專利名稱：：He4與其它生化標記物在評估子宮內膜癌和子宮癌中的應用的制作方法HE4與其它生化標記物在評估子宮內膜癌和子宮癌中的應用
背景技術：
：本公開一般性涉及癌癥的診斷、分級、分期和預后領域。更具體來說，本公開涉及了子宮內膜癌和子宮癌領域。本公開還涉及了使用蛋白表達進行診斷、分級、分期和預后的領域。癌癥包括范圍廣泛的疾病，在世界范圍內大約每4個人中就有1個人受到影響。癌癥的負面影響的嚴重性是深刻的，普遍影響到了醫(yī)療保險和程序以及社會。由于多種類型的癌癥標志是惡性細胞的快速和不受調控的增殖，因此改善針對癌癥的方法的一個決定性難題是對早期檢測和診斷的需求。早期檢測被廣泛認為是降低癌癥死亡率的最好方法。相應地，已經做了許多嘗試以開發(fā)出準確而可靠的診斷惡性病癥存在的標準。具體來說，已經針對被稱為腫瘤相關抗原的血清學定義的抗原性標記物的應用進行了研究，這些腫瘤相關抗原或者僅由癌癥細胞表達，或者以明顯較高的水平存在于患有惡性病癥的對象中。然而，由于腫瘤相關抗原表達的高度異質性，例如癌抗原的極端多樣性，因此對癌癥診斷中有用的其它腫瘤標記物存在著需求。已知有許多與癌相關抗原具有反應性的單克隆抗體。這些單克隆抗體結合多種不同的癌相關抗原，包括糖蛋白、糖脂和粘蛋白。許多這類單克隆抗體識別在來源于給定的細胞譜系或組織類型的某些腫瘤但不是其它腫瘤上表現出受限表達的腫瘤相關抗原。表現出可用于鑒定特定類型的惡性腫瘤的腫瘤相關抗原的例子相對較少。例如單克隆抗體B72.3，特異性地結合一種高分子量(〉106Da)的腫瘤相關粘蛋白抗原，該抗原選擇性地表達于許多不同的癌上，包括即便不是所有也是大部分的卵巢癌、絕大多數非小細胞肺癌、結腸癌和乳腺癌。然而，在外科切除腫瘤后檢測細胞相關的腫瘤標記物，例如被B72.3所識別的粘蛋白抗原，對于診斷篩查來說可能用途有限，在診斷篩査中在實體腫瘤塊積累以前對惡性病癥的早期檢測是優(yōu)選的。通過篩査外科切除的樣本的腫瘤相關抗原對特定類型的癌癥進行診斷時，通常只有在檢測到積累的腫瘤塊后才進行有創(chuàng)手術，這種診斷方法的替代方法是提供可用于在得自無創(chuàng)或微創(chuàng)術對象的樣本中檢測此類抗原的組合物和方法。例如，在卵巢癌、子宮內膜癌和其它癌癥中，目前有許多可溶性腫瘤相關抗原，它們可在易獲得的生物流體樣品例如血清或粘膜分泌物中檢出。一種此類標記物是CA125,其為一種也散落于血流中的癌相關抗原，可在血清中檢出(例如Bast等，1983N.Eng.J.Med.309:883;Lloyd等，1997Int.J.Cane.71:842)。血清和其它生物流體中的CA125水平同其它標記物的水平一起被測量，如癌胚抗原(CEA)、鱗狀細胞癌抗原(SCC)、組織多肽特異性抗原(TPS)、唾液酸化TN粘蛋白(STN)和胎盤堿性磷酸酶(PLAP)，以試圖提供卵巢癌、子宮內膜癌和其它癌的診斷和/或預后情況(例如Sarandakou等，1997ActaOncol.36:755;Sarandakou等，1998Eur.J.Gynaecol.Oncol.19:73;Meier等，1997Anticanc.Res.17(4B):2945;Kudoh等，1999Gynecol.Obstet.Invest.47:52;Ind等，1997Br.J.Obstet.Gynaecol.104:1024;Bell等，1998Br.J.Obstet.Gynaecol.105:1136;Cioffi等，1997Tumori83:594;Meier等，1997Anticanc.Res.17(4B):2949;Meier等，1997Anticanc.Res.17(4B):3019)。但是，升高的血清CA125水平單獨或與其它已知指標相結合，并不能提供對惡性腫瘤或特定惡性腫瘤如卵巢癌或子宮內膜癌的確定診斷。例如，相對于宮頸癌和生殖道癌癥來說，陰道液和血清中CA125、CEA和SCC升高與良性婦科疾病中的炎癥最密切相關(例如Moore等，1998Infect.Dis.Obstet.Gynecol.6:182;Sarandakou等，1997ActaOncol.36:755)。血清CA125升高也可伴有神經母細胞瘤，而CEA和SCC水7平升高可伴有結腸直腸癌。另一種標記物，分化抗原間皮素，表達于正常間皮細胞表面還有某些癌細胞上，包括上皮性卵巢腫瘤和間皮瘤。與間皮素(Chang等，1992Cane.Res.52:181;Chang等，1992Int.J.Cane.50:373;Chang等，1992Int.J.Cane.51:548;Chang等，1996Proc.Nat.Acad.Sci.USA93:136;Chowdhury等，1998Proc.Nat.Acad.Sci.USA95:669;Yamaguchi等，1994J.Biol.Chem.269:805;Kojima等，1995J.Biol.Chem.270:21984)和結構相關的間皮素相關抗原(MRA;參見例如Scholler等，1999Proc.Nat.Acad.Sci.USA96:11531)有關的組合物和方法在本
技術領域：
內是已知的，包括如在WO00/50900和美國申請系列號No.09/513,597中描述的在癌癥檢測和治療中的應用。對于可用于多標記物診斷篩查的其它標記物存在著迫切的需求。發(fā)明簡述本公開的主題包括評估患者是否患有子宮內膜癌或子宮癌的方法。該方法包括在從患者獲得的樣品(如實體組織樣品、體液樣品或與患者身體的相關部位接觸過的流體樣品)中HE4的表達進行評估。HE4表達升高是患者患有子宮內膜癌或子宮癌的指征。如果需要，可以將HE4表達的水平與參比值進行比較，例如對應于未患有子宮內膜癌或子宮癌的患者中HE4表達的參比值?；蛘?，樣品中HE4的表達可以與在較早時間從患者獲得的較早樣品中HE4的表達進行比較。在優(yōu)選實施方案中，所述方法還包括評估樣品中第二個標記物(例如CA125和/或SMRP)的表達。第二個標記物的表達升高進一步表明了患者患有子宮內膜癌或子宮癌。本公開還涉及了評估患有子宮內膜癌或子宮癌的患者對治療的反應的方法。該方法包括評估治療過程中不同時間從患者獲得的樣品中HE4的表達。在后來的時間HE4的表達降低(或表達隨時間降低)表明患者對治療有反應。樣品中第二個標記物(例如CA125和/或SMRP)的表達也可以被評估。第二個標記物的表達降低進一步表明了患者對治療有反應。本公開還涉及了在已經進行了子宮內膜癌或子宮癌治療的患者中評估復發(fā)的方法。該方法包括在從治療后的患者獲得的樣品中評估HE4的表達，單獨評估或與一種或多種第二種標記物組合評估。