專利名稱：：融合伴侶細(xì)胞的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
：本發(fā)明涉及融合伴侶細(xì)胞(fusionpartnercell)以及雜交瘤。
背景技術(shù)：
：雜交瘤(融合細(xì)胞)被用于利用培養(yǎng)細(xì)胞的物質(zhì)生產(chǎn)中。動(dòng)物細(xì)胞中產(chǎn)生商業(yè)上或?qū)W術(shù)上有用的物質(zhì)的細(xì)胞也很多。但是，一般來說，動(dòng)物細(xì)胞的培養(yǎng)是困難的，在維持物質(zhì)產(chǎn)生能力的同時(shí)長(zhǎng)期穩(wěn)定地培養(yǎng)動(dòng)物細(xì)胞的技術(shù)還未確立。于是，提出了下述技術(shù)將在生物體外能夠永久地進(jìn)行穩(wěn)定的培養(yǎng)的骨髓瘤制成融合伴侶細(xì)胞，通過使融合伴侶細(xì)胞與產(chǎn)生生理活性物質(zhì)的細(xì)胞發(fā)生融合而制成雜交瘤，從而制作出具備培養(yǎng)能力和物質(zhì)生產(chǎn)能力這兩種特性的細(xì)胞。使用細(xì)胞融合法的單克隆抗體如下生產(chǎn)對(duì)雜交瘤所產(chǎn)生的抗體的產(chǎn)生量和結(jié)合性等性質(zhì)進(jìn)行試驗(yàn)，將所選的細(xì)胞單一化，然后使細(xì)胞增殖，制作出均勻的細(xì)胞群體，從而生產(chǎn)單克隆抗體。這些雜交瘤在體外或體內(nèi)(以腹水的形式)進(jìn)行培養(yǎng)增殖，為了抗體的大量生產(chǎn)而擴(kuò)張。用于開發(fā)使用細(xì)胞融合法的單克隆抗體的方法是已知的(參照非專利文獻(xiàn)l)。單克隆抗體與從抗血清中精制的多克隆抗體相比特異性地優(yōu)異，在各種免疫學(xué)分析方法中成為重要的工具。細(xì)胞融合在同種細(xì)胞間進(jìn)行時(shí)僅稱作雜交瘤。一般來說，小鼠的單克隆抗體等通過該方法來制作。與此相對(duì)，將由某個(gè)種類中分離出來、且與來自其他種類的永生化細(xì)胞發(fā)生融合而成的抗體產(chǎn)生細(xì)胞稱作異種雜交瘤。所謂異種雜交的用語與異種間融合以同種意義使用，所制作出的細(xì)胞稱作異種雜交瘤。進(jìn)而，如果是融合三種動(dòng)物種來源的細(xì)胞而成的抗體產(chǎn)生細(xì)胞，則也可稱作三體瘤(trioma)。利用該方法制作的單克隆抗體為大鼠或倉(cāng)鼠的抗體，使小鼠來源的骨髓瘤細(xì)胞與預(yù)先投予了預(yù)定抗原的大鼠或倉(cāng)鼠的淋巴細(xì)胞融合，從而制作小鼠x大鼠或者小鼠x倉(cāng)鼠的異種雜交瘤。如此獲得的異種雜交瘤經(jīng)過克隆而獲得各種免疫動(dòng)物來源的單克隆抗體。目前為止，有關(guān)于制作人、兔、牛、羊的單克隆抗體的異種雜交瘤的報(bào)道(參照非專利文獻(xiàn)25、專利文獻(xiàn)l、2)。但是，利用異種雜交瘤進(jìn)行的單克隆抗體的制作隨著進(jìn)行融合的細(xì)胞的生物學(xué)系統(tǒng)的種間距離越遠(yuǎn)，則越難以產(chǎn)生抗體。例如，在小鼠x兔或者小鼠x人的雜交瘤中，抗體的產(chǎn)生是極其困難的。雜交瘤由于異常的染色體數(shù)，并不總是將同樣的染色體對(duì)分離給子細(xì)胞，有時(shí)也會(huì)失去這些染色體。非專利文獻(xiàn)1:Waldman,T.,Science252:pl657-1662(簡(jiǎn))非專利文獻(xiàn)2:Proc.Natl.Acad.Sci.(USA)80:p7308-7312,1983非專利文獻(xiàn)3:Raybould等，Science240:pl788-17卯，1988非專利文獻(xiàn)4:Kennedy等，J.Gen.Virol.69:p3023-3032,1988非專利文獻(xiàn)5:Flynn等，J.Immunol.Methods121:p237-246,1989專利文獻(xiàn)l:美國(guó)專利第4634664號(hào)說明書專利文獻(xiàn)2;美國(guó)專利第4977081號(hào)說明書
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明的目的在于提供在廣范圍的動(dòng)物種中能夠更容易地應(yīng)用利用雜交瘤的穩(wěn)定的物質(zhì)生產(chǎn)的技術(shù)。具體地說，本發(fā)明的目的在于提供對(duì)雜交瘤的制作有用的新型融合伴侶及其制作方法。或者，本發(fā)明的目的在于提供通過由本發(fā)明獲得的融合伴侶與物質(zhì)生產(chǎn)細(xì)胞的融合而獲得的雜交瘤、其制造方法、以及利用該雜交瘤的物質(zhì)生產(chǎn)方法。利用了細(xì)胞融合技術(shù)的物質(zhì)的生產(chǎn)除了小鼠等有限的動(dòng)物，還存在各種各樣的課題。例如，無法提供可用作細(xì)胞融合所用的融合伴侶的細(xì)胞是小鼠以外的動(dòng)物的細(xì)胞融合技術(shù)的重要課題之一。本發(fā)明人等發(fā)現(xiàn)，通過使特定的細(xì)胞融合，可獲得作為融合伴侶有用的細(xì)胞。本發(fā)明人等所建立的融合伴侶細(xì)胞通過與小鼠以外的細(xì)胞融合，形成穩(wěn)定的雜交瘤。而且確認(rèn)了如此獲得的雜交瘤在克隆期間也穩(wěn)定地維持其表型(phenotype)，并且作為物質(zhì)生產(chǎn)細(xì)胞也是有用的，進(jìn)而完成了本發(fā)明。另外，還明確了通過本發(fā)明的雜交瘤，能夠產(chǎn)生特異性地識(shí)別抗原的抗體。艮P，本發(fā)明涉及以下的融合伴侶細(xì)胞以及該融合伴侶細(xì)胞與物質(zhì)生產(chǎn)細(xì)胞的雜交瘤。或者，本發(fā)明涉及這些細(xì)胞的制造方法以及利用雜交瘤的6物質(zhì)的制造方法。一種融合伴侶細(xì)胞，其能夠通過將以下的細(xì)胞(a)和(b)融合而獲得，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞；(b)來源于第2動(dòng)物種、且在細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞。根據(jù)[l]所述的融合伴侶細(xì)胞，其中，第1動(dòng)物種為小鼠，骨髓瘤細(xì)胞選自以下所示的小鼠骨髓瘤細(xì)胞和從這些細(xì)胞株誘導(dǎo)的細(xì)胞株，MOPC21、P3X63AG8、SP2/0、NS-1、P3.X63AG8.653、F0、S194/5,XXO.BU-l、FOX-NY和SP2/0-Ag14。根據(jù)[l]所述的融合伴侶細(xì)胞，其中，第2動(dòng)物種為人，白血病細(xì)胞選自以下所示的白血病細(xì)胞和從這些細(xì)胞株誘導(dǎo)的細(xì)胞株，MEG-Ol、HEL、UT-7、M07e、MEG-A2和DAMI。根據(jù)[l]所述的融合伴侶細(xì)胞，其中，第1細(xì)胞為SP2/0-Ag14，第2細(xì)胞為MEG-Ol?！N以保藏編號(hào)FERMBP-10761保藏的融合伴侶細(xì)胞SPYMEG?！N雜交瘤，其能夠通過將以下的細(xì)胞(1)禾Q(2)融合而獲得，(1)能夠通過融合下述細(xì)胞(a)和(b)而獲得的融合伴侶細(xì)胞，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞；和，(2)第3細(xì)胞。根據(jù)[6]所述的雜交瘤，其中，第1動(dòng)物種為小鼠，骨髓瘤細(xì)胞選自以下所示的小鼠骨髓瘤細(xì)胞和從這些細(xì)胞株誘導(dǎo)的細(xì)胞株，MOPC21、P3X63AG8、SP2/0、NS-1、P3.X63AG8,653、F0、S194/5.XXO.BU-l、FOX-NY和SP2/0-Ag14。根據(jù)[6]所述的雜交瘤，其中，第2動(dòng)物種為人，白血病細(xì)胞選自以下所示的白血病細(xì)胞和從這些細(xì)胞株誘導(dǎo)的細(xì)胞株，MEG-Ol、HEL、UT-7、M07e、MEG-A2和DAM1。根據(jù)[6]所述的雜交瘤，其中，第1細(xì)胞為SP2/0-Ag14，第2細(xì)胞7為MEG-Ol。根據(jù)[6]所述的雜交瘤，其中，融合伴侶細(xì)胞是以保藏編號(hào)FERMBP-10761保藏的SPYMEG。根據(jù)[6]所述的雜交瘤，其中，第3細(xì)胞為來源于與第2細(xì)胞相同動(dòng)物種的細(xì)胞。根據(jù)[ll]所述的雜交瘤，其中，第3細(xì)胞為抗體產(chǎn)生細(xì)胞。