專利名稱：：在限定核苷酸間鍵環(huán)境下的誘導(dǎo)特異性免疫調(diào)節(jié)特性的rna序列基序的制作方法在限定核苷酸間鍵環(huán)境下的誘導(dǎo)特異性免疫調(diào)節(jié)特性的RNA序列基序相關(guān)申請的交叉本申請根據(jù)35U.S.C.§119(e)要求提交于2007年8月13日的題目為“處在限定的核苷酸間鍵的環(huán)境下的誘導(dǎo)特異性免疫調(diào)節(jié)狀況的序列基序”的美國臨時(shí)申請第60/964，448號的優(yōu)先權(quán)，本文通過參考并入其全部內(nèi)容。
背景技術(shù)：
：Toll樣受體(TLR)是一個(gè)高度保守的模式識別受體(PRR)多肽家族，它們識別病原體相關(guān)分子模式(PAMP)并且在哺乳動物的天然免疫中起著至關(guān)重要的作用。目前，已經(jīng)鑒定出至少10個(gè)家族成員，這些成員被指定為TLRlTLR10。各種TLR的胞漿域的特征是Toll-白細(xì)胞介素1受體(TIR)域(MedzhitovR等，(1998)MolCell2:253_8)。TLR對微生物入侵的識別引發(fā)了果蠅和哺乳動物中在進(jìn)化中得到保留的信號級聯(lián)的激活。據(jù)報(bào)道，含TIR域的銜接蛋白MyD88與TLR相關(guān)并將白細(xì)胞介素1受體相關(guān)激酶(IRAK)和腫瘤壞死因子(TNF)受體相關(guān)因子6(TRAF6)募集至TLR。據(jù)信MyD88依賴性信號途徑導(dǎo)致NF-B轉(zhuǎn)錄因子和c-JimNH2端激酶(Jnk)絲裂原激活蛋白激酶(MAPK)的激活，這些是免疫激活和產(chǎn)生炎性細(xì)胞因子的關(guān)鍵步驟。有關(guān)綜述可參見AderemA等(2000)Nature406:782-87，和AkiraS等(2004)NatRevImmunol4:499-511。已經(jīng)鑒定出許多特異性TLR配體。TLR2的配體包括肽聚糖和脂肽(YoshimuraA等(1999)JImmunol1631-5;YoshimuraA等(1999)JImmunol1631-5；AliprantisAO等(1999)Science285:736_9)。脂聚糖(LPS)是TLR4的配體(PoltorakA等(1998)Science2822085-8；HoshinoK等(1999)JImmunol162:3749_52)。細(xì)菌鞭毛蛋白是TLR5的配體(HayashiF等(2001)Nature410:1099_1103)。據(jù)報(bào)道肽聚糖不僅是TLR2的配體也是TLR6的配體(OzinskyA等(2000)ProcNatlAcadSciUSA9713766-71；Takeuchi0等(2001)IntImmunol13:933-40)。近來，據(jù)報(bào)道某些低分子量合成化合物即咪唑并喹啉類(咪喹莫特(R-837)和雷西莫特(R-848))是TLR7和TLR8的配體(HemmiH等(2002)NatImmunol3196-200JurkM等(2002)NatImmunol3:499)。從發(fā)現(xiàn)未甲基化的細(xì)菌DNA及其合成類似物(CpGDNA)是TLR9的配體開始(HemmiH等(2000)Nature408740-5；BauerS等(2001)ProcNatlAcadSciUSA98，9237-42)，已報(bào)道某些TLR的配體包括某些核酸分子。近來，已報(bào)道某些類型的RNA是以非序列依賴性或序列依賴性的方式的免疫刺激性的。此外，還報(bào)道了這些不同免疫刺激RNA會刺激TLR3、TLR7禾口TLR8。
發(fā)明內(nèi)容本發(fā)明廣泛地涉及含有某些免疫刺激序列基序的免疫刺激聚合物，并且還涉及含有這類免疫刺激聚合物的免疫刺激組合物以及這些免疫刺激聚合物和組合物的使用方法。在本發(fā)明的某些方面，所述免疫刺激聚合物是免疫刺激寡核糖核苷酸(ORN)。本發(fā)明的免疫刺激聚合物可以用于需要刺激或提高免疫應(yīng)答的任何場合或應(yīng)用中。如下文所公開，本發(fā)明的免疫刺激聚合物可特別用于制備包含佐劑、疫苗和其它藥物的藥物組合物，該藥物組合物用于治療包括感染、癌癥、過敏癥和哮喘的多種病況。因此，在某些方面，本發(fā)明涉及包含本發(fā)明的免疫刺激聚合物的組合物以及它們的使用方法。如下文所詳細(xì)公開，本發(fā)明的免疫刺激聚合物的特征在于它們包含至少一個(gè)序列依賴性免疫刺激基序序列。據(jù)公開，序列依賴性免疫刺激基序序列和包含這些基序的聚合物是TLR7相關(guān)細(xì)胞因子干擾素α(IFN-α)的有力誘導(dǎo)物。在一方面，本發(fā)明提供了一種包含含有rNfrC-rU-rC-rA-r^的長度為4100單元的單鏈聚合物的組合物，其中所述聚合物在基序rC-rU-rC-rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中N1和N2中的至少一個(gè)不是A7,且其中rNi-rC-rU-rC-rA-rR不是G⑶CAA。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物還包含輸送載具，其中所述輸送載具是脂質(zhì)體、非離子囊泡(noisome)、脂質(zhì)復(fù)合體(lipoplexe)、聚合物復(fù)合體(polyplexe)、脂質(zhì)聚合物復(fù)合體(Iipopolyplexe)、油包水(W/0)乳液、水包油(0/W)乳液、水包油包水(W/0/W)多重乳液、微乳液、納米乳液、膠束、樹枝狀聚合物、病毒顆粒、類病毒顆粒、聚合物納米顆粒(如納米球或納米膠囊)或聚合物微粒(如微球或微膠囊)，且其中所述組合物不含lipofectin。在一個(gè)實(shí)施方式中，N1包含至少一個(gè)Α。在另一個(gè)實(shí)施方式中，N1包含至少一個(gè)C。在再一個(gè)實(shí)施方式中，N1包含至少一個(gè)G。在又一個(gè)實(shí)施方式中，N1包含至少一個(gè)T。在一個(gè)實(shí)施方式中，N2包含至少一個(gè)A。在另一個(gè)實(shí)施方式中，N2包含至少一個(gè)C。在再一個(gè)實(shí)施方式中，N2包含至少一個(gè)G。在又一個(gè)實(shí)施方式中，N2包含至少一個(gè)T。在另一方面，本發(fā)明提供了一種包含含有免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4的長度為4100單元的組合物，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO34)，其中X1是A或C。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物還包含輸送載具，其中所述輸送載具是脂質(zhì)體、非離子囊泡、脂質(zhì)復(fù)合體、聚合物復(fù)合體、脂質(zhì)聚合物復(fù)合體、油包水(W/0)乳液、水包油(0/W)乳液、水包油包水(W/0/W)多重乳液、微乳液、納米乳液、膠束、樹枝狀聚合物、病毒顆粒、類病毒顆粒、聚合物納米顆粒(如納米球或納米膠囊)或聚合物微粒(如微球或微膠囊)，且其中所述組合物不含lipofectin。在一個(gè)實(shí)施方式中，X2是Α。在一個(gè)實(shí)施方式中，&是(。在另一個(gè)實(shí)施方式中，X2是6。在一個(gè)實(shí)施方式中，X3是々。在另一個(gè)實(shí)施方式中，X3是C。在又一個(gè)實(shí)施方式中，X3是6。在一個(gè)實(shí)施方式中，N3包含至少一個(gè)A。在另一個(gè)實(shí)施方式中，N3包含至少一個(gè)C。在再一個(gè)實(shí)施方式中，N3包含至少一個(gè)G。在又一個(gè)實(shí)施方式中，N3包含至少一個(gè)U。在一個(gè)實(shí)施方式中，N4包含至少一個(gè)A。在另一個(gè)實(shí)施方式中，N4包含至少一個(gè)C。在再一個(gè)實(shí)施方式中，N4包含至少一個(gè)G。在又一個(gè)實(shí)施方式中，N4包含至少一個(gè)U。上述組合物可以包含其它要素或所述聚合物的修飾物。例如，在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物還包含抗原。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗原與所述聚合物接合。在一個(gè)實(shí)施方式中，rNrrC-rU-rC-rA-rN2或rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4基序包含修飾的核苷堿基，所述修飾的核苷堿基選自次黃嘌呤、肌苷、8-氧代腺嘌呤及其7-位取代的衍生物、二氫尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、S-(C1-C6)烷基尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-(C2-C6)烯基尿嘧啶、5-(C2-C6)炔基尿嘧啶、5-羥甲基尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥基胞嘧啶、5-(C1-C6)烷基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-(C2-C6)烯基胞嘧啶、5-(C2-C6)炔基胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2，4-二氨基嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、8-氮雜嘌呤、取代的7-脫氮嘌呤、7-脫氮-7-位取代嘌呤、7-脫氮-8-位取代嘌呤、氫(無堿基殘基)及其任何組合。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物在rNi-rC-rU-rC-rA-rR基序之外還包含至少一個(gè)修飾的核苷堿基，其中所述修飾的核苷堿基選自次黃嘌呤、肌苷、8-氧代腺嘌呤及其7-位取代的衍生物、二氫尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、S-(C1-C6)烷基尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-(C2-C6)烯基尿嘧啶、5-(C2-C6)炔基尿嘧啶、5-羥甲基尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥基胞嘧啶、5-(C1-C6)烷基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-(C2-C6)烯基胞嘧啶、5-(C2-C6)炔基胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、N2-二甲基鳥嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤、7-脫氮-7-位取代鳥嘌呤、7-脫氮-7-(C2-C6)炔基鳥嘌呤、7-脫氮-8-位取代鳥嘌呤、8-羥基鳥嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、8-氧代鳥嘌呤、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2，4-二氨基嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、8-氮雜嘌呤、取代的7_脫氮嘌呤、7-脫氮-7-位取代嘌呤、7-脫氮-8-位取代嘌呤、氫(無堿基殘基)及其任何組合。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物還包含與該聚合物共價(jià)相連的親脂部分。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述親脂部分選自膽留烯基、棕櫚酰基和脂肪?；?。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物不含CpG基序。在再一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物不包含CCGAGCCGAGOTCACC(SEQIDNO:35)。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物的長度為420單元。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物的長度為1025單元。在再一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物的長度為1519單元。在一個(gè)實(shí)施方式中，每個(gè)聚合物單元都是核糖核苷酸。在另一個(gè)實(shí)施方式中，聚合物單元是核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸的混合物。在再一個(gè)實(shí)施方式中，所述脫氧核糖核苷酸包括處于所述聚合物的5’端的TCG基序。在又一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物的至少一個(gè)單元是氨基酸。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物與TLR9激動劑相連。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述TLR9激動劑是小分子。在再一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物與TLR7激動劑相連。在又一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物與TLR8激動劑相連。在另一方面，本發(fā)明提供了一種方法，所述方法包括使能產(chǎn)生IFN-α的免疫細(xì)胞與長度為4100單元的單鏈聚合物接觸，所述單鏈聚合物的量能有效地誘導(dǎo)產(chǎn)生治療上顯著量的IFN-α，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN^rC-rU-rC-rA-r^且在基序rC-rU-rC-rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中N1和N2中的至少一個(gè)不是A7,且其中rNfrC-rU-rC-rA-rR不是GCUCAA或UUAUCGUAX!CUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C，其中所述聚合物不與Iipofectin—起配制。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物包含至少一個(gè)在所述免疫刺激基序之外的穩(wěn)定化鍵。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物包含15個(gè)在所述免疫刺激基序之外的穩(wěn)定化鍵。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述穩(wěn)定化鍵處在5’端和/或3’端。在又一方面，本發(fā)明提供了一種方法，所述方法包括使能產(chǎn)生干擾素α(IFN-α)的免疫細(xì)胞與長度為4100單元的單鏈聚合物接觸，所述單鏈聚合物的量能有效地誘導(dǎo)產(chǎn)生治療上顯著量的IFN-α，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C，其中所述聚合物不與Iipofectin—起配制。在一個(gè)實(shí)施方式中，上述方法不會導(dǎo)致免疫細(xì)胞應(yīng)答于所述聚合物而產(chǎn)生顯著量的腫瘤壞死因子α(TNF-α)、干擾素、(TNF-γ)或白細(xì)胞介素12(IL-12)。在某些實(shí)施方式中，所述方法在體內(nèi)進(jìn)行。在某些實(shí)施方式中，將所述聚合物以如上所述的任何組合物的形式進(jìn)行施用。在另一方面，本發(fā)明提供了一種哮喘治療方法，所述方法包括對患有哮喘的受試對象施用哮喘治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rNfrC-rU-rC-rA-rR并且在基序rC-rU_rC_rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中N1和N2中的至少一個(gè)不是A7,且其中rNi-rC-rU-rC-rA-rR不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C。在再一方面，本發(fā)明提供了一種哮喘治療方法，所述方法包括對患有哮喘的受試對象施用哮喘治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C。在一個(gè)實(shí)施方式中，上述哮喘治療方法的任何一種還可以包括對受試對象施用過敏原。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物與所述過敏原接合。在某些實(shí)施方式中，將所述聚合物以如上所述的任何組合物的形式進(jìn)行施用。在另一方面，本發(fā)明提供了一種過敏病況的治療方法，所述方法包括對患有過敏病況的受試對象施用過敏病況治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rNfrC-rU-rC-rA-rR并且在基序rC-rU_rC_rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中N1和N2中的至少一個(gè)不是A7,且其中rNrrC-rU-rC-rA-rN2不是GCUCAA或UUAUCGUAX!CUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C。在再一方面，本發(fā)明提供了一種過敏病況的治療方法，所述方法包括對患有過敏病況的受試對象施用過敏病況治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC^SEQIDNO34)，其中X1是A或C。在一個(gè)實(shí)施方式中，上述過敏病況的治療方法的任何一種還可以包括對受試對象施用過敏原。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物與所述過敏原接合。在某些實(shí)施方式中，將所述聚合物以如上所述的任何組合物的形式進(jìn)行施用。在另一方面，本發(fā)明提供了一種癌癥治療方法，所述方法包括對患有癌癥的受試對象施用癌癥治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rNfrC-rU-rC-rA-rR并且在基序rC-rU_rC_rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中N1和N2中的至少一個(gè)不是A7,且其中rNi-rC-rU-rC-rA-rR不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C。在再一方面，本發(fā)明提供了一種癌癥治療方法，所述方法包括對患有癌癥的受試對象施用癌癥治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C。在一個(gè)實(shí)施方式中，上述癌癥治療方法的任何一種還可以包括對受試對象施用癌抗原。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物與所述抗原接合。在其它實(shí)施方式中，所述方法還包括對受試對象施用第二癌癥藥物。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述癌癥藥物是卡鉬、紫杉醇(paclitaxel)、順鉬、5-氟尿嘧啶、阿霉素、泰素(taxol)和吉西他濱(gemcitabine)中的一種或多種。在某些實(shí)施方式中，將所述聚合物以如上所述的任何組合物的形式進(jìn)行施用。在另一方面，本發(fā)明提供了一種傳染病治療方法，所述方法包括對患有傳染病的受試對象施用傳染病治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rNfrC-rU-rC-rA-rR并且在基序rC-rU-rC_rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中N1和N2中的至少一個(gè)不是A7,且其中rNrrC-rU-rC-rA-rN2不是GCUCAA或UUAUCGUAX!CUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C。在又一方面，本發(fā)明提供了一種傳染病治療方法，所述方法包括對患有傳染病的受試對象施用傳染病治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAX!CUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是八或C。在一個(gè)實(shí)施方式中，上述傳染病治療方法的任何一種還可以包括對受試對象施用微生物抗原。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物與所述抗原接合。在某些實(shí)施方式中，將所述聚合物以如上所述的任何組合物的形式進(jìn)行施用。在另一方面，本發(fā)明提供了一種用于在受試對象中誘導(dǎo)1型T輔助(Thl)樣免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括對受試對象施用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rNfrC-rU-rC-rA-rR并且在基序rC-rU_rC_rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中N1和N2中的至少一個(gè)不是A7,且其中rNrrC-rU-rC-rA-rN2不是GCUCAA或UUAUCGUAX!CUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C。在再一方面，本發(fā)明提供了一種用于在受試對象中誘導(dǎo)1型T輔助(Thl)樣免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括對受試對象施用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAX!CUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是八或C。在一個(gè)實(shí)施方式中，上述Thl樣免疫應(yīng)答的誘導(dǎo)方法中的任何一種還可以包括對受試對象施用抗原。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物與所述抗原接合。在某些實(shí)施方式中，將所述聚合物以如上所述的任何組合物的形式進(jìn)行施用。本發(fā)明在其應(yīng)用中不限于以下描述中所陳述或附圖中所顯示的要素的具體的構(gòu)建和安排。