HE4的表達升高表明在患者中子宮內膜癌或子宮癌復發(fā)了，第二種標記物的表達升高進一步表明了患者子宮內膜癌或子宮癌復發(fā)。HE4的表達可以在例如治療后進行多次評估。HE4的表達隨時間增加表明了患者子宮內膜癌或子宮癌復發(fā)。在另一個實施方案中，本公開涉及了對患者將發(fā)展子宮內膜癌或子宮癌的可能性進行評估的方法。該方法包括在從患者獲得的樣品中評估HE4的表達，單獨評估或與一種或多種第二種標記物組合評估。HE4的表達升高與患者將發(fā)展子宮內膜癌或子宮癌的可能性增加相關，第二個標記物的表達升高進一步表明了患者將發(fā)展子宮內膜癌或子宮癌。在另一個實施方案中，本發(fā)明涉及了在患有子宮內膜癌或子宮癌的患者中對腫瘤進行分期和/或分級的方法。該方法包括在從患者獲得的樣品中評估HE4單獨或與一種或多種第二標記物組合的表達。HE4(以及第二標記物，如果評估的話)的表達升高表明了更晚期的癌癥階段和/或更高的癌癥等級。本文公開的主題的還有一個方面涉及評估被診斷患有子宮內膜癌或子宮癌的患者對于治療性干預(例如化療)的需要的方法。該方法包括在從患者獲得的樣品中評估HE4單獨或與一種或多種第二標記物組合的表達。HE4(以及第二標記物，如果評估的話)的表達升高表明患者需要治療性干預。幾個表的簡述9表1是本文實施例1中描述的實驗獲得的ROC(接受者操作特征，ReceiverOperatingCharacteristic)曲線數據的曲線下面積(AUC)分析的概述。表2是實施例2中描述的血清腫瘤標記物的平均值和對于由每個被分析的標記物進行分組的每組值所確定的分期。表3是對于實施例2中描述的每個腫瘤標記物計算出的ROC-AUC。表4是對實施例2中提出的組合中每個腫瘤標記物獨立地在特異性為90%時的對數回歸分析。表5是對實施例2中提出的組合中每個腫瘤標記物獨立地在特異性為95%時的對數回歸分析。表6是對實施例2中提出的組合中每個腫瘤標記物獨立地在特異性為98%時的對數回歸分析。發(fā)明具體內容本公開涉及這樣一個發(fā)現，即HE4a抗原是子宮內膜癌和子宮("子宮體")癌存在等級和階段的指標。本發(fā)明的主題總的來說涉及使用HE4標記物或HE4與其它生物標記物的組合評估婦女的子宮內膜癌和子宮癌。評估HE4與子宮內膜癌和子宮癌的一種或多種其它標記物(特別是標記物CA125和SMRP)可用于診斷這類癌癥在人類患者中的發(fā)生，以及評估這些癌癥對于各種類型治療的反應。此外，對這些標記物的評估可用于監(jiān)測這些癌癥在患者中的復發(fā)，或用于評估患者將發(fā)展這些癌癥的可能性。在美國，每年診斷出大約40，880例子宮癌新病例，導致7,310人死亡。對子宮癌進行的外科分期表明75%患者患有I期疾病(Kottmeier，H丄.，Int.J.Gynaecol.Obstet.1971;9:172)。被診斷患有I期疾病的具有中度到高度風險因子的患者的復發(fā)率為20%到30%(Keys等，2004，Gynecol.O歸l.;92(3):744-751;Creutzberg等，2003，Gynecol.O腳l.,89(2):201-209)。在患有晚期III期和IV期疾病的患者中大約75%有血清CA125水平升高，而患有早期I期和II期疾病的患者只有17%升高(Niloff等，1984，Am.J.Obstet.Gynecol"148(8):1057-1058;Berchuck等，1989,CancerRes"49(8):2091-2095;OIt等，1990,Obstet.Gynecol.Surv.，45:570-577)。血清CA125水平升高已經與子宮內膜癌的階段和腫瘤向宮頸、淋巴結和腹膜表面的擴散相關聯(lián)(Ginath等，2002，Int.J.Gynecol.Cancer,12(4):372-375;Vuento等，1997，Gynecol.Oncol"64(1):141-146;Sood等，1997，Obstet.Gynecol.卯(3):441-447;Hsieh等，2002，Gynecol,Oncol"86(1):28-33;Powell等，2005,J.Reprod.Med"50(8):585-590)。目前CA125是最有用的檢測復發(fā)疾病的血清腫瘤標記物。但是，CA125在檢測復發(fā)疾病中的用途充其量來說也是有限的。僅僅10%到20%患有早期疾病的患者和25%患有無癥狀復發(fā)疾病的患者有CA125升高(Niloff等，2002;Duk等，1986,Am.J.Obstet.Gynecol.，155(5):1097-1102)。已經對許多新的血清腫瘤標記物在子宮內膜癌中的臨床用途進行了研究，包括CA15.3、CA19.9、CA72.4、CEA、OVX1和M-CSF(Cherchi等，1999,Eur.J.Gynaecol.Oncol"20(4):315-317;Takeshima等，1994，GynecolOncol1994;54(3):321-326;Hareyama等，1996，J.Clin.Pathol"49(12):967-970;Olt等1996，Am.J.Obstet.Gynecol.，174(4):1316-1319;Beck等，1997，Gynecol.Oncol"65(2):291-296)。最近已經使用了蛋白質組學分析來鑒定子宮內膜癌的新標記物，例如蛋白伴侶10(Yang等，2004，J.ProteomeRes.，3(3):636-643)。在子宮內膜癌的應用中利用了多標記物分析策略的研究很少。在本文描述的方法公開之前，到目前為止用于檢測復發(fā)疾病的最有希望的組合是CA125與CA19.9(Lo等，1999，CancerDetect.Prev.23(5):397-400)。11定義本文中使用的術語"樣品"是指可以與患者特異地相關聯(lián)的材料，從其中可以確定、計算或推斷出與患者有關的特定信息。樣品可以全部或部分由來自患者的生物材料構成。樣品也可以是以某種方式與患者接觸過的材料，這種接觸方式使得對樣品進行的測試可以提供與患者有關的信息。樣品也可以是已經與其它材料接觸過的材料，這種其它材料不是患者的，但是能夠使第一材料隨后被測試以確定與患者有關的信息，例如樣品可以是探針或解剖刀的清洗液。樣品可以接觸患者之外的生物材料源，只要本
技術領域：