[13]—種制造融合伴侶細(xì)胞的方法，其包括以下工序(1)融合以下的細(xì)胞(a)禾tl(b)的工序，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞；(2)培養(yǎng)在工序(1)中融合而成的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收融合伴侶細(xì)胞的工序。一種制造雜交瘤的方法，其包括以下工序.-(1)使通過[13]記載的方法獲得的融合伴侶細(xì)胞與抗體產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行融合的工序；和(2)培養(yǎng)在工序(1)中融合而成的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收雜交瘤的工序?！N制造抗體產(chǎn)生細(xì)胞的方法，其包括以下工序(1)使通過[13]記載的方法獲得的融合伴侶細(xì)胞與抗體產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行融合而獲得雜交瘤的工序；和(2)將工序(1)中獲得的雜交瘤作為抗體產(chǎn)生細(xì)胞回收的工序。[16]根據(jù)[15]所述的方法，其還附加性地包括將工序(1)中獲得的雜交瘤進(jìn)行克隆的工序。—種制造抗體的方法，其包括以下工序(1)使通過[13]記載的方法獲得的融合伴侶細(xì)胞與抗體產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行融合而獲得雜交瘤的工序；和(2)培養(yǎng)在工序(1)中獲得的雜交瘤，并從培養(yǎng)物中回收抗體的工序。根據(jù)[17]所述的方法，其還附加性地包括將工序(1)中獲得的雜交瘤進(jìn)行克隆的工序。[19]一種制造針對(duì)感染性疾病(infectiousdisease)的抗體的方法，其包括以下工序(1)將通過[13]記載的方法獲得的融合伴侶細(xì)胞與抗體產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行融合而獲得雜交瘤的工序，所述抗體產(chǎn)生細(xì)胞來源于有感染性疾病的病原體抗原的暴露經(jīng)歷的對(duì)象；和(2)培養(yǎng)在工序(1)中獲得的雜交瘤，并從培養(yǎng)物中回收針對(duì)感染性疾病的抗體的工序。根據(jù)[19]所述的方法，其中，感染性疾病為流感(即流行性感冒)、AIDS或病毒性肝炎中的任一種?；蛘?，本發(fā)明涉及可通過融合以下的細(xì)胞(a)禾卩(b)而獲得的融合細(xì)胞的作為融合伴侶細(xì)胞的用途。更具體地說，本發(fā)明包括該融合細(xì)胞的作為與抗體產(chǎn)生細(xì)胞的融合伴侶細(xì)胞的用途。(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞；(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extm-S期的白血病細(xì)胞。根據(jù)本發(fā)明，可以提供通過與異種細(xì)胞的細(xì)胞融合而形成穩(wěn)定的雜交瘤的融合伴侶細(xì)胞。通過與本發(fā)明的融合伴侶細(xì)胞的細(xì)胞融合而獲得的雜交瘤會(huì)穩(wěn)定地生產(chǎn)物質(zhì)。特別是，本發(fā)明的融合伴侶細(xì)胞通過與抗體產(chǎn)生細(xì)胞的細(xì)胞融合而形成產(chǎn)生來源于抗體產(chǎn)生細(xì)胞的抗體的雜交瘤。本發(fā)明的融合伴侶細(xì)胞的優(yōu)選方式為通過與人或小鼠的抗體產(chǎn)生細(xì)胞的細(xì)胞融合而形成產(chǎn)生人抗體或小鼠抗體的雜交瘤。穩(wěn)定地維持人的抗體產(chǎn)生細(xì)胞在以前是比較困難的。因此，提供了穩(wěn)定地產(chǎn)生人的抗體的細(xì)胞是本發(fā)明的很大的效果。雜交瘤穩(wěn)定地維持表型不僅在物質(zhì)的生產(chǎn)中、而且在細(xì)胞的克隆中也是重要的特征。例如，抗體產(chǎn)生細(xì)胞為了獲得單克隆抗體而將雜交瘤克隆。細(xì)胞的克隆也就是獲得由單一細(xì)胞增殖而成的細(xì)胞群體。因此，在反復(fù)進(jìn)行單一細(xì)胞分裂的過程中，如果細(xì)胞的表型不穩(wěn)定，則目標(biāo)細(xì)胞的克隆是極其困難的。由本發(fā)明提供的雜交瘤由于穩(wěn)定地維持細(xì)胞的表型，因此可以容易地進(jìn)行克隆。圖1為表示MEG-Ol的細(xì)胞周期的圖。圖2為表示利用ELISA法的人IgG產(chǎn)生雜交瘤的篩選概念的圖。圖3為比較本發(fā)明的融合伴侶細(xì)胞SPYMEG和現(xiàn)有的融合伴侶細(xì)胞Karpas的形態(tài)的照片。圖4為確認(rèn)克隆K0142(+)、MK16(+)、MK99(+)的各洗脫級(jí)分的IgG的照片。圖中的(+)表示ELISA陽性克隆、(-)表示ELISA陰性克隆。圖5為確認(rèn)各克隆的洗脫級(jí)分、透析濃縮后的樣品的IgG的照片。圖6為表示SPYMEG細(xì)胞融合的改良方法的工序的圖。圖7為比較細(xì)胞融合方法的改良前后的集落形成數(shù)、IgG產(chǎn)生克隆數(shù)的圖。表示了每4張96孔板的集落形成孔數(shù)、IgG產(chǎn)生孔數(shù)。通過細(xì)胞融合工序的改良，集落形成孔數(shù)、IgG產(chǎn)生孔數(shù)顯著地增加，其中在流感的篩選中，獲得了多個(gè)特異性地識(shí)別流感疫苗的抗體。首次成功地確立了特異性地識(shí)別抗原的抗體。圖8為表示與流感反應(yīng)的IgG產(chǎn)生克隆的ELISA中的反應(yīng)性的圖。圖9為表示利用Western印跡法的對(duì)流感疫苗的反應(yīng)性的圖。圖10為表示精制人IgG(6-19)的SDS-PAGE和反應(yīng)性的確認(rèn)的圖。表中的值為致敏了流感HA疫苗的ELISA的值，表示波長(zhǎng)450nm處的吸光度。具體實(shí)施例方式本發(fā)明中的"雜交瘤"是指通過細(xì)胞融合獲得的細(xì)胞。通常，雜交瘤通過種類不同的細(xì)胞或同種的不同個(gè)體或組織來源的細(xì)胞的融合來制造?；蛘撸雇N的相同細(xì)胞彼此融合而成的細(xì)胞也包括在雜交瘤中。進(jìn)而，本發(fā)明的雜交瘤包括通過2個(gè)以上細(xì)胞的融合而獲得的融合細(xì)胞。B口，通過對(duì)由細(xì)胞A和細(xì)胞B的細(xì)胞融合獲得的雜交瘤a進(jìn)一步融合細(xì)胞C而獲得的融合細(xì)胞(3也包括在本發(fā)明的雜交瘤中。(細(xì)胞A)x(細(xì)胞B)呵雜交瘤a]x(細(xì)胞C)=[雜交瘤卩]形成融合有上述3種細(xì)胞的雜交瘤P的細(xì)胞A、細(xì)胞B和細(xì)胞C所來源的種類是任意的。因此，這些細(xì)胞所來源的種類相同的情況和不同的情況均包含在本發(fā)明中。有時(shí)將通過3種細(xì)胞的融合而獲得的雜交瘤特別地10稱作三體瘤。本發(fā)明的優(yōu)選方式中，細(xì)胞A(第l細(xì)胞)和細(xì)胞B(第2細(xì)胞)所來源的種類不同，細(xì)胞B和細(xì)胞C(第3細(xì)胞)所來源的種類相同?；蛘撸?xì)胞A和細(xì)胞C所來源的種類相同的情況，或者細(xì)胞A、細(xì)胞B和細(xì)胞C為均不同種的來源的情況，均包括在本發(fā)明的雜交瘤中。一般來說，特別地將通過細(xì)胞融合獲得的可在體外長(zhǎng)期容易地培養(yǎng)的細(xì)胞稱作雜交瘤。因此，本發(fā)明中優(yōu)選的雜交瘤是指在細(xì)胞融合后可以在體外長(zhǎng)期容易地培養(yǎng)的細(xì)胞?；蛘?，本發(fā)明中優(yōu)選的雜交瘤是指在有限稀釋(limiteddilution)后維持細(xì)胞增殖的細(xì)胞。換而言之，有限稀釋后維持細(xì)胞增殖的細(xì)胞包括在細(xì)胞融合后可以在體外長(zhǎng)期容易地培養(yǎng)的細(xì)胞中。進(jìn)而，本發(fā)明中優(yōu)選的雜交瘤是維持細(xì)胞融合所利用的細(xì)胞的表型的細(xì)胞。本發(fā)明中，雜交瘤應(yīng)維持的細(xì)胞的表型包括細(xì)胞所具有的生產(chǎn)物質(zhì)的能力。例如，細(xì)胞融合所用的細(xì)胞為產(chǎn)生抗體或細(xì)胞因子的細(xì)胞時(shí)，本發(fā)明中優(yōu)選的雜交瘤維持生產(chǎn)這些物質(zhì)的能力。但是，本發(fā)明的雜交瘤并非必須完全地維持細(xì)胞融合所用細(xì)胞所具備的表型。因此，例如當(dāng)除了之前所示的抗體以外，也期待維持細(xì)胞表面抗原或細(xì)胞內(nèi)蓄積的酶或轉(zhuǎn)錄因子的產(chǎn)生這些表型時(shí)，這些表型也包含在雜交瘤應(yīng)維持的表型中。