本發(fā)明可以具有其它實(shí)施方式并且能以不同方式進(jìn)行實(shí)踐或?qū)嵤４送?，本文所用的措辭和術(shù)語是出于說明性目的，不應(yīng)將其視為限制性的。本文中“包括”、“包含”或者“具有”、“含有”、“涉及”及其變化形式意在涵蓋其后所列的項(xiàng)目及其等價(jià)物以及其它項(xiàng)目。圖1是顯示人外周血單核細(xì)胞(PBMC)與寡核糖核苷酸(ORN)接觸之后該細(xì)胞中誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-α的圖。將ORN(起始濃度2μΜ+50μg/mlDOTAP(N-[1-(2，3-二油酰氧基)丙基-1]-N，N,N-三甲基甲硫酸銨))與人PBMC—起溫育并在24小時(shí)后通過酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)(ELISA)測試上清液的IFN-a。所示為正對照(CCGUCUGUUGUGUGACUC；SEQIDNO1)和4個(gè)測試序列(SEQIDNO25，見表1)。顯示了3個(gè)捐獻(xiàn)者的平均值士SEM。y軸顯示以pg/ml為單位的IFN-α濃度，χ軸顯示單位為μM的logORN濃度。圖2是顯示通過ORN對IFN-α(圖2A)和IL_12p40(圖2B)的誘導(dǎo)的兩幅圖。所示為已知可誘導(dǎo)TLR7相關(guān)細(xì)胞因子和TLR8相關(guān)細(xì)胞因子兩者的ORN(SEQIDNO=D以及誘導(dǎo)的TLR7相關(guān)細(xì)胞因子比TLR8相關(guān)細(xì)胞因子多的ORN(SEQIDNO3)。將人PBMC與ORN在存在DOTAP(2μMORN和50μg/mlD0TAP)時(shí)一起溫育并在24小時(shí)后通過ELISA測試上清液的IFN-α和IL-12p40。顯示了3個(gè)捐獻(xiàn)者的平均值士SEM。y軸是以pg/ml為單位的IFN-α濃度(圖2A)和IL_12p40濃度(圖2B)，χ軸顯示單位為μM的logORN濃度。圖3是顯示人PBMC細(xì)胞與寡核糖核苷酸(ORN)接觸后該細(xì)胞中誘導(dǎo)產(chǎn)生IFN-a的圖。將ORN(起始濃度2μΜ+25μβ/πι1)與人PBMC—起溫育并在24小時(shí)后通過ELISA測試上清液的IFN-a。所示為SEQIDNO3和4個(gè)帶有細(xì)微序列變異的ORN(SEQIDNO:6、7、11和12，見表2)。顯示了3個(gè)捐獻(xiàn)者的平均值士SEM。y軸顯示以pg/ml為單位的IFN-a濃度，χ軸顯示單位為μM的logORN濃度。圖4是顯示通過ORN對IFN-α(圖4A)和IL_12p40(圖4B)的誘導(dǎo)的兩幅圖。所示為SEQIDN0:3和帶有細(xì)微序列變異的3個(gè)其它0RN(SEQIDNO:810，見表3)。將人PBMC與ORN在存在DOTAP(2μMORN和25μg/mlD0TAP)時(shí)一起溫育并在24小時(shí)后通過ELISA測試上清液的IFN-α和IL_12p40。顯示了3個(gè)捐獻(xiàn)者的平均值士SEM。y軸是以Pg/ml為單位的IFN-α濃度(圖4A)和IL_12p40濃度(圖4B)，χ軸顯示單位為μM的logORN濃度。圖5是顯示通過ORN對IFN-α(圖5A)和IL_12p40(圖5B)的誘導(dǎo)的兩幅圖。所示為SEQIDNO3和帶有細(xì)微序列變異的3個(gè)其它ORN(SEQIDNO1315，見表4)。將人PBMC與ORN在存在DOTAP(2μMORN和25μg/mlD0TAP)時(shí)一起溫育并在24小時(shí)后通過ELISA測試上清液的IFN-α和IL_12p40。顯示了3個(gè)捐獻(xiàn)者的平均值士SEM。y軸是以Pg/ml為單位的IFN-α濃度(圖5Α)和IL_12p40濃度(圖5B)，χ軸顯示單位為μM的logORN濃度。圖6是顯示通過ORN對IFN-α(圖6A)和IL_12p40(圖6B)的誘導(dǎo)的兩幅圖。所示為SEQIDNO3和帶有細(xì)微序列變異的3個(gè)其它ORN(SEQIDNO1921，見表5)。將人PBMC與ORN在存在DOTAP(2μMORN和25μg/mlD0TAP)時(shí)一起溫育并在24小時(shí)后通過ELISA測試上清液的IFN-α和IL_12p40。顯示了3個(gè)捐獻(xiàn)者的平均值士SEM。y軸是以Pg/ml為單位的IFN-α濃度(圖6Α)和IL_12p40濃度(圖6B)，χ軸顯示單位為μM的logORN濃度。圖7是顯示通過ORN對IFN-α(圖7A和7Β)和IL_12p40(圖7C和7D)的誘導(dǎo)的兩幅圖。所示為SEQIDNO:3和帶有細(xì)微序列變異的6個(gè)其它ORN(SEQIDN0:1618和SEQIDNO2224，見表3)。將人PBMC與ORN在存在DOTAP(2μMORN禾口25μg/mlD0TAP)時(shí)一起溫育并在24小時(shí)后通過ELISA測試上清液的IFN-α和IL_12p40。顯示了3個(gè)捐獻(xiàn)者的平均值士SEM。y軸是以pg/ml為單位的IFN-α濃度(圖7Α和7Β)和IL_12p40濃度(圖7C和7D)，χ軸顯示單位為μM的logORN濃度。圖8是比較通過帶有免疫刺激UCA基序的ORN(GACACACACACUCACACACACACA；SEQIDNO27)進(jìn)行的體外細(xì)胞因子誘導(dǎo)的4幅圖。SEQIDNO27沒有誘導(dǎo)顯著的IL-12(圖8A)、IL-6(圖8B)、IL_2R(圖8C)或IL_7(圖8D)。結(jié)果與負(fù)對照(GACACACACACACACACACACACA；SEQIDNO25)、帶有富含U的3，端的非UCAORN(GACACACACACACACACACACUUU；SEQIDNO26)和正對照(UUGUU⑶UGUU⑶UGUU⑶U(均為硫代磷酸酯)；SEQIDNO28)進(jìn)行比較。將3個(gè)健康捐血者的人PBMC與至多2μM的ORN在存在DOTAP時(shí)一起溫育24小時(shí)。收集上清液并通過ELISA測定細(xì)胞因子或趨化因子的濃度。y軸是以Pg/ml為單位的細(xì)胞因子或趨化因子的濃度，χ軸顯示單位為μM的logORN濃度。圖9是比較通過帶有免疫刺激UCA基序的0RN(SEQIDN0:27)進(jìn)行的體外細(xì)胞因子誘導(dǎo)的4幅圖。SEQIDN0:27沒有誘導(dǎo)顯著的IL-10(圖9A)、IL-15(圖9B)、IL-12p40(圖9C)或TNF-α(圖9D)。結(jié)果與負(fù)對照(SEQIDNO25)、帶有富含U的3，端的非UCA0RN(SEQIDNO26))和正對照(SEQIDNO28)進(jìn)行比較。將3個(gè)健康捐血者的人PBMC與至多2μM的ORN在存在DOTAP時(shí)一起溫育24小時(shí)。收集上清液并通過ELISA測定細(xì)胞因子或趨化因子的濃度。y軸是以Pg/ml為單位的細(xì)胞因子或趨化因子的濃度，χ軸顯示單位為μM的logORN濃度。圖10是比較通過帶有免疫刺激UCA基序的ORN(SEQIDNO,21)進(jìn)行的體外細(xì)胞因子誘導(dǎo)的4幅圖。SEQIDN0:27沒有誘導(dǎo)顯著的MIP-Ia(圖10B)、IFN-y(圖10C)或MIP-Iβ(圖10D)，但是誘導(dǎo)了IFN-a(圖10A)。結(jié)果與負(fù)對照(SEQIDNO25)、帶有富含U的3，端的非UCAORN(SEQIDNO26))和正對照(SEQIDNO28)進(jìn)行比較。將3個(gè)健康捐血者的人PBMC與至多2μM的ORN在存在DOTAP時(shí)一起溫育24小時(shí)。收集上清液并通過ELISA測定細(xì)胞因子或趨化因子的濃度。y軸是以pg/ml為單位的細(xì)胞因子或趨化因子的濃度，χ軸顯示單位為μM的logORN濃度。圖11是比較通過帶有免疫刺激UCA基序的ORN(SEQIDNO,21)進(jìn)行的體外細(xì)胞因子誘導(dǎo)的3幅圖。SEQIDNO:27沒有誘導(dǎo)顯著的MIG(圖11C)，但是誘導(dǎo)了IP-10(圖11A)和MCP-I(圖11B)。結(jié)果與負(fù)對照(SEQIDNO25)、帶有富含U的3，端的非UCAORN(SEQIDNO26))和正對照(SEQIDNO28)進(jìn)行比較。將3個(gè)健康捐血者的人PBMC與至多2μM的ORN在存在DOTAP時(shí)一起溫育24小時(shí)。收集上清液并通過ELISA測定細(xì)胞因子或趨化因子的濃度。y軸是以pg/ml為單位的細(xì)胞因子或趨化因子的濃度，χ軸顯示單位為μΜ的logORN濃度。圖12是比較通過帶有免疫刺激UCA基序的ORN(SEQIDNO3)進(jìn)行的體內(nèi)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的4幅圖。SEQIDN0:3在3小時(shí)和24小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)誘導(dǎo)IFN-α(圖12A和圖12C)和IP-10(圖12B和圖12D)。將SEQIDNO:3的活性與誘導(dǎo)TLR7相關(guān)細(xì)胞因子和TLR8相關(guān)細(xì)胞因子兩者的2個(gè)ORN(GACACACACACACACACACACAUU；SEQIDNO30；和UUAUUAUUAUUAUUAUUAUU(硫代磷酸酯主鏈)；SEQIDNO33)以及主要誘導(dǎo)TLR8相關(guān)細(xì)胞因子的2個(gè)ORN(UUGUU⑶UGUU⑶UGUU⑶U；SEQIDNO31；和UUAUUAUUAUUAUUAUUAUU(硫代磷酸酯主鏈)；SEQIDNO32)的活性進(jìn)行比較。χ軸顯示所用的0RN(包括作為負(fù)對照的鹽水和D0TAP)，y軸顯示以pg/ml為單位的細(xì)胞因子濃度。HBS緩沖鹽水。圖13是比較通過帶有免疫刺激UCA基序的ORN(SEQIDNO3)進(jìn)行的體內(nèi)細(xì)胞因子誘導(dǎo)的5幅圖。SEQID而3在3小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)沒有誘導(dǎo)顯著量的1順-(1、11^-2、11^-12、IL-6或IL-10(分別為圖13AE)。將SEQIDNO3的活性與誘導(dǎo)TLR7相關(guān)細(xì)胞因子和TLR8相關(guān)細(xì)胞因子兩者的2個(gè)ORN(SEQIDNO30和33)以及主要誘導(dǎo)TLR8相關(guān)細(xì)胞因子的2個(gè)0RN(SEQIDNO:31和32)的活性進(jìn)行比較。χ軸顯示所用的0RN(包括作為負(fù)對照的鹽水和D0TAP)，y軸顯示以pg/ml為單位的細(xì)胞因子濃度。HBS緩沖鹽水。圖14是顯示由帶有免疫刺激UCA基序的0RN(SEQIDNO3)進(jìn)行的體內(nèi)脾細(xì)胞激活的4幅柱形圖。SEQIDNO3激活脾⑶3+T細(xì)胞(圖14A和圖14B)和DX5+B細(xì)胞(圖14C和圖14D)。將細(xì)胞從脾臟隔離并通過FACS分析進(jìn)行分離。χ軸顯示所用的ORN(包括作為負(fù)對照的鹽水和D0TAP)，y軸顯示⑶69+細(xì)胞％(A和C)或IL-12R+細(xì)胞％(B和D)。HBS緩沖鹽水。圖15是描繪包括在UCA基序中帶有單個(gè)U的SEQIDNO,21的指定ORN與帶有至多3個(gè)U但沒有UCA基序的其它ORN相比對IFN-a的誘導(dǎo)的圖。y軸是以pg/ml為單位的IFN-α濃度，χ軸顯示以μM為單位的logORN濃度。圖16是描繪在應(yīng)答于指定的ORN或CpGODN1826(SEQIDNO34)時(shí)在TLR9敲除(TLR9K0)小鼠、TLR7敲除(TLR7K0)小鼠和對照C57BL/6小鼠中的IFN-a、IP-10、IL-12禾口IL-6的誘導(dǎo)的4幅柱形圖。HBS緩沖鹽水。圖17是描繪在MyD88敲除(MyD88K0)小鼠和對照C57BL/6小鼠中的IFN-α和IP-10的誘導(dǎo)的柱形圖。HBS緩沖鹽水。具體實(shí)施例方式已說明免疫刺激寡核糖核苷酸(ORN)可能以TLR7依賴性和/或TLR8依賴性方式來刺激人類免疫系統(tǒng)。例如，含有富含GU且富含CU而缺乏聚G末端的基序的ORN可能作用于TLR7和TLR8。帶有富含AU而缺乏聚G末端的ORN可能僅作用于TLR8。含有由聚G基序側(cè)包圍的免疫刺激RNA基序的ORN可能通過TLR7而非TLR8來刺激免疫應(yīng)答。這些在存在如例如DOTAP等陽離子脂質(zhì)體制劑時(shí)會產(chǎn)生大量的IFN-α。這種效應(yīng)似乎經(jīng)TLR7介導(dǎo)，這是因?yàn)楫a(chǎn)生IFN-α的類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞(pDC)表達(dá)TLR7但不表達(dá)TLR8。所觀察到的其它細(xì)胞因子(例如，TNF-α、IL-12和IFN-γ)可能經(jīng)TLR8介導(dǎo)。例如，單核細(xì)胞的激活很有可能是直接經(jīng)TLR8介導(dǎo)的效應(yīng)，因?yàn)閾?jù)顯示單核細(xì)胞表達(dá)TLR8而不表達(dá)TLR7并且在8謂織刺激時(shí)分泌1順-(1。近來，已經(jīng)鑒定出帶有不同免疫特性(immuneprofile)并且具有用于激活RNA介導(dǎo)的應(yīng)答的限定基序的0RN。某些這種ORN不會誘導(dǎo)人PBMC產(chǎn)生IFN-α，但卻誘導(dǎo)顯著量的TNF-α、IL-12和IFN-γ，這指向TLR8而非TLR7的刺激。本發(fā)明涉及發(fā)現(xiàn)一類含有特異性RNA基序的聚合物，所述RNA基序能誘導(dǎo)稱為TLR7介導(dǎo)應(yīng)答(如由pDC產(chǎn)生IFN-α)的RNA介導(dǎo)免疫應(yīng)答而不會誘導(dǎo)顯著量的TLR8介導(dǎo)(即由表達(dá)TLR8的細(xì)胞產(chǎn)生的細(xì)胞因子的產(chǎn)生，例如由單核細(xì)胞產(chǎn)生的TNF-α)的免疫激活。如本文所用，“顯著量”是指與由其它免疫刺激ORN產(chǎn)生的量不同的量?！安粫T導(dǎo)顯著量的TLR8介導(dǎo)的免疫激活”是指當(dāng)與由上述那些含有富含⑶和富含⑶而缺乏聚G末端的ORN或可能刺激TLR8的其它ORN等ORN誘導(dǎo)的水平相比，免疫激活(例如，被誘導(dǎo)的TLR激活相關(guān)因子的水平)最小。因此，本發(fā)明的ORN誘導(dǎo)更少的對于RNATLR8或TLR7/8配體(例如，促炎性細(xì)胞因子TNF-α、IL-6)而言是典型的細(xì)胞因子。在某些實(shí)施方式中，顯著量是“明顯重大量”。本文所述的聚合物類別是單鏈的、具有磷酸二酯主鏈并且具有含⑶CA序列的免疫刺激RNA基序。這一類別與特征是幾乎排他性的TLR7樣免疫應(yīng)答的激活的免疫特性相關(guān)聯(lián)。例如，如圖4所示，本發(fā)明的聚合物SEQIDNO:3在配制有DOTAP時(shí)誘導(dǎo)了極大量的IFN-α而沒有明顯誘導(dǎo)IL-12p40。相反，具有相似序列但缺乏免疫刺激⑶CA基序的聚合物SEQIDNO810誘導(dǎo)了大量的IL-12p40。已發(fā)現(xiàn)的這種新的免疫刺激基序僅在磷酸二酯主鏈的環(huán)境下是免疫刺激性的。有趣的是，已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，含有該基序的本發(fā)明的免疫刺激聚合物會產(chǎn)生強(qiáng)IFN-α應(yīng)答但不會刺激其它典型細(xì)胞因子(例如那些應(yīng)答于TLR8刺激而被誘導(dǎo)的細(xì)胞因子)。因此，在一方面，本發(fā)明提供了一種含有主要誘導(dǎo)TLR7相關(guān)細(xì)胞因子的免疫刺激基序并且具有磷酸二酯主鏈的免疫刺激聚合物。在本發(fā)明的一方面，所述免疫刺激RNA基序是rNi-rC-rU-rC-rA-rR，其中所述聚合物在基序rC-rU-rC-rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中N1和N2中的至少一個(gè)不是A7(rA-rA-rA-rA-rA-rA-rA)，且其中rNfrC-rU-rC-rA-r^不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C。在某些實(shí)施方式中，N1包含至少一個(gè)A、一個(gè)C或一個(gè)G。在其它實(shí)施方式中，N1包含至少一個(gè)T，例如，在RNA:DNA嵌合物中。在某些實(shí)施方式中，N2包含至少一個(gè)A、一個(gè)C、一個(gè)G或一個(gè)T。在本發(fā)明的另一方面，所述免疫刺激RNA基序是rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4，其中X2和X3不存在或?yàn)檫x自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸和核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4不存在或?yàn)橐粋€(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAX!CUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C。在某些實(shí)施方式中，所述聚合物不含CCGAGCCGAG⑶CACC(SEQIDNO:35)。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，N3和N4各自獨(dú)立地包含至少一個(gè)A、C、G或U。在某些實(shí)施方式中，所述免疫刺激聚合物的長度為4100單元。在其它實(shí)施方式中，所述免疫刺激聚合物的長度為420單元。在其它實(shí)施方式中，所述免疫刺激聚合物的長度為1025單元。在其它實(shí)施方式中，所述免疫刺激聚合物的長度為1519單元。如下文實(shí)施例中更詳細(xì)論述的那樣，據(jù)發(fā)現(xiàn)所述免疫刺激基序的CUCA對于TLR7樣免疫應(yīng)答很重要。令人驚訝的是，免疫刺激效果對于磷酸二酯主鏈?zhǔn)翘禺愋缘模鴮α虼姿狨ブ麈渼t不是。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫刺激聚合物具有多于一個(gè)的免疫刺激基序。本發(fā)明的免疫刺激聚合物是單鏈的。根據(jù)本發(fā)明的方法，所述聚合物并非設(shè)計(jì)為包含與人類細(xì)胞中的編碼序列互補(bǔ)的序列，并且因此不認(rèn)為其是反義ORN或沉默RNA(SiRNA)?！胺腔パa(bǔ)”聚合物是不含能與靶標(biāo)細(xì)胞中的一個(gè)特定編碼區(qū)強(qiáng)力雜交(例如，不會在嚴(yán)格條件下雜交)的序列的聚合物。因此，施用非互補(bǔ)的聚合物不會造成基因沉默，尤其是因?yàn)楸景l(fā)明所述的聚合物與基因沉默所用的雙鏈分子相比是單鏈的。本發(fā)明的聚合物能夠?qū)φT導(dǎo)相對于背景而言顯著量的IFN-α或IFN-α相關(guān)分子的免疫應(yīng)答進(jìn)行誘導(dǎo)。IFN-α相關(guān)分子是與IFN-α的表達(dá)有關(guān)的細(xì)胞因子或因子。這些分子包括但不限于MIPl-β、ΙΡ-10和MIPl-α。本發(fā)明一般性涉及包含免疫刺激RNA基序的免疫刺激聚合物、含有一個(gè)或多個(gè)本發(fā)明的免疫刺激聚合物的免疫刺激組合物以及使用本發(fā)明的免疫刺激聚合物和免疫刺激組合物的方法。如本文所用，術(shù)語“RNA”是指通過3’-5’磷酸二酯鍵共價(jià)連接的兩個(gè)以上的核糖核苷酸(即，各自包含與磷酸基相連的核糖和嘌呤或嘧啶核苷堿基(例如，鳥嘌呤、腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶)的分子)。如上所述，RNA是指通過3’-5’磷酸二酯鍵聯(lián)接的核糖核苷酸的聚合物。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫刺激聚合物是RNA。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了包含嵌合的DNA:RNA分子的免疫刺激組合物，所述嵌合DNA:RNA分子包含本發(fā)明的免疫刺激RNA基序。在本發(fā)明的一個(gè)實(shí)施方式中，DNARNA分子的脫氧核糖核苷酸殘基包含處于所述聚合物的5’端的TCG基序。在一個(gè)實(shí)施方式中，嵌合DNA:RNA分子的DNA組分包含CpG核酸，即TLR9激動劑。在一個(gè)實(shí)施方式中，嵌合DNA:RNA分子的DNA和RNA部分通過核苷酸間磷酸鍵共價(jià)連接。在另一個(gè)實(shí)施方式中，嵌合DNA:RNA分子的DNA和RNA部分通過連接子(例如，非核苷酸連接子)共價(jià)連接。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物的至少一個(gè)單元是氨基酸。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫刺激聚合物與不是CpG核酸的TLR9激動劑連接。在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫刺激聚合物與TLR7激動劑或TLR9激動劑連接。所述激動劑可以是脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸，或者其可以是肽或小分子。免疫刺激聚合物可以與激動劑直接相連或者它們可以經(jīng)由連接子相連。本發(fā)明的免疫刺激聚合物可以涵蓋各種相比于天然RNA和DNA的化學(xué)修飾和取代，這些化學(xué)修飾和取代涉及核苷酸間磷酸二酯鍵、β-D-核糖單元和/或天然核苷酸堿基(腺嘌呤、鳥嘌呤、胞嘧啶、胸腺嘧啶、尿嘧啶)?；瘜W(xué)修飾的實(shí)例對于本領(lǐng)域技術(shù)人員是已知的，并且在以下文獻(xiàn)中有所描述例如，UhlmarmE等(1990)ChemRev90:543;“ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs"SynthesisandProperties&SynthesisandAnalyticalTechniques,S.Agrawal,Ed,HumanaPress,Totowa,USA1993；CrookeST等(1996)AnnuRevPharmacolToxicol36:107-129；和HunzikerJ等(1995)ModSynthMethods7:331-417。本發(fā)明的寡核苷酸可以具有一種或多種修飾，其中與由天然DNA或RNA構(gòu)成的相同序列的寡核苷酸相比，每種修飾位于特定的核苷酸間磷酸二酯鍵和/或特定的β-D-核糖單元和/或特定的天然核苷酸堿基位置。例如，本發(fā)明涉及可以包含一種或多種修飾的寡核苷酸，其中每種修飾獨(dú)立地選自a)以修飾的核苷酸間鍵代替位于核苷酸的3’端和/或5’端的核苷酸間磷酸二酯鍵，b)以脫磷鍵代替位于核苷酸的3’端和/或5’端的磷酸二酯鍵，c)以另一單元代替磷酸化糖主鏈中的磷酸化糖單元，d)以修飾的糖單元代替β-D-核糖單元，和e)以修飾的核苷酸堿基代替天然核苷酸堿基。更詳細(xì)的寡核苷酸化學(xué)修飾的實(shí)例如下。