的專業(yè)人員仍然能夠從樣品確定與患者有關的信息就行。還可以理解的是，不是樣品的外來材料或信息也可用于將患者與樣品結論性地聯(lián)系在一起。舉一個非限制性的例子，雙盲實驗需要圖表或數據庫以將樣品與患者相匹配。本文中使用的術語"患者"是指作為分析對象以確定與生物體有關的信息的生物體。盡管在本文公開的方法的大部分實施方案中患者是人類，但所述方法不限于用于人類個體?；颊呖梢允且唤M人類?；颊咭部梢允侨说囊徊糠帧＿@種實施方案的一個非限制性的例子是，患者可以是與人體不相連的組織樣品，或轉化的細胞系。在某些實施方案中，患者也可以是非人類的生物體。本文中使用的術語"參比值"是指當與分析結果相比時與特定結果統(tǒng)計學相關的值。在優(yōu)選實施方案中，參比值是根據對比較HE4a的表達與已知的臨床結果的研究進行的統(tǒng)計學分析來確定的。在本文的實施例部分中顯示了一些這樣的研究。但是，來自文獻的研究和本文公開的方法的用戶經驗也可用于產生或調整參比值。參比值也可以通過考慮與患者的醫(yī)療史、遺傳學、年齡和其它因素特別相關的情況和結果來確定。本文使用的術語"體液"是指從患者獲得的稠度基本為流體的材料，但是可以有固體或顆粒物質與其相連。體液也可以含有不是來自于患者的材料和部分。例如體液可以用水稀釋，或可以含有防腐劑例如EDTA。體液的非限制性例子是血液、血清、漿膜液、血漿、淋巴液、尿液、腦脊液、唾液、分泌組織和器官的粘膜分泌液、陰道分泌物、乳汁、眼淚、以及腹水液例如與非實體腫瘤有關的腹水液。其它的例子包括胸膜、心包、腹膜、腹腔和其它體腔的流體等。生物流體還可以包括與對象或生物源接觸的液體溶液，例如細胞和器官培養(yǎng)基，包括細胞或器官條件培養(yǎng)基、灌洗液等。如果樣品是在治療性組合物或方法的施用前、施用時或施用后或在其后進行的隨診階段過程中獲得的，那么樣品是"在治療過程中"從患者獲得的。該術語的使用明確地包含了樣品在進行治療之前和之后(即為了評估治療的有效性或復發(fā))獲得的情況，以及在長期治療過程中間斷地獲取多個樣品的情況。具體說明本文公開的方法涉及HE4a，是本文描述的"四個二硫鍵核心"蛋白家族的成員。"四個二硫鍵核心"蛋白家族包含了功能多樣的酸和熱穩(wěn)定的小分子的異質群組，其包括人類附睪四個二硫鍵核心蛋白、或"HE4a"(Kirchhoff等，1991Biol.R印rod.45:350-357;Wang等，1999Gene229:101;Schummer等，1999Gene238:375)。HE4cDNA首先從人類附睪中分離(Kirchhoff等，1991Biol.Reprod.45:350-357)，隨后HE4cDNA在從卵巢癌構建的cDNA文庫中被高頻率檢出(Wang等，1999Gene229:101;Sclmmmer等，1999Gene238:375)。HE4a，"四個二硫鍵核心"蛋白家族的新成員，被描述在美國專利申請公布號No.2003/0108965Al和美國專利申請No.10/233,150中，在此引為參考，它包括了在本公開中使用的SEQIDNO名稱。HE4a顯示出與HE4高度相似但有所不同的序列。13對于本發(fā)明的目的來說，HE4或HE4a的檢測被認為是同義的，其任一分子的檢測都可以用于本文描述的方法中。HE4a是否是與HE4不同的分子、或HE4a的序列是否只是代表了對已經發(fā)表的HE4序列的校正，并不重要。本文公開的方法還部分涉及了用于對在對象中天然存在的細胞表面和/或可溶形式的HE4a、包括在患有某些癌癥(例如子宮內膜癌)的對象中這類多肽的水平升高進行檢測的組合物和方法。因此，本公開提供了通過特異性檢測這些細胞表面和/或可溶HE4a多肽而用于檢測和診斷對象的惡性腫瘤病癥的有用組合物和方法。按照本文公開的方法，可以在來自對象或生物來源的生物樣品中檢測可溶性人類HE4a抗原多肽(或HE4a多肽)。生物樣品可以通過從對象或生物來源獲得血液樣品、活檢樣本、組織外植體、器官培養(yǎng)物、生物流體或任何其它的組織或細胞制備物來提供。對象或生物來源可以是人類或非人類的動物、原代細胞培養(yǎng)物或改造的培養(yǎng)物細胞系，包括但不限于可以含有染色體整合的或游離的重組核酸序列的遺傳工程細胞系、永生化的或可以永生化的細胞系、體細胞雜交細胞系、分化的或可以分化的細胞系、轉化的細胞系等。在本文公開的方法的某些優(yōu)選實施方案中，對象或生物來源可以懷疑患有惡性腫瘤病癥或有惡性腫瘤病癥的風險，該病癥在某些其他的優(yōu)選實施方案中可以是子宮內膜癌癥例如子宮內膜癌，在本文公開的方法的某些其它的優(yōu)選實施方案中，對象或生物來源可以已知沒有這些疾病的風險或存在。在某些實施方案中，生物樣品包括至少一種來自對象或生物來源的細胞，在其它某些優(yōu)選實施方案中，生物樣品是含有另一種腫瘤標記物例如CA-125或可溶性人類間皮素相關抗原多肽的生物流體。生物流體典型為生理溫度下的液體，可以包括在對象或生物來源中存在、從中抽取、表達或以其他方式從中提取的天然存在的流體。某些生物流體源于特定的組織、器官或定位的區(qū)域，而某些其它的生物流體可以更為整體或全身地存在于對象中。生物流體的非限制性例子包括血液、血清和漿膜液、血漿、淋巴液、尿液、腦脊液、唾液、分泌組織和器官的粘膜分泌液、陰道分泌物、乳汁、眼淚、以及腹水液例如與非實體腫瘤有關的腹水液。其它的例子包括胸膜、心包、腹膜、腹腔和其它體腔的流體等。生物流體還可以包括與對象或生物源接觸的液體溶液，例如細胞和器官培養(yǎng)基包括細胞或器官條件培養(yǎng)基、灌洗液等。在其它的優(yōu)選實施方案中，生物樣品是無細胞的液體溶液，例如血清、血漿或離心的尿液的上清液。在某些其它的優(yōu)選實施方案中，生物樣品含有完整的細胞，在某些其它的優(yōu)選實施方案中，生物樣品包含了含核酸序列的細胞提取物，該核酸序列編碼具有SEQIDNOS:11或13中顯示的氨基酸序列的HE4a抗原多肽、或其片段或變異體。在本文公開的方法的其它實施方案中，需要在進行分析以前對細胞進行物理或化學的破碎或裂解，以提供分析用細胞內容物。樣品中的"以可溶形式天然存在的分子"可以是可溶性蛋白、多肽、肽、氨基酸或其衍生物；脂類、脂肪酸或類似物、或其衍生物；碳水化合物、糖或類似物、或其衍生物；核酸、核苷酸、核苷、嘌呤、嘧啶或相關的分子、或其衍生物等；或其任何組合，例如糖蛋白、糖脂、脂蛋白、蛋白脂或任何其它的可溶性生物分子或本文提供的生物樣品的無細胞組分。"以可溶形式天然存在的分子"也指溶液中或存在于生物樣品、包括本文提供的生物流體中的分子，并且它們不與完整細胞的表面結合。例如，以可溶形式天然存在的分子包括但不是必須限于溶質；大分子復合物的成分；從細胞脫落、分泌或輸出的物質；膠體；微粒或納米粒子或其它細的懸浮顆粒等。對象中惡性腫瘤病癥的存在是指對象中存在發(fā)育異常的、癌性的和/或轉化的細胞，包括例如贅生的、腫瘤的、非接觸性抑制的或致癌轉化的細胞等。出于說明而不是限制，在本文公開的方法中，惡性腫瘤病癥還可以是指對象中存在能夠分泌、脫落、輸出或釋放HE4a抗原多肽(或HE4a多肽)的癌細胞，以至于在來自對象的生物樣品中可以檢測到這種多肽的水平升高。例如，在優(yōu)選實施方案中，這樣的癌細胞是惡性上皮細胞例如癌細胞，在特別優(yōu)選實施方案中這樣的癌細胞是惡性間皮瘤細胞，它們是在例如內胸膜、心包、腹膜、腹腔和其它體腔中發(fā)現的鱗狀上皮或間皮細胞的變異體。在本文公開的方法的大多數優(yōu)選實施方案中，其存在意味著存在惡性腫瘤病癥的腫瘤細胞是子宮內膜癌細胞，包括原發(fā)和轉移的子宮內膜癌細胞。將惡性腫瘤分類為子宮內膜癌的標準在本
