專利名稱：：糖漿的制備方法糖漿的制備方法
背景技術(shù)：
已知玉米糖漿可用于生產(chǎn)飲料(例如，運(yùn)動(dòng)飲料)和其它食品是已知的。然而，仍然需要具有類似于玉米糖漿的甜味和功能，同時(shí)具有低血糖指數(shù)的產(chǎn)品用于生產(chǎn)飲料和其它的食品。發(fā)明概述本發(fā)明提供一種基本上清澈的(substantiallyclear)、含有alternan低聚糖的低血糖糖漿(LGS)的有效制備方法。這些糖漿具有相當(dāng)?shù)偷难侵笖?shù)并且也能用于需要提高的清澈度的情況中。這些性質(zhì)在食品和飲料配方中尤其有益。在一些實(shí)施方案中，基本上清澈的LGS的制備方法包括將至少約40%w/w濃度的一種或多種底物(初始的蔗糖和一種或多種初始的、選自糖或糖醇的受體，糖或糖醇在第2,3和6位的碳中的一個(gè)或多個(gè)位置具有能從蔗糖接受葡萄糖單體的游離羥基)與至少一種alternan蔗糖酶在高于45。C的溫度下反應(yīng)。在其它的實(shí)施方案中，底物的濃度是至少約41,42，43,44,45,46，47,48,49，50，51，52,53,54或55%w/w。在其它的實(shí)施方案中，底物和酶能在高于46，47，48，49，50,或51。C的溫度下反應(yīng)。在一些實(shí)施方案中，該方法包括將一種或多種alternan蔗糖酶與底物在相對短的時(shí)間段內(nèi)反應(yīng)，例如少于12小時(shí)，或少于ll,10,9，8或7小時(shí)。與較低溫度和較低底物濃度下制備的糖漿相比，在高于45。C的溫度和至少重量百分比為40%w/w的底物濃度下制備的基本上清澈的LGS通常在視覺上更清澈。也可以使用在此所述的測試方法來測定清澈度。在一些實(shí)施方案中，當(dāng)調(diào)整到20%w/w的濃度時(shí)，基本上清澈的LGS在650nm下會(huì)顯示出大于930/。，或大于94,95，96,97，98或99%的透射率。在一些實(shí)施方案中，基本上清澈的LGS包括小于0.5%的、大于DP12(葡萄糖單體的聚合度)的alter腿。在一些實(shí)施方案中，該方法提供了基本上清澈的具有低粘度的LGS，如在80。F和77%干固形物濃度時(shí)小于14000cps的粘度。在一些實(shí)施方案中，在8CTF和77%干固形物濃度下測量時(shí)，基本上清澈的LGS顯示出低于10000,9000,8000，7000,6000，5000或4000cps的粘度。在一些實(shí)施方案中，使用的alternan蔗糖酶通過如US6,570,065中描述的重組方法制得。在其它的實(shí)施方案中，重組酶與全長酶相比會(huì)小些或是截短的。"產(chǎn)自腸膜明串珠菌NNRLB1355的alternan蔗糖酶的表征設(shè)計(jì)新葡聚糖蔗糖酶的合理與隨機(jī)方法"(CharacterizationofalternansucrasefromLeuconostocmesenteroidesNNRLB1355:rationalandrandomapproachtodesignofnovelglucansucrase)GillesJoucla,DoctroalDissertation,IngenierINSA,Toulouse,France,2003。在另一方面中，本發(fā)明提供了一種食品或飲料的制備方法，包括將一種或多種成分和基本上清澈的糖漿混合，所述糖漿是通過將至少40%w/w濃度的一種或多種底物與至少一種alternan蔗糖酶在高于45°C的溫度下接觸而制得的。對于本領(lǐng)域技術(shù)人員可以了解，本發(fā)明的這些和其它目標(biāo)和有益效果可體現(xiàn)在以下的發(fā)明描述和權(quán)利要求中。發(fā)明詳述I.