在一個(gè)實(shí)施方式中，ORN可以具有至少一個(gè)穩(wěn)定化的核苷酸間鍵。通常，該鍵是處在或靠近5’端或3’端并且不在免疫刺激基序內(nèi)。位于核苷酸的3’端和/或5’端的核苷酸間磷酸二酯鍵可以由至少一個(gè)修飾的核苷酸間鍵替代，其中該修飾的核苷酸間鍵例如選自硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、NR1R2-氨基磷酸酯、硼烷磷酸酯(bcmmophosphate)、α-羥基芐基膦酸酯、磷酸(C1-C21)-O-烷基酯、磷酸[(C6C12)芳基-(C1-C21)-O-烷基]酯、(C1-C8)烷基膦酸酯和/或(C6C12)芳基膦酸酯鍵、(C7C12)-α-羥甲基芳基(例如，WO95/01363中所公開)，其中(C6C12)芳基、(C6C20)芳基和(C6C14)芳基可選地由鹵素、烷基、烷氧基、硝基、氰基取代，且其中R1和R2彼此獨(dú)立地為氫、(C1C18)烷基、(C6C20)芳基、(C6C14)芳基-(C1C8)烷基，優(yōu)選為氫、(C1C8)烷基，優(yōu)選為(C1-C4)烷基和/或甲氧基乙基，或者R1和R2與攜帶它們的氮共同形成五六元雜環(huán)，該五六元雜環(huán)可以另外含有來自0、S和N的其它雜原子。在一個(gè)實(shí)施方式中，ORN具有15個(gè)穩(wěn)定化鍵。位于核苷酸的3’端和/或5’端的磷酸二酯鍵可由脫磷鍵替代(脫磷鍵在例如UhlmannE禾口PeymanA所著"MethodsinMolecularBiology，，，第20卷，"ProtocolsforOligonucleotidesandAnalogs",S.Agrawal,Ed.,HumanaPress,Totowa1993,第16章，第355頁起中有所描述)，其中脫磷鍵例如選自脫磷鍵甲縮醛、3’-硫代甲縮醛、甲基羥基胺、肟、亞甲基二甲基亞胼、二亞甲基砜和/或甲硅烷基。來自磷酸化糖主鏈(即由磷酸化糖單元組成的磷酸化糖主鏈)的磷酸化糖單元(即β-D-核糖和核苷酸間磷酸二酯鍵共同形成磷酸化糖單元)可以由另一個(gè)單元替代，其中該另一單元例如適于構(gòu)建“嗎啉基衍生物”寡聚物(例如，StirchakEP等(1989)NucleicAcidsRes17:6129_41中所述)，即例如由嗎啉基衍生物單元替代；或該另一單元適于構(gòu)建聚酰胺核酸("PNA”；例如NielsenPE等(1994)BioconjugChem5:3_7所述)，即例如由PNA主鏈單元替代，例如，由2-氨基乙基甘氨酸替代。β-核糖單元或β-D-2’-脫氧核糖單元可以由修飾的糖單元替代，其中該修飾的糖單元是例如，0-0-核糖、(1-0-2-脫氧核糖、1^-2'-脫氧核糖、2'-F-2'-脫氧核糖、2‘-F-阿拉伯糖、‘-0-(C1C6)烷基核糖(2‘-0-(C1C6)烷基核糖優(yōu)選為2‘-0-甲基核糖)、‘-0-(C2C6)烯基核糖、2'-[O-(C1-C6)烷基-O-(C1-C6)烷基]核糖、2‘-NH2-2‘-脫氧核糖、β-D-呋喃木糖、α-阿拉伯呋喃糖、2，4-二脫氧-β-D-赤蘚吡喃己糖和碳環(huán)糖類似物(例如，F(xiàn)roehlerJ(1992)AmChemSoc1148320中所述)和/或開鏈糖類似物(例如，Vandendriessche等(1993)Tetrahedron497223中所述)和/或雙環(huán)糖類似物(例如，TarkovM等(1993)HelvChimActa76481中所述)。核酸還包括取代的嘌呤和嘧啶，例如，C-5丙炔嘧啶和7-脫氮-7-位取代的嘌呤等修飾的堿基(WagnerRW等(1996)NatBiotechnol14:840_4)。嘌呤和嘧啶包括但不限于腺嘌呤、胞嘧啶、鳥嘌呤和胸腺嘧啶以及其它的天然存在的核苷堿基和非天然存在的核苷堿基、帶有和不帶取代基的芳香部分。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫刺激聚合物可以在免疫刺激基序之外包含一個(gè)或多個(gè)修飾的核苷堿基，即A、C、G、T和U的衍生物。這些修飾的核苷堿基的具體實(shí)施方式包括但不限于5-位取代的胞嘧啶(例如，5-甲基胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、5-碘胞嘧啶、5-羥基胞嘧啶、5-羥甲基胞嘧啶、5-二氟甲基胞嘧啶和未被取代或取代的5-炔基胞嘧啶)、6_位取代的胞嘧啶、N4-取代的胞嘧啶(例如，N4-乙基胞嘧啶)、5_氮雜-胞嘧啶、2-巰基胞嘧啶、異胞嘧啶、假異胞嘧啶、帶有稠環(huán)體系的胞嘧啶類似物(例如，N，N’-丙炔胞嘧啶或吩噁嗪)以及尿嘧啶及其衍生物(例如，5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-溴乙烯基尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-丙炔基尿嘧啶)、胸腺嘧啶衍生物(例如，2-硫代胸腺嘧啶、4-硫代胸腺嘧啶、6-位取代的胸腺嘧啶)、鳥苷衍生物(7-脫氮鳥嘌呤、7-脫氮-7-位取代鳥嘌呤(如7-脫氮-7-(C2C6)炔基鳥嘌呤)、7_脫氮-8-位取代鳥嘌呤、次黃嘌呤、N2-取代的鳥嘌呤(例如，N2-甲基鳥嘌呤)、8_位取代的鳥嘌呤(例如，8-羥基鳥嘌呤和8-溴鳥嘌呤)和6-硫代鳥嘌呤)或腺苷衍生物(5-氨基-3-甲基-3H，6H-噻唑并[4，5-d]嘧啶-2，7-二酮、2，6_二氨基嘌呤、2-氨基嘌呤、嘌呤、吲哚、腺嘌呤、取代的腺嘌呤(例如，N6-甲基腺嘌呤、8-氧代腺嘌呤))。堿基還可以由通用堿基(universalbase,例如，4-甲基吲哚、5-硝基吲哚、3-硝基吡咯、P堿基和K堿基)、芳環(huán)體系(例如，苯并咪唑或二氯苯并咪唑、1-甲基-1H-[1，2，4]三唑-3-甲酰胺)、芳環(huán)體系(例如，氟苯或二氟苯)或氫原子(dSpacer)取代。修飾的U核苷堿基是如二氫尿嘧啶、假尿嘧啶、2_硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、5-(C1-C6)烷基尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-(C2-C6)烯基尿嘧啶、5-(C2-C6)炔基尿嘧啶、5-羥甲基尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶或5-溴尿嘧啶等尿嘧啶衍生物。前述修飾的核苷堿基及其應(yīng)答核苷可獲自商業(yè)供應(yīng)商。該列表旨在進(jìn)行舉例而不應(yīng)被解讀為限制性的。本發(fā)明的組合物涵蓋了具有或不具有二級或更高級的聚合物。例如，在一個(gè)實(shí)施方式中，所述聚合物包含核苷、核苷類似物或核苷和核苷類似物的組合的序列，該序列能形成由至少兩個(gè)相鄰的氫鍵堿基對提供的二級結(jié)構(gòu)。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述至少兩個(gè)相鄰的氫鍵堿基對涉及兩組每組至少3個(gè)連續(xù)堿基。所涉及堿基的連續(xù)性性質(zhì)在熱力學(xué)上對于形成所謂的夾型(clamp)是有利的。然而，連續(xù)堿基可能并非必需的，特別是在具有高GC含量和/或較長的序列時(shí)。通常，序列中存在3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15或16個(gè)堿基對。在一個(gè)實(shí)施方式中，氫鍵堿基對可以是經(jīng)典Watson-Crick堿基對，即G_C、A-U或A-T。在其它實(shí)施方式中，氫鍵堿基對可以是非經(jīng)典堿基對，例如，G-U、G-G、G-A或U-U。在另外的實(shí)施方式中，氫鍵堿基對可以是Hoogsteen堿基對或其它堿基對。在一個(gè)實(shí)施方式中，二級結(jié)構(gòu)是莖環(huán)(stem-loop)二級結(jié)構(gòu)。莖環(huán)二級結(jié)構(gòu)或發(fā)夾二級結(jié)構(gòu)可以通過在互補(bǔ)或至少部分互補(bǔ)的序列之間的分子內(nèi)氫鍵堿基配對而產(chǎn)生?；パa(bǔ)序列或至少部分互補(bǔ)的序列分別代表完全反轉(zhuǎn)重復(fù)序列或間斷的反轉(zhuǎn)重復(fù)序列。例如，具有由5‘-X1-X2-X3...X3'-X2‘-X1‘-3‘提供的堿基序列(其中X1和X1‘、X2和X2‘以及X3和X3'中的每一對都能形成氫鍵堿基對)的聚合物可以包含完全或間斷的反轉(zhuǎn)重復(fù)片段并且具有自身折疊并形成莖環(huán)二級結(jié)構(gòu)的潛力。當(dāng)存在兩個(gè)以上的反轉(zhuǎn)重復(fù)片段時(shí)，各個(gè)聚合物還能相互作用從而不僅形成二聚的分子間復(fù)合物還可形成更高級的分子間復(fù)合物或結(jié)構(gòu)。本領(lǐng)域技術(shù)人員會認(rèn)識到，可以選擇條件和/或序列以便使一種二級結(jié)構(gòu)類型比另一種二級結(jié)構(gòu)類型更利于形成。在一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的免疫刺激聚合物與親脂部分的接合物。在某些實(shí)施方式中，免疫刺激聚合物與親脂部分共價(jià)連接。親脂部分通常會出現(xiàn)在具有游離末端的免疫刺激ORN的一個(gè)以上的末端處，但在某些實(shí)施方式中，親脂部分可以出現(xiàn)在免疫刺激聚合物的其它地方并因此不需要免疫刺激ORN具有游離末端。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫刺激聚合物具有3’端，而親脂部分與該3’端共價(jià)相連。親脂基團(tuán)通?？梢詾槟懥粝┗?、修飾的膽留烯基、膽固醇衍生物、還原膽固醇、帶取代基的膽固醇、修飾的膽固醇、膽留烷、C16烷基鏈、膽汁酸、膽酸、?；悄懰帷⒚撗跄懰狨?、油烯基石膽酸、油?；懴┧?、糖脂、磷脂、鞘月旨、如類固醇等類異戊二烯、如維生素E等維生素、飽和脂肪酸、不飽和脂肪酸、如甘油三酯等脂肪酸酯、芘、嚇啉、德克薩卟啉(Texaphyrine)、金剛烷、吖啶、生物素、香豆素、熒光素、若丹明、德克薩斯紅(Texas-Red)、地高辛、二甲氧基三苯甲基、叔丁基二甲基甲硅烷基、叔丁基二苯基甲硅烷基、花菁染料(例如，Cy3或Cy5)、H0echst33258染料、補(bǔ)骨脂素或布洛芬。在某些實(shí)施方式中，親脂部分選自膽留烯基、棕櫚酰基和脂肪?；?。據(jù)信在本發(fā)明的免疫刺激ORN中包含一個(gè)或多個(gè)這類親脂部分會為其帶來額外的抵抗核酸酶的降解的穩(wěn)定性。當(dāng)本發(fā)明的單個(gè)免疫刺激聚合物中存在兩個(gè)以上的親脂部分時(shí)，可以互相獨(dú)立地選擇每個(gè)親脂部分。在一個(gè)實(shí)施方式中，親脂基團(tuán)與免疫刺激聚合物的核苷酸的2’-位相連。親脂基團(tuán)可以替代性地或者附加性地與免疫刺激聚合物的核苷酸的雜環(huán)核苷堿基相連。親脂部分可以經(jīng)由任何合適的直接或間接鏈接與免疫刺激聚合物共價(jià)連接。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述鏈接時(shí)直接鏈接并且是酯鍵或酰胺鍵。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述鏈接是間接鏈接并且包括間隔區(qū)部分，例如，一個(gè)或多個(gè)無堿基核苷酸殘基、寡聚乙二醇(如三聚乙二醇(間隔區(qū)9)或六聚乙二醇(間隔區(qū)18))或烷基二醇(如丁二醇)。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫刺激聚合物與陽離子脂質(zhì)混合。在一個(gè)實(shí)施方式中，陽離子脂質(zhì)是D0TAP(N-[l-(2，3-二油酰氧基)丙基_1]_N，N,N-三甲基甲硫酸銨)。據(jù)信DOTAP將聚合物轉(zhuǎn)運(yùn)至細(xì)胞內(nèi)并特異性地運(yùn)輸至內(nèi)體腔，DOTAP可以在內(nèi)體腔中以PH依賴性方式釋放該聚合物。一旦進(jìn)入內(nèi)體腔后，聚合物可以與某些胞內(nèi)TLR相互作用，從而引發(fā)參與產(chǎn)生免疫應(yīng)答的LTR介導(dǎo)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑?？梢允褂镁哂邢嗨菩再|(zhì)(包括向內(nèi)體腔的運(yùn)輸)的其它試劑代替DOTAP或作為其補(bǔ)充。其它脂質(zhì)制劑包括例如，EFFECTENE(帶有特異性DNA縮合增強(qiáng)子的非脂質(zhì)體脂質(zhì))和SUPERFECT(新型作用樹枝狀聚合物技術(shù))、SMARTICLES(可以在穿過細(xì)胞膜時(shí)變?yōu)閹д姾傻碾姾煽赡嫘灶w粒)以及采用脂雙層的穩(wěn)定核酸脂顆粒(SNALP)。脂質(zhì)體可從GibcoBRL商購，例如，LIPOFECTIN和LIPOFECTACE，它們由如N-[I-(2，3-二油酰氧基)-丙基]-N，N，N-三甲基氯化銨(DOTMA)和二甲基二(十八烷基)溴化銨(DDAB)等陽離子脂質(zhì)形成。脂質(zhì)體的制備方法是本領(lǐng)域內(nèi)公知的并且已在許多出版物中得到描述。此外，GregoriadisG(1985)TrendsBiotechnol3:235_241也對脂質(zhì)體進(jìn)行了綜述。在其它實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫刺激聚合物與微粒、環(huán)糊精、納米顆粒、非離子囊泡、樹枝狀聚合物、聚陽離子肽、病毒顆粒和類病毒顆?；騃SCOM混合。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫刺激聚合物的形式是具有一級結(jié)構(gòu)和二級結(jié)構(gòu)的共價(jià)性閉合的啞鈴形分子。如下文所述，在一個(gè)實(shí)施方式中，這類寡核糖核苷酸包含兩個(gè)通過插入的雙鏈片段連接的單鏈環(huán)。在一個(gè)實(shí)施方式中，至少一個(gè)單鏈環(huán)包含本發(fā)明的免疫刺激RNA基序。本發(fā)明的其它共價(jià)閉合的鈴形分子包括嵌合DNA:RNA分子，在該嵌合DNA:RNA分子中，例如所述雙鏈片段至少部分是DNA(例如，同二聚體dsDNA或異二聚體DNA:RNA)，并且至少一個(gè)單鏈環(huán)包含本發(fā)明的免疫刺激RNA基序。替代性地，所述嵌合分子的雙鏈片段是RNA。在某些實(shí)施方式中，免疫刺激聚合物是孤立的。孤立分子是基本純凈并且不帶一般與其共同發(fā)現(xiàn)于天然或體內(nèi)系統(tǒng)中的其它物質(zhì)的分子，其程度對于其預(yù)期用途是實(shí)際并且適當(dāng)?shù)?。特別地，免疫刺激聚合物足夠的純凈并且所帶的其它細(xì)胞生物組分足夠少從而可用于例如制備藥物制劑。由于孤立的本發(fā)明的免疫刺激聚合物可以與藥物可接受載劑在藥物制劑中共混，免疫刺激聚合物可以僅構(gòu)成該制劑的較小的重量百分比。然而，免疫刺激聚合物是大體純凈的，因?yàn)橐褜⑵渑c可能與其在生物體系中相關(guān)的物質(zhì)相分離。為用于本發(fā)明，可以使用或者修改任何的本領(lǐng)域公知的多種方法來從頭合成本發(fā)明的免疫刺激聚合物。例如，β-氰乙基亞磷酰胺法(BeaucageSL等(1981)TetrahedronLett22:1859)；核苷H-膦酸酯法(GareggP等(1986)TetrahedronLett27:4051-4;FroehlerBC等(1986)NuclAcidRes145399-407；GareggP等(1986)TetrahedronLett274055-8；GaffneyBL等(1988)TetrahedronLett29:2619-22)。這些化學(xué)方法可以通過可商購的各種自動核酸合成儀進(jìn)行。可用于本發(fā)明的其它合成方法公開于UhlmarmE等(1990)ChemRev90:544_84和GoodchildJ(1990)BioconjugateChem1:165中。寡核糖核苷酸合成可以在溶液中或固相基質(zhì)上進(jìn)行。在溶液中，優(yōu)選塊偶聯(lián)反應(yīng)(二聚體、三聚體、四聚體等)，而固相合成優(yōu)選使用單體構(gòu)建塊以逐步法進(jìn)行。如磷酸三酯法、H-膦酸酯法和亞磷酰胺法等不同化學(xué)方法都已有所描述(EcksteinF(1991)OligonucleotidesandAnalogues，APracticalApproach，IRLPress，Oxford)。盡管在磷酸三酯法中反應(yīng)性磷基團(tuán)處于+V氧化態(tài)，但在亞磷酰胺法和H-磷酸酯法的偶聯(lián)反應(yīng)中使用更具反應(yīng)活性的磷+III衍生物。在后兩種方法中，磷在偶聯(lián)步驟之后被氧化而產(chǎn)生穩(wěn)定的P(V)衍生物。如果氧化劑是碘/水/堿，則在脫保護(hù)后獲得磷酸二酯。相反，如果氧化劑是如Beaucage試劑等硫化劑，則在脫保護(hù)后獲得硫代磷酸酯。一種有效的寡核糖核苷酸合成方法是采用亞磷酰胺化學(xué)的固相合成的組合，該方法最初是由Matteucci和Caruthers等描述用于寡聚脫氧核苷酸的(Matteucci等(1981)JAmChemSoc1033185)。寡核糖核苷酸的合成類似于寡脫氧核苷酸，區(qū)別之處在于寡核糖核苷酸中存在的2，-羥基必須由合適的羥基保護(hù)基進(jìn)行保護(hù)。RNA單體構(gòu)建塊中的單體可以例如由2’-0-叔丁基二甲基甲硅烷基(TBDMS)基團(tuán)保護(hù)。然而，據(jù)報(bào)道使用含有2’-0-三異丙基甲硅烷氧基甲基(TOM)基團(tuán)(TOM保護(hù)基)的單體的RNA合成會產(chǎn)生更高的偶聯(lián)效率，這是由于TOM保護(hù)基表現(xiàn)出比TBDMS基團(tuán)更低的空間位阻。TBDMS保護(hù)基通過使用氟化物除去，而對于TOM基團(tuán)可以在室溫使用甲胺的乙醇/水溶液而實(shí)現(xiàn)快速脫保護(hù)。在寡聚(核糖)核苷酸合成中，優(yōu)選從3’端向5’端的鏈延伸，這通過將具有3’-磷(III)基團(tuán)或其活化衍生物的核糖核苷酸單元與另一個(gè)核苷酸單元的游離5’-羥基偶聯(lián)而實(shí)現(xiàn)?？梢允褂米詣覦NA/RNA合成儀來方便地進(jìn)行合成。由此，可以使用合成儀供應(yīng)商所推薦的合成循環(huán)。與脫氧核苷單體相比，對于核糖核苷亞磷酰胺單體的偶聯(lián)時(shí)間更長(例如，400秒)。作為固體基質(zhì)，可以使用500A1000A的可控多孔玻璃(CPG)基質(zhì)或如引物基質(zhì)PS200(Amersham)等有機(jī)聚合物基質(zhì)。固體基質(zhì)通常含有通過其3’端連接的第一核苷，例如，5’-0_二甲氧基三苯甲基-N-6-芐氧基腺苷。在用三氯乙酸切下5’-0_二甲氧基三苯甲基后，使用例如5’-0-二甲氧基三苯甲基-N保護(hù)的2’-0-叔丁基二甲基甲硅烷基核苷-3’-0-亞磷酰胺。連續(xù)的反復(fù)循環(huán)之后，將完成的寡核糖核苷酸從基質(zhì)切下并通過在30°C用濃氨/乙醇(體積比31)處理24小時(shí)而脫保護(hù)。最后使用三乙胺/HF將TBDMS保護(hù)基切去。粗寡核糖核苷酸可以通過離子交換高壓液相色譜(HPLC)、離子對反相HPLC或聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)純化并通過質(zhì)譜表征。5’_接合物的合成直接通過在固相合成中將待聯(lián)接的分子的亞磷酰胺與末端核苷酸的5’-羥基偶聯(lián)而進(jìn)行。如膽固醇、吖啶、生物素、補(bǔ)骨脂素、乙二醇或氨基烷基殘基等配體的各種亞磷酰胺衍生物可以商購獲得。替代性地，可以在固相合成期間引入氨基烷基官能團(tuán)，這使得可以通過如活性酯、異硫氰酸酯或碘代乙酰胺等活化接合分子進(jìn)行合成后衍生化。3’端接合物的合成通常通過使用經(jīng)相應(yīng)修飾的固體基質(zhì)(例如，商購的膽固醇衍生化固體基質(zhì))而完成。然而，接合也能在核苷酸間鍵、核苷堿基或核糖殘基(例如，核糖的2’-位)處進(jìn)行。對于環(huán)狀寡核糖核苷酸而言，可以使用標(biāo)準(zhǔn)亞磷酰胺化學(xué)方法在核苷酸PS固體基質(zhì)(GlenResearch)上進(jìn)行寡核苷酸鏈的延伸。然后使用磷酸三酯偶聯(lián)法(Alazzouzi等(1997)NucleosidesNucleotidesl61513-14)在固體基質(zhì)上進(jìn)行環(huán)化反應(yīng)。在最后用氫氧化銨脫保護(hù)后，基本上從溶液中得出的唯一產(chǎn)物就是所需的環(huán)狀寡核苷酸。本發(fā)明的環(huán)狀寡核糖核苷酸包括閉合環(huán)形形式的RNA，并且還可以包括帶有或不帶雙鏈RNA的單鏈RNA。例如，在一個(gè)實(shí)施方式中，環(huán)狀寡核糖核苷酸包含雙鏈RNA并且采取具有由介入的雙鏈片段連接的兩個(gè)單鏈環(huán)的啞鈴構(gòu)象。共價(jià)閉合的啞鈴形CpG寡聚脫氧核苷酸已在美國專利第6，849，725號中進(jìn)行了描述。在另一個(gè)實(shí)施方式中，環(huán)狀寡核糖核苷酸包含雙鏈RNA并且采取具有由介入的雙鏈片段連接的三個(gè)以上的單鏈環(huán)的構(gòu)象。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫刺激RNA基序位于一個(gè)或多個(gè)單鏈片段中。本發(fā)明的免疫刺激聚合物可單獨(dú)使用或與如佐劑等其它試劑組合使用。本文所用的佐劑是指除抗原以外的其它提高免疫細(xì)胞在應(yīng)答于抗原時(shí)(例如，體液免疫應(yīng)答和/或細(xì)胞免疫應(yīng)答)的激活的物質(zhì)。佐劑促進(jìn)輔助細(xì)胞的累積和/或激活從而提高抗原特異性免疫應(yīng)答。佐劑被用來提高疫苗(即用于誘導(dǎo)抵抗抗原的保護(hù)性免疫的含抗原組合物)的效力。佐劑可以通過兩種一般性機(jī)制工作，且給定的佐劑或佐劑制劑可以通過以一種或兩種機(jī)制起作用。第一種機(jī)制是物理地影響抗原在產(chǎn)生抗原特異性免疫應(yīng)答的細(xì)胞或位點(diǎn)處的分布，而這種機(jī)制可以是改變抗原的生物分布(包括靶向特定區(qū)域或細(xì)胞類型)的輸送載具或者建立貯藏效應(yīng)以使抗原被緩慢釋放于體內(nèi)從而延長免疫細(xì)胞與該抗原的接觸。這類佐劑包括但不限于明礬(氫氧化鋁、磷酸鋁)；包括由礦物油或非礦物油制成的油包水或水包油乳液的乳液類制劑。這些佐劑可以是以下水包油乳液，例如，MontanideISA720(Seppic,AirLiquide,巴黎，法國)；MF-59(以Span85和Tween80穩(wěn)定化的水包角鯊烯乳液；ChironCorporation,Emeryville，加利福尼亞州)；和PROVAX(穩(wěn)定化洗滌劑和膠束形成劑；IDECPharmaceuticalsCorporation,SanDiego，加利福尼亞州)。這些佐劑還可以是以下油包水乳液，例如，MontanideISA50(二縮甘露醇油酸酯和礦物油的油性組合物，Seppic)或MontanideISA206(二縮甘露醇油酸酯和礦物油的油性組合物，Seppic)ο第二種佐劑機(jī)制是作為免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)劑或免疫刺激劑。