技術領域：
中是眾所周知的，來自原發(fā)和轉移腫瘤的人類子宮內膜癌細胞系的建立和表征也是同樣。在其它實施方案中，惡性腫瘤病癥可以是間皮瘤、胰腺癌、非小細胞肺癌或其它形式的癌癥，包括任何各種癌癥例如鱗狀細胞癌和腺癌，也包括肉瘤和血液惡性腫瘤(例如白血病、淋巴瘤、骨髓瘤等)。這些以及其它惡性腫瘤病癥的分類對于熟悉本
技術領域：
的人來說是已知的，本公開提供了在這樣的惡性腫瘤病癥中無需過多試驗就確定HE4a多肽的存在的方法。在本文包含的實施例中提供了參比值。這些值適合于本文公開的方法的實踐。但是應該注意的是，本文公開的方法的使用并不限于那些參比值或數據。本
技術領域：
的專業(yè)人員可以根據他們的具體需要獲得參比值。這樣的參比值可以在患者因為疑似惡性腫瘤的子宮或子宮內膜腫塊而進行組織活檢程序時，通過分析患者的HE4a表達來獲得。獲得這類參比值的方法被包含在本文中并在實施例中提供。本文公開的方法的使用者可能希望獲得不同于本文所提供的參比值，以致力于特定的患者類型?？梢灶A見到這樣的類型可以包括年齡、遺傳背景、癌癥風險、醫(yī)療史、血型、生理特征例如體重，以及其它的類型。本文提供的用于在對象中篩查惡性腫瘤病癥的存在的方法，其特征可以是使用特異性針對HE4a抗原多肽的抗體或特異性針對HE4a多16肽的抗體。特異性針對HE4a抗原多肽(或HE4a多肽)的抗體容易產生為單克隆抗體或多克隆抗血清，或可以使用本
技術領域：
眾所周知的方法產生為被設計成具有所需性質的遺傳工程免疫球蛋白(Ig)。例如，作為說明而不是限制，抗體可以包括重組IgG、具有來自免疫球蛋白的序列的嵌合融合蛋白或"人源化的"抗體(參見例如美國專利Nos.5,693,762、5,585,089、4,816,567、5,225,539、5,530,101，在此引為參考)，它們都可以用于按照本文公開的方法檢測人類HE4a多肽。這樣的抗體可以按照本文提供的方法制備，包括下面描述的用HE4a多肽進行免疫。例如，如本文所提供，公開了編碼HE4a多肽的核酸序列，因此本
技術領域：
的專業(yè)人員可以常規(guī)制備這些多肽用作免疫原。例如將在下面更詳細描述的單克隆抗體如2H5、3D8和4H4，可用于實踐在本文公開的方法中的某些方法。術語"抗體"包括多克隆抗體、單克隆抗體、其片段例如F(ab')2和Fab片段、以及作為與HE4a多肽特異性結合的分子的任何天然存在或重組產生的結合配偶體?？贵w，如果能夠以Ka大于或等于大約104M"、優(yōu)選大于或等于大約10SM'1、更優(yōu)選大于或等于大約106M"、更加優(yōu)選大于或等于大約1(^M"與HE4a多肽結合，就被定義為是"免疫特異性的"或特異性地結合。結合配偶體或抗體的親和性可以使用常規(guī)技術容易地確定，例如在Scatchard等，Ann.N.Y.Acad.Sci.51:660(1949)中描述的那些技術。其它蛋白作為HE4a多肽配偶體的確定，可以使用許多已知的用于鑒定和獲得與其它蛋白或多肽特異性相互作用的蛋白的任何方法來進行，例如酵母雙雜交篩選系統(tǒng)，如在美國專利No.5,283,173和美國專利No.5,468,614中描述的那些，或其等同物。本文公開的方法也包括使用HE4a多肽和基于HE4a多肽的氨基酸序列的肽來制備與HE4a多肽特異性結合的結合配偶體和抗體?？贵w一般可以通過本
技術領域：
的專業(yè)人員所熟知的各種不同技術17中的任何一種來制備(參見例如Harlow和Lane,《抗體實驗室手冊》Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,1988)。在一種這樣的技術中，首先將含有HE4a多肽的免疫原，例如在表面上具有HE4a多肽的細胞或分離的HE4a多肽，注射到適當的動物中(例如小鼠、大鼠、兔、綿羊和山羊)，優(yōu)選按照預定的計劃加入一次或多次增強免疫，然后定期從動物取血。然后可以從這些抗血清中通過例如使用與適當的固相支持物偶聯(lián)的多肽的親和層析方法，純化出特異性針對HE4a多肽的多克隆抗體。特異性針對HE4a多肽或其變異體的單克隆抗體可以使用例如Kohler和Milstein的技術(1976Eur.J.Immunol.6:511-519)以及對它進行的改進來制備。簡單來說，這些方法包括制備能夠產生具有所需特異性(即與目的間皮多肽具有反應性)的抗體的永生的細胞系。這樣的細胞系可以例如從上述免疫的動物獲得的脾細胞來產生。然后通過例如與骨髓瘤細胞融合伴侶、優(yōu)選為與被免疫的動物同種同源者進行融合，來使脾細胞永生化。例如，可以使用膜融合促進劑例如聚乙二醇或非離子去污劑將脾細胞和骨髓瘤細胞結合幾分鐘，然后以低密度接種在支持雜交細胞生長但不支持骨髓瘤細胞生長的選擇性培養(yǎng)基上。優(yōu)選的篩選技術使用HAT(次黃嘌呤、氨基喋呤、胸腺噴啶)進行篩選。經過足夠的時間，通常為大約1到2周之后，觀察到雜交體的集落。挑選單個集落并測試與多肽的結合活性。具有高反應性和特異性的雜交瘤是優(yōu)選的。本文公開的方法考慮到了產生與HE4a多肽特異性結合的單克隆抗體的雜交瘤。單克隆抗體可以從生長的雜交瘤集落的上清液中分離。此外，各種不同的技術可以用于增加產率，例如將雜交瘤細胞系注射到適合的脊椎動物宿主例如小鼠或其它適合的宿主的腹膜腔中。然后可以從腹水液或血液中收獲單克隆抗體。污染物可以通過常規(guī)的技術例如層析、凝膠過濾、沉淀和抽提從抗體中除去。例如，抗體可以使用標準技術通過在固定蛋白G或蛋白A上進行層析來純化。在某些實施方案中，使用抗體的抗原結合片段可能是優(yōu)選的。這樣的片段包括Fab片段，它可以使用標準技術來制備(例如通過用木瓜蛋白酶消化來產生Fab和Fc片段)。Fab和Fc片段可以通過親和層析(例如在固定蛋白A柱上)使用標準技術來分離。這樣的技術在本
技術領域：
中是眾所周知的，參見例如Weir，D.M.,《實驗免疫學手冊》HandbookofExperimentalImmunology,1986，BlackwellScientific,Bostorio利用與編碼各種不同效應蛋白的序列按閱讀框架連接的DNA序列編碼的免疫球蛋白V區(qū)結構域而對于預先選定的抗原具有特異結合親和性的的多功能融合蛋白，在本
