)10mg結(jié)晶纖維素100mg乳糖100mg硬脂酸鎂2mg通過混合上述成分并通過傳統(tǒng)的凝膠制備方法填充凝膠膠囊劑而制備膠注射劑制備示例2的提取物(G2-l)10mg注射用的蒸餾水最佳量PH控制劑最佳量通過傳統(tǒng)的注射劑制備方法溶解活性成分、將pH控制在約7.5、然后以填充所有成分并進(jìn)行消毒，從而制備注射制劑。液體制備示例2的提取物(G2-1)0.180g糖5-10g檸檬酸0.05-0.3%焦糖0.005-0.02%維生素C0.1-1%蒸餾水79-94%C02氣體0.5-0.82%通過傳統(tǒng)的液體制備方法溶解活性成分、填充所有成分并消毒來制備液體IJ。保健食品的制備示例1的提取物(G2-l)1000mg151]維生素混合物最佳量—152]維生素A醋酸鹽70mg153]維生素El.Omg154]維生素Bl0.13mg155]維生素B20.15mg156]維生素B60.5mg157]維生素B120.2mg158]維生素C10mg159]生物素10mg160]煙酸胺1.7mg16]葉酸50mg162]泛酸鈣0.5mg163]礦物質(zhì)混合物最佳量164]硫酸亞鐵1.75mg165]氧化鋅0.82mg—166]碳酸鎂25.3mg—167]磷酸一鉀15mg—168]磷酸二鈣55mg169]檸檬酸鉀90mg170]碳酸鈣lOOmg171]氯化鎂24.8mg172]上述維生素和礦物質(zhì)混合物可以多種方式變化。這種變化不應(yīng)視為脫離本發(fā)明的主旨和范圍。173]保健飲料的制備—174]示例1的提取物(G2-2)1000mg—175]檸檬酸lOOOmg176]寡糖100g[177]杏濃縮物2g[178]牛磺酸lg[179]蒸餾水900g[180]通過傳統(tǒng)的保健飲料制備方法溶解活性成分，混合，在85°C下攪拌1小時(shí)，過濾，然后以lOOOg填充所有成分并進(jìn)行消毒，從而制備保健飲料。[181]上文已對(duì)本發(fā)明進(jìn)行了描述，顯然，本發(fā)明可以許多方式修改。這種變化不應(yīng)視為脫離本發(fā)明的精神和范圍，并且對(duì)本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言顯見的所有這種修改都要包括在以下權(quán)利要求書的范圍內(nèi)。工業(yè)適用性[182]根據(jù)本發(fā)明的用于制備加工人參的方法可以通過施加選定的特定壓力和溫度而提供豐富的人參皂甙Rg5，其顯示了各種藥理學(xué)活性，并且含有所述加工人參及其提取物的組成物可以用作藥劑或保健食品，以預(yù)防或治療各種疾病，尤其是癌癥。權(quán)利要求1.一種用于制備藥理學(xué)上有效的人參產(chǎn)品的方法，其由以下步驟所組成將相當(dāng)于人參重量1到3倍的水添加到五到七年參齡的人參材料中，并且對(duì)于未去皮人參的情況是在1.20到1.50kgf/cm2的內(nèi)部壓力下，而對(duì)于去皮人參的情況是在2.30到3.00kgf/cm2的內(nèi)部壓力下，在大約110到130℃的溫度范圍內(nèi)，處理1到5小時(shí)，以獲得具有大量人參皂甙Rg5的目標(biāo)加工人參。2.如權(quán)利要求1所述的方法，所述人參材料為六年參齡的未去皮人參或去皮人參。3.—種用于提取加工人參的提取物的方法，其由以下步驟所組成使用回流提取方法，通過由甲醇和二氯甲垸混合的有機(jī)溶劑混合物，對(duì)從權(quán)利要求1所述的方法制備的加工人參材料進(jìn)行提取，持續(xù)時(shí)間為1小時(shí)至兩天；進(jìn)行過濾，以獲得濾液，將濾液濃縮，以除去剩余的溶劑并進(jìn)行干燥，以獲得富含人參皂甙Rg5的有效人參提取物。4.如權(quán)利要求3所述的方法，所述溶劑混合物是甲醇和二氯甲烷以0.60:1.40至1.20:0.80的混合體積比混合的溶劑混合物。5.—種含有從權(quán)利要求1或3所述的方法制備的人參提取物及醫(yī)藥上可接受的載劑或佐劑的醫(yī)藥組成物，用于治療或預(yù)防癌病。6.如權(quán)利要求5所述的醫(yī)藥組成物，其中，所述組成物作為散劑、粉劑、顆粒、片劑、膠囊劑、軟膠囊劑、液體藥劑、糖漿、酏劑丸劑、溶液、香囊、霜齊U、軟膏、洗齊"凝膠、香油、貼片、糊劑、噴霧液、氣溶膠或注射劑提供。7.—種含有通過權(quán)利要求1或3所述的方法制備的提取物的保健食品，其顯示了有效的抗癌活性及營(yíng)養(yǎng)學(xué)上可接受的食品添加劑。8.如權(quán)利要求7所述的保健食品，其中，所述保健食品作為片劑、膠囊劑、散劑、粉劑或顆粒提供。全文摘要本發(fā)明涉及一種通過施加選定范圍的壓力和溫度制備可提供豐富人參皂甙Rg5的藥理學(xué)上有效的人參產(chǎn)品及其提取物的加工方法，所述人參皂甙Rg5顯示了各種藥理學(xué)活性，因此，含有本發(fā)明的加工人參及其提取物的組成物可以用作藥劑或保健食品，以預(yù)防或治療各種疾病，尤其是癌病。文檔編號(hào)A23L1/212GK101155521SQ200680011768公開日2008年4月2日申請(qǐng)日期2006年4月11日優(yōu)先權(quán)日2005年4月12日發(fā)明者崔鎮(zhèn)華,鄭侑燮申請(qǐng)人:百奧生物醫(yī)藥化學(xué)基因有限公司;鄭侑燮