這些會導(dǎo)致免疫細(xì)胞的激活從而更好地呈遞、識別或應(yīng)答于抗原，且因此提高了抗原特異性應(yīng)答的動力學(xué)、數(shù)量級、表型或記憶(memory)。免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)劑通常通過如Toll樣受體等特異性受體或數(shù)種其它非TLR途徑之一(例如，RIG-I)而起作用，然而對于某些免疫應(yīng)答調(diào)節(jié)劑而言途徑尚未知。這類佐劑包括但不限于從皂樹(Q.saponariatree)的樹皮提純的皂苷(如QS21，一種采用HPLC分級時(shí)在第21峰洗脫的糖脂；Antigenics，Inc.,Worcester,馬薩諸塞州)、聚[二(羧基苯氧基)]磷腈(PCPP聚合物；VirusResearchInstitute,USA)、Flt3配體和利什曼原蟲延伸因子(純化的利什曼原蟲蛋白；CorixaCorporation，Seattle，華盛頓州)。存在許多通過TLR起作用的佐劑。通過TLR4起作用的佐劑包括如單磷酰脂A(MPL；RibiImmunoChemResearch,Inc.，Hamilton，蒙大拿州)和胞壁酰二肽(MDP；Ribi)等月旨多糖衍生物；0M-174(與脂A相關(guān)的氨基葡萄糖二糖；OMPharmaSA，MeyrinJ^i)。鞭毛蛋白是通過TLR5起作用的佐劑。雙鏈RNA通過TLR3起作用。通過TLR7和/或TLR8起作用的佐劑包括單鏈RNA或寡核糖核苷酸(ORN)和包括咪唑并喹啉胺(例如，咪喹莫特、雷西莫特；3M)的識別并激活TLR的合成小分子量化合物。通過TLR9起作用的佐劑包括源自病毒或細(xì)菌的DNA或者如CpGODN等合成寡聚脫氧核苷酸(ODN)。同時(shí)具有物理效果和免疫刺激效果的佐劑是具有上述兩種功能的那些化合物。這類佐劑包括但不限于ISCOMS(含有混合的皂苷、脂質(zhì)并且形成帶有能容納抗原的孔的病毒尺寸的顆粒的免疫刺激復(fù)合物；CSL，Melbourne，澳大利亞)、Pam3Cys、SB-AS2(SmithKlineBeecham佐劑體系#2，其為含有MPL和QS21的水包油乳液=SmithKlineBeechamBiologicals[SBB],Rixensart,比利時(shí))、SB-AS4(SmithKlineBeecham佐劑體系#4，含明礬和MPL;SBB，比利時(shí))、如CRL1005等形成膠束的非離子嵌段共聚物(這些共聚物含有由聚氧化乙烯鏈側(cè)面包圍的直鏈?zhǔn)杷跃垩趸琕axcel,Inc.，Norcross，佐治亞州)和Syntex佐劑制劑(SAF，含Tween80和非離子嵌段共聚物的水包油乳液；SyntexChemicals,Inc.，Boulder，科羅拉多州)、MontanideIMS(例如，IMS1312，與可溶性免疫刺激劑混合的基于水的納米顆粒，Seppic)以及許多下述輸送載具。此外，本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明的免疫刺激聚合物和另一種佐劑的組合物，其中所述另一種佐劑是如殼聚糖等陽離子多糖或如魚精蛋白等陽離子肽、聚酯、聚乳酸、聚乙醇酸或者一種或多種上述物質(zhì)的共聚物。此外，本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明的免疫刺激聚合物和另一種佐劑的組合物，其中所述另一種佐劑是細(xì)胞因子。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述組合物是本發(fā)明的免疫刺激聚合物和細(xì)胞因子的接合物。細(xì)胞因子是由介導(dǎo)炎性反應(yīng)和免疫反應(yīng)的許多細(xì)胞類型產(chǎn)生的可溶性蛋白和糖蛋白。細(xì)胞因子介導(dǎo)免疫系統(tǒng)的細(xì)胞之間的通訊，在局部以及全身起作用以募集細(xì)胞并調(diào)節(jié)其功能和增殖。細(xì)胞因子的類別包括天然免疫的介質(zhì)和調(diào)節(jié)劑、適應(yīng)性免疫的介質(zhì)和調(diào)節(jié)劑以及造血刺激劑。在細(xì)胞因子中包括有白細(xì)胞介素(例如，IL-1、IL-2、IL-3、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-8、IL-9、IL-10、IL-IUIL-12、IL-13、IL-14、IL-15、IL-16、IL-17、IL-18和白細(xì)胞介素1932(IL-19L-32)等)、趨化因子(例如，IP_10、RANTES、MIP_1、MIP-UMIP-3、MCP-UMCP-2、MCP-3、MCP-4、嗜酸細(xì)胞趨化因子、I-TAC和BCA-I等)以及包括1型干擾素(例如，IFN-α和IFN_i3)、2型干擾素(例如，IFN-Y)、腫瘤壞死因子a(TNF-a)、轉(zhuǎn)化生長因子β(TGF-β)和各種集落刺激因子(包括GM-CSF、G-CSF和M-CSF)的其它細(xì)胞因子。此外，本發(fā)明還提供了包含本發(fā)明的免疫刺激聚合物和免疫刺激CpG核酸的組合物。在一個(gè)實(shí)施方式中，該組合物是本發(fā)明的免疫刺激聚合物和CpG核酸的接合物，例如，RNA:DNA接合物。本文所用的免疫刺激CpG核酸是指包含CpG基序并且刺激免疫系統(tǒng)的細(xì)胞的激活或增殖的天然或合成的DNA序列。免疫刺激CpG核酸已經(jīng)在包括美國專利第6，194，388號、第6，207，646號、第6，214，806號、第6，218，371號、第6，239，116號和第6，339，068號的許多已發(fā)表的專利、已公布的專利申請和其它出版物中進(jìn)行了描述。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫刺激CpG核酸是長度為6100個(gè)核苷酸的CpG寡聚脫氧核苷酸(CpG0DN)。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫刺激CpG核酸是長度為840個(gè)核苷酸的CpG寡聚脫氧核苷酸(CpG0DN)。在某些實(shí)施方式中，所述聚合物包含CG二核苷酸。在其它實(shí)施方式中，所述聚合物不帶CG二核苷酸。免疫刺激CpG核酸包括不同族的CpG核酸。一族CpG核酸可有力地激活B細(xì)胞但對于誘導(dǎo)IFN-α和NK細(xì)胞激活相對較弱；已將這一族稱為B族。B族CpG核酸通常是完全穩(wěn)定化的并且包含處于某些優(yōu)選的堿基環(huán)境下的未甲基化的CpG二核苷酸。參見例如，美國專利第6，194，388號、第6，207，646號、第6，214，806號、第6，218，371號、第6，239，116號和第6，339，068號。另一族CpG核酸可有力地誘導(dǎo)IFN-α和NK細(xì)胞激活但對于刺激B細(xì)胞而言相對較弱；已將這一族稱為A族。A族CpG核酸通常具有含磷酸二酯CpG二核苷酸的至少6個(gè)核苷酸的回文序列，并且在其5’端和/或3’端具有穩(wěn)定化的聚G序列。參見例如，已公布的國際專利申請WO01/22990。還有一族CpG核酸激活B細(xì)胞和NK細(xì)胞并且誘導(dǎo)IFN-α；已將這一族稱為C族。首先被表征的C族CpG核酸通常是完全穩(wěn)定化的，包含B族類型的序列和富含GC的回文序列或近似回文序列。該族CpG核酸已在公布的美國專利申請2003/0148976中進(jìn)行了描述，本文通過參考并入其全部內(nèi)容。免疫刺激CpG核酸還包括如公布的美國專利申請2003/0148976所披露的所謂的軟CpG核酸和半軟CpG核酸，本文通過參考并入其全部內(nèi)容。這些軟免疫刺激CpG核酸和半軟免疫刺激CpG核酸包含了耐核酸酶和對核酸酶敏感的核苷酸間鍵，其中不同類型的鍵根據(jù)特定規(guī)則而設(shè)置。在一方面，本發(fā)明提供了包含抗原和本發(fā)明的免疫刺激聚合物的疫苗。如本文所用的“抗原”是指能被τ細(xì)胞抗原受體或B細(xì)胞抗原受體識別的任何分子。該術(shù)語廣泛地包括被宿主免疫系統(tǒng)識別為外來物的任何類型的分子?？乖话惆ǖ幌抻诩?xì)胞、細(xì)胞提取物、蛋白、多肽、肽、多糖、多糖接合物、多糖和其它分子的肽模擬物和非肽模擬物、小分子、脂質(zhì)、糖脂、多糖、糖、病毒和病毒提取物以及如寄生物等多細(xì)胞生物體還有過敏原。對于是蛋白、多肽或肽的抗原而言，這些抗原可以包含編碼該抗原的核酸分子。更具體而言，抗原包括但不限于癌抗原，包括癌細(xì)胞和表達(dá)于癌細(xì)胞內(nèi)或其上的分子；微生物抗原，包括微生物和表達(dá)于微生物內(nèi)或其上的分子；過敏原以及如自身反應(yīng)性T細(xì)胞等其它疾病相關(guān)分子。因此，在某些實(shí)施方式中，本發(fā)明提供了用于癌癥、傳染病、過敏癥、成癮癥、由異常折疊的蛋白引起的疾病、自身免疫疾病和膽固醇管理的疫苗。抵抗傳染病的疫苗可以是預(yù)防性或治療性的。疫苗中的抗原可以是全活(減毒)的、全滅/失活的、重組減活的、亞基純化的、亞基重組的或肽。疫苗還可以包含額外的佐劑或佐劑組合。額外的佐劑可以是具有貯藏效果的佐劑(例如，明礬)和免疫調(diào)節(jié)劑(例如，另一個(gè)TLR激動劑或通過非TLR途徑起作用的免疫調(diào)節(jié)劑)或如免疫刺激復(fù)合物(ISGOM)等具有這兩種效果的佐劑。下文將對佐劑進(jìn)行更詳細(xì)的描述。抵抗癌癥的疫苗也可以是預(yù)防性或治療性的。癌抗原可以是全細(xì)胞(個(gè)別DC疫苗)或者一種或多種多肽或肽。這些癌抗原通常附著于載劑分子。疫苗還可以包含如上述那些佐劑的額外的佐劑或佐劑組合。下文將對癌抗原進(jìn)行更詳細(xì)的描述。對于用于治療過敏癥的疫苗而言，抗原是過敏原或部分過敏原。過敏原可以包含于輸送載具之內(nèi)或附著于其上。過敏原可以與免疫刺激聚合物相連。下文將對過敏原進(jìn)行更詳細(xì)的描述。用于治療成癮癥的疫苗可以用于治療例如尼古丁成癮、可卡因成癮、脫氧麻黃堿或海洛因成癮。在這些情況下，成癮性分子是原分子或半抗原。用于包含在抵抗成癮癥的疫苗中的“抗原”通常是小分子并且可以與載劑蛋白或其它載劑顆粒接合，或可將其并入類病毒顆粒中。用于治療由異常折疊蛋白引起的疾病的疫苗可用于治療如傳染性海綿狀腦病(克雅氏病(CreutZfeld-Jakobdisease)的變種)等疾病。在該情形中，“抗原”是搔癢病朊病毒(scrapieprion)，它可以附著于載劑蛋白或活減毒載體?？拱柎暮Ｄ〉囊呙绲囊粋€(gè)實(shí)例是例如靶向淀粉樣肽或蛋白的疫苗。此外還提供了治療自身免疫疾病的疫苗。這些疫苗可用于治療其中自身免疫細(xì)胞所識別的分子已經(jīng)被鑒定出的自身免疫疾病。例如，抵抗應(yīng)答于髓磷脂的自身反應(yīng)性T細(xì)胞的疫苗可用于治療多發(fā)性硬化。此外還提供了可用于治療心血管疾病和病況的疫苗。該疫苗可以靶向如脂蛋白、膽固醇和參與膽固醇代謝的分子等已知有助于所述疾病的成病的分子。用于管理膽固醇的疫苗可以包含例如膽留醇脂轉(zhuǎn)移蛋白(CETP)作為抗原。CETP促進(jìn)膽固醇從抗動脈硬化的含有載脂蛋白A-I的HDL顆粒向動脈硬化性的含載脂蛋白B的VLDL和LDL的交換。這類疫苗可被用于治療高膽固醇或減緩動脈硬化的進(jìn)展。所述疫苗可以用于治療其中靶標(biāo)分子已知的其它心血管疾病和病況。在一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的免疫刺激聚合物在制備對受試對象免疫接種用的藥物中的用途。在一方面，本發(fā)明提供了疫苗的制備方法。該方法包括將本發(fā)明的免疫刺激聚合物與抗原和可選的藥物可接受載劑緊密結(jié)合。在某些實(shí)施方式中，免疫刺激聚合物與抗原或過敏原接合?？乖c免疫刺激聚合物可以直接接合，或者它們可以通過連接子而間接接合。如本文所用的“微生物抗原”是微生物的抗原并且包括但不限于病毒、細(xì)菌、寄生物和真菌。這類抗原包括無損微生物以及天然分離物和片段或其衍生物，還有與天然微生物抗原相同或相似并且誘導(dǎo)對于該微生物特異性的免疫應(yīng)答的合成化合物。如果化合物誘導(dǎo)對于天然微生物抗原的免疫應(yīng)答(體液應(yīng)答和/或細(xì)胞應(yīng)答)，則其與天然微生物抗原相似。這類抗原在本領(lǐng)域內(nèi)常規(guī)使用并且是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員所公知的。病毒是通常包含核酸核和蛋白衣殼的小感染劑，但不是獨(dú)立的生物體。病毒還能采取缺乏蛋白的感染性核酸的形式。病毒不能在缺乏能在其中復(fù)制的活細(xì)胞時(shí)存活。病毒通過胞吞或直接DNA(噬菌體)注入而進(jìn)入特定的活細(xì)胞并繁殖從而導(dǎo)致疾病。繁殖的病毒隨后可以被釋放并感染其它細(xì)胞。某些病毒是含DNA病毒，其它病毒是含RNA病毒。在某些方面，本發(fā)明還意圖治療其中的疾病進(jìn)展中涉及阮病毒的疾病，例如，牛海綿狀腦病(即，瘋牛病，BSE)或動物中的搔癢病感染或人類中的克雅氏病。病毒包括但不限于腸道病毒(包括但不限于小核糖核酸病毒科，例如，脊髓灰質(zhì)炎病毒、柯薩奇病毒、?？刹《?、輪狀病毒、腺病毒和肝炎病毒(例如，甲肝、乙肝、丙肝、丁肝和戊肝病毒)。已在人類中發(fā)現(xiàn)的病毒的具體實(shí)例包括但不限于逆轉(zhuǎn)錄病毒科(例如，如HIV-I(也稱為HTLV-III、LAV或HTLV-III/LAV或者HIV-III)和如HIV-LP其它分離毒株等人類免疫缺陷病毒)；小核糖核酸病毒科(例如，脊髓灰質(zhì)炎病毒、甲肝病毒；腸道病毒、人類柯薩奇病毒、鼻病毒、?？刹《?；杯狀病毒科(例如，造成胃腸炎的毒株)；披膜病毒科(例如，馬腦炎病毒、風(fēng)疹病毒)；黃病毒科(例如，登革病毒、腦炎病毒、黃熱病毒)；冠狀病毒科(例如，冠狀病毒)；彈狀病毒科(例如，水皰性口炎病毒、狂犬病毒)；纖絲病毒科(例如，埃博拉病毒)；副粘病毒科(例如，副流感病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、呼吸道合胞病毒)；正粘病毒科(例如，流感病毒)；布尼亞病毒科(例如，漢坦病毒、布尼亞病毒、白蛉熱病毒和內(nèi)羅畢病毒)；沙粒病毒科(出血熱病毒)；呼腸孤病毒科(例如，呼腸孤病毒、環(huán)狀病毒和輪狀病毒)；雙核糖核酸病毒科；肝DNA病毒科(乙肝病毒)；細(xì)小病毒科(細(xì)小病毒)；乳多空病毒科(乳頭瘤病毒、多瘤病毒)；腺病毒科(大多數(shù)腺病毒)；皰疹病毒科(單純皰疹病毒(HSV)I和2、帶狀皰疹病毒、巨細(xì)胞病毒(CMV))；痘病毒科(天花病毒、痘苗病毒、痘病毒)；虹彩病毒科(例如，非洲豬瘟病毒)；和其它病毒如急性喉氣管支氣管炎病毒、甲病毒、卡波西肉瘤相關(guān)皰疹病毒、新城疫病毒、尼帕病毒(Nipahvirus)、諾沃克病毒、乳頭瘤病毒、副流感病毒、禽流感病毒、SARS病毒、西尼羅病毒。細(xì)菌是通過二分分裂無性繁殖的單細(xì)胞生物體?；诩?xì)胞的形態(tài)、染色反應(yīng)、養(yǎng)料和代謝需求、抗原結(jié)構(gòu)、化學(xué)組成和遺傳同源性來對細(xì)胞進(jìn)行分類和命名?；诩?xì)胞的形態(tài)學(xué)形式、可以將細(xì)胞非為三組，即球形(球菌)、直桿形(桿菌)和曲桿形或螺旋桿形(弧菌、彎曲桿菌、螺菌和螺旋體)。更常見的是基于細(xì)胞的染色反應(yīng)而將其表征為兩類生物體，即革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。革蘭氏(Gram)是指通常在微生物實(shí)驗(yàn)室中進(jìn)行的染色方法。革蘭氏陽性生物體在染色步驟后保持染色并呈現(xiàn)深紫色。革蘭氏陰性生物體不會保持染色但會攝取復(fù)染劑(counter-stain)因而呈現(xiàn)粉色。感染性細(xì)菌包括但不限于革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌。革蘭氏陽性菌包括但不限于巴氏桿菌屬、葡萄球菌屬和鏈球菌屬。革蘭氏陰性菌包括但不限于大腸桿菌、假單胞菌屬和沙門氏菌屬。感染性細(xì)菌的具體實(shí)例包括但不限于幽門螺桿菌、伯氏疏螺桿菌、嗜肺軍團(tuán)菌、分枝桿菌屬(例如，結(jié)核分枝桿菌、鳥分枝桿菌、胞內(nèi)分枝桿菌、堪薩斯分枝桿菌、戈登分枝桿菌)、金黃色葡萄球菌、淋病奈瑟菌、腦膜炎奈瑟菌、單核細(xì)胞增生性李斯特菌、化膿性鏈球菌(A類鏈球菌)、無乳鏈球菌(B類鏈球菌)、鏈球菌(草綠色類)、糞鏈球菌、牛鏈球菌、鏈球菌(厭氧種)、肺炎鏈球菌、致病性彎曲桿菌屬、腸球菌屬、流感嗜血桿菌、炭疽桿菌、白喉棒狀桿菌、棒狀桿菌屬、紅斑丹毒絲菌、產(chǎn)氣莢膜梭菌、破傷風(fēng)梭菌、產(chǎn)氣腸桿菌、肺炎克雷伯菌、多殺性巴氏桿菌、擬桿菌屬、具核梭桿菌、念珠狀鏈桿菌、梅毒螺旋體、細(xì)弱密螺旋體、鉤端螺旋體、立克次體和以色列放線菌。寄生物是為生存而依賴于其它生物體的生物體，因此它們必須進(jìn)入或感染另一個(gè)生物體以繼續(xù)其生命周期。受感染的生物體(即宿主)為寄生物提供養(yǎng)料和棲息地。盡管從最廣泛的意義上講，術(shù)語寄生物可以包括所有感染物(即，細(xì)菌、病毒、真菌、原生動物和蠕蟲)，但一般而言，該術(shù)語被用來僅指代原生動物、蠕蟲和外寄生節(jié)肢動物(例如，蜱、螨等)。原生動物是既能在細(xì)胞內(nèi)復(fù)制又能在細(xì)胞外、特別是血液、腸道或組織的胞外基質(zhì)中復(fù)制的單細(xì)胞生物體。蠕蟲是幾乎總是在細(xì)胞外的多細(xì)胞生物體(一個(gè)例外是旋毛蟲)。蠕蟲一般需要離開原始宿主并傳播到次級宿主以便進(jìn)行復(fù)制。與上述這些類型相反，外寄生節(jié)肢動物與宿主體的外表面形成寄生關(guān)系。寄生物包括胞內(nèi)寄生物和專性胞內(nèi)寄生物。寄生物的實(shí)例包括但不限于惡性瘧原蟲、卵形瘧原蟲、三日瘧原蟲、間日瘧原蟲、諾氏瘧原蟲、微小巴貝蟲、分歧巴貝蟲、克氏錐蟲、弓形蟲、旋毛蟲、碩大利什曼原蟲、杜氏利什曼原蟲、巴西利什曼原蟲、熱帶利什曼原蟲、岡比亞錐蟲、羅德西亞錐蟲和曼氏血吸蟲。真菌是真核生物體，僅少數(shù)真菌在脊椎哺乳動物中造成感染。由于真菌是真核生物體，因而它們與原核細(xì)菌在尺寸、結(jié)構(gòu)組成、生命周期和繁殖機(jī)制上都顯著不同。通?；谡婢男螒B(tài)特征、繁殖模式和培養(yǎng)特性來將真菌分類。盡管真菌可能在受試對象中造成不同類型的疾病(例如，吸入真菌抗原后引起的呼吸道過敏癥、因攝食如有毒蘑菇產(chǎn)生的毒傘(Amanitaphalloides)毒素和毒蕈肽以及曲霉菌物種產(chǎn)生的黃曲霉毒素等毒性物質(zhì)而引起的真菌中毒)，不是所有的真菌都會導(dǎo)致傳染病。感染性真菌能造成系統(tǒng)感染或淺表感染。原發(fā)性系統(tǒng)感染可能出現(xiàn)在正常健康的受試對象中，而機(jī)會性感染最常見于免疫低下的受試對象中。最普通的造成原發(fā)性系統(tǒng)感染的真菌物包括芽生菌屬、球孢子菌屬和組織胞漿菌屬。在免疫低下或免疫抑制的受試對象中造成機(jī)會性感染的常見真菌包括但不限于白色念珠菌、新型隱球菌和各種曲霉菌物種。系統(tǒng)性真菌感染是對內(nèi)臟的侵襲性感染。真菌生物體通常經(jīng)肺、胃腸道或靜脈導(dǎo)管進(jìn)入體內(nèi)。這些類型的感染可以由原發(fā)性致病真菌或機(jī)會性真菌弓I起。淺表性真菌感染涉及真菌在外表面生長而不侵入內(nèi)部組織。典型的淺表性真菌感染包括涉及皮膚、頭發(fā)或指甲的皮膚真菌感染。與真菌感染相關(guān)的疾病包括曲霉病、芽生菌病、念珠菌病、著色芽生菌病、球孢子菌病、隱形菌病、真菌性眼部感染、真菌性頭發(fā)、指甲和皮膚感染、組織胞漿菌病、洛博芽生菌病、足分支菌病、耳真菌病、副球孢子菌病、播散性馬爾尼菲青霉菌感染、暗色絲孢菌病、鼻孢子菌病、孢子絲菌病和接合菌病。其它醫(yī)學(xué)相關(guān)微生物已在文獻(xiàn)中進(jìn)行了詳盡描述，例如，參見C.G.A.Thomas,MedicalMicrobiology,BailliereTindall，英國1983，本文通過參考并入其全部內(nèi)容。上述的各個(gè)清單均為說明性而非旨在限制。如本文所用，術(shù)語“癌抗原，，和“腫瘤抗原，，被可互換地用于指代如肽、蛋白或糖蛋白等與腫瘤細(xì)胞或癌細(xì)胞相關(guān)的化合物，所述化合物能在表達(dá)于抗原呈遞細(xì)胞的表面時(shí)在主要組織相容性復(fù)合物(MHC)分子的環(huán)境中引發(fā)免疫應(yīng)答。由癌細(xì)胞差異性表達(dá)的癌抗原由此可以被利用來靶向癌細(xì)胞。癌抗原是能潛在地刺激顯著腫瘤特異性的免疫應(yīng)答。某些癌抗原雖然不一定由正常細(xì)胞表達(dá)但由正常細(xì)胞編碼。這些抗原可以被表征為通常在正常細(xì)胞中沉默(即，未表達(dá))的抗原、僅在某些分化階段表達(dá)的抗原以及如胚胎抗原和胎兒抗原等在某段時(shí)間表達(dá)的抗原。其它癌抗原由如癌基因(例如，激活的ras癌基因)、抑制基因(例如，突變體P53)、由內(nèi)部缺失或染色體易位產(chǎn)生的融合蛋白等突變的細(xì)胞基因編碼。還有一些其它癌抗原可以由如RNA和DNA腫瘤病毒上攜帶的那些基因等病毒基因編碼。癌抗原可以通過制備癌細(xì)胞的粗提取物(例如，如CohenPA等(1994)CancerRes541055-8中所述)、通過部分純化抗原、通過重組技術(shù)或通過已知抗原的從頭合成來從癌細(xì)胞制備。癌抗原包括但不限于經(jīng)重組表達(dá)的抗原、其免疫原部分或整個(gè)腫瘤或癌或其細(xì)胞。這些抗原可以經(jīng)重組來分離或制備，或者通過本領(lǐng)域內(nèi)任何其它已知方法進(jìn)行分離或制備。腫瘤抗原的實(shí)例包括MAGE、MART-I/Melan-A,gplOO、二肽基肽酶IV(DPPIV)、腺苷脫氨酶結(jié)合蛋白(ADAbp)、親環(huán)素b、大腸相關(guān)抗原(CRC)—C017-1A/GA733、癌胚抗原(CEA)及其免疫原表位CAP-I和CAP-2、etV6、amll、前列腺特異性抗原(PSA)及其免疫原表位PSA-l、PSA-2和PSA-3、前列腺特異性膜抗原(PSMA)、T細(xì)胞受體/⑶3-ζ鏈、MAGE腫瘤抗原族(例如，MAGE-Al、MAGE-A2、MAGE-A3、MAGE-A4、MAGE-A5、MAGE-A6、MAGE-A7、MAGE-A8、MAGE-A9、MAGE-A10,MAGE-AlUMAGE-Al2,MAGE_Xp2(MAGE-B2)、MAGE-Xp3(MAGE-B3)、MAGE-Xp4(MAGE-B4)、MAGE-CUMAGE-C2、MAGE-C3、MAGE-C4、MAGE-C5)、GAGE腫瘤抗原族(例如，GAGE-1、GAGE-2、GAGE-3、GAGE-4、GAGE-5、GAGE-6、GAGE-7、GAGE-8、GAGE-9)、BAGE、RAGE、LAGE-I、NAG、GnT-V,MUM-UCDK4、酪氨酸酶、p53、MUC族、HER2/neu、p21ras、RCASl、α-胎蛋白、E-鈣粘蛋白、α-聯(lián)蛋白、β-聯(lián)蛋白和Y-聯(lián)蛋白、pl20ctn、gpl00Pmel117,PRAME,NY-ESO-Ucdc27、結(jié)腸腺瘤性息肉病蛋白(APC)、胞襯蛋白、連接蛋白37(Connexin37)、Ig獨(dú)特型、pl5、gp75、GM2和GD2神經(jīng)節(jié)苷脂、如人乳頭瘤病毒蛋白等病毒產(chǎn)品、Smad腫瘤抗原族、Imp-UP1A、EBV編碼的細(xì)胞核抗原(EBNA)-1、腦糖原磷酸化酶、SSX-USSX-2(H0M-MEL-40)、SSX-1、SSX-4、SSX-5、SCP-1和CT-7以及c-erbB-2。