技術領域：
中是已知的，例如公開于EP-B1-0318554、美國專利No.5,132,405、美國專利No.5,091,513和美國專利No.5,476,786。這樣的效應蛋白包括多肽結構域，所述結構域可以通過本
技術領域：
的專業(yè)人員熟悉的各種技術中的任何一種用來檢測融合蛋白的結合，這些技術包括但不限于生物素模擬序列(參見例如Luo等，1998J.Biotechnol.65:225，在此引為參考)、用可檢測的標記部分進行的直接共價修飾、與特異性標記的報告分子的非共價結合、可檢測的底物的酶法修飾或固定在(共價或非共價地)固相支持物上。用于本文公開的方法的單鏈抗體也可以通過例如噬菌體展示這樣的方法來產生和篩選(參見例如美國專利No.5,223,409;Schlebusch等1997Hybridoma16:47;在此引為參考)。簡單來說，在該方法中，DNA序列被插入到絲狀噬菌體例如M13的基因m或基因VIII基因中。已經開發(fā)了幾種帶有多克隆位點的載體用于插入(McLafferty等，Gene128:29-36，1993;Scott禾口Smith,Science249:386-390，1990;Smith禾口Scott,MethodsEnzymol.217:228-257，1993)。插入的DNA序列可以隨機產生，或可以是結合HE4a多肽的已知結合結構域的變異體。使用這種方法可容易地產生單鏈抗體。一般來說，插入片段編碼6到20個氨基酸。插入序列編碼的肽展示在噬菌體表面上。表達了HE4a多肽的結合結構域的噬菌體通過與固定的HE4a多肽的結合來進行篩選，例如使用本
技術領域：
中熟知的方法和本文公開的核酸編碼序列制備的重組多肽。未結合的噬菌體通過清洗液除去，清洗液一般含有10mMTris、1mMEDTA，并且不含鹽或含有低濃度鹽。結合的噬菌體用例如含有鹽的緩沖液洗脫。NaCl的濃度逐步增加，直到所有的噬菌體都被洗脫。一般來說，以較高親和力結合的噬菌體將被較高的鹽濃度所釋出。將洗脫的噬菌體在細菌宿主中繁殖。可以進行附加輪次的篩選以選出幾個高親和力結合的噬菌體。然后測定結合的噬菌體中插入片段的DNA序列。一旦知道了結合的肽的預測的氨基酸序列，就可以通過重組手段或合成方法制備足夠的肽，在本文中用作特異性針對HE4a多肽的抗體。當抗體作為融合蛋白產生時，使用重組的方法。肽也可以被產生成兩個或多個相似的或不相似肽的串聯(lián)排列，以最大化親和力或結合。為了檢測與特異性針對HE4a多肽的抗體反應的抗原決定簇，檢測試劑一般為抗體，它可以按照本文的描述制備。對于本
技術領域：
的普通專業(yè)人員來說，使用抗體檢測樣品中的多肽已知有各種不同的分析方式，包括但不限于酶聯(lián)免疫吸附分析(ELISA)、放射免疫分析(RIA)、免疫熒光、免疫沉淀、平衡透析、免疫擴散以及其它的技術。參見，例如Harlow和Lane，《抗體實驗室手冊》Antibodies:ALaboratoryManual,ColdSpringHarborLaboratory,1988;Weir,D.M.，《實驗免疫學手冊》HandbookofExperimentalImmunology,1986,BlackwellScientific,Boston。例如，分析可以以Western印跡的方式進行，其中將來自生物樣品的蛋白制備物進行凝膠電泳、轉移到適當的膜上并使其與抗體反應。然后可以使用適合的檢測試劑來檢測膜上抗體的存在，這是本
技術領域：
中熟知的并將在下面描述。在另一個實施方案中，分析包括使用固定在固相支持物上的抗體來結合耙HE4a多肽并將其從其余的樣品中取出。然后可以使用與不同的HE4a多肽抗原性決定簇反應的第二抗體來檢測結合的HE4a多肽，20例如含有可檢測的報告部分的試劑。作為非限制性的例子，根據本實施方案，識別不同抗原性決定簇的固定抗體和第二抗體可以是本文描述的選自單克隆抗體2H5、3D8和4H4的任何兩個單克隆抗體?；蛘撸梢允褂酶偁幮苑治?，其中HE4a多肽用可檢測的報告部分標記，并在將固定抗體與樣品孵育之后允許其與固定的HE4a多肽特異性抗體結合。樣品的成分對標記的多肽與抗體結合的抑制程度表明了樣品與固定抗體的反應性，因此表明了樣品中HE4a的水平。固相支持物可以是本
技術領域：
的普通專業(yè)人員已知的可以結合抗體的任何材料，例如微量滴定板中的測試孔、硝酸纖維素濾膜或其它適合的膜?；蛘?，支持物可以是珠子或圓盤，例如玻璃、纖維玻璃、膠乳或塑料例如聚苯乙烯或聚氯乙烯?？贵w可以使用本
技術領域：
中已知的各種不同的技術固定在固相支持物上，這些技術在專利和科學文獻中有充分的描述。在某些優(yōu)選實施方案中，檢測樣品中HE4a抗原多肽的分析方法是雙抗體夾心分析。該分析可以如下進行，首先將固定在固相支持物、通常為微量滴定板的孔上的HE4a多肽特異性抗體(例如單克隆抗體如2H5、3D8或4H4)與生物樣品進行接觸，使得樣品中天然存在的并具有與抗體反應的抗原性決定簇的可溶性分子能夠與固定抗體結合(例如在室溫下30分鐘的孵育時間一般就足夠了)，以形成抗原-抗體復合物或免疫復合物。然后從固定的免疫復合物中除去未結合的樣品組分。接下來，加入特異性針對HE4a抗原多肽的第二抗體，其中第二抗體的抗原結合位點不會競爭性地抑制固定的第一抗體的抗原結合位點與HE4a多肽的結合(例如，與固定在固相支持物上的單克隆抗體不同的單克隆抗體例如2H5、3D8或4H4)。第二抗體可以按照本文提供的方法可檢測地標記，以便它可以被直接檢測?；蛘撸诙贵w可以通過使用可檢測地標記的第二(或"第二階段")抗-抗體、或通過使用本文提供的特異性檢測試劑而間接檢測。本文提供的方法不限于任何特定的檢測程序，因為熟悉免疫分析方法的人員將會認識到，在雙抗體夾心免疫分析中有大量的試劑和安排可用于免疫學檢測特定的抗原(例如間皮素多肽)。在使用上面描述的雙抗體夾心分析的本文公開的方法的某些優(yōu)選實施方案中，第一種特異性針對HE4a抗原多肽的固定抗體是多克隆抗體，第二種特異性針對HE4a抗原多肽的抗體是多克隆抗體。任何非競爭性HE4a抗體的組合都可以與本文公開的方法一起使用。包括單克隆抗體、多克隆抗體及其組合。在本文公開的方法的某些其它實施方案中，第一種特異性針對HE4a抗原多肽的固定抗體是單克隆抗體，第二種特異性針對HE4a抗原多肽的抗體是多克隆抗體。在本文公開的方法的某些其它的實施方案中，第一種特異性針對HE4a抗原多肽的固定抗體是多克隆抗體，第二種特異性針對HE4a抗原多肽的抗體是單克隆抗體。在本文公開的方法的某些其它高度優(yōu)選的實施方案中，第一種特異性針對HE4a抗原多肽的固定抗體是單克隆抗體，第二種特異性針對HE4a抗原多肽的抗體是單克隆抗體。例如，在這些實施方案中，應該注意的是本文提供的單克隆抗體2H5、3D8和4H4識別HE4a多肽上不同的和非競爭性的抗原性決定簇(例如表位)，因此這些單克隆抗體的任何成對組合都可以使用。在本文公開的方法的其它優(yōu)選實施方案中，第一種特異性針對HE4a抗原多肽的固定抗體和/或第二種特異性針對HE4a抗原多肽的抗體可以是本