但是，當(dāng)不需要生產(chǎn)這些物質(zhì)時(shí)，即便是失去生產(chǎn)這些物質(zhì)的能力的細(xì)胞，只要維持所需物質(zhì)的生產(chǎn)，則包含在本發(fā)明的雜交瘤中。本發(fā)明中的"融合伴侶細(xì)胞"是指可以通過與其它細(xì)胞融合來制作雜交瘤的細(xì)胞。本發(fā)明中，優(yōu)選的融合伴侶細(xì)胞通過細(xì)胞融合而使在體外的細(xì)胞的長(zhǎng)期存活成為可能。進(jìn)而，融合伴侶細(xì)胞優(yōu)選具備用于篩選的適當(dāng)?shù)倪x擇標(biāo)記物。選擇標(biāo)記物是指在特定的培養(yǎng)條件下可以(或不可以)存活的表型。動(dòng)物細(xì)胞的選擇標(biāo)記物中已知有由次黃嘌呤-鳥嘌呤-磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶缺乏(以下簡(jiǎn)稱為HGPRT缺乏)或胸苷激酶缺乏(以下簡(jiǎn)稱為TK缺乏)所帶來的次黃嘌呤-氨基喋呤-胸苷敏感性(以下簡(jiǎn)稱為HAT敏感性)等。HAT敏感性的細(xì)胞無法在HAT選擇培養(yǎng)基中進(jìn)行DNA合成而死亡，但當(dāng)與正常的細(xì)胞融合時(shí)，由于可以利用正常細(xì)胞的補(bǔ)救途徑來繼續(xù)DNA的合成，因此在HAT選擇培養(yǎng)基中也會(huì)增殖。HGPRT缺乏或TK缺乏的細(xì)胞分別可以在含有6-硫鳥嘌呤、8-氮鳥嘌呤(以下簡(jiǎn)稱為8AG)或5'-溴脫氧尿苷的培養(yǎng)基中選擇。正常的細(xì)胞由于將這些嘧啶類似物攝入到DNA中，因此會(huì)死亡，但缺乏這些酶的細(xì)胞由于不會(huì)攝入這些嘧啶類似物，因此可以在選擇培養(yǎng)基中存活。另外，被稱作G418耐受性的選擇標(biāo)記物通過新霉素耐受性基因，形成針對(duì)2-脫氧鏈霉胺系抗生素(慶大霉素類似物)的耐受性。本發(fā)明提供可通過融合以下的細(xì)胞(a)禾P(b)而獲得的融合伴侶細(xì)胞(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞。另外，本發(fā)明還提供包含以下工序的制造融合伴侶細(xì)胞的方法(1)融合以下的細(xì)胞(a)和(b)的工序，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞；和，(2)培養(yǎng)在工序(1)中融合的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收融合伴侶細(xì)胞的工序。本發(fā)明中，來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞是指來源于可單獨(dú)地克隆的骨髓瘤的細(xì)胞?？蓡为?dú)地克隆是指在人工的培養(yǎng)環(huán)境下從1個(gè)細(xì)胞就可以開始增殖并維持增殖。本發(fā)明中，來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞只要是可通過與白血病細(xì)胞的細(xì)胞融合而形成融合伴侶的細(xì)胞，則可以利用各種細(xì)胞。例如，作為可用作本發(fā)明的骨髓瘤細(xì)胞的公知的細(xì)胞，可以列舉出以下的細(xì)胞株。以下所示細(xì)胞株的一覽中，ATCC表示美國(guó)標(biāo)準(zhǔn)生物品收藏中心(AmericanTissueandCultureCollection)的保藏編號(hào)，JCRB表示JCRB細(xì)胞庫(kù)(日本細(xì)胞庫(kù)，JapaneseCollectionofResearchBioresources)的保藏編號(hào)。因此，這些細(xì)胞株均可以由該細(xì)胞庫(kù)獲得分售。另外，JCRB細(xì)胞庫(kù)的細(xì)胞株通過日本科學(xué)研究資源庫(kù)(HumanScienceResearchResourcesBank,HSRRB)獲得分售。12MOPC21(ATCC編號(hào)HB-8411)P3X63AG8(ATCC編號(hào)T1B9)SP2/0(ATCC編號(hào)CRL1581)NS-1(ATCC編號(hào)TIB18)P3.X63AG8.653(ATCC編號(hào)CRL1580)F0(ATCC編號(hào)CRL1646)S194/5.XXO.BU-1(ATCC編號(hào)CRL1580)FOX-NY(ATCC編號(hào)CRL1732)SP2/0-Ag14(JCRB編號(hào)0029)這些細(xì)胞株中具備之前所述的優(yōu)選特征的是一組小鼠骨髓瘤細(xì)胞株、或者從這些小鼠骨髓瘤細(xì)胞株誘導(dǎo)的細(xì)胞株。誘導(dǎo)的細(xì)胞株是指導(dǎo)入藥劑耐受性等附加表型后重新進(jìn)行克隆而得到的細(xì)胞株。本發(fā)明的來源于第2動(dòng)物種的白血病細(xì)胞是指細(xì)胞周期中含有Extm-S期的白血病細(xì)胞。一般來說，對(duì)于真核細(xì)胞，由以下的循環(huán)構(gòu)成細(xì)胞周期。持續(xù)細(xì)胞增殖的細(xì)胞通過重復(fù)G1期M期的循環(huán)來繼續(xù)細(xì)胞分裂。另一方面，當(dāng)停止細(xì)胞增殖時(shí)，成為M期后稱為GO期的穩(wěn)定狀態(tài)，細(xì)胞周期停止。-[Gl期]-[S期]畫[G2期]-[M期]-這些各細(xì)胞周期中，S期為進(jìn)行核酸合成的期間。此時(shí)認(rèn)為構(gòu)成染色體的基因組DNA被復(fù)制，做好細(xì)胞分裂的準(zhǔn)備。倍增的基因組DNA在M期通過有絲分裂而分離為2個(gè)細(xì)胞。然而，在特定細(xì)胞中，在進(jìn)行基因組DNA的復(fù)制后，觀察到細(xì)胞分裂不進(jìn)行的現(xiàn)象。將完成DNA的合成但未移向M期的細(xì)胞分裂的期間命名為Extra-S期。在未分裂的細(xì)胞中，所合成的基因組DNA蓄積，觀察到細(xì)胞中的DNA的增加。例如，本發(fā)明中優(yōu)選的白血病細(xì)胞MEG-01的平均染色體數(shù)為2n=104，遠(yuǎn)遠(yuǎn)多于正常細(xì)胞(2n=46)。這是由于MEG-01在增加基因組DNA的細(xì)胞周期中含有Extra-S期，從而具有使染色體成為倍數(shù)體的性質(zhì)(Oncogenel3:p695-703，1996)(圖1)。這樣，在本發(fā)明中，通過使用細(xì)胞周期中含有Extm-S期、從而具有使染色體成為倍數(shù)體的性質(zhì)的白血病細(xì)胞，可以期待防止來源于抗體產(chǎn)生細(xì)胞的染色體從異種雜交瘤上脫落的效果。本發(fā)明的細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞來源于與上述骨髓瘤不同的動(dòng)物種，且優(yōu)選為來源于與后述的第3細(xì)胞的來源種類相同種的白血病細(xì)胞。白血病細(xì)胞可以由具有白血病的個(gè)體的造血組織或末梢血中獲得。造血組織包括骨髓、脾臟或者淋巴結(jié)等。白血病例如可以列舉出巨核細(xì)胞系白血病。例如，通過用Ficoll法離心分離末梢血并回收特定比重的細(xì)胞級(jí)分，從而可以分離白細(xì)胞或者單核細(xì)胞等。進(jìn)一步分離的白血病細(xì)胞的細(xì)胞周期中含有Extra-S期可以將細(xì)胞染色體的增加作為指標(biāo)來進(jìn)行確認(rèn)。染色體的增加例如可以通過經(jīng)12-氧沖四烷酰佛波醇-13-醋酸酯(TPA)處理的細(xì)胞的倍數(shù)性(染色體總數(shù))的增加來確認(rèn)。倍數(shù)性的增加可以通過流式細(xì)胞儀或者倍數(shù)性分析儀來檢測(cè)?；蛘撸€可將公知的白血病細(xì)胞用于本發(fā)明。例如，作為可作為本發(fā)明的來源于第2動(dòng)物種的白血病細(xì)胞利用的公知的細(xì)胞，可以列舉出以下的細(xì)胞株。MEG-01和HEL為人的巨核細(xì)胞系白血病細(xì)胞株(Blood66:pl384-1392，1985、J.Clin.Invest.85:pl072-1084)。MEG-01(ATCC編號(hào)CRL-2021)HEL(JCRB編號(hào)0062)UT-7(N.Komatsuetal.CancerRes,51:341-348，1991)M07e(AvanziGCetal.JCellPhysiol.1990Dec;145(3):458-64.)MEG-A2(JCRB編號(hào)IFO50478)DAM1(Blood89:p4238,1997)特別是MEG-01作為選擇標(biāo)記物具有有用的8AG耐受性。