糖漿的制備方法在此所述的基本上清澈的LGS顯示出各種物理性質(zhì)。具體而言，能從與一種或多種alternan蔗糖酶反應(yīng)的受體和蔗糖制得alternan低聚糖，這些酶將蔗糖的葡萄糖單體轉(zhuǎn)移至受體碳水化合物并釋放不同長度的果糖和葡萄糖低聚糖。所得到的產(chǎn)品具有與玉米糖漿相相似的甜度水平，并且口感和功能與玉米糖漿的相似。此外，在本發(fā)明的方法中更為顯著地，在一些實(shí)施方案中，與沒有和酶反應(yīng)的底物(蔗糖和受體)所結(jié)合形成的混合物相比，所得到產(chǎn)品的具有低血糖指數(shù)。將這些糖漿稱為基本上清澈的低血糖糖漿(LGS)。受體可以選自在碳位置編號2,3和6具有能從蔗糖接受葡萄糖單體的游離羥基的糖或糖醇。受體可以是糖漿或糖漿固體的形式。在此適用的糖漿或糖漿固體的實(shí)例是麥芽糖，麥芽三糖，4-a葡糖基麥芽糖，高麥芽糖(超過40%)玉米糖漿，中到低DE(葡萄糖當(dāng)量)玉米糖漿，棉子糖，纖維二糖，麥芽糖醇，麥芽三糖，麥芽四糖，葡萄糖，異麥芽糖，異麥芽糖醇，大麥糖漿和糖漿固體，大米糖漿和糖漿固體，乳糖，乳清透過液，木薯淀粉糖漿和糖漿固體，黑糖，曲二糖，異麥芽糖低聚糖，氫化淀粉糖漿，馬鈴薯淀粉糖漿和糖漿固體，玉米糖漿和糖漿固體等。適用于混合物的糖漿實(shí)例包括，但不限于，SATINSWEET,可從Cargill，Incorporated獲得，其含有最少55至70重量％的麥芽糖和45至30重量％的葡萄糖和其它含葡萄糖的低聚糖。在一個(gè)實(shí)施方案中，使用的糖漿或糖漿固體包括約2至約99%重量的麥芽糖。能用于生產(chǎn)LGS反應(yīng)中的alternan蔗糖酶包括，但不限于，腸膜明串珠菌(丄ewc鍾tocMe膽fm,'^)(LM)菌抹NRRLB1355,23185，23186，23188,23311,21297，30821，30894和在此^是供的其它酶。可以另夕卜克隆和重組表達(dá)這些酶，3口GillesJoucla,DoctroalDissertation,IngenierINSA,Toulouse,France,2003中所述的?？梢允褂帽?頁域已知的任何方法來培養(yǎng)這些菌抹并分離酶，例如以下提供的方法。通過將一種或多種alteman蔗糖酶與相對高濃度的蔗糖和受體反應(yīng)來制備基本上清澈的LGS。并且，通過在高于45。C的溫度下反應(yīng)來提高反應(yīng)效率。這使得為完成反應(yīng)(殘留底物為總碳水化合物w/w基質(zhì)的《。/。時(shí))而需要較少量的酶，并且反應(yīng)能在較短的時(shí)間段內(nèi)完成。例如，反應(yīng)能在高于45。C的溫度下進(jìn)行小于4，5，6,7,8,9，10,11，12，13，14,l5,16,17或小于20小時(shí)的時(shí)間段。在一些實(shí)施方案中，升高的溫度也可以減少微生物污染。能通過控制蔗糖和受體的比例來改變LGS的特征。通常，隨著蔗糖和受體的比例升高到高達(dá)約12:1的比例，基本上清澈的LGS的血糖指數(shù)將降低。例如，預(yù)期使用1:1比例(蔗糖比受體)制得的產(chǎn)品比使用4:1比例(蔗糖比受體)制得的產(chǎn)品具有更高的血糖指數(shù)。在一些實(shí)施方案中，使用約8:1至約11:1的比例。在其它實(shí)施方案中，該方法包括用至少4:1,5:1,6:1，7:1,8:1，9:1和10:1的蔗糖/受體的比例來制備LGS。因此，本發(fā)明也提供用這些方法制得的食品和飲料產(chǎn)品。LGS也能用葡萄糖低聚糖中葡萄糖分子之間的鍵來表征。在一些實(shí)施方案中，葡萄糖低聚糖同時(shí)具有a1,3和al,6鍵。在一些實(shí)施方案中，葡萄糖低聚糖還包括其它鍵，如al,4鍵。在一些實(shí)施方案中，LGS具有至少20。