技術領域：
中已知的和本文提到的任何種類的抗體，例如，作為說明而非限制，是Fab片段、F(ab')2片段、免疫球蛋白V區(qū)融合蛋白或單鏈抗體。熟悉本
技術領域：
的人員將會認識到，本文公開的方法包含了在本文公開和要求權利的方法中使用其它的抗體形式、片段、衍生物等。在某些特別優(yōu)選的實施方案中，第二抗體可以含有可檢測的報告部分或標記例如酶、染料、放射性核素、發(fā)光部分、熒光部分或生物素等。任何報告部分或標記都可以與本文公開的方法一起使用，只要其信號與清洗后保留在支持物上的抗體的量直接相關或成比例就行。然后使用適合于特定的可檢測的報告部分或標記的方法，確定仍然結合在固相支持物上的第二抗體的量。對于放射活性基團來說，閃爍計數或放射自顯影方法通常是適合的?？梢允褂酶鞣N偶聯(lián)技術來制備抗體-酶偶聯(lián)物(綜述參見，例如Scouten,W.H.，MethodsinEnzymology135:30-65,1987)。光譜方法可用于檢測染料(包括，例如，酶反應的可比色產物)、發(fā)光基團和熒光基團。生物素可以使用與不同的報告基團(通常為放射活性或熒光基團或酶)偶聯(lián)的親和素或鏈親和素來檢測。酶報告基團一般可以通過加入底物(一般進行特定的時間段)，然后對反應產物進行分光鏡、分光光度法或其它分析來檢測。標準品或標準添加物可用于使用眾所周知的技術確定樣品中抗原的水平。在另一個實施方案中，本文公開的方法考慮到了使用本文提供的HE4a抗原多肽，通過檢測來自生物來源或對象的生物樣品中免疫特異性的反應性抗體來篩査惡性腫瘤病癥的存在。根據本實施方案，HE4a抗原多肽(或其包含本文提供的截短的HE4a抗原多肽的片段或變異體)被可檢測地標記，并與生物樣品相接觸，以檢測樣品中以可溶形式天然存在的抗體與HE4a抗原多肽的結合。例如，可以使用本文公開的序列配合眾所周知的方法例如在體外翻譯過程中摻入易于檢測的(例如放射性標記的)氨基酸、或者通過使用其它可檢測的報告部分例如在上面描述的那些，以生物合成來標記HE4a抗原多肽。不希望受到理論的束縛，本文公開的方法的本實施方案考慮到了本文公開的某些HE4a多肽例如HE4a融合多肽，可以提供具有特定免疫原性的肽，因此產生了特異性的和可檢測的抗體。例如，根據該理論，某些HE4a融合多肽可以代表能夠喚起強烈的免疫反應的"非自身"抗原，而缺少融合結構域的HE4a多肽可能被免疫系統(tǒng)視為更類似"自身的"抗原，不容易引發(fā)體液或細胞介導的免疫。正如上面注意到的那樣，本文公開的方法部分涉及令人吃驚的發(fā)現，即可溶形式的HE4a抗原多肽在對象中天然存在，包括在患有某些癌癥的對象中這類可溶性HE4a多肽的水平升高了。23根據本文公開的方法，篩查惡性腫瘤病癥的存在的方法可以通過在來自對象的生物樣品中對一個以上腫瘤相關標記物進行檢測來進一步加強。因此，本文公開的方法的某些實施方案提供了篩查的方法，該方法除了檢測天然存在的可溶性樣品成分與特異性針對HE4a抗原多肽的抗體的反應性之外，還包括使用本
技術領域：
中已知的和本文提供的已建立的方法檢測至少一種惡性腫瘤病癥的其它溶性標記物。正如前面注意到的那樣，目前有許多可溶性腫瘤相關抗原可以在容易獲得的生物流體樣品中檢測到。例如，本文公開的方法的某些實施方案涉及人類間皮素多肽，其包括了例如新的可溶的間皮素相關抗原(MRA)多肽這樣的多肽，它們被描述在Scholler等(1999Proc.Nat.Acad.Sci.USA96:11531)中以及還描述于美國專利No.6,770,445中。正如本文提供的那樣，"間皮素多肽"是可溶性的多肽，具有含有下面的肽的氨基酸序列1EVEKTACPSGKKAREIDESSEQIDNO:14并還具有至少一個與至少一種具有抗原結合位點的抗體具有反應性的抗原性決定簇，該抗體競爭性地抑制MAbK-l(Chang等1996Proc.Nat.Acad.Sci.USA93:136;MAbK-1可以從例如SignetLaboratories,Inc.,Dedham,Mass.獲得)或在美國專利No.6,770,445中提供的單克隆抗體OV569、4H3、3G3或1A6的免疫特異性結合。因此，這些根據本文公開的方法使用的其它可溶性腫瘤相關抗原可以包括但不必限于間皮素和間皮素相關抗原、CEA、CA125、唾液酸化TN、SCC、TPS和PLAP(參見，例如Bast等，1983N.Eng.J.Med.309:883;Lloyd等，1997Int.J.Cane.71:842;Sarandakou等，1997ActaOncol.36:755;Sarandakou等，1998Eur.J.Gynaecol.Oncol.19:73;Meier等，1997Anticanc.Res.17(4B):2945;Kudoh等，1999Gynecol.Obstet.Invest.47:52;Ind等，1997Br.J.Obstet.Gynaecol.104:1024;Bell等，1998Br.J.Obstet.Gynaecol.105:1136;Cioffi等，1997Tumori83:594;Meier等，1997Anticanc.Res.17(4B):2949;Meier等，1997Anticanc.Res.17(4B):3019)，并還可以包括任何已知的標記物，所述標記物在生物樣品中的存在可以與本文提供的至少一種惡性腫瘤病癥的存在相關聯(lián)?；蛘?，編碼HE4a多肽的核酸序列可以使用標準雜交和/或聚合酶鏈反應(PCR)技術來檢測。本
技術領域：
的普通專業(yè)人員可以根據本文提供的HE4acDNA序列來設計適合的探針和引物。分析一般來說可以使用從生物來源獲得的多種樣品中的任何一種來進行，這些生物來源例如真核細胞、細菌、病毒、從這些生物體制備的提取物以及在活生物體中發(fā)現的流體。實施例一般方法在實施例中使用的標準重組DNA和分子克隆技術在本
技術領域：