另外，由于MEG-01本身不產(chǎn)生免疫球蛋白，因此作為與抗體產(chǎn)生細(xì)胞的雜交瘤的制作用融合伴侶是優(yōu)選的。本發(fā)明的融合伴侶細(xì)胞可以通過將來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞與來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞融合而獲得。細(xì)胞融合可以利用聚乙二醇(PEG法)或電融合法等公知的細(xì)胞融合技術(shù)。聚乙二醇法的操作如下。首先，將骨髓瘤細(xì)胞與白血病細(xì)胞的細(xì)胞比就各個(gè)特定的融合條件進(jìn)行最優(yōu)化。對(duì)于聚乙二醇(PEG)的濃度，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以根據(jù)PEG的分子量等條件來選擇最佳的條件。例如，35%的PEG1500(Aldrich、Milwaukee、Wisconsin)是用于一般的細(xì)胞融合的條件之一。用1.5分鐘的時(shí)間慢慢將lmL的35%PEG1500加入細(xì)胞團(tuán)塊/細(xì)胞混合物中后，緩慢地用不含血清的培養(yǎng)基、然后用含血清的培養(yǎng)基進(jìn)行稀釋，從而進(jìn)行細(xì)胞融合。為了使細(xì)胞融合變得容易而同樣地可使用的其它方法包括電融合。該方法中，將細(xì)胞置于特殊的緩沖液中，通過施加電場(chǎng)使細(xì)胞排列。排列后的細(xì)胞與其它細(xì)胞的接觸機(jī)會(huì)增加，可以有效地使細(xì)胞融合。將融合混合物在含有例如15%胎牛血清的HB-GRO培養(yǎng)基(IrvineScientific,SantaAna，California)150ml中制成細(xì)胞密度為8xl()5細(xì)胞/mL，以2,105細(xì)胞/孔分散于96孔板中。將細(xì)胞在5~10%(:02氣氛下、37"C下孵育，制成8AG耐受性，從而可以獲得融合伴侶細(xì)胞。所得融合伴侶細(xì)胞可以根據(jù)需要進(jìn)行克隆。克隆后的融合伴侶細(xì)胞在雜交瘤的制造中有助于維持重現(xiàn)性。例如，可以分別使用SP2/0-Agl4作為來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、使用MEG-01作為來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞。如此提供的融合伴侶細(xì)胞其本身可長(zhǎng)期穩(wěn)定地傳代，成為用于從抗體產(chǎn)生細(xì)胞獲得單克隆抗體的普遍的融合伴侶細(xì)胞。即，與小鼠的同種雜交瘤中確立的小鼠骨髓瘤同樣，作為可以利用小鼠以外的生物種來源的抗體產(chǎn)生細(xì)胞來穩(wěn)定地獲得雜交瘤的融合伴侶是有用的。通過本發(fā)明獲得的融合伴侶細(xì)胞中，通過將小鼠骨髓瘤細(xì)胞株SP2/0-Ag14與人白血病細(xì)胞株MEG-01融合而獲得的融合伴侶細(xì)胞SPYMEG以保藏編號(hào)FERMBP-10761保藏在專利生物保藏中心(InternationalPatentOrganismDepositary)。(a)保藏機(jī)構(gòu)的名稱和地址名稱獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心地址日本茨城縣筑波市東l丁目1番1號(hào)中央第6(郵編305-8566)(b)保藏日平成18年(2006年)2月24日(c)保藏編號(hào)FERMBP-10761(由平成18年2月24日保藏的FERMP-20816轉(zhuǎn)移)15本發(fā)明涉及可以使用上述融合伴侶細(xì)胞獲得的雜交瘤。即，本發(fā)明提供可通過融合以下的細(xì)胞(1)和(2)而獲得的雜交瘤。(1)可以通過融合下述的細(xì)胞(a)和(b)而獲得的融合伴侶細(xì)胞，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞；和，(2)第3細(xì)胞。另外，本發(fā)明還提供包括以下工序的制造雜交瘤的方法(1)融合下述的細(xì)胞(a)和(b)的工序，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extm-S期的白血病細(xì)胞；(2)培養(yǎng)在工序(1)中融合的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收融合伴侶細(xì)胞的工序；(3)使第3細(xì)胞與工序(2)中回收的融合伴侶細(xì)胞融合的工序；以及，(4)培養(yǎng)在工序(3)中融合的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收雜交瘤的工序。本發(fā)明的第3細(xì)胞為與第1細(xì)胞或第2細(xì)胞同種來源或者不同種來源的細(xì)胞。具體地例如可以利用來源于人、兔、小鼠、大鼠、牛、山羊和綿羊等的細(xì)胞。更具體地說，當(dāng)使用通過小鼠來源的骨髓瘤(第1細(xì)胞)和人來源的白血病細(xì)胞(第2細(xì)胞)而獲得的融合伴侶時(shí)，作為第3細(xì)胞優(yōu)選的細(xì)胞為人或小鼠來源的細(xì)胞。特別是可以利用人來源的細(xì)胞作為第3細(xì)胞，這是本發(fā)明的融合伴侶細(xì)胞的很大優(yōu)點(diǎn)。本發(fā)明的第3細(xì)胞是可以期待最終能夠長(zhǎng)期培養(yǎng)的細(xì)胞。更具體地說，例如可將具有生產(chǎn)目標(biāo)物質(zhì)的能力的細(xì)胞作為第3細(xì)胞來使用。通過將這種細(xì)胞與本發(fā)明的融合伴侶進(jìn)行細(xì)胞融合，可以獲得能夠長(zhǎng)期地維持具有目標(biāo)表型的細(xì)胞的雜交瘤。一般將通過制成雜交瘤而使細(xì)胞能夠長(zhǎng)期間維持的形式稱作永生化。本發(fā)明中，可以將產(chǎn)生目標(biāo)生理活性物質(zhì)的任意細(xì)胞作為第3細(xì)胞利用。本發(fā)明中優(yōu)選的生理活性物質(zhì)可以列舉出抗體。即，抗體產(chǎn)生細(xì)胞作為本發(fā)明的第3細(xì)胞是優(yōu)選的。抗體產(chǎn)生細(xì)胞例如可以列舉出白細(xì)胞(末梢淋巴細(xì)胞)、脾細(xì)胞等。從生物體采集這些細(xì)胞的方法是公知的。作為第3細(xì)胞，更具體地可以列舉出來源于有感染性疾病的病原體抗原的暴露經(jīng)歷的對(duì)象的抗體產(chǎn)生細(xì)胞。有感染性疾病的病原體抗原的暴露經(jīng)歷的對(duì)象可以列舉出接種了感染性疾病的病原體抗原(疫苗)的對(duì)象、或者有感染性疾病的感染經(jīng)歷的對(duì)象等。本發(fā)明中，感染性疾病并無特別限定，優(yōu)選可以列舉出流感、AIDS、HCV或HBV等病毒性肝炎等。特別是末梢血淋巴細(xì)胞作為本發(fā)明的抗體產(chǎn)生細(xì)胞是優(yōu)選的。末梢血淋巴細(xì)胞可以通過采血容易地獲得。通過根據(jù)本發(fā)明將小鼠的末梢血淋巴細(xì)胞制成雜交瘤，可以容易地獲得產(chǎn)生小鼠抗體的雜交瘤。進(jìn)而，通過根據(jù)本發(fā)明將人的末梢血淋巴細(xì)胞制成雜交瘤，可以容易地獲得產(chǎn)生人抗體的雜交瘤。本發(fā)明中，融合伴侶和第3細(xì)胞可以通過與上述第1細(xì)胞和第2細(xì)胞的細(xì)胞融合相同的方法來進(jìn)行細(xì)胞融合。細(xì)胞融合可以利用PEG法或電融合法。例如，在使用作為本發(fā)明的融合伴侶的SPYMEG進(jìn)行與人末梢血淋巴細(xì)胞的細(xì)胞融合時(shí)，優(yōu)選的條件可以列舉出以下條件。首先，所融合的末梢血白細(xì)胞(PBL)的細(xì)胞數(shù)優(yōu)選調(diào)整至lxl07108個(gè)。以2:110:1的比例混合SPYMEG和PBL，先離心分離使其沉淀，除去上清液。在所回收的細(xì)胞級(jí)分中加入聚乙二醇(PEG)使細(xì)胞融合。細(xì)胞融合所用的PEG的濃度為30%~70%、優(yōu)選為4060%、更優(yōu)選為50%。根據(jù)細(xì)胞數(shù)，將0.1mL2.0mL、優(yōu)選0.6mL1.0mL的PEG溶液用60秒~90秒的時(shí)間用吸管加入細(xì)胞中，同時(shí)進(jìn)行攪拌混合。加完P(guān)EG溶液后，在該狀態(tài)下用吸管攪拌混合2分鐘~3分鐘。