/。的(xl,3鍵。在其它實(shí)施方案中，LGS具有至少20%的a1,3鍵和至少20%的al,6鍵。在一些實(shí)施方案中，隨后處理基本上清澈的LGS來除去部分或全部的果糖，因此產(chǎn)生了果糖耗盡的LGS。使用本領(lǐng)域中已知的任何方法將果糖從LGS中除去，例如，使用柱色譜。通常，LGS含有少于50y。的果糖?？梢赃M(jìn)一步氫化基本上清澈的LGS和/或果糖耗盡的LGS來制備非還原糖漿。在其它實(shí)施方案中，提供了具有7至12聚合度的oligoalteran,其是緩慢但完全消化性的碳水化合物，其使LGS成為獨(dú)特的甜味劑，其給予了低血糖應(yīng)答和持續(xù)的能量而且沒有任何腸不適或副作用。菌林NRRLB30821和NRRLB30894是通過化學(xué)誘變產(chǎn)生的菌抹NRRLB21297(Leathersetal,1997)的組成型突變抹。因此，在菌林NRRLB30821中不再需要蔗糖來誘導(dǎo)alternan蔗糖酶的最大產(chǎn)生。II.產(chǎn)品和包括基本上清澈的低血糖糖漿(LGS)的混合物在此所述的基本上清澈的LGS能與一種或多種各種各樣的其它成分混合并可以作為混合物銷售給配方設(shè)計(jì)師，或作為混合物的成分分開提供給配方設(shè)計(jì)師并且配方設(shè)計(jì)師能將它們混合而制得最終的食品。基本上清澈的LGS能與一種或多種其它成分如維生素，礦物質(zhì)，糖醇，高強(qiáng)度甜味劑，風(fēng)味劑，風(fēng)味增強(qiáng)劑和其它常規(guī)甜味劑混合來提供所需的營養(yǎng)效果以及所需的風(fēng)味。期望與基本上清澈的LGS的混合物的創(chuàng)造能提高終產(chǎn)品的均一性。能與基本上清澈的LGS混合的維生素包括除了對于機(jī)體的正常新陳代謝，生長和發(fā)育所必需的蛋白質(zhì)，碳水化合物，脂肪，礦物質(zhì)和有機(jī)鹽之外的任何有機(jī)物質(zhì)。維生素包括如A，D,E,I,生物素，膽-威，葉酸和尼克酸的化合物。能與基本上清澈的LGS混合的無機(jī)化合物包括，礦物質(zhì)元素?zé)o機(jī)化合物，其構(gòu)成機(jī)體的礦物質(zhì)成分。無機(jī)鹽和水每天從才幾體中排泄，因此，需要補(bǔ)充。這些必須通過食品或補(bǔ)充劑攝入來補(bǔ)充。礦物質(zhì)的實(shí)例包括Ca,Fe,P,Na,Cu,K,和Mg。風(fēng)味劑和/或風(fēng)味增強(qiáng)劑也能與LGS混合。例如二羥基苯甲酸(DHB，包括其全部異構(gòu)體)以及如薄荷油，可可粉和香草香精的風(fēng)味劑。糖醇能與LGS混合并且用于賦予特定食品甜味，在許多情況中，與普通甜味劑相比，糖醇不會(huì)為產(chǎn)品提供太多的熱量。糖醇的特征在于酮糖或己糖上存在羥基。在此所述的能與LGS甜味劑混合的糖醇實(shí)例包括山梨醇，lo甘露醇，木糖醇，乳糖醇，麥芽糖醇，異麥芽糖，氫化淀粉水解物和赤藻糖醇。在此公開的LGS也能與高強(qiáng)度甜味劑混合。高強(qiáng)度甜味劑是在非常低的濃度呈現(xiàn)出加甜能力的物質(zhì)。在此所述的能與LGS組合物混合的高強(qiáng)度甜味劑實(shí)例包括糖精，環(huán)己氨磺酸鹽，阿司帕坦，莫那亭(monatin)，阿利坦，乙酰舒泛鉀，三氯蔗糖(sucralose),祝馬丁，斯替維苷和甘草甜素(glycynhizin)?；旧锨宄旱腖GS的用途和使用基本上清澈的LGS制得的產(chǎn)品的其它實(shí)例可參見WO2004023894A1和WO2005089483A2中，在此引入作為參考。