本清單并非限制性的。本文所用“過敏原”是能夠引起特征為產(chǎn)生IgE的免疫應(yīng)答的分子。過敏原也是能在易感性受試對象中誘發(fā)過敏應(yīng)答或哮喘應(yīng)答的物質(zhì)。因此，在本發(fā)明的背景下，術(shù)語過敏原是指能引發(fā)由IgE抗體介導(dǎo)的過敏應(yīng)答的特定類型的抗原。過敏原的清單龐大，并且可以包括花粉、昆蟲毒液、動物毛皮屑、真菌孢子和藥物(例如，青霉素)。天然動物和植物過敏原的實(shí)例包括對于以下的屬是特異性的蛋白犬屬(家犬)；塵螨屬(例如，粉塵螨)；貓屬(家貓)；豚草屬(美洲豚草)；黑麥草屬(例如，多年生黑麥草和多花黑麥草)；柳杉屬(日本柳杉)；鏈格孢屬(鏈格孢菌(Alternariaalternata))；榿木屬；赤楊屬(歐洲赤楊(Alnusgultinosa))；樺木屬(疣皮樺)；櫟屬(美洲白櫟)；木樨欖屬(橄欖)；蒿屬(艾蒿)；車前屬(例如，長葉車前)；墻草屬(例如，藥用墻草(Parietariaofficinalis)和歐蓍草)；小蠊屬(例如，德國小蠊)；蜂屬(例如，蜜蜂(ApismultifIorum))；柏木屬(例如，絲柏、綠干柏和大果柏)；檜屬(例如，Juniperussabinoides、鉛筆柏、歐洲刺柏和Juniperusashei)、金鐘柏屬(例如，東方金鐘柏(Thuyaorientalis))、扁柏屬(例如，日本扁柏)、大蠊屬(例如，美洲大蠊)、冰草屬(例如，匍匐冰草)、黑麥屬(例如，黑麥)、小麥屬(例如，小麥)、鴨茅屬(例如，鴨茅)、羊茅屬(例如，牛尾草)、早熟禾屬(例如，草地早熟禾和加拿大早熟禾)、燕麥屬(例如，燕麥)、絨毛草屬(例如，絨毛草)、黃花茅屬(例如，黃花茅)、燕麥草屬(例如，花葉燕麥草)、剪股穎屬(例如，小糠草)、梯牧草屬(例如，梯牧草)、薦草屬(例如，薦草)、雀稗屬(例如，百喜草)、高粱屬(例如，假高粱)和雀麥屬(例如，無芒雀麥)。在一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的免疫刺激聚合物與抗原的接合物。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的免疫刺激聚合物與抗原共價(jià)連接。免疫刺激聚合物與抗原之間的共價(jià)鏈接(covalentlinkage)可以為任何合適類型的共價(jià)鏈接，條件是免疫刺激聚合物和抗原在如此相連時(shí)保持各單個(gè)組分的可測的功能活性。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述共價(jià)鏈接為直接鏈接。在另一個(gè)實(shí)施方式中，所述共價(jià)鏈接為例如通過連接子部分的間接鏈接。經(jīng)共價(jià)連接的免疫刺激聚合物和抗原可以在細(xì)胞內(nèi)被處理而使一者從另一者釋放。通過這種方式，與如果作為單獨(dú)制劑或單獨(dú)組分施用時(shí)的輸送相比，各個(gè)組分向細(xì)胞的輸送可以得到提高。在一個(gè)實(shí)施方式中，抗原是抗原本身，即其為預(yù)先形成的抗原。在一方面，本發(fā)明提供了包含本發(fā)明的組合物以及輸送載具的藥物組合物。在各種實(shí)施方式中，輸送載具可以選自陽離子脂、脂質(zhì)體、脂螺旋(cochleate)、病毒顆粒、免疫刺激復(fù)合物(ISC0M)、微粒、微球、納米球、單層囊泡(LUV)、多層囊泡、乳化顆粒(emulsome)、以及聚陽離子肽、脂質(zhì)復(fù)合體、聚合物復(fù)合體、脂質(zhì)聚合物復(fù)合體、油包水(W/0)乳液、水包油(0/W)乳液、水包油包水(W/0/W)多重乳液、微乳液、納米乳液、膠束、樹枝狀聚合物、病毒顆粒、類病毒顆粒、聚合物納米顆粒(如納米球或納米膠囊)、聚合物微粒(如微球或微膠囊)、殼聚糖、環(huán)糊精、非離子囊泡或ISCOM以及可選的藥物可接受載劑。以下對藥物可接受載劑進(jìn)行討論。本發(fā)明的藥物組合物必要時(shí)可以再包含抗原。使用任何合適的方法來將本發(fā)明的組合物以及抗原(當(dāng)其存在時(shí))與輸送載具結(jié)合。免疫刺激組合物可以被容納在輸送載具之內(nèi)，或者可以將其呈現(xiàn)于或聯(lián)結(jié)于輸送載具的暴露于溶劑的表面。在一個(gè)實(shí)施方式中，將免疫刺激聚合物呈現(xiàn)于或聯(lián)結(jié)于輸送載具的暴露于溶劑的表面，而將抗原(當(dāng)其存在時(shí))容納于輸送載具內(nèi)。在另一個(gè)實(shí)施方式中，將免疫刺激聚合物和抗原均呈現(xiàn)于或聯(lián)結(jié)于輸送載具的暴露于溶劑的表面。在再一個(gè)實(shí)施方式中，將抗原呈現(xiàn)于或聯(lián)結(jié)于輸送載具的暴露于溶劑的表面，而將免疫刺激聚合物容納于輸送載具內(nèi)。在又一個(gè)實(shí)施方式中，將免疫刺激聚合物和抗原(如果包含有抗原)均容納于輸送載具內(nèi)。本發(fā)明還提供了本發(fā)明的免疫刺激組合物的使用方法。在一方面，本發(fā)明提供了激活免疫細(xì)胞的方法。根據(jù)本發(fā)明這一方面的方法包括使體外或體內(nèi)的免疫細(xì)胞與有效量的本發(fā)明的組合物接觸以便激活免疫細(xì)胞。本發(fā)明的組合物在必要時(shí)可以包含抗原。本文所用的“免疫細(xì)胞”是指任何能參與天然免疫相應(yīng)或適應(yīng)性免疫應(yīng)答的源自骨髓的細(xì)胞。免疫系統(tǒng)的細(xì)胞包括但不限于樹突細(xì)胞(DC)、自然殺傷(NK)細(xì)胞、單核細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、粒細(xì)胞、B淋巴細(xì)胞、漿細(xì)胞、T淋巴細(xì)胞以及它們的前體細(xì)胞。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫細(xì)胞是能夠產(chǎn)生IFN-α的免疫細(xì)胞，例如，類漿細(xì)胞樹突細(xì)胞(pDC)。在某些實(shí)施方式中，免疫細(xì)胞是TLR7表達(dá)細(xì)胞。在本發(fā)明的背景下，所述方法不包括與可有效誘導(dǎo)治療性顯著的IFN-α生產(chǎn)的量的1ipofectin的配制。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫細(xì)胞不會應(yīng)答于所述聚合物而產(chǎn)生治療性顯著量的TNF-α。如本文所用，術(shù)語“有效量”是指為產(chǎn)生所需的生物效果而必需或足夠的物質(zhì)量。有效量可以但不必限于在單次施用中施用的量。在一個(gè)實(shí)施方式中，可以使用本發(fā)明的組合物通過誘導(dǎo)免疫細(xì)胞進(jìn)入與免疫相應(yīng)相關(guān)的激活態(tài)而激活該免疫細(xì)胞。激活免疫細(xì)胞是指既誘發(fā)也提高免疫相應(yīng)。如本文所用，術(shù)語“免疫相應(yīng)”是指反映出進(jìn)行增殖、執(zhí)行效應(yīng)子免疫功能或產(chǎn)生參與免疫相應(yīng)的基因產(chǎn)物的免疫細(xì)胞的激活的天然免疫應(yīng)答或適應(yīng)性免疫應(yīng)答的任何方面。參與免疫應(yīng)答的基因產(chǎn)物可以包括經(jīng)分泌的產(chǎn)物(例如，抗體、細(xì)胞因子和趨化因子)以及具有免疫功能的特征的細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞表面的分子(例如，某些抗原分化簇(CD)、轉(zhuǎn)錄因子和基因轉(zhuǎn)錄物)。術(shù)語“免疫應(yīng)答”可以被用于單個(gè)細(xì)胞或細(xì)胞群。細(xì)胞因子的產(chǎn)生可以由本領(lǐng)域公知的數(shù)種方法中的任何一種來進(jìn)行評估，所述方法包括生物應(yīng)答檢驗(yàn)、酶聯(lián)免疫吸附檢驗(yàn)(ELISA)、細(xì)胞內(nèi)熒光激活細(xì)胞分選(FACS)分析和逆轉(zhuǎn)錄酶/聚合物酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RT-PCR)。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫應(yīng)答涉及IFN-α的產(chǎn)生。在一個(gè)實(shí)施方式中，免疫應(yīng)答涉及免疫細(xì)胞激活的細(xì)胞表面標(biāo)記物(例如，CD25、⑶80、⑶86和⑶154)的上調(diào)。用于測定這類標(biāo)記物的細(xì)胞表面表達(dá)的方法是本領(lǐng)域內(nèi)公知的并且包括FACS分析。為測定細(xì)胞或細(xì)胞群中的免疫應(yīng)答，在一個(gè)實(shí)施方式中，該細(xì)胞或細(xì)胞群表達(dá)了TLR7。細(xì)胞可以天然地表達(dá)該TLR，或可以通過在該細(xì)胞內(nèi)引入合適的該TLR用表達(dá)載體來操作該細(xì)胞以表達(dá)該TLR。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述細(xì)胞或細(xì)胞群作為外周血單核細(xì)胞(PBMC)而獲取。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述細(xì)胞或細(xì)胞群作為表達(dá)所述TLR的細(xì)胞系獲取。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述細(xì)胞或細(xì)胞群作為表達(dá)所述TLR的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染物獲取。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述細(xì)胞或細(xì)胞群作為表達(dá)所述TLR的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染物獲取。此外，為了用于測定細(xì)胞或細(xì)胞群內(nèi)的免疫應(yīng)答，方便的是在該細(xì)胞或細(xì)胞群中引入可應(yīng)答于TLR的胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的報(bào)告子(reporter)構(gòu)建體。在一個(gè)實(shí)施方式中，這種報(bào)告子是置于NF-κB啟動子的控制下的基因。在一個(gè)實(shí)施方式中，置于所述啟動子的控制下的所述基因是熒光素酶。在合適的激活條件下，熒光素酶報(bào)告構(gòu)建體得到表達(dá)并發(fā)出可以使用光度計(jì)進(jìn)行定量測定的可檢測光信號。這種報(bào)告子構(gòu)建體和其它合適的報(bào)告子構(gòu)建體可以商購。本發(fā)明還考慮了使用無細(xì)胞的TLR激活檢測方法。在某些方面，本發(fā)明涉及用于治療中的組合物和方法。本發(fā)明的免疫刺激組合物可以被單獨(dú)使用或與其它治療劑組合使用。可以將免疫刺激組合物與其它治療劑同時(shí)施用或依次施用。當(dāng)免疫刺激組合物和其它治療劑同時(shí)施用時(shí)，可以將其在相同或不同的制劑中施用，但在同一時(shí)間進(jìn)行施用。另外，當(dāng)免疫刺激組合物和其它治療劑同時(shí)施用時(shí)，可以將其通過相同或不同的施用途徑進(jìn)行施用，但在同一時(shí)間施用。當(dāng)本發(fā)明的免疫刺激組合物的施用在時(shí)間上與其它治療劑的施用相分開時(shí)，本發(fā)明的免疫刺激組合物與其它治療劑依次得到施用。這些化合物的施用之間的時(shí)間間隔可能以數(shù)分鐘計(jì)或者可以更長。在一個(gè)實(shí)施方式中，將本發(fā)明的免疫刺激組合物在施用其它治療劑之前施用。在一個(gè)實(shí)施方式中，將本發(fā)明的免疫刺激組合物在施用其它治療劑之后施用。另外，當(dāng)本發(fā)明的免疫刺激組合物與其它治療劑依次施用時(shí)，可以將其以相同或不同的施用途徑進(jìn)行施用。其它治療劑包括但不限于佐劑、抗原、疫苗和可用于治療感染、癌癥、過敏癥和哮喘的藥物。在一方面，本發(fā)明提供了對受試對象預(yù)防接種的方法。根據(jù)本發(fā)明的這一方面的方法包括對受試對象施用抗原和本發(fā)明的組合物。在一個(gè)實(shí)施方式中，抗原的施用包括施用編碼該抗原的核酸。本文所用“受試對象”是指脊椎動物。在各種實(shí)施方式中，受試對象是人類、非人類靈長類或其它哺乳動物。在某些實(shí)施方式中，受試對象是小鼠、大鼠、豚鼠、兔、貓、狗、豬、綿羊、山羊、?；蝰R。為用于對受試對象的預(yù)防接種，在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物包含抗原。所述抗原可以與本發(fā)明的聚合物分離或與其共價(jià)連接。在一個(gè)實(shí)施方式中，本發(fā)明的組合物自身不包含該抗原。在該實(shí)施方式中，可以將所述抗原與本發(fā)明的組合物分開施用于受試對象，或者與本發(fā)明的組合物共同施用。分開的施用包括時(shí)間上的分開、施用位置或途徑的分開或者既在時(shí)間上也在施用位置或途徑上分開。當(dāng)本發(fā)明的組合物與抗原在時(shí)間上分開施用時(shí)，可以將抗原在本發(fā)明的組合物之前或之后施用。在一個(gè)實(shí)施方式中，將抗原在施用本發(fā)明的組合物之后48小時(shí)4周進(jìn)行施用。所述方法還考慮了在抗原和組合物的初始施用之后施用一劑或多劑加強(qiáng)劑量的僅抗原、僅組合物或抗原與組合物。本發(fā)明還考慮了通過對受試對象施用本發(fā)明的組合物來使受試對象準(zhǔn)備好應(yīng)對未來遭遇未知抗原的情形，其中所述組合物不包含抗原。根據(jù)該實(shí)施方式，使受試對象準(zhǔn)備好對該受試對象以后遇到的抗原(例如，通過環(huán)境或職業(yè)接觸)產(chǎn)生更強(qiáng)烈的應(yīng)答?？梢詫⑦@類方法用于例如易于接觸微生物的旅行者、醫(yī)務(wù)工作者和士兵。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了治療患有感染的受試對象的方法。根據(jù)本發(fā)明的該方面的方法包括對患有感染的受試對象施用有效量的本發(fā)明的組合物和感染藥物以治療該受試對象。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的免疫刺激聚合物在制備用于治療受試對象的感染的藥物中的用途。在一個(gè)方面，本發(fā)明提供了可用于治療感染的組合物。根據(jù)該方面的組合物包含本發(fā)明的免疫刺激聚合物和感染藥物。如本文所用，關(guān)于患有疾病或病況的受試對象的術(shù)語“治療”應(yīng)指預(yù)防、改善或消除該受試對象中的疾病或病況的至少一個(gè)體征或癥狀?；加袀魅静〉氖茉噷ο笫腔加幸蚱涫芨腥拘晕⑸锏臏\表性、局部性或系統(tǒng)性侵襲而產(chǎn)生的病癥的受試對象。感染性微生物可以是如上所述的病毒、細(xì)菌、真菌或寄生物。感染藥物包括但不限于抗菌劑、抗病毒劑、抗真菌劑和抗寄生物劑。如“抗感染齊U”、“抗生素”、“抗菌劑”、“抗病毒劑”、“抗真菌劑”、“抗寄生物劑”和“殺寄生物藥”對于本領(lǐng)域普通技術(shù)人員具有公認(rèn)的含義并且在標(biāo)準(zhǔn)醫(yī)學(xué)教科書中得到定義。簡言之，抗菌劑殺死或抑制細(xì)菌，并且包括抗生素以及其它具有類似功能的合成或天然化合物。抗病毒劑可以從天然來源分離或合成并且可用于殺死或抑制病毒?？拐婢鷦┛捎糜谥委煖\表性真菌感染以及機(jī)會性和原發(fā)性的系統(tǒng)性真菌感染?？辜纳飫⑺阑蛞种萍纳?。許多抗生素是作為次生代謝物(secondarymetabolite)由如微生物等細(xì)胞產(chǎn)生的低分子量分子。通常，抗生素干擾對于微生物特異的但在宿主細(xì)胞中不存在的一種或多種功能或結(jié)構(gòu)。抗感染治療的問題之一是用抗感染劑治療的宿主中出現(xiàn)的副作用。例如，許多抗感染劑可以殺死或抑制廣譜的微生物，并且并非對于特定的物種類型特異。采用這些類型的抗感染劑的治療導(dǎo)致生存于宿主中的正常微生物群以及感染性微生物的殺傷。這些微生物群的損失可能導(dǎo)致疾病并發(fā)癥并使宿主易于受到其它病原體感染，這是因?yàn)樗鑫⑸锶号c感染性病原體相競爭并且充當(dāng)對感染性病原體的屏障。其它副作用可能因這些化學(xué)物質(zhì)在宿主的非微生物細(xì)胞或組織上的特異性或非特異性影響而產(chǎn)生。抗感染劑的廣泛使用的另一個(gè)問題是耐抗生素的微生物菌株的發(fā)展。目前，已經(jīng)發(fā)展出耐萬古霉素腸球菌、耐青霉素肺炎球菌、多抗性金黃色葡萄球菌和多抗性結(jié)核菌株，而它們正成為重大臨床問題?？垢腥緞┑膹V泛使用將可能產(chǎn)生許多耐抗生素的細(xì)菌菌株。結(jié)果，新型抗感染策略將必須抗擊這些微生物?？捎行⑺阑蛞种拼蠓秶募?xì)菌的抗菌微生物稱作廣譜抗生素。其它類型的抗菌抗生素主要對于抵抗革蘭氏陽性或革蘭氏陰性類細(xì)菌有效。這些類型的抗生素稱作窄譜抗生素。其它的可以有效抵抗單一生物體或疾病而不會抵抗其它類型細(xì)菌的抗生素稱作有限譜(limited-spectrum)抗生素。有時(shí)基于抗菌劑的主要作用模式來將其分類。通常，抗菌劑是細(xì)胞壁合成抑制劑、細(xì)胞膜合成抑制劑、蛋白合成抑制劑、核酸合成或功能抑制劑和競爭性抑制劑。細(xì)胞壁合成抑制劑抑制細(xì)胞壁合成過程中的一個(gè)步驟，且通常是細(xì)菌肽聚糖的合成中的一個(gè)步驟。細(xì)胞壁合成抑制劑包括內(nèi)酰胺抗生素、天然青霉素、半合成青霉素、氨芐青霉素、克拉維酸、頭孢菌素和桿菌肽。β-內(nèi)酰胺是抑制肽聚糖合成的最后一步的含四元β"內(nèi)酰胺環(huán)的抗生素。β_內(nèi)酰胺抗生素可以是合成的或天然的。由青霉菌產(chǎn)生的內(nèi)酰胺抗生素是如青霉素G或青霉素V等天然青霉素。它們通過黃青霉的發(fā)酵而產(chǎn)生。天然青霉素具有窄譜活性并且通?？捎行У挚规溓蚓⒘芮蚓推咸亚蚓?。還可有效抵抗革蘭氏陽性細(xì)菌的其它類型天然青霉素包括青霉素F、X、K和0。半合成青霉素通常是對由霉菌產(chǎn)生的分子6-氨基青霉烷酸的修飾。6-氨基青霉烷酸可以通過添加可產(chǎn)生具有并天然青霉素更廣譜的活性或其它有利性質(zhì)的青霉素的側(cè)鏈來修飾。某些類型的半合成青霉素具有抵抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的廣譜，但被青霉素酶失活。這些半合成青霉素包括氨芐青霉素、羧芐青霉素、苯唑西林、美洛西林和哌拉西林。其它類型的半合成青霉素具有更窄的抵抗革蘭氏陽性菌的活性，但具有經(jīng)改進(jìn)的性質(zhì)從而其不會被青霉素酶失活。這些半合成青霉素包括例如，甲氧西林、雙氯西林和萘夫西林。某些廣譜半合成青霉素可以與如克拉維酸和舒巴坦等β-內(nèi)酰胺酶抑制劑組合使用。β-內(nèi)酰胺酶抑制沒有抗微生物作用但是其起到抑制青霉素酶的作用，因而保護(hù)半合成青霉素不被降解。另一類β-內(nèi)酰胺抗生素是頭孢菌素。頭孢菌素對細(xì)菌β“內(nèi)酰胺酶的降解敏感，因而并非總是單獨(dú)有效的。然而，頭孢菌素可抵抗青霉素酶。它們可有效抵抗多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌。頭孢菌素包括但不限于頭孢噻吩、頭孢氨芐、頭孢孟多、頭孢克洛、頭孢唑啉、頭孢呋辛、頭孢西丁、頭孢噻肟、頭孢磺啶、頭孢他美、頭孢克肟、頭孢曲松、頭孢哌酮、頭孢他啶和拉氧頭孢。桿菌肽是通過抑制胞璧肽亞基或肽聚糖從輸送該亞基至膜外的分子釋放而抑制細(xì)胞壁合成的另一類抗生素。盡管桿菌肽可有效抵抗革蘭氏陽性菌，但其用途通常因其高毒性而限于局部施用。碳青霉烯(carbapenem)是能夠抑制細(xì)胞壁合成的另一種廣譜β-內(nèi)酰胺抗生素。碳青霉烯的實(shí)例包括但不限于亞胺培南(imipenem)。單胺菌素(monobactam)也是廣譜β-內(nèi)酰胺抗生素，并且包括euztreonam。一種由鏈霉菌產(chǎn)生的抗生素萬古霉素也可通過抑制細(xì)胞膜合成而有效抵抗革蘭氏陽性菌。另一類抗菌劑是作為細(xì)胞膜抑制劑的抗菌劑。這些化合物瓦解細(xì)菌細(xì)胞膜的結(jié)構(gòu)或抑制其功能。細(xì)胞膜抑制劑類抗菌劑的一個(gè)問題在于，它們在真核細(xì)胞和細(xì)菌中都能產(chǎn)生效果，這是由于細(xì)菌膜和真核生物膜中的磷脂的相似性而造成的。因此，這些化合物很少具有足夠的特異性以允許這些化合物被系統(tǒng)性使用并且避免對于局部施用的高劑量使用。一種臨床上可用的細(xì)胞膜抑制劑是多粘菌素。多粘菌素通過結(jié)合膜磷脂而干擾膜的功能。多粘菌素主要有效抵抗革蘭氏陰性菌并且通常被用于對毒性更低的抗生素抵抗的嚴(yán)重假單胞菌感染或假單胞菌感染中。與該化合物的系統(tǒng)性施用相關(guān)的嚴(yán)重副作用包括對腎臟和其它器官的損害。其它細(xì)胞膜抑制劑包括主要用于治療系統(tǒng)性真菌感染和念珠菌酵母感染的抗真菌劑兩性霉素B和制霉菌素。咪唑類是另一類細(xì)胞膜抑制劑抗生素。咪唑類被用作抗菌劑以及抗真菌劑，例如，用于治療酵母菌感染、皮膚寄生感染和系統(tǒng)性真菌感染。咪唑類包括但不限于克霉唑、咪康唑、酮康唑、伊曲康唑和氟康唑。許多抗菌劑是蛋白合成抑制劑。這些化合物阻止細(xì)菌合成結(jié)構(gòu)蛋白和酶并因而造成對細(xì)菌細(xì)胞生長或功能或者細(xì)胞死亡的抑制。通常，這些化合物干擾轉(zhuǎn)錄或翻譯過程。阻斷轉(zhuǎn)錄的抗菌劑包括但不限于利福平和乙胺丁醇。抑制RNA聚合酶的利福平具有廣譜活性并可有效抵抗革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌以及結(jié)核分枝桿菌。乙胺丁醇可有效抵抗結(jié)核分枝桿菌。阻斷翻譯的抗菌劑干擾細(xì)菌核糖體以阻止mRNA被翻譯為蛋白。這類化合物通常包括但不限于四環(huán)素、氯霉素、大環(huán)內(nèi)酯類(例如，紅霉素)和氨基糖苷類(例如，鏈霉素)。氨基糖苷類是一類鏈霉菌屬細(xì)菌產(chǎn)生的抗生素，例如，鏈霉素、卡那霉素、妥布霉素、阿米卡星和慶大霉素。氨基糖苷類已被用于抵抗各種各樣的由革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌造成的細(xì)菌感染。鏈霉素被廣泛用作治療結(jié)核的主要藥物。慶大霉素、尤其是與妥布霉素組合使用時(shí)用于抵抗許多革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌菌株，包括假單胞菌感染。卡那霉素用于抵抗包括耐青霉素的葡萄球菌的許多革蘭氏陽性菌。限制其臨床使用的氨基糖苷類的一個(gè)副作用是在對于實(shí)現(xiàn)效力所必要的劑量下，其過長使用已顯示出對腎功能的損害并對聽覺神經(jīng)造成損傷從而導(dǎo)致失聰。