中是眾所周知的，描述在Sambrook,J.,Fritsch,E.F.和Maniatis,T.的《分子克隆實驗室手冊》MolecularCloning:ALaboratoryManual;ColdSpringHarborLaboratoryPress:ColdSpringHarbor,(1989)(Maniatis)和T.J.Silhavy，M.L.Bennan，和L.W.Enquist的《基因融合實驗》ExperimentswithGeneFusions,ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,N.Y.(1984)以及Ausubel,F.M.等的《分子生物學現代方法》CurrentProtocolsinMolecularBiology,GreenePublishingAssoc.andWiley-Interscience出版(1987)中。縮寫的意義如下"h"表示小時，"min"表示分鐘，"sec"表示秒，"d"表示天，"mL"表示毫升，"L"表示升，"U"表示單位，"pM"表示皮摩爾，"ROC"表示接受者操作特征，"AUC"表示曲線下的面積，"StDev"表示標準偏差，"Min"表示最小值，"Max"表示最大值，"p"表示p-值?，F在將參考下面的實施例對本公開的主題進行描述。提供這些實施例的目的僅僅是為了說明，而主題不限于這些實施例，而是應該包括所有明顯是本文提供的指導的結果的變體。實施例1新的血清腫瘤標記物HE4相對于CA-125在患有子宮內膜癌的患者中的應用在美國，每年診斷出大約40,880例子宮癌新病例，導致7，310人死亡。對子宮癌進行的外科分期表明75。/。的患者患有I期疾病。在患有晚期疾病的患者中，75。/。的血清CA-125水平升高，而在患有早期疾病的患者中僅為17%。CA-125在檢測復發(fā)疾病中的用途充其量來說也是有限的。僅僅25。/?；加袩o癥狀復發(fā)疾病的患者的CA-125升高。指示早期復發(fā)疾病的更好標記物是需要的。本研究的目的是考査新的血清腫瘤標記物HE4的值，并將它與CA-125作為子宮內膜癌的標記物進行比較?，F在描述在本實施例中使用的方法。這是一項IRB批準的前瞻性研究，比較了在因為良性疾病或子宮癌而將要經歷切除子宮和卵巢的外科手術的患者的HE4和CA-125。從所有的患者獲得了知情同意書。在手術前抽取血液樣品，在抽取后4小時內收集血清并冷凍到-80。C。使用FujirebioDiagnosticsInc.的分析方法測定HE4和CA-125水平。然后將外科病理結果與腫瘤標記物水平進行比較。對于每種腫瘤標記物建立ROC曲線?，F在描述本實施例的實驗的結果。在方案中總共征集了221位患者，128例良性和93例子宮內膜癌。子宮內膜癌患者具有下列的外科階段I期62例、1I期4例、III期19例、IV期8例。子宮內膜癌患者的平均HE4是161pM(15到1052)，而良性疾病患者為49.3pM(14到254)。子宮內膜癌患者的平均CA-125是52U/ml(3到1427)，良性疾病患者是46U/ml(3到773)。對于26每個類型計算了HE4和CA-125的ROC曲線的AUC，并進行了比較(表1)。表1ROC曲線的AUCHE4a(AUC)CA-125(AUC)p-值良性對子宮內膜癌79%54%<0駕良性對I期76%48%<0週良性對II期88%69%0.253良性對III期86%66%0.002良性對IV期86%66%0馬根據本文提供的信息，可以得出結論，在子宮內膜癌的所有階段中HE4都升高了，并且與CA-125相比在檢測所有階段的子宮內膜癌中都具有較高的靈敏度。HE4可以用在子宮內膜癌患者中作為早期復發(fā)疾病的標記物。實施例2現在描述在本實施例中使用的方法。從婦幼醫(yī)院/布朗大學(WomenandInfantsHospital/BrownUniversity)征集進入IRB批準的前瞻性方案的患者中以及從德克薩斯大學MDAnderson癌癥中心(TheUniversityofTexasMDAndersonCancerCenter)的IRB批準的血清庫中獲得血清樣品。在收集研究用的血液樣品之前，所有進入方案的患者都簽署了知情同意書。所有的血液樣品在馬上進行手術前收集并離心，在收集后4小時內取出血清并冷凍到-80。C。隨后所有的患者經歷了外科手術，手術由探測性剖腹術以及子宮切除術與雙側卵巢輸卵管切除術以及全外科分級包括清洗、以及骨盆和主動脈周圍的淋巴結清除術組成。從婦幼醫(yī)院獲得的血清樣品在FujirebioDiagnosticsInc的實驗室進行分析。從MDAnderson癌癥中心獲得的樣品就地分析。正常的對照樣品從健康患者獲得。使用FujirebioDiagnosticInc的分析方法測定了CA125、HE4、CA72.4和SMRP的腫瘤標記物血清水平和尿SMRP水平。對于每種腫瘤標記物建立了ROC曲線，在特異性設置為95%的情況下確定了敏感性?，F在描述本實施例的結果。從患有外科分期的子宮內膜癌患者獲得了233份血清樣品，從健康對照者獲得了156份血清樣品。在患有外科分期的子宮內膜癌患者的組中，有151例I期、21例II期、47例III期和14例IV期。對于健康對照者、外科I期患者和外科II到IV期患者計算了每個被分析的標記物的平均血清腫瘤標記物水平，顯示在(表2)中。對于每種標記物確定了CA125、HE4、CA72.4、SMRP和尿SMRP水平的ROC曲線下面積(ROC-AUC)(表3)。使用對數回歸分析，在特異性設置為90%、95%和98%下，獨立地和在各種不同組合中對子宮內膜癌樣品和對照的每種腫瘤標記物進行了比較(表4、5和6)。對于個體標記物區(qū)分對照和子宮內膜癌的靈敏度表明HE4表現得最好。當特異性設置為95%時，對于所有階段的子宮內膜癌來說HE4的靈敏度為44.9%，相比之下CA125為25.2%(p=0.0001)。對于I期病例來說，HE4與單獨的CA125相比，表現出靈敏度高出20.5%(37.1%對16.6%，p=0.0001)(表3)。對于患有II到IV期疾病的患者來說，當特異性設置為95%時，HE4的靈敏度上升到59.8%，比CA125高18.3%(p=0,0001)。當分析任何兩種標記物的組合時，HE4和CA125或HE4和尿SMRP的組合對于所有階段的子宮內膜癌來說將靈敏度分別提高到了48.7和49.6。在患有II到IV期疾病的患者中對HE4和CA125組合的分析表明，當特異性設置為95%時，靈敏度為69.5%。這表示靈敏度與單獨使用CA125相比增加了24.4%(p=0.0001)。HE4、CA125和尿28SMRP的組合在所有的子宮內膜癌患者中產生了最大的靈敏度增加，比單獨的CA125增加了26.1%。但是，這只比HE4禾BCA125的組合的靈敏度增加了2.6%，沒有顯著意義。