以下的實(shí)施例提供了特定的實(shí)施方案并且本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將意識到給出這些實(shí)施例僅僅是為了說明的目的而絕不是構(gòu)成所要求范圍的限制。實(shí)施例實(shí)施例l，制備酶溶液的方法通過在培養(yǎng)基上培養(yǎng)腸膜明串珠菌NRRLB30821或NRRLB30894來生產(chǎn)酶制劑，所述培養(yǎng)基包括不同來源的10g/L酵母提取物，5g/L磷酸鉀，0.2g/L硫酸鎂(七水合物)，0.1g/L硫酸錳(一水合物)，0.02g/L氯化鈣，0.01g/L氯化鈉，0/01g/L硫酸亞鐵(七水合物)和20至40g/L葡萄糖。在上述類似的培養(yǎng)基中培養(yǎng)腸膜明串珠菌NRRLB21297培養(yǎng)物，所用的培養(yǎng)基除了以2%蔗糖和2%高麥芽糖玉米糖漿(65%麥芽糖)作為碳源外與上述培養(yǎng)基相同。將培養(yǎng)物生長于27至30°C,并將pH控制在6.0(用10%NaOH調(diào)節(jié))，直至碳水化合物耗盡。一旦碳源耗盡，通過在12,200xg4。C離心30分鐘除去細(xì)胞。通過50,000分子量截留(50kDMWCO)的膜超濾將澄清的培養(yǎng)物上清液濃縮來獲得以體積計(jì)的10倍酶濃縮物。菌林NRRLB30821和NRRLB30894都是從腸膜明串珠菌NRRLB21297通過化學(xué)誘變產(chǎn)生的，并且在葡萄糖培養(yǎng)基上生長時(shí)組成型表達(dá)alternan蔗糖酶。實(shí)施例2，測定可消化性的測試通過體外消化測試來測定所得到糖漿的可消化性。將2ml的8%測試糖漿與10ul葡糖淀粉酶(購自GenencorInternational,PaloAlto,CA的OptidexL-400),和2mlpH=4.5的0.019M乙酸緩沖液混合，在6(TC培養(yǎng)16-20小時(shí)。消化后，取出2ml糖漿并且與2mlpH=6.5的0.05M磷酸緩沖液，0.1ml的1%NaN3，和O.lg的大鼠腸粉(Catalog#I-1630,Sigma-AldrichFineChemicals,StLouis,M〇,USA)混合，并且在37。C培養(yǎng)高達(dá)24小時(shí)。在每個(gè)時(shí)間點(diǎn)，將0.5ml混合物與lmL的1.2NHC1混合來終止進(jìn)一步的反應(yīng)。使用從Bio-RadLaboratories(Hercules,CA)獲得的AminexHPX-87H柱，通過HPLC測定葡糖淀粉酶和大鼠腸酶水解釋放的葡萄糖含量，用0.01N(普通)硫酸作為0.6ml/min和60。C的流動(dòng)相。將可消化性表示為從總葡萄糖低聚糖釋放的葡萄糖百分?jǐn)?shù)并且通過以下等式來計(jì)算理論葡萄糖釋放量％=[葡萄糖]/[果糖]*0.45/0.55*100或者，最初的葡糖淀粉酶處理步驟可以省略。實(shí)施例3，酶測試和單位定義向2.5mL的40%(w/v)9:1比例的蔗糖和麥芽糖以及0.lml的1.5M,pH5.5的檸檬酸緩沖液中加入0.1至2.4mL的濃縮酶。用納米純的水將體積加至5,0ml,并將反應(yīng)在37。C孵育。l小時(shí)后，0.5ml的每個(gè)反應(yīng)物置于90-100。C水浴中5分鐘。短時(shí)冷卻后，將1.0mL納米純的水加入0.5ml的樣品中，并加入0.05-0.lg由Dowex66和Dowex88(DowChemicalCo.,Midland,MI)構(gòu)成的離子交換混合物。將樣品倒置2-3分鐘，并通過0.45um尼龍濾器(Whatman,Clifon,NJ)過濾進(jìn)入HPLC小并瓦中。樣品在HPLC上通過HPX-87C碳水化合物柱(300mmx7.8mm)(Bio-Red,Hercules，CA)在85。C運(yùn)行，將水作為0.9ml/min的流動(dòng)相。