之后，進(jìn)一步用30秒~60秒的時(shí)間一點(diǎn)點(diǎn)地加入1014mL的無血清培養(yǎng)基，同時(shí)進(jìn)行攪拌混合。之后，加入無血清培養(yǎng)基并進(jìn)行離心分離。離心后除去上清，用無血清培養(yǎng)基洗滌細(xì)胞1次。在HAT培養(yǎng)基(15%FBS、HAT(x50)、RPMI中)混懸洗滌后的細(xì)胞，接種于96孔板中。對(duì)于無血清培養(yǎng)基和PEG，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以適當(dāng)利用通常的細(xì)胞融合中所使用的那些。例如，本發(fā)明的細(xì)胞融合中可以利用以下的培養(yǎng)基和PEG。17PEG:PEG1500(Aldrich、Milwaukee、Wisconsin)HAT:HAT添加(50x)(GIBCO制、目錄號(hào)No.21060-017)無血清培養(yǎng)基RPMI1640(SIGMA帝ij、目錄號(hào)NoR8758)除此以外，抗體產(chǎn)生細(xì)胞還可從免疫動(dòng)物獲得。預(yù)先將任意的抗原與適當(dāng)?shù)淖魟┮黄饘?duì)免疫動(dòng)物免疫?？乖€可以與載體蛋白相結(jié)合而成為免疫原。用于獲得免疫原的載體蛋白可以使用鑰孔蟲戚血藍(lán)蛋白(KLH)或牛血清白蛋白(BSA)等。免疫動(dòng)物一般利用兔、小鼠、大鼠、山羊或綿羊等。作為佐劑，一般使用Freund的完全佐劑(FCA)等(Adv.Tubercl.Res.,1:130-148，1956)。利用ELISA或Ouchterlony法追蹤抗體效價(jià)，確認(rèn)抗體效價(jià)充分地上升后，摘出抗體產(chǎn)生細(xì)胞并使該細(xì)胞分散，從而制成細(xì)胞融合所使用的抗體產(chǎn)生細(xì)胞。與人同樣，通過回收脾細(xì)胞或末梢血淋巴細(xì)胞，可以回收抗體產(chǎn)生細(xì)胞。如此獲得的抗體產(chǎn)生細(xì)胞通過與本發(fā)明的融合伴侶進(jìn)行融合，可以制成本發(fā)明的雜交瘤。這樣，本發(fā)明的雜交瘤的制造方法中，通過在第3細(xì)胞中使用抗體產(chǎn)生細(xì)胞，可以制造抗體。即，本發(fā)明提供包括以下工序的制造抗體的方法(1)通過以下的工序獲得融合伴侶細(xì)胞的工序，(A)將以下的細(xì)胞(a)禾n(b)融合的工序，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞，(B)培養(yǎng)在工序(A)中融合的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收融合伴侶細(xì)胞的工序；(2)使抗體產(chǎn)生細(xì)胞與工序(1)中獲得的融合伴侶細(xì)胞融合，從而獲得雜交瘤的工序；以及，(3)培養(yǎng)在工序(2)中獲得的雜交瘤，并從培養(yǎng)物中回收抗體的工序?；蛘撸景l(fā)明涉及對(duì)上述抗體的制造有用的產(chǎn)生抗體的細(xì)胞的制造方法。即，本發(fā)明提供包括以下工序的制造抗體產(chǎn)生細(xì)胞的方法(1)通過以下的工序獲得融合伴侶細(xì)胞的工序，(A)將以下的細(xì)胞(a)和(b)融合的工序，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extm-S期的白血病細(xì)胞，(B)培養(yǎng)在工序(A)中融合的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收融合伴侶細(xì)胞的工序；(2)使抗體產(chǎn)生細(xì)胞與工序(1)中獲得的融合伴侶細(xì)胞再融合，從而獲得雜交瘤的工序；以及，(3)將工序(2)中獲得的雜交瘤作為抗體產(chǎn)生細(xì)胞回收的工序。通過使用本發(fā)明的融合伴侶細(xì)胞，可以獲得穩(wěn)定地產(chǎn)生抗體的雜交瘤。雜交瘤通過在適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)基中培養(yǎng)，可以優(yōu)先地使細(xì)胞融合成功的細(xì)胞增殖。例如，使用本發(fā)明的SPYMEG作為融合伴侶細(xì)胞時(shí)，可以利用含有HAT的選擇培養(yǎng)基。在本發(fā)明的抗體制造方法或者抗體產(chǎn)生細(xì)胞的制造方法中，雜交瘤可以進(jìn)行克隆。將雜交瘤進(jìn)行克隆的方法是公知的。即，通過有限稀釋法可以將雜交瘤進(jìn)行克隆。經(jīng)有限稀釋的雜交瘤理論上形成從1個(gè)細(xì)胞增殖而成的細(xì)胞群體。如此獲得的細(xì)胞群體為具有均勻的遺傳特征的細(xì)胞群體、即克隆。由經(jīng)克隆化的雜交瘤獲得的抗體稱作單克隆抗體。單克隆抗體是具有高度均勻的抗原結(jié)合表型的抗體。艮P，本發(fā)明提供包括以下工序的單克隆抗體的制造方法(1)通過以下的工序獲得融合伴侶細(xì)胞的工序，(A)將以下的細(xì)胞(a)禾B(b)融合的工序，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞，(B)培養(yǎng)在工序(A)中融合的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收融合伴侶細(xì)胞的工序；(2)使抗體產(chǎn)生細(xì)胞與工序(1)中獲得的融合伴侶細(xì)胞融合而制成雜交瘤，并將產(chǎn)生目標(biāo)抗體的雜交瘤進(jìn)行克隆的工序；以及，(3)培養(yǎng)工序(2)中經(jīng)克隆的雜交瘤，并從培養(yǎng)物中回收單克隆抗體的工序?；蛘撸景l(fā)明涉及對(duì)上述抗體的制造有用的產(chǎn)生抗體的細(xì)胞的制造方法。即，本發(fā)明提供包括以下工序的制造抗體產(chǎn)生細(xì)胞的方法(1)通過以下的工序獲得融合伴侶細(xì)胞的工序，(A)將以下的細(xì)胞(a)禾n(b)融合的工序，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extm-S期的白血病細(xì)胞，(B)培養(yǎng)在工序(A)中融合的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收融合伴侶細(xì)胞的工序；(2)使抗體產(chǎn)生細(xì)胞與工序(1)中獲得的融合伴侶細(xì)胞再融合，從而獲得雜交瘤的工序；以及，(3)將工序(2)中獲得的雜交瘤作為抗體產(chǎn)生細(xì)胞回收的工序。本發(fā)明中，可以將抗體產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行克隆。通過將產(chǎn)生目標(biāo)抗體的抗體產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行克隆，可以制成產(chǎn)生單克隆抗體的細(xì)胞。即，本發(fā)明提供包括以下工序的產(chǎn)生單克隆抗體的雜交瘤的制造方法(1)通過以下的工序獲得融合伴侶細(xì)胞的工序，(A)將以下的細(xì)胞(a)和(b)融合的工序，(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、(b)來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞，(B)培養(yǎng)在工序(A)中融合的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收融合伴侶細(xì)胞的工序；(2)使抗體產(chǎn)生細(xì)胞與工序(1)中獲得的融合伴侶細(xì)胞再融合而制成雜交瘤，并將產(chǎn)生目標(biāo)抗體的雜交瘤進(jìn)行克隆的工序；以及，(3)將工序(2)中經(jīng)克隆的雜交瘤作為抗體產(chǎn)生細(xì)胞回收的工序。本發(fā)明的雜交瘤是在體外具有穩(wěn)定的抗體產(chǎn)生能力的抗體產(chǎn)生細(xì)胞。因此，雖為異種雜交瘤，但在適當(dāng)培養(yǎng)基中在細(xì)胞增殖的同時(shí)，抗體產(chǎn)生能力也維持。因此，在克隆的過程中失去必要的克隆的可能性較低。而且，已建立的雜交瘤克隆也可穩(wěn)定地維持。通過由本發(fā)明獲得的雜交瘤或者其克隆的培養(yǎng)，可以產(chǎn)生抗體或單克20隆抗體。使用無血清培養(yǎng)基或低濃度血清培養(yǎng)基等作為培養(yǎng)基時(shí)，抗體的精制變得容易，因此優(yōu)選?