另一種類型的翻譯抑制劑抗菌劑是四環(huán)素類。四環(huán)素類是可有效抵抗多種革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌的一類廣譜抗生素。四環(huán)素類的實(shí)例包括四環(huán)素、米諾環(huán)素、強(qiáng)力霉素和金霉素。它們對于治療許多類型的細(xì)菌很重要，但對治療萊姆病尤為重要。由于四環(huán)素類的低毒性和極小的直接副作用，它們已經(jīng)被醫(yī)學(xué)界過度使用和濫用從而導(dǎo)致許多問題。例如，其過度使用易導(dǎo)致大范圍的耐藥性的發(fā)展。如大環(huán)內(nèi)脂類等抗菌劑與50S核糖體亞基可逆地結(jié)合并抑制蛋白通過肽基轉(zhuǎn)移酶的延伸和/或阻止不帶電荷的tRNA從細(xì)菌核糖體釋放。這些化合物包括紅霉素、羅紅霉素、克拉霉素、竹桃霉素和阿奇霉素。紅霉素對于抵抗大多數(shù)革蘭氏陽性菌(淋球菌、軍團(tuán)菌和嗜血桿菌)具有活性，但不能抵抗腸桿菌。阻斷蛋白合成期間的肽鍵形成的林可霉素和克林霉素被用來抵抗革蘭氏陽性菌。另一種類型的翻譯抑制劑是氯霉素。氯霉素與抑制細(xì)菌酶肽基轉(zhuǎn)移酶的70S核糖體結(jié)合從而阻止蛋白合成期間的多肽鏈的生長。與氯霉素相關(guān)的一個(gè)嚴(yán)重副作用是再生障礙性貧血。再生障礙性貧血發(fā)展于可有效治療少部分患者(1/50，000)的氯霉素劑量下。由于因貧血造成的死亡，曾經(jīng)是廣泛采用的處方抗生素的氯霉素現(xiàn)在較少使用。但由于其有效性，在危及生命的情況下(例如，傷寒癥)仍會采用它。某些抗菌劑干擾核酸合成或功能，例如，與DNA或RNA結(jié)合以致其信息不能被讀取。這些抗菌劑包括但不限于喹諾酮類和復(fù)方新諾明(co-trimoxazole)(兩者均為合成化學(xué)品)以及天然或半合成化學(xué)品利福霉素。喹諾酮類通過抑制DNA旋轉(zhuǎn)酶(細(xì)菌產(chǎn)生其環(huán)狀DNA所需的酶)而阻斷細(xì)菌DNA復(fù)制。喹諾酮類是廣譜的，其實(shí)例包括諾氟沙星、環(huán)丙沙星、依諾沙星、萘啶酸和替馬沙星。萘啶酸是與DNA旋轉(zhuǎn)酶(拓?fù)洚悩?gòu)酶)結(jié)合從而抑制DNA旋轉(zhuǎn)酶活性的殺菌劑，DNA旋轉(zhuǎn)酶對于DNA復(fù)制至關(guān)重要并且使得超螺旋可以弛豫并重新形成。萘啶酸的主要用途是治療下尿路感染(UTI)，因?yàn)樗捎行У挚棺鳛閁TI的常見病因的數(shù)種類型的革蘭氏陰性菌(例如，大腸桿菌、產(chǎn)氣腸桿菌、肺炎克雷伯菌和變形桿菌物種)。復(fù)方新諾明是磺胺甲噁唑和甲氧芐啶的組合，它阻斷形成DNA核苷酸所需的葉酸的細(xì)菌合成。利福霉素是具有抵抗革蘭氏陽性菌(包括結(jié)核分枝桿菌和由腦膜炎奈瑟菌引起的腦膜炎)和某些革蘭氏陰性菌的活性的利福霉素的衍生物。利福平與聚合酶的β亞基結(jié)合并阻斷激活聚合酶所必需的第一核苷酸的加成，從而阻斷mRNA合成。另一類抗菌劑是充當(dāng)細(xì)菌酶的競爭性抑制劑的化合物。所述競爭性抑制劑大多數(shù)均在結(jié)構(gòu)上與細(xì)菌生長因子相似并且競爭進(jìn)行結(jié)合但不在細(xì)胞中執(zhí)行代謝功能。這些化合物包括磺酰胺和具有更高和更廣的抗菌活性的磺胺的化學(xué)修飾形式?；酋０?例如，磺胺異噁唑和甲氧芐啶)可用于治療肺炎鏈球菌、β“溶血性鏈球菌和大腸桿菌，并且已被用于治療由大腸桿菌引起的單純性尿路感染(UTI)和治療腦膜炎球菌性腦膜炎?？共《緞┦欠乐褂刹《疽鸬募?xì)胞感染或病毒在細(xì)胞內(nèi)的復(fù)制的化合物。現(xiàn)有的抗病毒藥比抗菌藥少得多，這是由于病毒復(fù)制過程與宿主細(xì)胞內(nèi)的DNA復(fù)制的關(guān)系極為密切，以至于非特異性抗病毒劑往往對于宿主有毒性。病毒感染過程中的數(shù)個(gè)階段可以被抗病毒劑阻斷或抑制。這些階段包括病毒對宿主細(xì)胞的附著(免疫球蛋白或結(jié)合肽)、病毒的脫殼(例如，金剛烷胺)、病毒mRNA的合成或翻譯(例如，干擾素)、病毒RNA或DNA的復(fù)制(例如，核苷類似物)、新病毒蛋白的成熟(例如，蛋白酶抑制劑)和病毒的出芽和釋放。另一類抗病毒劑是核苷類似物。核苷類似物是與核苷相似的合成化合物，但其具有不完整的或異常的脫氧核糖或核糖基。一旦核苷類似物進(jìn)入細(xì)胞，它們被磷酸化，從而產(chǎn)生與正常核苷酸競爭以并入病毒DNA或RNA的三磷酸酯形式。一旦核苷類似物的三磷酸酯形式并入正在生長的核酸鏈，其導(dǎo)致與病毒聚合物酶的不可逆結(jié)合并因此造成鏈終止。核苷類似物包括但不限于阿昔洛韋(用于治療單純皰疹病毒和水痘帶狀皰疹病毒)、更昔洛韋(可用于治療巨細(xì)胞病毒)、碘苷、利巴韋林(可用于治療呼吸道合胞病毒)、雙脫氧肌苷、雙脫氧胞苷和齊多夫定(疊氮胸苷)。另一類抗病毒劑包括如干擾素等細(xì)胞因子。干擾素是由受病毒感染細(xì)胞以及免疫細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子。干擾素通過與受感染細(xì)胞相鄰的細(xì)胞上的特異性受體的結(jié)合而發(fā)揮功能，從而導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)的變化，這種變化保護(hù)細(xì)胞不受病毒感染。α-干擾素和β-干擾素還誘導(dǎo)受感染細(xì)胞表面上的I類和II類MHC分子的表達(dá)，從而導(dǎo)致抗原呈遞的增加以用于宿主免疫細(xì)胞識別。α-干擾素和干擾素可作為重組形式獲得并且已被用于治療慢性乙肝和丙肝感染。在對于抗病毒治療有效的劑量下，干擾素具有如發(fā)燒、不適和體重減輕等嚴(yán)重副作用。免疫球蛋白治療用于預(yù)防病毒感染。用于病毒感染的免疫球蛋白治療與用于細(xì)菌感染的不同，這是因?yàn)槊庖咔虻鞍字委熗ㄟ^與胞外病毒粒子結(jié)合并避免其附著并進(jìn)入易受病毒感染的細(xì)胞而發(fā)揮功能，而并非抗原特異性的。該治療可用于在宿主中存在抗體的時(shí)段內(nèi)避免病毒感染。通常，存在兩類免疫球蛋白治療，正常免疫球蛋白治療和超免疫球蛋白治療。正常免疫球蛋白治療利用從正常捐血者的血清制備并匯集的抗體產(chǎn)物。該匯集抗體產(chǎn)物含有低滴度的針對大范圍人類病毒(例如，甲肝、細(xì)小病毒、腸道病毒(尤其是新生兒中))的抗體。超免疫球蛋白治療利用從具有高滴度的針對特定病毒的抗體的個(gè)體的血清制備的抗體。這些抗體其后被用于抵抗特定的病毒。超免疫球蛋白的實(shí)例包括帶狀皰疹免疫球蛋白(可用于預(yù)防免疫受傷的兒童和新生兒中的水痘)、人狂犬病免疫球蛋白(可用于對被狂犬病動物咬傷的受試對象的暴露后預(yù)防)、乙肝免疫球蛋白(可用于預(yù)防乙肝病毒，尤其是用于接觸過該病毒的受試對象)和RSV免疫球蛋白(可用于治療呼吸道合胞病毒感染)?？拐婢鷦┛捎糜谥委熀皖A(yù)防感染性真菌。有時(shí)通過抗真菌劑的作用機(jī)制而對其進(jìn)行分類。某些抗真菌劑通過抑制葡萄糖合成酶而起著細(xì)胞壁抑制劑的作用。這些抗真菌劑包括但不限于basiimgin/ECB。其它抗真菌劑通過使膜整體去穩(wěn)定化而起作用。這些抗真菌劑包括但不限于咪唑類(如克霉唑、舍他康唑、氟康唑、伊曲康唑、咪康唑、酮康唑和伏立康唑)以及Hi463、兩性霉素B、BAY38-9502、MK991、普那米星、UK292、布替萘芬和特比萘芬。其它抗真菌劑通過破壞甲殼質(zhì)(例如，甲殼質(zhì)酶)或免疫抑制(501乳膏)來起作用。殺寄生物劑是直接殺死寄生物的試劑。這些化合物是本領(lǐng)域已知的并且通常可商購。可用于人類施用的殺寄生物劑的實(shí)例包括但不限于阿苯噠唑、兩性霉素B、芐硝唑、硫氯酚、鹽酸氯喹、磷酸氯喹、克林霉素、去氫依米丁、乙胺嗪、二氯尼特糠酸酯、依氟鳥氨酸、呋喃唑酮、糖皮質(zhì)激素、鹵泛曲林、雙碘喹啉(iodoquinol)、伊維菌素、甲苯咪唑、甲氟喹、銻酸葡甲胺、硫胂密胺、美曲膦酯、甲硝唑、氯硝柳胺、硝呋莫司、羥氨喹、巴龍霉素、羥乙磺酸戊氧苯脒、哌嗪、吡喹酮、磷酸伯氨喹、氯胍、雙羥萘酸噻嘧啶、乙胺嘧啶(pyrimethamine)-磺胺、乙胺嘧啶-磺胺多辛、鹽酸阿的平、硫酸奎寧、葡萄糖酸奎尼丁、螺旋霉素、銻化葡萄糖酸鈉(葡萄糖酸銻鈉)、蘇拉明、四環(huán)素、強(qiáng)力霉素、噻菌靈、替硝唑、甲氧芐啶_磺胺甲基異噁唑和錐蟲胂胺。所述聚合物還可用于抑制受試對象中的Th2樣免疫應(yīng)答。Th2型免疫應(yīng)答至少部分地由Th2細(xì)胞因子IL-4和IL-5以及轉(zhuǎn)換為IgE的抗體同種型表征。因此，抑制Th2樣應(yīng)答是指減少Th2細(xì)胞因子的產(chǎn)生和減少其它Th2影響。所述聚合物還能用于誘導(dǎo)Thl樣免疫應(yīng)答。Thl和Th2免疫應(yīng)答是互相反調(diào)節(jié)的，從而使免疫應(yīng)答傾向于Thl型免疫應(yīng)答可以避免或改善Th2型免疫應(yīng)答。所述聚合物能用于治療和預(yù)防自身免疫疾病。自身免疫疾病是這樣的一類疾病其中患者的自身抗體與宿主組織反應(yīng)，或者其中免疫效應(yīng)T細(xì)胞對于內(nèi)源性自身肽具有自身反應(yīng)性并導(dǎo)致組織的破壞。因此，針對受試對象自己的抗原(稱為自身抗原)而引發(fā)免疫應(yīng)答。自身免疫疾病包括但不限于類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、克羅恩氏病、多發(fā)性硬化、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(SLE)、自身免疫性腦脊髓炎、重癥肌無力(MG)、橋本甲狀腺炎、肺出血腎炎綜合征、天皰瘡(例如、尋常型天皰瘡)、甲狀腺機(jī)能亢進(jìn)、自身免疫性溶血性貧血、自身免疫性血小板減少性紫癜、具有抗膠原抗體的硬皮病、混合性結(jié)締組織病、多發(fā)性肌炎、惡性貧血、特發(fā)性Addison病、自身免疫性不孕、腎小球腎炎(例如、新月體腎炎、增生性腎小球腎炎)、大皰性類天皰瘡、修格蘭氏綜合征(Sj0gren’ssyndrome)、胰島素抵抗和自身免疫性糖尿病。自身抗原是指正常宿主組織的抗原。正常宿主組織不包括癌細(xì)胞。因此，在自身免疫疾病的背景下，針對自身抗原而引發(fā)的免疫應(yīng)答是不合需要的免疫應(yīng)答并促進(jìn)正常組織的破壞和損傷，而針對癌抗原而引發(fā)的免疫應(yīng)答是期望的免疫應(yīng)答并促進(jìn)腫瘤或癌的破壞。因此，在某些方面，本發(fā)明致力于治療自身免疫病癥，不推薦將所述聚合物與自身抗原、特別是那些作為自身免疫病癥的靶標(biāo)的自身抗原一同施用。在其它情況下，可以將所述聚合物與低劑量的自身抗原一同輸送。許多動物研究已經(jīng)表明，低劑量抗原的粘膜施用可以造成免疫低反應(yīng)性(hyporesponsiveness)或“耐受性”?；钚詸C(jī)制可能是細(xì)胞因子介導(dǎo)的由Thl向Th2和Th3占主導(dǎo)(即，TGF-β支配的)的應(yīng)答的免疫偏向(immimedeviation)。采用低劑量抗原輸送的活性抑制還能抑制在自身免疫疾病(例如，類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎和SLE)的治療中受到相當(dāng)多關(guān)注的無關(guān)免疫應(yīng)答(旁側(cè)抑制)。旁側(cè)抑制(bystandersuppression)涉及Thl反調(diào)節(jié)的抑制細(xì)胞因子在局部環(huán)境中的分泌，其中促炎性Thl細(xì)胞因子以抗原特異性或抗原非特異性方式在該局部環(huán)境中釋放。本文所用“耐受性”是用來指代這種現(xiàn)象。事實(shí)上，口服耐受性已經(jīng)可以有效治療多種動物自身免疫疾病，包括實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(EAE)、實(shí)驗(yàn)性自身免疫性重癥肌無力、膠原誘導(dǎo)關(guān)節(jié)炎(CIA)和胰島素依賴性糖尿病。在這些模型中，對自身免疫疾病的預(yù)防和抑制與從Thl應(yīng)答向Th2/Th3應(yīng)答轉(zhuǎn)移的抗原特異性體液和細(xì)胞應(yīng)答。本發(fā)明的組合物和方法可以單獨(dú)使用或與可用于治療癌癥的其它試劑盒方法聯(lián)合使用。在一方面，本發(fā)明提供了治療患有癌癥的受試對象的方法。根據(jù)本發(fā)明的該方面的方法包括對患有癌癥的受試對象施用有效量的本發(fā)明的組合物以治療該受試對象的步驟。在一方面，本發(fā)明提供了治療患有癌癥的受試對象的方法。根據(jù)本發(fā)明的該方面的方法包括對患有癌癥的受試對象施用有效量的本發(fā)明的組合物和抗癌治療以治療該受試對象的步驟。在一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的免疫刺激聚合物在制備用于治療受試對象的癌癥的藥物中的用途。在一方面，本發(fā)明提供了可用于治療癌癥的組合物。根據(jù)這一方面的組合物包含本發(fā)明的免疫刺激聚合物和癌癥藥物?；加邪┌Y的受試對象是具有可檢測的癌性細(xì)胞的受試對象。癌癥可以是惡性癌或非惡性癌。本文所用的“癌癥”是指干擾身體器官和系統(tǒng)的正常功能作用的不受控細(xì)胞生長。從其原始位置遷移并種植到重要器官的癌癥可能通過受影響的器官的功能惡化而最終導(dǎo)致受試對象的死亡。如白血病等造血癌癥能夠擊敗受試對象中的正常造血區(qū)室，由此導(dǎo)致造血損傷(以貧血、血小板減少和中性粒細(xì)胞減少的形式)而最終造成死亡。轉(zhuǎn)移瘤(metastasis)是與原發(fā)腫瘤位置不同的因癌細(xì)胞從原發(fā)腫瘤向身體其它部分傳播而產(chǎn)生的癌細(xì)胞區(qū)域。在診斷原發(fā)腫瘤塊時(shí)，可以監(jiān)測受試對象中轉(zhuǎn)移瘤的存在。除了監(jiān)測特定癥狀以外，最常通過單獨(dú)或組合使用磁共振成像(MRI)掃描、計(jì)算機(jī)斷層掃描(CT)、血和血小板計(jì)數(shù)、肝功能檢查、胸X光和骨掃描來檢測轉(zhuǎn)移瘤。癌癥包括但不限于基底細(xì)胞癌、膽管癌、膀胱癌、骨癌、大腦和中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)癌、乳腺癌、宮頸癌、絨毛膜癌、結(jié)腸癌和直腸癌、結(jié)締組織癌、消化系統(tǒng)的癌癥、子宮內(nèi)膜癌、食道癌、眼癌、頭頸部癌、上皮內(nèi)腫瘤、腎癌、喉癌、白血病、肝癌、肺癌(例如、小細(xì)胞肺癌和非小細(xì)胞肺癌)、淋巴瘤(包括霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)、黑色素瘤、骨髓瘤、神經(jīng)母細(xì)胞瘤、口腔癌(例如、唇癌、舌癌、口癌和咽癌)、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤、橫紋肌肉瘤、直腸癌、呼吸系統(tǒng)的癌癥、肉瘤、皮膚癌、胃癌、睪丸癌、甲狀腺癌、子宮癌、泌尿系統(tǒng)癌癥以及其他癌、腺癌和肉瘤。本發(fā)明的免疫刺激組合物還可與抗癌治療聯(lián)合施用?？拱┲委煱ò┌Y藥物、放射和外科手術(shù)。如本文所用，“癌癥藥物”是指為治療癌癥的目的而對受試對象施用的試劑。如本文所用，“治療癌癥”是指預(yù)防癌癥的產(chǎn)生、減少癌癥的癥狀和/或抑制已建立的癌癥的生長。在其它方面，為了降低產(chǎn)生癌癥的風(fēng)險(xiǎn)的目的而對處在產(chǎn)生癌癥的風(fēng)險(xiǎn)中的受試對象施用癌癥藥物。本文描述了各種類型的用于癌癥治療的藥物。出于本說明書的目的，將癌癥藥物分類為化學(xué)治療劑、免疫治療劑、癌疫苗、激素治療和生物應(yīng)答調(diào)節(jié)劑?；瘜W(xué)治療劑可以選自但不限于甲氨蝶呤、長春新堿、阿霉素、順鉬、不含糖的氯乙基亞硝脲、5-氟尿嘧啶、絲裂霉素C、博萊霉素、阿霉素、氮烯咪胺、泰素(Taxol)、fragyline,MeglamineGLA、戊柔比星、卡莫司汀和聚苯丙生、MMI270、BAY12-9566、RAS法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、法尼基轉(zhuǎn)移酶抑制劑、MMP,MTA/LY231514、LY264618/洛美曲索、Glamolec,CI-994、TNP-470、和美新/托泊替康、PKC412、伐司樸達(dá)/PSC833、諾消靈/米托蒽醌、Metaret/蘇拉明、巴馬司他、E7070、BCH-4556、CS_682、9_AC、AG3340、AG3433、Incel/VX-710、VX-853、ZD0101、ISI641、0DN698,TA2516/Marmistat,ΒΒ2516/Marmistat,CDP845、D2163、PD183805、DX8951f、LemonalDP2202、FK317、溶鏈菌制劑(Picibanil)/0K-432、AD32/戊柔比星、美他特龍/鍶衍生物、泰道/替莫唑胺、Evacet/阿霉素脂質(zhì)體、Yewtaxan/紫杉醇、泰素/紫杉醇、希羅達(dá)/卡培他濱、氟鐵龍/去氧氟尿苷、Cyclopax/口服紫杉醇、口服類紫杉醇(taxoid)、SPU-077/順鉬、HMR1275/夫拉平度(Flavopiridol)、CP-358(774)/EGFR、CP-609(754)/RAS癌基因抑制劑、BMS-182751/口服鉬、UFT(替加氟/尿嘧啶)、Ergamisol/左旋咪唑、乙炔尿嘧啶/776C85/5FU增強(qiáng)劑、開普拓/左旋咪唑、Camptosar/Tumodex/(Raltitrexed)、Leustatin/胃才立屈賓、Paxex/紫杉醇、Doxil/阿霉素脂質(zhì)體、楷萊/阿霉素脂質(zhì)體、福達(dá)華/氟達(dá)拉濱、泛艾霉素/表柔比星、脂質(zhì)體阿糖胞苷(D印oCyt)、ZD1839、LU79553/二萘二甲酰亞胺、LU103793/海兔毒素、Caetyx/阿霉素脂質(zhì)體、健擇/吉西他濱、ZD0473/Anormed、YM116、碘粒子、CDK4和CDK2抑制劑、PARP抑制劑、D4809/Dexifosamide、Ifes/美司那(Mesnex)/異環(huán)磷酰胺、衛(wèi)萌(Vumon)/替尼泊苷、卡鉬、Plantinol/順鉬、足葉乙甙(V印eside)/依托泊苷、ZD9331、泰索帝(Taxotere)/多烯紫杉醇、鳥嘌呤阿拉伯糖苷前藥、紫杉烷類似物、亞硝脲、如美法侖(melphalan)和環(huán)磷酰胺等烷基化劑、氨魯米特、天冬酰胺酶、白消安、卡鉬、苯丁酸氮芥、鹽酸阿糖胞苷、更生霉素、鹽酸柔紅霉素、雌二醇氮芥磷酸鈉、依托泊苷(VP16-213)、氟尿苷、氟尿嘧啶(5-FU)、氟他胺、羥脲(羥基脲)、異環(huán)磷酰胺、干擾素α_2a、干擾素α_2b、醋酸亮丙瑞林(LHRH釋放因子類似物)、洛莫司汀(CCNU)、鹽酸二氯甲基二乙胺(氮芥)、巰基嘌呤、美司鈉、米托坦(o.P’_DDD)、鹽酸米托蒽醌、奧曲肽、普卡霉素、鹽酸甲基芐胼、鏈脲霉素、檸檬酸三苯氧胺、硫鳥嘌呤、塞替派、硫酸長春花堿、安吖啶(m-AMSA)、阿扎胞苷、促紅細(xì)胞生成素、六甲蜜胺(HMM)、白細(xì)胞介素2、丙脒腙(甲基-GAG、甲基乙二醛二脒腙、MGBG)、噴司他丁(2’脫氧助間型霉素)、司莫司汀(甲基-CCNU)、替尼泊苷(VM-26)和硫酸長春地辛。免疫治療劑可以選自但不限于3622W94、4B5、ANAAb、抗FLK-2、抗VEGF、ATRAGEN、AVASTIN(貝代單抗；Genentech)、BABS、BEC2、BEXXAR(托西莫單抗；GlaxoSmithKline)、C225、CAMPATH(阿來組單抗；GenzymeCorp.)、CEACIDE、CMA676、EMD-72000、ERBITUX(西妥昔單抗；ImCloneSystems,Inc.)、Gliomab-H、GNI-250、HERCEPTIN(曲妥珠單抗；Genentech)、IDEC-Y2B8、ImmuRAIT-CEA、iorc5、ioregf.r3、iort6、LDP-03,LymphoCide,MDX-IUMDX-22,MDX—210、MDX-220,MDX-260,MDX-447,MELIMMUNE-l、MELIMMUNE-2、Monopharm-C、NovoMAb_G2、Oncolym、0V103、Ovarex、Panorex、Pretarget>Quadramet>Ributaxin>RITUXAN(禾U胃；Genentech)、SMARTlDlOAb、SMARTABL364Ab、SMARTM195、TNT和ZENAPAX(達(dá)利珠單抗；Roche)。癌疫苗可選自但不限于EGF、抗獨(dú)特型癌疫苗、Gp75抗原、GMK黑色素瘤疫苗、MGV神經(jīng)節(jié)苷脂共軛疫苗、Her2/neu、Ovarex,M-Vax,O-Vax,L-Vax,STn-KHL癌疫苗(theratope)、BLP25(MUC-I)、脂質(zhì)體獨(dú)特型疫苗、黑素瘤疫苗、肽抗原疫苗、毒素/抗原疫苗、基于MVA的疫苗、PACIS、BCG疫苗、TA-HPV、TA-CIN、DISC-病毒和ImmuCyst/TheraCys。本發(fā)明的組合物和方法可以單獨(dú)使用或與可用于過敏治療的其它試劑和方法聯(lián)合使用。在一方面，本發(fā)明提供了治療患有過敏病況的受試對象的方法。根據(jù)本發(fā)明此方面的方法包括對患有過敏病況的受試對象施用有效量的本發(fā)明的組合物以治療該受試對象的步驟。在一方面，本發(fā)明提供了治療患有過敏病況的受試對象的方法。根據(jù)本發(fā)明此方面的方法包括對患有過敏病況的受試對象施用有效量的本發(fā)明的組合物和抗過敏治療以治療該受試對象的步驟。在一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的免疫刺激聚合物在制備用于治療受試對象的過敏病況的藥物中的用途。在一方面，本發(fā)明提供了可用于治療過敏病況的組合物。根據(jù)此方面的組合物包含本發(fā)明的免疫刺激聚合物和過敏藥物?！盎加羞^敏病況的受試對象”應(yīng)指正在經(jīng)歷或此前已經(jīng)歷了應(yīng)答于過敏原的過敏反應(yīng)的受試對象。“過敏病況”或“過敏”指對于物質(zhì)(過敏原)的獲得性超敏反應(yīng)。過敏病況包括但不限于濕疹、過敏性鼻炎或鼻感冒、花粉癥、過敏性結(jié)膜炎、支氣管哮喘、蕁麻疹和食物過敏、包括特異性皮炎的其它特異性病況、過敏反應(yīng)(anaphylaxis)、藥物過敏和血管性水腫。過敏通常是與來自特定類別的免疫球蛋白(IgE)的抵抗過敏原的抗體的產(chǎn)生相關(guān)的表位病況。對普通氣源性過敏原的IgE介導(dǎo)應(yīng)答的產(chǎn)生也是一個(gè)表明易于產(chǎn)生哮喘的因素。如果過敏原與結(jié)合到嗜堿性粒細(xì)胞(在血液中循環(huán))或肥大細(xì)胞(分散遍布固體組織中)表面的IgEFc受體(FeεR)的特異性IgE相遇，則所述細(xì)胞被激活，導(dǎo)致產(chǎn)生并釋放如組胺、5-羥色胺和脂質(zhì)介導(dǎo)劑等介導(dǎo)劑。當(dāng)IgE型組織敏化免疫球蛋白與外來過敏原反應(yīng)時(shí)，過敏反應(yīng)發(fā)生。