才艮據(jù)果糖面積相對于總糖面積的百分比來計(jì)算。計(jì)算如下果糖百分比*51111反應(yīng)物中的lg總糖/lh/使用的酶液體積-g果糖/h/mL活性。然后使用果糖的分子量和公制換算將值換算為jumol果糖/min/ml。將在37。C下每分鐘釋放lpmol的果糖定義為一個(gè)活性單位，并且將對應(yīng)的值記錄為單位/ml(U/ml)。實(shí)施例4,低血糖糖漿的糖構(gòu)成分析通過如下所述的HPLC方法來分析低血糖糖漿的低聚糖構(gòu)成。用去離子水將低血糖糖漿的樣品稀釋至5-10%千固形物，用離子交換樹脂(Dowex66/Dowex88,DowChemicalCo.,Midland,MI)除去灰分，并且在注射到HPLC中進(jìn)行糖分析之前通過0.45微米濾器過濾。在65°C使用帶有折射率檢測器的兩個(gè)串聯(lián)的BioRadAminexHPX-42A,300-7.8mm柱(Hercules,CA)來實(shí)現(xiàn)低聚糖分離。將水用作洗脫液，流速為0.2ml/min。典型的低血糖糖漿樣品(PDF8)的色譜顯示于圖1中。色i普上顯示的連續(xù)峰對應(yīng)于聚合度(DP)遞增的寡聚物。例如，DP3是三糖而DP4是四糖。在最左邊最短時(shí)間內(nèi)洗脫的峰對應(yīng)于具有至少為250,000分子量的聚合物峰。實(shí)施例5,蔗糖/麥芽糖底物(蔗糖麥芽糖比例=9:1)在高溫下酶轉(zhuǎn)化成特別清澈糖漿(specialtyclearsyrup)具有慢消化性和低粘度的基本上清澈的LGS能在溫度高于45。C的溫度下制得。在提高的溫度下，糖底物轉(zhuǎn)化成清澈糖漿的速率明顯提高。因?yàn)樵诟邷叵绿岣叩姆磻?yīng)速率，使得過程中酶的使用，轉(zhuǎn)化時(shí)間長度和微生物污染的風(fēng)險(xiǎn)都明顯降低。在商業(yè)生產(chǎn)中，這特別重要，對于基本上清澈的LGS的生產(chǎn)給予了經(jīng)濟(jì)優(yōu)勢。如實(shí)施例1中所述的，從腸膜明串珠菌NRRLB30821中獲得的酶制劑。酶制劑具有如實(shí)施例3中定義的92.5單位/mL的活性。假定酶制劑和水的比重為lg/ml。結(jié)晶蔗糖和麥芽糖，都購自Sigma-AldrichFineChemicals(St.Louis,MO,USA),與基于干重9:l比例的蔗糖:麥芽糖千混合并且在咖啡磨碎機(jī)中磨碎來獲得均勻的粉末狀底物混合物，此后稱為底物。在50-ml具塞聚丙烯試管中，將糖底物溶解于去離子水中至包括應(yīng)加入的酶制劑在內(nèi)終濃度20，30,40和50y。w/w。每個(gè)試管中加入酶制劑等份試樣O.nml,得到不同的酶劑量(表l)。每個(gè)試管中底物、水和酶的總重量都是8.50g。將試管置于設(shè)置為37°C,45°C,50r和55。C的水浴中30分鐘，在酶加入之前，底物溶液平衡到上述各溫度。表1.每個(gè)試管中含有的底物濃度，酶劑量與底物和水的含量。將0.17ml酶加入到每個(gè)試管中(相當(dāng)于15.7總活性單位)<table>tableseeoriginaldocumentpage11</column></row><table>添加酶制劑后，將試管放回分別為37°C,45°C，50°C,55。C的水浴中。20小時(shí)培養(yǎng)后，從每個(gè)試管取出小部分樣品。除了對總糖面積來計(jì)算底物的百分比面積之外，如實(shí)施例3中所述的通過HPLC分析樣品中剩余的底物。以每小時(shí)每單位酶所消耗的iumol底物(iumol底物/hr/單位)計(jì)算20hr反應(yīng)過程中的平均反應(yīng)速率。