；镜膭?dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)基己知有DMEM培養(yǎng)基、RPMI1640培養(yǎng)基或ASF培養(yǎng)基103等。另外，還可接種于裸鼠或SCID小鼠的腹腔，以腹水的形式回收單克隆抗體。當(dāng)向培養(yǎng)基中加入血清時(shí)，可以以510y。v/v利用胎牛血清(以下簡(jiǎn)稱為FCS)。另外，當(dāng)在這些培養(yǎng)基中培養(yǎng)本發(fā)明的雜交瘤時(shí)，添加公知的抗體產(chǎn)生增強(qiáng)因子是有利的。在體外增強(qiáng)抗體產(chǎn)生的成分已知有例如D-青霉胺、乙酰乙酸、雙胍類、維生素K5、N-乙酰谷氨酸(特開平8-70858)、白細(xì)胞介素6(Nature,324:6092，73-6;1986)、糖醇(特開平2-200177)、脂多糖(特開平4-20294)、佛波酯(特開平1-171494)或丁酸(hyridomeVol.4，No.1，p63;1985)等。如此獲得的單克隆抗體可以通過利用硫酸銨、硫酸鈉等的鹽析法、離子交換色譜法、凝膠過濾法或者親和色譜法等進(jìn)行精制。以下通過實(shí)施例具體地說明本發(fā)明，但本發(fā)明并非局限于這些實(shí)施例。另外，本說明書中引用的全部現(xiàn)有技術(shù)文獻(xiàn)均作為參考編入本說明書中。實(shí)施例[實(shí)施例1]融合伴侶細(xì)胞的制作根據(jù)常規(guī)方法用PEG使在RPMI+5%FCS(普通培養(yǎng)基)的培養(yǎng)液中培養(yǎng)的SP2/0-Ag-14(3xl07)和MEG-Ol(3~6xl07)的細(xì)胞進(jìn)行融合。在普通培養(yǎng)基(RPMI+5°/。FCS)中培養(yǎng)融合細(xì)胞3天，在第3天用不含F(xiàn)CS的RPMI溶液培養(yǎng)19天。在第19天用含有8AG的普通培養(yǎng)基進(jìn)行有限稀釋，并培養(yǎng)5天。由于融合細(xì)胞發(fā)生了增殖，因此取其作為融合伴侶細(xì)胞SPYMEG。SPYMEG以保藏編號(hào)FERMBP-10761(由FERMP-20816轉(zhuǎn)移)在2006年2月24日保藏于獨(dú)立行政法人產(chǎn)業(yè)技術(shù)綜合研究所專利生物保藏中心。SPYMEG為8AG耐受性，用HAT培養(yǎng)基培養(yǎng)時(shí)死亡。利用PEG法制作異種雜交瘤21a)人末梢血白細(xì)胞的回收(比重離心法)以每次10mL將肝素采血的人末梢血40mL分注于50mL的管中，加入25mL滅菌PBC并混合，疊置于以每次15mL分注有HISTOPAQUE(SIGMAH8889)的50mL管中，在800rpm、室溫下離心30分鐘。離心后回收白細(xì)胞層。b)融合伴侶細(xì)胞(SPYMEG)的回收回收在75cm2培養(yǎng)燒瓶中增殖的SPYMEG(培養(yǎng)基10%FBS-RPMI)。c)細(xì)胞融合混合回收的人末梢血白細(xì)胞和SPYMEG，以達(dá)到2:110:l的比例，進(jìn)行離心(從末梢血40mL獲得48xl(^個(gè)。SPYMEG使用4個(gè)75cn^培養(yǎng)燒瓶的量)。在團(tuán)塊中加入0.61.0mL的50%PEG(PEG4000、MERCKCatNo.1097270100，用RPMI(RPMI1640、SIGMA、CatNo.R8758)等量稀釋)，進(jìn)行細(xì)胞融合。用RPMI無血清添加培養(yǎng)基洗滌后，在15%FBS(EQUITECH-BIOINCLot.SFB30-1548)-HAT(HAT添加(BM-condimed、rocheCatNo.663573)(50x)、GIBCOCatNo.21060-017)1%BM培養(yǎng)基160mL中懸浮，并接種于8張96孔板中。接種開始3天后更換培養(yǎng)基，在確認(rèn)雜交瘤的集落形成的階段(2~3周后)從96孔板中采樣培養(yǎng)上清，進(jìn)行1次篩選。IgG精制方案以1滴/秒的流速將樣品(培養(yǎng)上清)上樣，回收通過液。用PBS/0.1%NaN3以最大流速洗柱(洗滌直至用吸光度計(jì)測(cè)達(dá)到A280=0.05以下)。用柱床體積的25倍量的0.17M甘氨酸-HC1緩沖液(pH為2.3)以全速的流速進(jìn)行解離。使用級(jí)分收集器將解離物收集于試管中。在試管中預(yù)先放入有解離物量(mL)的1/5以上的lMTris-HCl緩沖液(pH為8.0)。解離物和中和用lMTris-HCl緩沖液(pH為8.0)盡量迅速地混合。測(cè)定各級(jí)分的A280后，尋找有蛋白的級(jí)分，集中A280=0.1以上的級(jí)分。集中后用pH試紙確認(rèn)了pH為8.0。集中的級(jí)分用12.5%凝膠、樣品緩沖液(2ME+)進(jìn)行SDS-PAGE，檢驗(yàn)純度。每個(gè)帶道的樣品量為5昭，以前的批次也等量電泳，進(jìn)行比較。裝于透析管中，用回收體積的100倍以上的PBS或PBS/0.1%NaN3以每次6小時(shí)以上透析3次以上。濃縮結(jié)束后用去離子水充分地洗滌透析管，充分地揉搓透析管，將附著在管壁上的蛋白質(zhì)溶解，將濃縮液從管取出。之后測(cè)定濃度?；蛘?，還可以不使用級(jí)分收集器，而是集中解離物并在1個(gè)量筒、燒杯等中邊攪拌邊回收。此時(shí)也放入解離物回收量(mL)的1/5以上的中和用1MTris-HCl緩沖液(pH為8.0)，回收后用pH試紙確認(rèn)pH為8.0。如果pH為8.0以下時(shí)，加入中和用緩沖液，立即使pH為8.0。利用ELISA法測(cè)定人IgGa)致敏板的制作用致敏用緩沖液(PBS)將兔抗人IgG多克隆抗體稀釋至10jig/mL，按5(HU/孔分注到微孔板(NuncMaxiSorp)中。在4。C下靜置1晚。除去致敏用緩沖液，揮去水分。按100fil/孔分注封閉用緩沖液(PBS中含1%BSA、0.1%NaN3)，并在4"C下靜置1晚。b)ELISA法將雜交瘤培養(yǎng)上清按50^1/孔分注到致敏微孔板(a中準(zhǔn)備的板)中，在室溫下靜置反應(yīng)1小時(shí)。除去反應(yīng)液，用洗滌用緩沖液(0.05%Tween20/PBS)洗滌3次后，揮去水分。稀釋識(shí)別抗體(過氧化物酶系，5000倍稀釋后使用，抗人IgGPOD識(shí)別多克隆抗體)，按50pl/孔分注后，在室溫下靜置l小時(shí)。調(diào)制酶底物液(四甲基聯(lián)苯胺溶液)。除去板的識(shí)別抗體，用洗滌用緩沖液洗滌3次后，揮去水分。按50pl/孔分注酶底物液。在室溫下反應(yīng)15分鐘左右。按50|11/孔分注反應(yīng)停止液(2N硫酸)。利用酶標(biāo)儀(platereader)測(cè)定吸光度(主波長(zhǎng)A450/副波長(zhǎng)A620)。將本試驗(yàn)中使用的ELISA法的概念圖示于圖2。利用Western印跡法來確認(rèn)人IgG等量混合lmg/mL的抗體溶液和樣品緩沖液，煮沸5分鐘。將10H1(抗體5昭)上樣于12.5%凝膠。進(jìn)行SDS-PAGE，轉(zhuǎn)印于PVDF膜(immobilon-PcatNo.IPVHOOOlO)，在4。C下用0/N的2。/。脫脂奶粉/PBS進(jìn)行封閉。作為檢測(cè)用抗體，使用抗大鼠IgGPODx2500的10。/。BlockAce/PBS，在室溫下處理1小時(shí)。用緩沖液(0.05。/。Tween20的PBS)洗滌3次。底物使用PIERCE(SupersignalWestPico化學(xué)發(fā)光底物、code.34080)，曝光1分鐘，并進(jìn)行顯影。膠片使用HyperfilmECLAmershamBioscienceCatNo.RPN3103K，顯影液使用RENDOL(富士膠片)，停止液使用3%醋酸，定影液使用RENFIX(富士膠片)。結(jié)果a)融合伴侶細(xì)胞的制作將所制作的融合伴侶細(xì)胞SYPMEG和現(xiàn)有的人融合伴侶細(xì)胞Karpas(AbrahamKarpasetal.,ProcNatlAcadSciUSA.2001Feb13;98(4):1799-1804)進(jìn)行比較觀察(圖3)。SPYMEG為與一般的骨髓瘤細(xì)胞同樣的球形細(xì)胞，與Karpas相比粘著性弱。進(jìn)而，增殖能力高(未顯示數(shù)據(jù))。由此可知，SPYMEG作為融合伴侶細(xì)胞的性能高于Karpas。進(jìn)而，所確立的融合伴侶細(xì)胞SPYMEF在冷凍后復(fù)蘇，即便進(jìn)行l(wèi)OOmL培養(yǎng)(培養(yǎng)1個(gè)月)時(shí)產(chǎn)生能力也不會(huì)消失，是穩(wěn)定的(未顯示數(shù)據(jù))。