IgE抗體與肥大細(xì)胞和/或嗜堿性粒細(xì)胞結(jié)合，然后這些專門化細(xì)胞在受將抗體分子的末端橋聯(lián)的過敏原刺激時(shí)釋放該過敏反應(yīng)的化學(xué)介導(dǎo)劑(血管活性胺)。組胺、血小板活化因子、花生四烯酸代謝物和5-羥色胺是公知的人類過敏反應(yīng)的介導(dǎo)劑。組胺和其它血管活性胺一般儲存于肥大細(xì)胞和嗜堿性白細(xì)胞中。肥大細(xì)胞分散遍布動物組織中，而嗜堿性粒細(xì)胞在血管系統(tǒng)內(nèi)循環(huán)。這些細(xì)胞在細(xì)胞內(nèi)制造并儲存組胺，除非發(fā)生涉及IgE結(jié)合的專門化事件序列來引發(fā)其釋放。過敏反應(yīng)的癥狀各異，取決于IgE與抗原反應(yīng)的體內(nèi)位置。如果反應(yīng)沿呼吸道上皮發(fā)生，則癥狀通常為打噴嚏、咳嗽和哮喘反應(yīng)。如果反應(yīng)在消化道內(nèi)發(fā)生，如在食物過敏的情形中，則通常為腹痛和腹瀉。系統(tǒng)性過敏反應(yīng)(例如，在蜂蜇或?qū)^敏受試對象施用青霉素后)可能很嚴(yán)重且常常危及生命。過敏與Th2型免疫應(yīng)答(至少部分地由Th2細(xì)胞因子IL-4和IL_5表征)以及抗體同位型向IgE的轉(zhuǎn)換有關(guān)。本發(fā)明的免疫刺激聚合物自身可用于治療患有過敏病況的受試對象，因?yàn)樵撁庖叽碳ぞ酆衔锟梢允姑庖邞?yīng)答傾向于Thl型免疫應(yīng)答。替代性地或除此以外，本發(fā)明的免疫刺激聚合物能與過敏原組合用于治療患有過敏病況的受試對象。本發(fā)明的免疫刺激組合物還可與抗過敏治療聯(lián)合施用。治療或預(yù)防過敏的傳統(tǒng)方法涉及了過敏藥物或脫敏治療。一些正在發(fā)展的治療或預(yù)防過敏的治療包括使用中和性抗IgE抗體。阻斷過敏反應(yīng)的化學(xué)介導(dǎo)劑的效果的抗組胺和其它藥物幫助調(diào)節(jié)過敏癥狀的嚴(yán)重性但不能預(yù)防該過敏反應(yīng)且對后續(xù)過敏應(yīng)答沒有效果。脫敏治療通常通過皮下注射通過給予小劑量過敏原以便誘導(dǎo)抵抗該過敏原的IgG型應(yīng)答。據(jù)信IgG抗體的存在幫助中和了IgE抗體誘導(dǎo)所導(dǎo)致的介導(dǎo)劑生成。最初，對受試對象用非常低劑量的過敏原進(jìn)行治療以避免引起嚴(yán)重反應(yīng)，然后緩慢增加劑量。這類治療因?qū)λ鍪茉噷ο髮?shí)際上施用了造成過敏應(yīng)答的化合物而有危險(xiǎn)，且可能出現(xiàn)嚴(yán)重過敏反應(yīng)。過敏藥物包括但不限于抗組胺類、糖皮質(zhì)激素類和前列腺素誘導(dǎo)劑。抗組胺類是中和由肥大細(xì)胞或嗜堿性粒細(xì)胞釋放的組胺的化合物。這些化合物在本領(lǐng)域內(nèi)是公知的且常用于過敏治療?？菇M胺類包括但不限于阿伐斯汀、阿司咪唑、阿扎他定、氮卓斯汀、betatastine、溴苯那敏、布克力嗪、西替利嗪、西替利嗪類似物、氯苯那敏、氯馬斯汀、CS560、賽庚啶、地氯雷他定、右氯苯那敏、依巴斯汀、依匹斯汀、非索非那定、HSR609、羥嗪、左卡巴斯汀、氯雷他定、東莨菪堿、咪唑斯汀、去甲阿斯咪唑、苯茚胺、異丙嗪、吡拉明、特非那定和曲尼司特。糖皮質(zhì)激素類包括但不限于甲基強(qiáng)的松龍、強(qiáng)的松龍、潑尼松、倍氯米松、布地奈德、地塞米松、氟尼縮松、丙酸氟替卡松和去炎松。盡管地塞米松是有抗炎作用的糖皮質(zhì)激素，由于其被高度吸收且在有效劑量時(shí)具有長期的抑制性副作用因而它不常用于治療過敏或以吸入形式用于治療哮喘。然而，地塞米松可根據(jù)本發(fā)明用于治療過敏或哮喘，因?yàn)楫?dāng)將它與本發(fā)明的組合物聯(lián)合施用時(shí)可以將其以低劑量施用以降低所述副作用。與糖皮質(zhì)激素使用相關(guān)的一些副作用包括咳嗽、發(fā)聲困難、口瘡(念珠菌病)，以及在高劑量時(shí)的系統(tǒng)性副作用，如腎上腺抑制、葡萄糖耐受不良、骨質(zhì)疏松、無菌性骨壞死、白內(nèi)障形成、生長抑制、高血壓、肌肉無力、皮膚變薄和易于瘀傷(Barnes&Peterson(1993)AmRevRespirDis148:S1-S26；和KamadaAK等(1996)AmJRespirCritCareMed1531739-48)本發(fā)明的組合物和方法可以單獨(dú)使用或與可用于哮喘治療的其它試劑和方法聯(lián)合使用。在一方面，本發(fā)明提供了治療患有哮喘的受試對象的方法。根據(jù)本發(fā)明此方面的方法包括對患有哮喘的受試對象施用有效量的本發(fā)明的組合物以治療該受試對象的步驟。在一方面，本發(fā)明提供了治療患有哮喘的受試對象的方法。根據(jù)本發(fā)明此方面的方法包括對患有哮喘的受試對象施用有效量的本發(fā)明的組合物和抗哮喘治療以治療該受試對象的步驟。在一方面，本發(fā)明提供了本發(fā)明的免疫刺激聚合物在制備用于治療受試對象的哮喘的藥物中的用途。在一方面，本發(fā)明提供了可用于治療哮喘的組合物。根據(jù)該方面的組合物包括本發(fā)明的免疫刺激聚合物和哮喘藥物。本文所用的“哮喘”是指特征為氣道發(fā)炎和狹窄以及氣道對吸入劑反應(yīng)性提高的呼吸系統(tǒng)病癥。哮喘往往(但不是排他地)與特應(yīng)性病況或過敏病況有關(guān)。哮喘的癥狀包括氣流阻塞引起的喘氣、氣促、胸悶和咳嗽的反復(fù)發(fā)作?？赏ㄟ^觀察如氣道上皮的剝蝕、基底膜下膠原沉積、水腫、肥大細(xì)胞激活、炎癥細(xì)胞(包括中性粒細(xì)胞、嗜酸性粒細(xì)胞和淋巴細(xì)胞)浸潤等一系列生理學(xué)變化來檢測與哮喘相關(guān)的氣道炎癥。作為氣道炎癥的結(jié)果，哮喘患者往往會經(jīng)受氣道超反應(yīng)性、氣流限制、呼吸道癥狀和疾病慢性化。氣流限制包括急性支氣管收縮、氣道水腫、粘膜堵塞形成和氣道重塑，這些特點(diǎn)往往導(dǎo)致支氣管阻塞。在某些哮喘情形中，可能出現(xiàn)亞基底膜纖維化，從而導(dǎo)致肺功能持續(xù)性異常。過去幾年的研究已揭示，哮喘可能因炎性細(xì)胞、介導(dǎo)劑以及位于氣道內(nèi)的其它細(xì)胞和組織之間的復(fù)雜相互作用而造成。肥大細(xì)胞、嗜酸性細(xì)胞、上皮細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和活化T細(xì)胞都在與哮喘相關(guān)的炎性過程中起到重要作用(DjukanovicR等(1990)AmRevRespirDisl42:434_457)。據(jù)信這些細(xì)胞能通過分泌預(yù)先形成的和新合成的能直接或間接地作用于局部組織的介導(dǎo)劑而影響氣道功能。此外，還已經(jīng)認(rèn)識到，T淋巴細(xì)胞(Th2)亞群在通過釋放選擇性細(xì)胞因子并造成疾病慢性化來調(diào)節(jié)氣道內(nèi)過敏性炎癥中起到重要作用(RobinsonDS等(1992)NEnglJMed326:298_304)。哮喘是在發(fā)展的不同階段出現(xiàn)的復(fù)雜病癥，可基于癥狀程度將其分為急性、亞急性或慢性。急性炎性應(yīng)答與氣道內(nèi)早期細(xì)胞募集相關(guān)。亞急性炎性應(yīng)答與造成更持久性的炎癥狀況的細(xì)胞募集以及本地細(xì)胞激活相關(guān)。慢性炎性應(yīng)答的特征在于可能在氣道內(nèi)造成永久性異常的持續(xù)性細(xì)胞損害水平和不斷進(jìn)行的修復(fù)進(jìn)程?！盎加邢氖茉噷ο蟆笔腔加刑卣鳛闅獾姥装Y和狹窄以及氣道對吸入物的反應(yīng)性增加的呼吸系統(tǒng)病癥的受試對象。與引發(fā)哮喘有關(guān)的因素包括但不限于過敏原、低溫、運(yùn)動、病毒感染和SO2。如上所述，哮喘可能與Th2型免疫應(yīng)答(至少部分由Th2細(xì)胞因子IL-4和IL_5表征)以及抗體同位型向IgE的轉(zhuǎn)換相關(guān)。Thl和Th2免疫應(yīng)答是互相反調(diào)節(jié)的，從而使免疫應(yīng)答傾向Thl型免疫應(yīng)答能防止或減輕包括過敏的Th2型免疫應(yīng)答。因此，本發(fā)明的修飾寡核糖核苷酸類似物自身可用于治療患有哮喘的受試對象，這是因?yàn)樗鲱愃莆锟梢允姑庖邞?yīng)答傾向Thl型免疫應(yīng)答。替代性地或除此以外，本發(fā)明的修飾寡核糖核苷酸類似物能與過敏原組合使用以治療患有哮喘的受試對象。本發(fā)明的免疫刺激組合物還可與哮喘治療聯(lián)合施用。治療或預(yù)防哮喘的傳統(tǒng)方法涉及使用抗過敏治療(如上所述)和包括吸入劑的許多其它試劑。用于治療哮喘的藥物通常分為兩類，快速緩解藥物和長期控制藥物。哮喘患者每日服用長期控制藥物以達(dá)到和保持對持續(xù)性哮喘的控制。長期控制藥物包括如糖皮質(zhì)激素、色甘酸鈉和奈多羅米等抗炎劑；如長效β2激動劑和甲基黃嘌呤等長效支氣管擴(kuò)張劑；以及白細(xì)胞三烯修飾劑?？焖倬徑馑幬锇ǘ绦Е?激動劑、抗膽堿能藥(anti-cholinergic)和系統(tǒng)性糖皮質(zhì)激素。這些藥物每種都與許多副作用相關(guān)，沒有任何所述藥物能單獨(dú)或組合來預(yù)防或治愈哮喘。哮喘藥物包括但不限于PDE-4抑制劑、支氣管擴(kuò)張劑/β-2激動劑、K+通道開放劑、VLA-4拮抗劑、烯丙異戊酰脲拮抗劑、血栓素Α2(ΤΧΑ2)合成抑制劑、黃嘌呤、花生四烯酸拮抗劑、5脂氧合酶抑制劑、ΤΧΑ2受體拮抗劑、ΤΧΑ2拮抗劑、5-lipox激活蛋白抑制劑和蛋白酶抑制劑。支氣管擴(kuò)張劑/β2激動劑是一類造成支氣管擴(kuò)張或平滑肌松弛的化合物。支氣管擴(kuò)張劑/β2激動劑包括但不限于沙美特羅、沙丁胺醇、沙丁胺醇、特布他林、D2522/福莫特羅、非諾特羅、比托特羅、吡布特羅甲基黃嘌呤和奧西那林。長效β2激動劑和支氣管擴(kuò)張劑是用于除所述抗炎治療以外長期預(yù)防癥狀的化合物。長效β2激動劑包括但不限于沙美特羅和沙丁胺醇。這些化合物經(jīng)常與糖皮質(zhì)激素類組合使用且通常不在沒有進(jìn)行任何炎癥治療時(shí)使用。它們與如心動過速、骨骼肌戰(zhàn)栗、低血鉀和過量時(shí)的QTc間隙的延長等副作用有關(guān)。包括例如茶堿的甲基黃嘌呤用于長期控制和預(yù)防癥狀。這些化合物引起由磷酸二酯酶抑制導(dǎo)致的支氣管擴(kuò)張和可能的腺苷拮抗。與劑量相關(guān)的急性毒性是這類化合物的重要問題。因此，必須監(jiān)測常規(guī)血清濃度以便解釋因代謝清除率的個(gè)體差異而產(chǎn)生的毒性和較窄治療范圍。副作用包括心動過速、快速性心律失常、惡心嘔吐、中樞神經(jīng)系統(tǒng)刺激、頭痛、癲癇發(fā)作、嘔血、高血糖和低血鉀。短效β2激動劑包括但不限于沙丁胺醇、比托特羅、吡布特羅和特布他林。與短效β2激動劑的施用有關(guān)的一些副作用包括心動過速、骨骼肌戰(zhàn)栗、低血鉀、乳酸增多、頭痛和高血糖。色氨酸鈉和奈多羅米作為長效控制藥物主要用于預(yù)防由運(yùn)動引發(fā)的哮喘癥狀或過敏原引發(fā)的過敏癥狀。據(jù)信這類化合物可通過干擾氯離子通道功能來阻斷與過敏原的早期和晚期反應(yīng)。它們還穩(wěn)定肥大細(xì)胞膜并抑制來自嗜酸性粒細(xì)胞和上皮細(xì)胞的介導(dǎo)劑的激活與釋放。通常需要四到六周的施用期以達(dá)到最大效果?？鼓憠A能藥通常用于緩解急性支氣管痙攣。據(jù)信這些化合物可通過對毒蕈堿(muscariniccholinergic)受體的競爭性抑制來發(fā)揮功能。抗膽堿能藥包括但不限于異丙托溴胺。這些化合物僅可緩和經(jīng)膽堿能介導(dǎo)的支氣管痙攣但不會改變?nèi)魏闻c抗原的反應(yīng)。副作用包括口干和呼吸道分泌物、某些個(gè)體中的喘氣增加以及如果噴入眼時(shí)的視覺模糊。本發(fā)明的免疫刺激聚合物還可用于治療氣道重塑。氣道重塑由氣道內(nèi)的平滑肌細(xì)胞增殖和/或粘膜下增厚造成，且最終造成氣道狹窄從而導(dǎo)致氣流受限。本發(fā)明的免疫刺激聚合物可防止進(jìn)一步的重塑甚至可能減少所述重塑過程產(chǎn)生的組織積累。本發(fā)明的免疫刺激聚合物還可用于改善樹突狀細(xì)胞的存活、分化、激活和成熟。所述免疫刺激寡核糖核苷酸具有促進(jìn)樹突狀細(xì)胞的細(xì)胞存活、分化、激活和成熟的獨(dú)特能力。本發(fā)明的免疫刺激聚合物還增加了自然殺傷細(xì)胞的溶解活性和抗體依賴性細(xì)胞毒性(ADCC)。使用與對如癌細(xì)胞等細(xì)胞靶標(biāo)特異的抗體組合的所述免疫刺激聚合物可執(zhí)行ADCC。當(dāng)對受試對象施用與抗體組合的所述免疫刺激聚合物時(shí)，該受試對象的免疫系統(tǒng)被誘導(dǎo)來殺死腫瘤細(xì)胞?？捎糜贏DCC方法的抗體包括與體內(nèi)細(xì)胞相互作用的抗體。許多這類對細(xì)胞靶標(biāo)特異的抗體已在本領(lǐng)域內(nèi)說明且許多可商購。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述抗體是IgG抗體。在某些方面，本發(fā)明提供了增強(qiáng)表位擴(kuò)展的方法。本文所用“表位擴(kuò)展”是指從起初集中的針對自身蛋白或外來蛋白的顯性表位特異性免疫應(yīng)答到該蛋白(分子內(nèi)擴(kuò)展)或其它蛋白(分子間擴(kuò)展)上的亞顯性和/或隱性表位的表位特異性的多元化。表位擴(kuò)展導(dǎo)致多重表位特異性免疫應(yīng)答。免疫應(yīng)答由初始放大期和使免疫系統(tǒng)回到體內(nèi)平衡并產(chǎn)生記憶的后期下調(diào)期組成，其中初始放大期既可能是有害的(如自身免疫疾病)也可能是有益的(如預(yù)防接種)。表位擴(kuò)展可能是兩個(gè)時(shí)期的重要成分。在腫瘤背景下，表位擴(kuò)展的增強(qiáng)使得受試對象的免疫系統(tǒng)可以確定最初沒有被免疫系統(tǒng)在應(yīng)答于原始治療方案時(shí)識別的額外靶標(biāo)表位，同時(shí)降低在腫瘤群中逃逸變異體的可能性并因此影響疾病進(jìn)程。本發(fā)明的寡核糖核苷酸可用于促進(jìn)在諸如癌癥、病毒感染和細(xì)菌感染以及過敏等治療性有益的標(biāo)志物中的表位擴(kuò)展。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述方法包括對受試對象施用包含抗原和佐劑的疫苗并隨后對該受試對象施用至少兩劑的可有效誘導(dǎo)多重表位特異性免疫應(yīng)答的量的本發(fā)明的免疫刺激聚合物的步驟。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述方法包括對受試對象施用包含腫瘤抗原和佐劑的疫苗并隨后對該受試對象施用至少兩劑的可有效誘導(dǎo)多重表位特異性免疫應(yīng)答的量的本發(fā)明的免疫刺激聚合物的步驟。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述方法涉及應(yīng)用造成免疫系統(tǒng)抗原在受試對象中暴露的治療方案，隨后至少兩次施用本發(fā)明的免疫刺激寡核糖核苷酸以誘導(dǎo)多重表位特異性免疫應(yīng)答(即促進(jìn)表位擴(kuò)展)。在不同實(shí)施方式中，所述治療方案是手術(shù)、放療、化療、其它癌癥藥物、疫苗或癌疫苗。除后續(xù)免疫刺激劑治療外，治療方案可與免疫刺激劑聯(lián)合實(shí)施。例如，當(dāng)所述治療方案為疫苗時(shí)，它可與佐劑聯(lián)合施用。疫苗與佐劑的組合可以是混合物或分開施用，即注射(即相同引流區(qū))。施用不必為同時(shí)的。如果使用非同時(shí)的注射，時(shí)機(jī)可能涉及在使用疫苗制劑之前預(yù)先注射佐劑。當(dāng)實(shí)施治療方案后，開始免疫刺激單一治療。最佳的頻率、持續(xù)時(shí)間和施用位點(diǎn)將取決于靶標(biāo)和其它因素，但可為例如在六個(gè)月至兩年的時(shí)期中每月或隔月施用。替代性的是，可基于每日、每周或隔周進(jìn)行施用，或可以在一天、一周或一月中多次施用。在某些情形中，施用的周期可取決于治療的療程，例如其可在一周、一月、一年或多年后結(jié)束。在其它情形中，所述單一治療可以是如同使用靜脈滴注那樣的連續(xù)性的。免疫刺激劑可施用于對于靶標(biāo)常用的引流區(qū)。為用于治療，根據(jù)化合物活性、施用方式、免疫目的(即預(yù)防性或治療性)、病癥的特性和嚴(yán)重性、受試對象的年齡和體重，對于受試對象的治療可能必須采用不同劑量。給定劑量的施用可通過以獨(dú)立劑量單元或幾個(gè)較小劑量單元的形式單次施用。以數(shù)周或數(shù)月的特定間隔分開的多次劑量施用對提升抗原特異性免疫應(yīng)答是常用的。結(jié)合本文提供的教導(dǎo)，通過從各種活性化合物中進(jìn)行選擇和衡量如效力、相對生物利用度、患者體重、副作用的嚴(yán)重性和優(yōu)選施用模式等因素，可以設(shè)計(jì)有效的預(yù)防性或治療性治療方案，所述治療方案不會導(dǎo)致顯著的毒性但對治療具體受試對象完全有效。對任何具體應(yīng)用的有效量可取決于諸如待治療的疾病或病況、所施用的具體治療劑、受試對象的尺寸或者疾病或病況的嚴(yán)重性等因素而有所不同。本領(lǐng)域普通技術(shù)人員能憑經(jīng)驗(yàn)確定特定核酸和/或其它治療劑的有效量而不必進(jìn)行過度實(shí)驗(yàn)。本文所述化合物的典型受試對象劑量為約0.Iyg/日10，OOOmg/日，更典型為約1μg/日8000mg/日，而最典型為約IOmg/日IOOmg/日。就受試對象體重而言，典型劑量是約0.1μg/kg/周20mg/kg/周，更典型的是約lmg/kg/周10mg/kg/周，而最典型的是約lmg/kg/周5mg/kg/周。含核酸和/或其它化合物的藥物組合物可以通過任何合適的藥物施用途徑來施用。可以利用多種施用途徑。所選的具體模式當(dāng)然將取決于所選的一種或多種具體試劑、待治療的具體病況和治療效力所需的劑量。一般而言，本發(fā)明的方法可使用醫(yī)學(xué)可接受的任何施用模式來實(shí)施，所述醫(yī)學(xué)可接受的任何施用模式是指產(chǎn)生有效的免疫應(yīng)答水平而不會造成在臨床上無法接受的副作用的任何模式。本文討論了優(yōu)選的施用模式。為用于治療，可以通過將核酸和/或其它治療劑輸送到所需表面(例如，粘膜表面、系統(tǒng)性表面)的任何模式來對受試對象施用有效量的所述試劑。本發(fā)明的藥用組合物的施用可通過本領(lǐng)域熟練技術(shù)人員已知的任何方法來完成。施用途徑包括但不限于口服、胃腸外、靜脈內(nèi)、肌內(nèi)、腹膜內(nèi)、鼻內(nèi)、舌下、氣管內(nèi)、吸入、皮下、眼、陰道和直腸途徑。對于治療或預(yù)防哮喘或過敏，所述化合物優(yōu)選的是被吸入、吞咽或通過系統(tǒng)性途徑施用。系統(tǒng)性途徑包括口服和胃腸外途徑。在某些實(shí)施方式中、主要在哮喘患者中，吸入型藥物因其直接輸送到肺(炎癥位點(diǎn))而優(yōu)選。有幾類裝置常用于吸入施用。這些裝置類型包括計(jì)量吸入器(MDI)、呼吸引發(fā)型MDI、干粉吸入器(DPI)、與MDI組合的間隔/保持腔和霧化器。本發(fā)明的治療劑可以在載體的幫助下輸送到特定的組織、細(xì)胞類型和/或免疫系統(tǒng)。從最廣義而言，“載體”是能協(xié)助將組合物轉(zhuǎn)移至靶標(biāo)細(xì)胞的任何載具。載體通常將免疫刺激核酸、抗體、抗原和/或病癥特異性藥物運(yùn)送到靶標(biāo)細(xì)胞，而相對于不存在該載體時(shí)所造成的降解程度而言降解減少。一般而言，可用于本發(fā)明的載體分為兩類生物載體和化學(xué)/物理載體。生物載體和化學(xué)/物理載體可用于輸送和/或攝取本發(fā)明的治療劑。大多數(shù)生物載體用于輸送核酸，而這最適合于輸送本身是免疫刺激核酸的治療劑或包含免疫刺激核酸的治療劑。除本文討論的生物載體外，化學(xué)/物理載體也可用于輸送包括免疫刺激核酸、抗體、抗原和病癥特異性藥物的治療劑。如本文所用，“化學(xué)/物理載體”指能輸送核酸和/或其它藥物的除源自細(xì)菌或病毒的分子以外的其它天然分子或合成分子。本發(fā)明優(yōu)選的化學(xué)/物理載體為膠體分散體系。膠體分散體系包括基于脂質(zhì)的體系，所述基于脂質(zhì)的體系包括水包油乳液、膠束、混合膠束和脂質(zhì)體。本發(fā)明優(yōu)選的膠體體系是脂質(zhì)體。脂質(zhì)體是可用作體內(nèi)或體外輸送載體的人工膜容器。據(jù)顯示，尺寸為0.2μm4.0μm的大多層囊泡(LUV)能封裝較大的大分子。RNA、DNA和完整病毒粒子可以被封裝于水性內(nèi)部并以生物活性形式輸送至細(xì)胞(Fraley等(1981)TrendSBiochemSci677)?？梢酝ㄟ^將脂質(zhì)體與如單克隆抗體、糖、糖脂或蛋白等特定配體偶聯(lián)而將脂質(zhì)體靶向特定組織?？捎糜趯⒅|(zhì)體靶向免疫細(xì)胞的配體包括但不限于與免疫細(xì)胞特異性受體和分子相互作用的完整分子或片段，例如，與免疫細(xì)胞的細(xì)胞表面標(biāo)記物相互作用的抗體。這類配體可易于通過本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的結(jié)合測試來鑒定。在其它實(shí)施方式中，可通過將脂質(zhì)體與上文討論的免疫治療抗體中的一種偶聯(lián)而將該脂質(zhì)體靶向癌癥。另外，載體可與靶向核的肽偶聯(lián)，后者將該載體引導(dǎo)至寄主細(xì)胞核。轉(zhuǎn)染用脂質(zhì)制劑可商購自QIAGEN，例如，EFFECTENE(帶特定DNA縮合增強(qiáng)子的非脂質(zhì)體脂)和SUPERFECT(新型樹枝狀聚合物技術(shù))。脂質(zhì)體可商購自GibcoBRL，例如，由如N-[l_(2，3-二油酰氧基)-丙基]-N，N，N-三甲基氯化銨(DOTMA)和二甲基二(十八烷基)溴化銨(DDAB)等陽離子脂質(zhì)形成的LIP0FECTIN和LIP0FECTACE。脂質(zhì)體制備方法是本領(lǐng)域內(nèi)公知的且已在許多出版物中進(jìn)行了描述。在GregoriadisG(1985)TrendsBiotechnol3:235_241中也對脂質(zhì)體進(jìn)行了綜述。具體包括N-[1-(2，3-二油酰氧基)_丙基]-N，N，N-三甲基甲硫酸銨(DOTAP)的某些陽離子脂似乎在與本發(fā)明的修飾的寡核糖核苷酸類似物混合時(shí)尤其有優(yōu)勢。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述載具是適于植入或施用到哺乳動物接受體的生物相容性微?；蛑踩胛?。在PCT國際申請第PCT/US/03307號(公開第1095/^24929號，標(biāo)題為“PolymericGeneDeliverySystem")中描述了可根據(jù)此方法使用的生物可侵蝕性(bioerodible)植入物的實(shí)例。PCT/US/03307描述了一種可用于在適當(dāng)啟動子控制下裝載外源性基因的生物相容性、優(yōu)選生物可降解性聚合物基質(zhì)。所述聚合物基質(zhì)的優(yōu)選形式是如微球(其中核酸和/或其它治療劑分散在整個(gè)固體聚合物基質(zhì)中)或微膠囊(其中核酸和/或其它治療劑儲存在聚合物外殼的核中)等微粒形式。用于裝載治療劑的聚合物基質(zhì)的其它形式包括薄膜、涂層、凝膠、植入物和支架。