以下表2所示的反應(yīng)結(jié)果說明在較高溫度和較高底物濃度下的反應(yīng)顯示出較高的底物轉(zhuǎn)化率和較高的反應(yīng)速率。結(jié)果，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員將認(rèn)識到在高溫和高底物濃度下在較短時(shí)間內(nèi)完成反應(yīng)所需要的酶比在較低底物濃度和較低溫度下的少。例如，與30%濃度和37。C下使用6.17U/g酶消耗98。/。底物相比較，在20小時(shí)內(nèi)5(TC下50%的底物濃度、使用3.7U/g酶獲得97%的使用率，40。C下40y。的濃度、使用4.63U/g酶可使98%底物完成反應(yīng)。在37。C完成20%濃度的反應(yīng)需要9.25U/g的酶。從工業(yè)生產(chǎn)的角度說，高底物濃度下的反應(yīng)還有減少使用水和能量的優(yōu)勢。從這個(gè)實(shí)驗(yàn)可以看出，本領(lǐng)域普通技術(shù)人員還將認(rèn)識到因?yàn)榈头磻?yīng)速率，在高底物濃度和低溫(例如，37°C)下完成反應(yīng)需要更長的時(shí)間。表2.底物濃度和溫度對底物轉(zhuǎn)化率和反應(yīng)速率的影響<table>tableseeoriginaldocumentpage12</column></row><table>實(shí)施例5，高溫制得的清澈糖漿的化學(xué)和物理性質(zhì)如實(shí)施例1中所述的從腸膜明串珠菌NRRLB30821中獲得酶制劑。酶制劑具有如實(shí)施例3中限定的92.5單位/mL的活性。假定酶制劑和水的比重為lg/ml。結(jié)晶蔗糖和麥芽糖，都購自Sigma-AldrichFineChemicals(St.Lo腦，MO,USA),與基于干重9:1比例的蔗糖麥芽糖干混合，并且在咖啡磨碎機(jī)中磨碎來獲得均勻的粉末狀底物混合物，此后稱為底物。在50-ml具塞聚丙烯試管中將糖底物溶解于去離子水中至包括應(yīng)加入的酶制劑在內(nèi)達(dá)50和60%w/w的終濃度。將酶制劑的等份試樣加入每個(gè)試管中來獲得最終2U/g,5U/g和8U/g的酶劑量。每個(gè)試管中底物，水和酶的總重量是20g。將試管置于設(shè)置為5(TC的水浴中30min,使得在加入酶之前底物溶液平纟軒至各溫度。50。C條件下經(jīng)過48小時(shí)后，用實(shí)施例3中所述的二重AminexHPX-42AHPLC柱分析樣品中的糖組成。用實(shí)施例2中所述的方法測定樣品的可消化性。通常，在高溫和高底物濃度制得的糖漿含有的聚合物較少，而明串珠菌二糖較多，但是葡萄糖低聚糖的含量相似(表3)。因?yàn)轶w外消化率很大程度上歸因于低聚糖的含量，在高溫和高底物濃度條件下制得的糖漿顯示出與在低溫和低底物濃度制得的糖漿相似的體外可消化性。體外消化速率的結(jié)果顯示了測試樣品中相似的消化速率。在相同的消化條件下，麥芽糖和麥芽糖低聚糖在8小時(shí)內(nèi)是100%消化的(數(shù)據(jù)未顯示)。表3.高溫制備與低溫制備的的清澈糖漿的糖構(gòu)成和體外消化性的比較<table>tableseeoriginaldocumentpage13</column></row><table>實(shí)施例6，高溫制得的糖漿的清澈度因?yàn)榻档土司酆衔餄舛?，在高溫制得的糖漿顯示出另一種重要的性質(zhì)，即它們是清澈的。將在20%(w/w)底物濃度和37°C條件下，在CargillProcessDevelopmentFacilitymSavage(顧，USA),PDF03,PDF04,PDF06，PDF08和PDF10中生產(chǎn)的糖漿樣品，與那些在50。/。(w/w)底物和50。C生產(chǎn)的相比較。比較中還包括了通過超濾(50kDMWCO)除去了alternan聚合物的由PDF07生產(chǎn)的樣品。