b)融合有SYPMEG和人末梢血白細(xì)胞的雜交瘤(抗體產(chǎn)生細(xì)胞)的制作表1表示由融合SYPMEG和人末梢血白細(xì)胞而獲得的雜交瘤(抗體產(chǎn)生細(xì)胞)產(chǎn)生IgG。將雜交瘤接種于8張96孔微孔板(768孔)，顯示形成了集落的孔數(shù)、其中產(chǎn)生了IgG的孔數(shù)、以及其中在培養(yǎng)3周以上時(shí)維持了IgG的產(chǎn)生的孔數(shù)。利用ELISA法進(jìn)行篩選。由此結(jié)果可知，通過本試驗(yàn)制作了產(chǎn)生IgG的雜交瘤。另外，從現(xiàn)有的融合伴侶細(xì)胞Karpas無法獲得IgG產(chǎn)生克隆。由此說明，SYPMEG是與Karpas相比可更高效地制作雜交瘤的融合伴侶細(xì)胞。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>將IgG產(chǎn)生克隆添加于蛋白質(zhì)G柱后，對(duì)洗脫時(shí)的各洗脫級(jí)分利用SDS-PAGE禾nWestern印跡法進(jìn)行確認(rèn)(圖4)。圖中的(+)表示ELISA陽性克隆、(-)表示ELISA陰性克隆。K0142級(jí)分2為ELISA陽性，用SDS-PAGE也確認(rèn)了人IgG的存在，但用Western印跡法無法確認(rèn)信號(hào)。認(rèn)為此次是由于某種原因而無法檢測(cè)。進(jìn)而，確認(rèn)了各克隆的洗脫級(jí)分、透析濃縮后的樣品(圖5)。利用SDS-PAGE在ELISA陰性克隆中也確認(rèn)了認(rèn)為是IgG的H鏈、L鏈的條帶，但使用抗人IgG抗體的Western印跡法的結(jié)果是未檢測(cè)到，因此猜測(cè)是FBS來源的IgG。在ELISA陰性克隆的帶道5上檢測(cè)到了條帶，但由于陰性的判斷是培養(yǎng)上清的ELISA的結(jié)果，因此認(rèn)為該克隆產(chǎn)生了極少量的IgG。另外，由此次的結(jié)果可知，SPYMEG本身也不產(chǎn)生人IgG。表2表示由顯示陽性的各克隆培養(yǎng)上清得到的精制IgG的產(chǎn)量。由培養(yǎng)上清100mL得到的精制IgG計(jì)算出的培養(yǎng)上清中的人IgG濃度為2ll|ig/mL。確認(rèn)是與通常的小鼠雜交瘤基本相同的濃度。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage25</column></row><table>[實(shí)施例7]異種雜交瘤的制作方法的改良在[實(shí)施例2]中，將末梢血用PBS稀釋，疊置于HISTPAQUE并進(jìn)行離心，但為了獲得純度更高的白細(xì)胞(B細(xì)胞)，將末梢血與HetaSep(HETASTARCH)混合，進(jìn)行除去紅細(xì)胞的前處理，然后利用疊置于HISTPAQUE的方法來回收人末梢血白細(xì)胞(圖6)。具體地說，將來源于接種了流感HA疫苗的患者的末梢血約10ml放入15ml管中，加入2~3ml的HetaSep(StemCellTechnologiesIncCAT#07906)。進(jìn)行顛倒攪拌，并在室溫下靜置l小時(shí)?；厥侦o置后的上清(橙色)，用巴氏吸管按照不要擾亂界面的方式緩慢地在15ml管中疊置于HISTPAQUE。在1800rpm、室溫下離心分離30分鐘，離心分離后，用巴氏吸管將溶液的正中間區(qū)域出現(xiàn)的白色帶的層(白細(xì)胞層)回收于50ml管中。加入30ml左右的無血清培養(yǎng)基DMEM，在1600rpm下離心分離8分鐘以進(jìn)行洗漆。利用[實(shí)施例2]中記載的方法，進(jìn)行所回收的人末梢血白細(xì)胞與融合伴侶細(xì)胞SPYMEG的細(xì)胞融合。作為細(xì)胞融合的基礎(chǔ)培養(yǎng)基，使用無血清培養(yǎng)基DMEM來代替RPMI。對(duì)于所制作的異種雜交瘤，利用[實(shí)施例3]和[實(shí)施例4]中記載的方法，進(jìn)行IgG的精制和利用ELISA法的人IgG的測(cè)定。結(jié)果，通過對(duì)異種雜交瘤的制作方法加以改良，確認(rèn)了利用細(xì)胞融合獲得的集落的形成數(shù)和IgG產(chǎn)生克隆數(shù)均有所增加(圖7)。對(duì)流感疫苗的反應(yīng)性的確認(rèn)確認(rèn)通過[實(shí)施例7]的方法制作的IgG產(chǎn)生克隆對(duì)流感疫苗的反應(yīng)性。具體地說，通過以下的工序，用夾心ELISA來確認(rèn)致敏了流感疫苗的板和未進(jìn)行任何致敏而僅進(jìn)行了封閉的板(除去非特異性反應(yīng)的克隆)中的克隆的IgG產(chǎn)生。將用PBS稀釋30倍的流感疫苗以50|11/孔分注到ELISA板中，并靜置1晚(致敏)。作為流感疫苗，使用流感HA疫苗(化學(xué)和血液療法研究所，日本)。該制劑如下調(diào)制將流感病毒的A型和B型株分別單獨(dú)地在發(fā)育雞蛋中培養(yǎng)，利用蔗糖密度梯度離心法等將含有增殖了的病毒的尿囊液進(jìn)行精制濃縮后，利用醚等來處理病毒粒子，制成血凝素(以下為HA)級(jí)分懸浮液，用福爾馬林進(jìn)行惰化后，使用磷酸鹽緩沖氯化鈉溶液，按照各株病毒的HA含有規(guī)定量的方式進(jìn)行稀釋，從而調(diào)制。除去溶液，按200pl/孔加入封閉緩沖液，并靜置l晚(封閉)。除去封閉緩沖液，按50pl/孔加入雜交瘤的培養(yǎng)上清，在室溫下反應(yīng)l小時(shí)。除去上清，用0.05。/。TweenPBS洗滌3次。以5000倍稀釋加入抗人IgGHRP識(shí)別抗體(MBL:206)，在室溫下反應(yīng)1小時(shí)。洗滌3次后，以每孔50^1加入顯色底物，使其顯色15分鐘，加入反應(yīng)停止液，用酶標(biāo)儀測(cè)定吸光度(OD450)。結(jié)果確認(rèn)了有IO個(gè)克隆左右對(duì)流感疫苗產(chǎn)生反應(yīng)(圖8)。通過本發(fā)明的異種雜交瘤，成功地確立了抗原特異性反應(yīng)的人抗體。利用Western印跡法來確認(rèn)人IgG將流感HA疫苗作為樣品，確認(rèn)人IgG產(chǎn)生雜交瘤的培養(yǎng)上清的Western印跡法的反應(yīng)性。等量混合流感HA疫苗和樣品緩沖液，煮沸5分鐘。將20pK疫苗lOpl)上樣于12.5%凝膠。進(jìn)行SDS-PAGE，轉(zhuǎn)印于PVDF膜(immobilon-PcatNo.IPVH00010)，在4。C下用0/N的2。/。脫脂奶粉/PBS進(jìn)行封閉。作為檢測(cè)用抗體，使用抗人IgGHRP(MBLcode206)x3000的10%BlockAce/PBS，并在室溫下處理1小時(shí)。用緩沖液(0.05%Tween20的PBS)洗漆3次。底物使用PIERCE(SupersignalWestPico化學(xué)發(fā)光底物、code.34080)，曝光1分鐘，并進(jìn)行顯影。膠片使用HyperfilmECLAmershamBioscienceCatNo.RPN3103K，顯影液使用RENDOL(富士膠片)，停止液使用3%醋酸，定影液使用RENFIX(富士膠片)。結(jié)果，在克隆(6-19)中檢測(cè)到了特異性的條帶(圖9)。[實(shí)施例10]精制人IgG(6-19)的SDS-PAGE和反應(yīng)性的確認(rèn)首先，利用以下的工序，從[實(shí)施例9]的在Western印跡法中顯示了反應(yīng)性的人IgG產(chǎn)生雜交瘤的培養(yǎng)上清中精制對(duì)流感HA疫苗產(chǎn)生反應(yīng)的人IgG。以1滴/秒的流量將培養(yǎng)上清上樣，回收通過液。用PBS/0.1%NaN3-PBS以最大流速洗柱(蛋白質(zhì)G瓊脂糖ProteinGSepharose4FastFlowCatNo:17-0618-03)(洗滌直至用吸光度計(jì)測(cè)得A280=0.05以下)。用柱床體積的2~5倍量的0.17M甘氨酸-HCl緩沖液(pH為2.3)以全速的流速進(jìn)行解離。使用級(jí)分收集器將解離物收集于試管中。在試管中預(yù)先放入解離物量(ml)的1/5以上的中和用緩沖液1MTris-HCl緩沖液(pH為8.0)，將解離物和緩沖液迅速地混合。測(cè)定各級(jí)分的A280后，將檢測(cè)出蛋白質(zhì)的級(jí)分中A280=0.1以上的級(jí)分集中。集中后用pH試紙確認(rèn)了pH為8.0。集中的部分用12.5%凝膠、樣品緩沖液(2ME+)進(jìn)行SDS-PAGE，檢驗(yàn)純度(圖10)。將集中的級(jí)分裝于透析管中，用回收體積的100倍以上的PBS或PBS/0.1%NaN3，以每次6小時(shí)以上透析3次。濃縮結(jié)束后用去離子水充分地洗滌透析管，充分地揉搓透析管，將附著在管壁上的蛋白質(zhì)溶解，將濃縮液從管中取出。