也發(fā)現了在患有I期子宮內膜癌的患者中HE4比CA125具有更高的靈敏度，靈敏度分別為37.1%對16.6G/。。HE4和CA-125的組合也將靈敏度增加到了39.1%，超過CA125。但是，HE4、CA125和尿SMRP的組合在患有I期疾病的患者中表現最好，靈敏度為44.7%，將靈敏度增加到超過單獨使用CA125的靈敏度28.1%(p=0.0001)。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage30</column></row><table>表3<table>tableseeoriginaldocumentpage31</column></row><table>表4正常VS.所有子宮內膜癌靈敏度<table>tableseeoriginaldocumentpage32</column></row><table>表5<table>tableseeoriginaldocumentpage33</column></row><table>表6正常VS.所有子宮內膜癌(II-IV期)靈敏度<table>tableseeoriginaldocumentpage34</column></row><table>在本文中引用的每個專利、專利申請和出版物的公開內容在此以其全文引為參考。盡管已經參考具體的實施方案公開了本發(fā)明的主題，但是顯然本
技術領域：
的其它專業(yè)人員可以設計出其它的實施方案和修改，而不背離本文描述的主題的真實精神和范圍。隨附的權利要求包含了所有這樣的實施方案和等同修改。權利要求1.評估患者是否患子宮內膜癌或子宮癌的方法，該方法包括在從患者獲得的樣本中評估HE4的表達，其中HE4的表達升高表明患者患有子宮內膜癌或子宮癌。2.權利要求l的方法，其中所述樣品為實體組織樣品。3.權利要求1的方法，其中所述樣品是從患者獲得的體液。4.權利要求3的方法，其中所述體液選自血液、血清、腹膜液和陰道液。5.權利要求l的方法，其中所述樣品是與患者接觸過的流體。6.權利要求5的方法，其中所述流體選自腹膜沖洗液和陰道灌洗液。7.權利要求1的方法，其中樣品中HE4的表達與參比值進行比較。8.權利要求l的方法，其中所述參比值對應于未患有子宮內膜癌或子宮癌的患者中HE4的表達。9.權利要求1的方法，其中樣品中HE4的表達與在早期從該患者獲得的早期樣品中HE4的表達進行比較。10.權利要求1的方法，進一步包括評估樣本中選自CA125和SMRP的第二個標記物的表達，其中第二個標記物的表達升高進一步表明患者患有子宮內膜癌或子宮癌。11.權利要求1的方法，進一步包括評估樣品中CA125和SMRP的表達，其中CA125和SMRP任一種的表達升高進一步表明患者患有子宮內膜癌或子宮癌。12.評估患有子宮內膜癌或子宮癌的患者對治療的反應的方法，該方法包括評估在治療中不同時間從患者獲得的樣本中HE4的表達，其中在較晚時間HE4的表達降低表明患者對治療有反應。13.權利要求12的方法，進一步包括評估樣品中選自CA125和SMRP的第二個標記物的表達，其中第二個標記物的表達降低進一步表明患者對治療有反應。14.權利要求12的方法，進一步包括評估樣品中CA125和SMRP的表達，其中CA125和SMRP任一種的表達降低進一步表明患者對治療有反應。15.對已經進行了子宮內膜癌或子宮癌治療的患者的復發(fā)進行評估的方法，該方法包括在從治療后的患者獲得的樣品中評估HE4的表達，其中HE4的表達升高表明患者的子宮內膜癌或子宮癌復發(fā)。16.權利要求15的方法，進一步包括評估樣品中選自CA125和SMRP的第二個標記物的表達，其中第二個標記物的表達升高進一步表明患者的子宮內膜癌或子宮癌復發(fā)。17.權利要求15的方法，進一步包括評估樣品中CA125和SMRP的表達，其中CA125和SMRP任一種的表達升高進一步表明患者的子宮內膜癌或子宮癌復發(fā)。18.權利要求15的方法，其中在治療后多次評估HE4的表達，并且其中逐漸升高的HE4表達表明患者的子宮內膜癌或子宮癌復發(fā)。19.對患者將發(fā)展子宮內膜癌或子宮癌的可能性進行評估的方法，該方法包括在從患者獲得的樣品中評估HE4的表達，其中HE4的表達升高與患者將發(fā)展子宮內膜癌或子宮癌的可能性增加相關。20.權利要求19的方法，進一步包括評估樣品中選自CA125和SMRP的第二個標記物的表達，其中第二個標記物的表達升高進一步表明患者將發(fā)展子宮內膜癌或子宮癌。21.權利要求19的方法，進一步包括評估樣品中CA125禾QSMRP的表達，其中CA125和SMRP任一種的表達升高進一步表明患者將發(fā)展子宮內膜癌或子宮癌。22.在患有子宮內膜癌或子宮癌的患者中對腫瘤進行分期方法，該方法包括在從患者獲得的樣品中評估HE4的表達，其中逐漸升高的HE4表達表明更晚期的癌癥。23.權利要求22的方法，進一步包括評估樣品中選自CA125和SMRP的第二個標記物的表達，其中第二個標記物的表達升高進一步表明更晚期的癌癥。24.權利要求22的方法，進一步包括評估樣品中CA125和SMRP的表達，其中CA125和SMRP任一種的表達升高進一步表明更晚期的癌癥o25.在患有子宮內膜癌或子宮癌的患者中對腫瘤進行分級方法，該方法包括在從患者獲得的樣品中評估HE4的表達，其中逐漸升高的HE4表達表明更高等級的癌癥。26.權利要求25的方法，進一步包括評估樣品中選自CA125和SMRP的第二個標記物的表達，其中第二個標記物的表達升高進一步表明更高等級的癌癥。27.權利要求25的方法，進一步包括評估樣品中CA125和SMRP的表達，其中CA125和SMRP任一種的表達升高進一步表明更高等級的癌癥。28.評估被診斷患有子宮內膜癌或子宮癌的患者對治療性干預的需要的方法，該方法包括在從患者獲得的樣品中評估HE4的表達，其中HE4的表達升高表明患者需要治療性干預。29.權利要求28的方法，進一步包括評估樣品中選自CA125和SMRP的第二個標記鉤的表達，其中第二個標記物的表達升高進一步表明患者需要治療性干預。30.權利要求28的方法，其中所述治療性干預為化療。全文摘要本發(fā)明涉及HE4/HE4a標記物在評估患者的子宮內膜癌和子宮癌中的應用。本發(fā)明還涉及將腫瘤標記物用于子宮內膜癌和子宮癌的診斷、分級和分期。本發(fā)明還涉及了對被診斷患有子宮內膜癌或子宮癌的患者的預后和治療有效性的確定。文檔編號C12Q1/25GK101473041SQ200780007052公開日2009年7月1日申請日期2007年1月4日優(yōu)先權日2006年1月4日發(fā)明者伊麗莎白·薩默斯,杰弗里·W·阿拉德,理查德·摩爾申請人:富士瑞必歐美國公司