所有的樣品用去離子水從~80%千固形物稀釋至50，40，30，20，10和5%千固形物，并且用分光光度計(jì)(HewlettPackard,Model8453)在650nm使用1-cm比色皿4全測光透射率。在測量試樣透射率之前，用去離子水校準(zhǔn)分光光度計(jì)。如表4中所示，除了通過超濾除去了聚合物的PDF07之外，在20%底物濃度和37。C生產(chǎn)的全部樣品都具有小于96.1%的光透射率，并且看上去在40%干固形物或更低濃度生產(chǎn)的樣品是不透明的。相反地，在整個(gè)濃度范圍內(nèi)(從0.5%干固形物到85%千固形物)，高溫制得的樣品與同過超濾除去聚合物的樣品一樣清澈。<table>tableseeoriginaldocumentpage14</column></row><table>實(shí)施例7,用NRRLB30894在高溫下制得的糖漿根據(jù)實(shí)施例1從菌抹腸膜明串珠菌NRRLB30821和菌抹NRRLB30894獲得酶制劑。在5(TC下，用3U/g腸膜明串珠菌NRRLB30894的酶的底物和蔗糖與麥芽糖比例為9的50。/。的總糖制得批號-PDF12糖漿。在37。C下，用NRRLB30821的酶以6U/g底物的劑量和蔗糖與麥芽糖比例為9的20%的總糖制得批號PDF6和PDF7糖漿。如實(shí)施例2所迷的進(jìn)行消化測試，其中沒有葡糖淀粉酶預(yù)處理步驟。使用兩種77%干固形物的不同批次的糖漿在不同溫度下進(jìn)行粘性測量，所述的測量使用BrookfieldDV-EViscometer(BrookfieldEngineeringLabs,Inc.,Middleboro,MA)進(jìn)行。批號PDF6和PDF7糖漿是不透明的，而批號PDF12糖漿是清澈的糖漿。在低溫(PDF7)和高溫(PDF12)制得的兩種類型糖漿的糖構(gòu)成顯示于表6中，并且顯示出糖漿PDF12中沒有聚合物存在。漿與相同干固形物水平的不透明糖漿相比，清澈的糖具有顯著地低的粘度(表7),并且以與不透明糖漿相似的速率被大鼠腸粉消化(表8)。<table>tableseeoriginaldocumentpage15</column></row><table>表8:清澈與不透明糖漿的消化速率(0-24小時(shí)后釋放的葡萄糖％)<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實(shí)施例8，使用不同明串珠菌菌林的酶制劑在高溫下制得的清澈糖漿使用實(shí)施例1中所述的方法從3林不同的明串珠菌菌抹中獲得酶制劑。將全部3g糖底物(蔗糖麥芽糖=9:1)溶解于自來水中以獲得包括加入的酶在內(nèi)的50%干固形物w/w或52%干固形物w/w的終濃度。在50。C或52。C進(jìn)行反應(yīng)(以下的表9)。在每個(gè)反應(yīng)結(jié)束時(shí)取出等份試樣并且如所述的測定它們的糖構(gòu)成和體外可消化性。表9,在高溫下制備的糖漿的反應(yīng)條件，糖構(gòu)成和體外消化性<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>如表9中所示的，所有酶制劑完成了反應(yīng)。所得到的糖漿顯示出相似的化學(xué)組成和體外消化速率。權(quán)利要求1.一種制備基本上清澈糖漿的方法，包括在高于45℃的溫度下將至少40％w/w濃度的一種或多種底物與至少一種alternan蔗糖酶反應(yīng)，以形成基本上清澈的糖漿。2.根據(jù)權(quán)利要求l的方法，其中在高于45。C的溫度下將至少一種alternan蔗糖酶與一種或多種底物保持小于12小時(shí)。3.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中酶具有小于8單位/克底物的濃度。