之后，對(duì)濃縮液進(jìn)行濃度的測(cè)定。由以上的結(jié)果確認(rèn)了從培養(yǎng)上清200ml中獲得2.5mg的精制IgG(圖10)，且結(jié)合活性也得以保持。本發(fā)明對(duì)于利用動(dòng)物細(xì)胞的物質(zhì)生產(chǎn)是有用的。具體地說，通過與本發(fā)明的融合伴侶的細(xì)胞融合，可以將生產(chǎn)有用物質(zhì)的細(xì)胞制成在體外容易培養(yǎng)的雜交瘤。作為產(chǎn)生有用物質(zhì)的細(xì)胞，可以列舉出抗體產(chǎn)生細(xì)胞。艮口，本發(fā)明作為抗體的制造方法是有用的。特別是本發(fā)明可以以人抗體產(chǎn)生細(xì)胞作為材料來制造雜交瘤。通過本發(fā)明獲得的雜交瘤穩(wěn)定地產(chǎn)生人抗體。例如，在從感染性疾病恢復(fù)的患者的血液中，產(chǎn)生將病原體或病原體所產(chǎn)生的毒素進(jìn)行中和的抗體的細(xì)胞的存在的可能性較高。如果通過本發(fā)明將這種患者的抗體產(chǎn)生細(xì)胞制成雜交瘤，則可以產(chǎn)生對(duì)感染性疾病的治療有用的抗體。作為可通過本發(fā)明獲得治療用抗體的感染性疾病，例如可以列舉出流感、AIDS、HCV或HBV等病毒性肝炎等。或者，在癌癥患者的抗體產(chǎn)生細(xì)胞中，有可能存在產(chǎn)生對(duì)癌細(xì)胞具有抑制作用的抗體的細(xì)胞。如果通過本發(fā)明將這種抗體產(chǎn)生細(xì)胞制成雜交瘤，則可以獲得對(duì)癌癥治療有效的抗體。根據(jù)本發(fā)明的抗體制造方法，可以利用人的抗體產(chǎn)生細(xì)胞來獲得人的抗體。人抗體由于可以安全地投予給人，因此作為治療用的抗體是優(yōu)選的。為了將從一般用作單克隆抗體的制造工具的小鼠獲得的抗體用于人的治療而必須要進(jìn)行嵌合化或人源化等修飾，而與此相比可知，本發(fā)明的抗體制造方法作為治療用抗體的制造方法是有用的。29權(quán)利要求1.一種融合伴侶細(xì)胞，其能夠通過將下述的細(xì)胞(a)和(b)進(jìn)行融合而獲得(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞；和，(b)來源于第2動(dòng)物種且在細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞。2.權(quán)利要求1所述的融合伴侶細(xì)胞，其中，第l動(dòng)物種為小鼠，骨髓瘤細(xì)胞選自以下所示的小鼠骨髓瘤細(xì)胞和從這些細(xì)胞株誘導(dǎo)的細(xì)胞株MOPC21、P3X63AG8、SP2/0、NS-1、P3.X63AG8.653、F0、S194/5.XXO.BU-l、FOX-NY和SP2/0-Ag14。3.權(quán)利要求1所述的融合伴侶細(xì)胞，其中，第2動(dòng)物種為人，白血病細(xì)胞選自以下所示的白血病細(xì)胞和從這些細(xì)胞株誘導(dǎo)的細(xì)胞株MEG陽Ol、HEL、UT-7、M07e、MEG-A2和DAMI。4.權(quán)利要求1所述的融合伴侶細(xì)胞，其中，第1細(xì)胞為SP2/0-Ag14，第2細(xì)胞為MEG-01。5.以保藏編號(hào)FERMBP-10761保藏的融合伴侶細(xì)胞SPYMEG。6.—種雜交瘤，其能夠通過將下述的細(xì)胞(1)和(2)進(jìn)行融合而獲得(1)能夠通過將下述的細(xì)胞(a)和(b)進(jìn)行融合而獲得的融合伴侶細(xì)胞(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞；禾口，(b)來源于第2動(dòng)物種且在細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞;以及，(2)第3細(xì)胞。7.權(quán)利要求6所述的雜交瘤，其中，第l動(dòng)物種為小鼠，骨髓瘤細(xì)胞選自以下所示的小鼠骨髓瘤細(xì)胞和從這些細(xì)胞株誘導(dǎo)的細(xì)胞株MOPC21、P3X63AG8、SP2/0、NS-1、P3.X63AG8.653、F0、S194/5.XXO.BU-I、FOX-NY禾HSP2/0-Ag14。8.權(quán)利要求6所述的雜交瘤，其中，第2動(dòng)物種為人，白血病細(xì)胞選自以下所示的白血病細(xì)胞和從這些細(xì)胞株誘導(dǎo)的細(xì)胞株MEG-Ol、HEL、UT-7、M07e、MEG-A2和DAM1。9.權(quán)利要求6所述的雜交瘤，其中，第1細(xì)胞為SP2/0-Ag14，第2細(xì)胞為MEG-Ol。10.權(quán)利要求6所述的雜交瘤，其中，融合伴侶細(xì)胞是以保藏編號(hào)FERMBP-10761保藏的SPYMEG。11.權(quán)利要求6所述的雜交瘤，其中，第3細(xì)胞為來源于與第2細(xì)胞相同動(dòng)物種的細(xì)胞。12.權(quán)利要求ll所述的雜交瘤，其中，第3細(xì)胞為抗體產(chǎn)生細(xì)胞。13.—種制造融合伴侶細(xì)胞的方法，其包括下述工序(1)將下述的細(xì)胞(a)和(b)進(jìn)行融合的工序(a)來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞、和(b)來源于第2動(dòng)物種且在細(xì)胞周期中含有Extra-S期的白血病細(xì)胞；以及，(2)培養(yǎng)在工序(1)中融合的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收融合伴侶細(xì)胞的工序。14.一種制造雜交瘤的方法，其包括下述工序(1)使通過權(quán)利要求13所述的方法獲得的融合伴侶細(xì)胞與抗體產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行融合的工序；禾口，(2)培養(yǎng)在工序(1)中融合的細(xì)胞，并從培養(yǎng)物中回收雜交瘤的工序。15.—種制造抗體產(chǎn)生細(xì)胞的方法，其包括下述工序(1)使通過權(quán)利要求13所述的方法獲得的融合伴侶細(xì)胞與抗體產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行融合而獲得雜交瘤的工序；禾口，(2)將工序(1)中獲得的雜交瘤作為抗體產(chǎn)生細(xì)胞回收的工序。16.權(quán)利要求15所述的方法，其還附加性地包括將工序(1)中獲得的雜交瘤進(jìn)行克隆的工序。17.—種制造抗體的方法，其包括下述工序(1)使通過權(quán)利要求13所述的方法獲得的融合伴侶細(xì)胞與抗體產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行融合而獲得雜交瘤的工序；禾口，(2)培養(yǎng)在工序(1)中獲得的雜交瘤，并從培養(yǎng)物中回收抗體的工序。18.權(quán)利要求17所述的方法，其還附加性地包括將工序(1)中獲得的雜交瘤進(jìn)行克隆的工序。19.一種制造針對(duì)感染性疾病的抗體的方法，其包括下述工序(1)使通過權(quán)利要求13所述的方法獲得的融合伴侶細(xì)胞與抗體產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行融合而獲得雜交瘤的工序，所述抗體產(chǎn)生細(xì)胞來源于有感染性疾病的病原體抗原的暴露經(jīng)歷的對(duì)象；禾口，(2)培養(yǎng)在工序(1)中獲得的雜交瘤，并從培養(yǎng)物中回收針對(duì)感染性疾病的抗體的工序。20.權(quán)利要求19所述的方法，其中，感染性疾病為流感、AIDS或病毒性肝炎中的任一種。全文摘要本發(fā)明提供融合伴侶細(xì)胞。通過將來源于第1動(dòng)物種的骨髓瘤細(xì)胞與來源于第2動(dòng)物種且細(xì)胞周期中具有Extra-S期、并具有使染色體為多倍體的性質(zhì)的白血病細(xì)胞進(jìn)行融合，從而制作能夠與小鼠以外的種制作異種雜交瘤的融合伴侶細(xì)胞。通過使該融合伴侶細(xì)胞與小鼠以外的物質(zhì)產(chǎn)生細(xì)胞進(jìn)行融合來制作異種雜交瘤，從而可以進(jìn)行穩(wěn)定的物質(zhì)生產(chǎn)。文檔編號(hào)C12N5/00GK101466828SQ20078002211公開日2009年6月24日申請(qǐng)日期2007年4月13日優(yōu)先權(quán)日2006年4月13日發(fā)明者兼田瑞穗,山本正雅申請(qǐng)人:株式會(huì)社醫(yī)學(xué)生物學(xué)研究所;山本正雅