4.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中20%w/w濃度的糖漿在650nm下的透射率高于93%。5.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中糖漿含有小于0.5%的高于DP12的alteraan。6.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中在80。F所述糖漿具有小于14000cps的粘度和77%干固形物濃度。7.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中至少一種alternan蔗糖酶是從乳酸細(xì)菌獲得的。8.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中至少一種alternan蔗糖酶是從腸膜明串3朱菌(Lewco/7oWocmesew/^rai(3fes)獲得的。9.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中至少一種alternan蔗糖酶是從選自腸膜明串珠菌NRRLB1355,23185，23186,23188,23311，21297，30821,30894的菌抹獲得的。10.根據(jù)權(quán)利要求1的方法，其中至少一種alternan蔗糖酶是重組產(chǎn)生的。11.根據(jù)權(quán)利要求1的方法制得的糖漿。12.含有權(quán)利要求11的糖漿的食品或飲料組合物。13.—種制備食品或飲料的方法，包括將一種或多種成分與基本上清澈的糖漿混合，所述糖漿是在高于45。C的溫度下通過將至少40%w/w濃度的一種或多種底物與至少一種alternan蔗糖酶反應(yīng)制得的。14.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中飲料是運(yùn)動(dòng)飲料。15.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中至少一種alternan蔗糖酶是從乳酸細(xì)菌獲得的。16.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中至少一種alternan蔗糖酶是從腸膜明串珠菌獲得的。17.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中至少一種alternan蔗糖酶是從選自腸膜明串珠菌NRRLB1355,23185,23186，23188，23311，21297，30821，30894的菌株獲得的。18.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中至少一種alternan蔗糖酶是重組產(chǎn)生的。19.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中至少一種成分是維生素。20.根據(jù)權(quán)利要求13的方法，其中至少一種成分是高強(qiáng)度甜味劑。21.根據(jù)權(quán)利要求13的方法制得的食品。22.根據(jù)權(quán)利要求13的方法制得的飲料。全文摘要在此提供了基本上清澈糖漿的制備方法，包括將至少40％w/w濃度的一種或多種底物與至少一種alternan蔗糖酶在高于45℃的溫度下反應(yīng)。文檔編號C13K13/00GK101258248SQ200680012531公開日2008年9月3日申請日期2006年2月15日優(yōu)先權(quán)日2005年2月15日發(fā)明者A·沃,G·-H·鄭,T·L·卡爾森申請人:卡吉爾公司