選擇聚合物基質(zhì)裝置的尺寸和組成以便在其中引入了所述基質(zhì)的組織內(nèi)產(chǎn)生有利的釋放動力學(xué)。此外，所述聚合物基質(zhì)的尺寸還可根據(jù)待用的輸送方法(通常是注射到組織內(nèi)或通過氣溶膠將懸浮液施用到鼻部和/或肺部)來選擇。當(dāng)使用氣溶膠途徑時(shí)，優(yōu)選的是將聚合物基質(zhì)與核酸和/或治療劑包封于表面活性劑載具內(nèi)?？梢赃x擇聚合物基質(zhì)組合物以使其既具有有利的降解速率又由生物粘附性材料形成，從而在將所述基質(zhì)施用到受損的鼻表面和/或肺表面時(shí)進(jìn)一步增加輸送有效性。此外，還可以選擇基質(zhì)組合物以使其不是降解而是通過擴(kuò)散在延長的時(shí)段中釋放。在某些優(yōu)選實(shí)施方式中，將核酸通過植入物來對受試對象施用而將其它治療劑急性施用。適于輸送(例如，口腔輸送或粘膜輸送)的生物相容性微球公開于Chickering等(1996)BiotechBioeng52:96_101和MathiowitzE等(1997)Nature386410-414以及PCT專利申請W097/03702中。非生物可降解性和生物可降解性聚合物基質(zhì)都可用于將核酸和/或治療劑輸送到受試對象。優(yōu)選生物相容性基質(zhì)。這些聚合物可為天然聚合物或合成聚合物。所述聚合物基于釋放所需的時(shí)段(通常為數(shù)小時(shí)至一年以上的級別)來選擇。通常，尤其是對于核酸劑而言，最理想的是數(shù)小時(shí)3個(gè)月至12個(gè)月的時(shí)期中釋放。所述聚合物在必要時(shí)處于能吸收多達(dá)其重量的約90%的水的水凝膠的形式中，且必要時(shí)與多價(jià)離子或其它聚合物交聯(lián)。特別受關(guān)注的生物粘附性聚合物包括H.S.Sawhney,C.P.Pathak和J.A.Hubell在Macromolecules,(1993)26:581_587中所描述的生物可侵蝕性水凝膠，本文并入其教導(dǎo)。這些聚合物包括聚透明質(zhì)酸、酪蛋白、明膠、明膠蛋白(glutin)、聚酸酐、聚丙烯酸、海藻酸鹽、殼聚糖、聚甲基丙烯酸甲酯、聚甲基丙烯酸乙酯、聚甲基丙烯酸丁酯、聚甲基丙烯酸異丁酯、聚甲基丙烯酸己酯、聚甲基丙烯酸異癸酯、聚甲基丙烯酸十二烷酯、聚甲基丙烯酸苯酯、聚丙烯酸甲酯、聚丙烯酸異丙酯、聚丙烯酸異丁酯和聚丙烯酸十八烷酯。如果治療劑是核酸，壓縮劑的使用也是理想的。壓縮劑也可以單獨(dú)使用或者與生物載體或化學(xué)/物理載體組合使用。本文所用“壓縮劑”是指如組胺等中和核酸上的負(fù)電荷并由此允許將核酸壓縮為小顆粒的試劑。核酸的壓縮有助于靶標(biāo)細(xì)胞對該核酸的攝取。所述壓縮劑可以單獨(dú)使用(即以能更有效地被細(xì)胞攝取的形式輸送核酸)，或更優(yōu)選的是與一個(gè)或多個(gè)上述載體組合使用。能用于協(xié)助核酸的攝取的其它示例性組合物包括磷酸鈣和胞內(nèi)運(yùn)輸?shù)钠渌瘜W(xué)介導(dǎo)劑、微注射組合物、電穿孔和同源重組組合物(例如，用于將核酸整合到靶標(biāo)細(xì)胞染色體內(nèi)的預(yù)選位置)。如上所述，可以將本發(fā)明的聚合物與輸送載具共同配制。例如，已描述了下列輸送載具螺旋體、、EmulsomesISCOM、活細(xì)菌載體(例如，沙門氏菌、大腸桿菌、卡介苗、志賀菌、乳酸桿菌)、活病毒載體(例如，痘苗、腺病毒、單純皰疹病毒)、微球、核酸疫苗、聚合物(例如，羧甲基纖維素、殼聚糖)、聚合物環(huán)、蛋白體(proteosome)、氟化鈉、轉(zhuǎn)基因植物。在本發(fā)明的某些實(shí)施方式中，所述輸送載具是脂質(zhì)體、非離子囊泡、脂質(zhì)復(fù)合體、聚合物復(fù)合體、脂質(zhì)聚合物復(fù)合體、油包水(W/0)乳液、水包油(0/W)乳液、水包油包水(W/0/W)多重乳液、微乳液、納米乳液、膠束、樹枝狀聚合物、病毒顆粒、類病毒顆粒、如納米球或納米膠囊等聚合物納米顆粒、如微球或微膠囊等聚合物微粒。本發(fā)明的制劑在藥物可接受溶液中進(jìn)行施用，所述溶液在常規(guī)上可以包含藥物可接受濃度的鹽、緩沖劑、防腐劑、相容性載劑、佐劑和可選的其它治療成分。在某些實(shí)施方式中，所述組合物是無菌的。術(shù)語“藥物可接受載劑”是指適于對人或其它脊椎動物施用的一種或多種相容性固體或液體的填料、稀釋劑或包封物質(zhì)。術(shù)語載劑是指與活性成分混合以協(xié)助應(yīng)用的天然或合成的有機(jī)或無機(jī)成分。藥物組合物的組分還能以不存在會顯著損害所需藥物效率的相互作用的方式與本發(fā)明的化合物彼此共混。對于口服施用，可以通過將所述活性化合物與本領(lǐng)域內(nèi)公知的藥物可接受載劑混合來容易地配制所述化合物(即，核酸、抗原、抗體和其它治療劑)。這些載劑使本發(fā)明的化合物能被配制為片劑、丸劑、糖錠劑、膠囊劑、液劑、凝膠劑、糖漿劑、漿劑和懸浮劑等以便由待治療的受試對象口服吞咽?？诜盟幬镏苿┛勺鳛楣腆w賦形劑獲得，可選的是研磨所得混合物，在需要時(shí)加入適當(dāng)助劑，其后加工顆?；旌衔镆垣@得片劑或糖錠劑核。適當(dāng)賦形劑具體為諸如包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇的糖等填料；諸如玉米淀粉、小麥淀粉、大米淀粉、土豆淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)等纖維素制劑。如果需要，可以加入崩解劑，例如，交聯(lián)聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂或者海藻酸或其鹽(例如，海藻酸鈉)。必要時(shí)還可將所述口服制劑配制在生理鹽水或緩沖液中以用于中和內(nèi)部酸性狀況，或者所述口服制劑可以不帶任何載劑而施用。為糖錠劑的核提供了適當(dāng)包衣。出于此目的可以使用濃縮糖溶液，所述濃縮糖溶液可選地含有阿拉伯膠、滑石粉、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯膠、聚乙二醇和/或二氧化鈦、漆溶液以及適當(dāng)有機(jī)溶劑或溶劑混合物?？梢栽谒銎瑒┗蛱清V劑包衣中添加染料或色素用于鑒定或表征活性化合物劑量的不同組合?？梢钥诜褂玫乃幱弥苿┌髂z制成的壓入配合(push-fit)膠囊以及由明膠和如甘油或山梨醇等增塑劑制成的密封軟膠囊。壓入配合膠囊可含有與如乳糖等填料、如淀粉等粘合劑和/或如滑石粉或硬脂酸鎂等潤滑劑以及可選的穩(wěn)定劑共混的活性成分。在軟膠囊中，所述活性化合物可以溶解或懸浮于如脂肪油、液體石蠟或液體聚乙二醇等適當(dāng)液體中。另外，可以添加穩(wěn)定劑。此外，還可以使用配制用于口服施用的微球。這類微球在本領(lǐng)域內(nèi)已得到詳盡定義。口服施用的所有制劑都應(yīng)為適于這種施用的劑量。對于口腔施用，所述組合物可采用以常規(guī)方式配制的片劑或錠劑形式。對于吸入施用，可以將本發(fā)明所用化合物以氣溶膠噴霧樣形式使用適當(dāng)推進(jìn)劑(例如，二氯二氟甲烷、三氯氟甲烷、二氯四氟乙烷、二氧化碳或其它適當(dāng)氣體)從加壓包或霧化器便利地輸送。在加壓氣溶膠情況下，通過提供輸送計(jì)定量的閥門可以確定劑量單元。用于吸入器或吹入器(insufflator)中的膠囊和藥筒(例如，明膠制)可以被配制來包含所述化合物和如乳糖或淀粉等適當(dāng)粉末基質(zhì)的粉末混合物。當(dāng)意圖將所述化合物系統(tǒng)性輸送時(shí)，可以將其配制用于經(jīng)注射(例如，團(tuán)注)或持續(xù)輸注的胃腸外施用。注射用制劑可以與添加的防腐劑一起以例如安瓿或多劑量容器中的單元劑量形式存在。所述組合物可以采取如油性或水性載具中的懸浮液、溶液或乳液等形式，且可以包含如懸浮劑、穩(wěn)定劑和/或分散劑等配方劑。用于胃腸外施用的藥物制劑包括水溶形式的活性化合物水溶液。另外，可以將活性化合物的懸浮液可以制備成為適當(dāng)?shù)挠托宰⑸鋺腋∫?。合適的親脂性溶劑或載具包括如芝麻油等脂肪油、如油酸乙酯或甘油三酯等合成脂肪酸酯或者脂質(zhì)體。水性注射懸浮液可以包含如羥甲基纖維素鈉、山梨醇或右旋糖苷等增加該懸浮液粘度的物質(zhì)。必要時(shí)，所述懸浮液還可以含有適當(dāng)?shù)姆€(wěn)定劑或增加所述化合物的溶解性從而使得可以制備高度濃縮溶液的試劑。替代性的是，所述活性化合物可以為粉末形式以用于在使用前用適當(dāng)載具(例如無菌無熱源水)重建。此外，還可將所述化合物配制為例如包含常規(guī)栓劑基質(zhì)(例如，可可脂或其它甘油酯)的栓劑或保留灌腸劑的直腸或陰道組合物。除前述制劑以外，還可將所述化合物配制為貯存制劑(cbpotpr印aration)?？蓪⑦@類長效制劑與合適的聚合物材料或疏水性材料(例如，作為可接受油中的乳液)或者離子交換樹脂共同配制，或作為微溶衍生物(例如，微溶鹽)來配制。所述藥物組合物還可包含適當(dāng)?shù)墓滔嗷蚰z相載劑或賦形劑。這類載劑或賦形劑的實(shí)例包括但不限于碳酸鈣、磷酸鈣、各種糖類、淀粉、纖維素衍生物、明膠和如聚乙二醇等聚合物。合適的液體或固體藥物制劑形式為例如，吸入用水溶液或鹽水溶液、微膠囊封裝形式、螺旋體封裝形式、涂覆于微型金顆粒上、包含于脂質(zhì)體中、霧化形式、氣溶膠、用于植入皮膚內(nèi)的丸劑或在尖銳物體上干燥以被刮擦進(jìn)入皮膚的形式。所述藥物組合物還可包括粒劑、粉劑、片劑、包衣片劑、(微)膠囊、栓劑、糖漿劑、乳化劑、懸浮劑、乳膏劑、滴劑或延緩釋放活性化合物的制劑，在所述制劑中通常如上所述使用了如崩解劑、粘合劑、涂布劑、溶脹劑、潤滑劑、增味劑、甜味劑或溶解化劑等賦形劑和添加劑和/或助劑。所述藥用組合物適用于許多藥物輸送體系中。關(guān)于藥物輸送方法的簡短綜述，參見LangerR(1990)Science249:1527-1533，本文通過參考并入其內(nèi)容。核酸和可選的其它治療劑和/或抗原可以以自身施用(單純施用)或以藥物可接受鹽的形式施用。當(dāng)用于藥物中時(shí)，所述鹽應(yīng)該為藥物可接受的，但是可以方便地使用非藥物可接受鹽來制備其藥物可接受鹽。這類鹽包括但不限于，從下列酸制備的鹽鹽酸、氫溴酸、硫酸、硝酸、磷酸、馬來酸、乙酸、水楊酸、對甲苯磺酸、酒石酸、檸檬酸、甲磺酸、甲酸、丙二酸、琥珀酸、萘-2-磺酸和苯磺酸。另外，這類鹽還可被制備為堿金屬鹽或堿土金屬鹽，如羧基鈉鹽、鉀鹽或鈣鹽。合適的緩沖劑包括乙酸和鹽(1%2%重量/體積)；檸檬酸和鹽(1%3%重量/體積)；硼酸和鹽(0.5%2.5%重量/體積)；以及磷酸和鹽(0.8%2%重量/體積)。合適的防腐劑包括苯扎氯銨(0.003%0.03%重量/體積)；氯丁醇(0.3%0.9%重量/體積)；對羥基苯甲酸(0.01%0.25%重量/體積)和硫汞撒(0.004%0.02%重量/體積)。所述組合物可以方便地以單元劑量形式呈現(xiàn)且可由藥物學(xué)領(lǐng)域內(nèi)公知的任何方法制備。所有方法都包括將所述化合物與包含一個(gè)或多個(gè)附屬成分的載劑結(jié)合的步驟。一般而言，通過將所述化合物與液體載劑和/或細(xì)分固體載劑均一地緊密地結(jié)合，然后在必要時(shí)將產(chǎn)品成型來制備所述組合物。液體劑量單元為瓶或安瓿。固體劑量單元為片、膠囊和栓。其它輸送體系可包括按時(shí)釋放、延遲釋放或持續(xù)釋放的輸送體系。這些體系能避免所述化合物的反復(fù)施用，對受試對象和醫(yī)師更加便利。許多類型的釋放輸送體系是本領(lǐng)域普通技術(shù)人員已知的且可利用的。它們包括基于聚合物的體系，例如，聚丙交酯乙交酯、共聚草酸酯、聚己內(nèi)酯、聚酯酰胺、聚原酸酯、聚羥基丁酸和聚酸酐。在例如美國專利第5，075，109號中描述了含有藥物的上述聚合物的微膠囊。輸送體系還包括非聚合物體系包括留醇(如膽固醇和膽固醇酯)和脂肪酸或中性脂肪(如甘油單酯、甘油二酯和甘油三酯)的脂類；水凝膠釋放體系；硅橡膠體系；基于肽的體系；蠟包衣；使用常規(guī)粘合劑和賦形劑的壓縮片劑；以及部分融合的植入物等。具體實(shí)例包括但不限于(a)侵蝕性體系，其中本發(fā)明的試劑包含于處于基質(zhì)內(nèi)的形式中，例如，美國專利第4，452，775號、第4，675，189號和第5，736，152號中所描述的體系；和(b)擴(kuò)散性體系，其中活性成分以受控速率從聚合物中滲出，例如，美國專利第3，854，480號、第5，133，974號和第5，407，686號中所描述的體系。另外，可使用泵類硬件輸送體系，其中某些被改造以用于植入。通過以下實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步說明，而不應(yīng)將它們視為對本發(fā)明的進(jìn)一步限制。在此通過參考特意并入本申請所引用所有參考(包括參考文獻(xiàn)、已頒布專利、已公布專利申請和審理中的專利申請)的全部內(nèi)容。實(shí)施例TLR7和TLR8識別單鏈RNA或短寡核糖核苷酸(ORN)。對表達(dá)TLR7和/或TLR8的免疫細(xì)胞的溫育導(dǎo)致誘導(dǎo)細(xì)胞因子的生成。由于這兩種受體的表達(dá)模式不同，據(jù)推測TLR7介導(dǎo)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)會刺激人PDC產(chǎn)生的IFN-α的生成，而TLR8主要造成產(chǎn)生IL_12、TNF_α和IFN-γ的mDC和單核細(xì)胞的激活。已經(jīng)說明了特異性誘導(dǎo)TLR8和TLR7/8活性的RNA基序的存在。以下實(shí)施例顯示了對主鏈特異性的額外基序的鑒定。一個(gè)重要的發(fā)現(xiàn)在于，含有該RNA基序的聚合物主要誘導(dǎo)IFN-α，從而支持其為沒有刺激顯著的促炎性細(xì)胞因子水平的有力免疫刺激基序。方法ELISA檢驗(yàn)將人PBMC與連續(xù)稀釋的ORN在DOTAP存在時(shí)(從2μMORN和25μg/mlDOTAP開始)進(jìn)行溫育，24小時(shí)后通過ELISA檢驗(yàn)上清液的IFN-α和IL_12p40。顯示了3個(gè)捐獻(xiàn)者的平均值士SEM。細(xì)胞因子檢測將人PBMC以約5XIO6細(xì)胞/mL的濃度重懸并添加至圓底96孔板(250μ1/孔)。將PBMC與連續(xù)稀釋的ORN在DOTAP存在時(shí)(從2μMORN和25μg/mlDOTAP開始)溫育，24小時(shí)后收集培養(yǎng)上清液(SN)。如不立即使用，在需要使用之前將SN在-20°C下保存。使用用于IL_12p40的商購ELISA試劑盒(來自BDBiosciences，Heidelberg，德國)或用于IFN-α的采用商購抗體(PBL，NewBrunswick，NJ，美國)開發(fā)的自制ELISA試劑盒來評估SN中的細(xì)胞因子的量。為了對大范圍的細(xì)胞因子和趨化因子進(jìn)行分析，使用來自Bio-Rad(Munich，德國)的Iuminex系統(tǒng)和來自Biosource(Solingen，德國)的Multiplex試劑盒進(jìn)行復(fù)合分l/f(multiplexanalysis)。實(shí)施例1誘導(dǎo)TLR7介導(dǎo)但非TLR-8介導(dǎo)的細(xì)胞因子的免疫刺激聚合物的鑒定對4個(gè)ORN和正對照測試其誘導(dǎo)IFN-α的能力(序列參見表1)。將ORN與人PBMC—同溫育，并通過ELISA檢驗(yàn)上清液的IFN-α。ORNSEQIDNO3和SEQIDNO:5具有相同的堿基序列，但SEQIDNO:5具有硫代磷酸酯(PS)主鏈，而ORNSEQIDΝ0:3具有磷酸二酯(PO)主鏈。令人吃驚的是，與正對照ODNSEQIDNO:1相比，SEQIDNO:5僅誘導(dǎo)了背景水平的IFN-α，而SEQIDNO3誘導(dǎo)了最大的IFN-α水平，SEQIDNO1在硫代磷酸酯主鏈內(nèi)具有優(yōu)化的富含⑶的基序(圖1)。這些數(shù)據(jù)表明，對于SEQIDNO:3和SEQIDNO5的ORN序列而言，PO主鏈產(chǎn)生了顯著的IFN-α誘導(dǎo)。此外，還對兩個(gè)其它帶有PO主鏈的0RN(SEQIDNO:2和SEQIDNO4)測試了其誘導(dǎo)IFN-α的能力，且據(jù)顯示其僅誘導(dǎo)極低水平的IFN-α。如SEQIDNO:2和SEQIDNO:3的序列比較所示，一個(gè)尿苷⑶的存在極大提高了IFN-α的誘導(dǎo)。尿苷核苷酸被嵌入特定的序列基序內(nèi)。在該基序之外存在的一個(gè)U顯著減少了IFN-α的生成，如SEQIDNO3和SEQIDNO4的序列比較所示。ORNSEQIDNO:3主要誘導(dǎo)IFN-α的生成(很可能是由TLR7介導(dǎo))(也見圖2Α)，但誘導(dǎo)極少的其它(TLR8介導(dǎo)的)細(xì)胞因子，例如，IL-12(圖2B)、TNF-a(未顯示)或IFN-γ(未顯示)。表1<table>tableseeoriginaldocumentpage50</column></row><table>ORN主鏈“_”表示磷酸二酯，“*”表示硫代磷酸酯。實(shí)施例2新的免疫刺激RNA基序⑶CA的鑒定為了確定最佳的主鏈特異性免疫刺激基序，設(shè)計(jì)了ORN并測試其誘導(dǎo)IFN-α的能力。與此前鑒定的RNA基序相反，所確定的新基序?qū)τ趲в辛姿岫ブ麈湹腛RN是獨(dú)特和特異性的(圖3)。將人PBMC與ORN—起溫育，并通過ELISA檢驗(yàn)上清液的IFN-α。確定了一個(gè)令人驚訝的短基序UCA。顯示出了該序列內(nèi)腺嘌呤堿基的存在的重要性。對SEQIDNO:7和SEQIDNO6的比較(見表2)表明，最佳基序包含一個(gè)在UC的3，側(cè)的堿基。對SEQIDNO11和SEQIDNO12的比較確證了在該尿苷的3，側(cè)的胞苷的重要性。表2<table>tableseeoriginaldocumentpage51</column></row><table>非常具有特異性，這是由于所有的3個(gè)在基序中不帶C的POORN(SEQIDNO:8、SEQIDNO9和SEQIDNO10)比含有UCA基序的親本ORNSEQIDNO:3誘導(dǎo)了高得多的IL-12水平(見表3)。表3<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>對序列變化的進(jìn)一步測試得到的數(shù)據(jù)顯示出，UCA基序的腺苷部分對于IFN-α活性很重要(圖5，表4中的序列)。將人PBMC與ORN溫育，通過ELISA測試上清液的IFN-α和IL-12p40。將UCA基序內(nèi)的腺苷用C或G替換(SEQIDNO:13、SEQIDNO14)產(chǎn)生了僅誘導(dǎo)背景水平的IFN-αWORN。SEQIDN0:15(U⑶)誘導(dǎo)了適度的IFN-α量，但其誘導(dǎo)量少于SEQIDNO:3的誘導(dǎo)量。該誘導(dǎo)很可能是由于額外的序列UCUG的產(chǎn)生。同樣地，由SEQIDNO3誘導(dǎo)的IL-12與SEQIDNO:14禾口SEQIDNO15相比非常低。表4<table>tableseeoriginaldocumentpage52</column></row><table>為進(jìn)一步評估最小基序周圍的其他核苷酸的必要，測試了在3’和5’處帶有核苷酸修飾的UCA基序的與IL-12相比的IFN-α誘導(dǎo)活性(序列如表5所示)。如圖6所示，在最小基序UCA的5，區(qū)僅存在胞苷(CUCA，SEQIDNO3)或尿苷核苷酸(UUCA，SEQIDNO21)產(chǎn)生具有高IFN-α誘導(dǎo)性質(zhì)的0RN。然而，在該位置僅不存在尿苷時(shí)觀察到了所述的ORN誘導(dǎo)大量IFN-α而不誘導(dǎo)大量IL_12p40的意外活性，因?yàn)閁UCA基序?qū)е翴FN-α和IL-12兩者的大量生成。表5<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>其它序列分析顯示，4聚體基序CUCA相鄰的核苷酸位置似乎沒有那么重要并且不會影響ORN誘導(dǎo)IFN-α產(chǎn)生的能力(表6)。然而，這些核苷酸的確影響IL-12的產(chǎn)生，如圖7所示。不管是在⑶CA基序的5，側(cè)(圖7A，SEQIDNO:22、23和24)還是在其3，側(cè)(圖7B，SEQIDNO:16、17和18)的核苷酸似乎均未影響IFN-α誘導(dǎo)活性。這些核苷酸似乎僅影響IL-12誘導(dǎo)。因此，對于最優(yōu)的TLR7特異性誘導(dǎo)特性而言，這些位置應(yīng)該如SEQIDΝ0:24和SEQIDNO18中那樣優(yōu)選不是尿苷，因?yàn)檫@些ORN顯示出相對較強(qiáng)的IL-12誘導(dǎo)能力(圖7C和圖7D)。表6<table>tableseeoriginaldocumentpage53</column></row><table>實(shí)施例3⑶CA基序ORN的細(xì)胞因子狀況測試了免疫刺激CUCA基序ORNSEQIDNO:27(GACACACACACUCACACACACACA)誘導(dǎo)各種細(xì)胞因子的能力。比較ORNSEQIDN0:27與負(fù)對照(GACACACACACACACACACACACA；SEQIDNO25)、帶有富含U的3，末端的非UCAORN(GACACACACACACACACACACUUU；SEQIDNO26)和正對照(GACACACACACUCACACACACACA；SEQIDNO28)的細(xì)胞因子誘導(dǎo)。將3個(gè)健康捐血者的人PBMC與連續(xù)稀釋的ORN在DOTAP(從2μMORN和25μg/mlDOTAP開始)的存在下一起溫育24h。收集SN并通過ELISA測定多種細(xì)胞因子或趨化因子的細(xì)胞因子濃度或趨化因子濃度。SEQIDNO:27誘導(dǎo)了IFN-α以及較小程度的IFN-α相關(guān)分子ΙΡ_10和MCP-I。為分析更大的細(xì)胞因子和趨化因子組，采用Luminex系統(tǒng)Multiplex試劑盒進(jìn)行了多元分析。在對Luminex數(shù)據(jù)的初始非定量評估中使用了兩個(gè)捐獻(xiàn)者。結(jié)果匯總于下表7中。同樣地，SEQIDNO27僅誘導(dǎo)IFN-α和ΙΡ-10以及較小程度的MIP-I。表7<table>tableseeoriginaldocumentpage54</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage55</column></row><table>η.d.=未檢測到實(shí)施例4帶有UCA基序的ORN的顯著Thl細(xì)胞因子和趨化因子誘導(dǎo)測試了帶有UCA基序的ORN在體內(nèi)的細(xì)胞因子和趨化因子誘導(dǎo)。將BALB/c小鼠分為每組5只的兩組，并進(jìn)行0RN、D0TAP或緩沖鹽水(HBS)靜脈內(nèi)施用。注射后3小時(shí)對第一組動物取血并使用適當(dāng)?shù)募?xì)胞因子特異性ELISA確定IP-10、IFN-a,TNF-a、IL_2、IL_12、IL-6和IL-IO的血清水平。注射后24小時(shí)對第二組動物取血并確定IFN-α和IL-10的血清水平。將UCAORNSEQIDNO:3誘導(dǎo)細(xì)胞因子和趨化因子的能力與誘導(dǎo)TLR7相關(guān)細(xì)胞因子和TLR8相關(guān)細(xì)胞因子兩者的兩個(gè)ORN(GACACACACACACACACACACAUU；SEQIDNO30；禾口UUAUUAUUAUUAUUAUUAUU(硫代磷酸酯主鏈)；SEQIDNO33))以及主要誘導(dǎo)TLR8相關(guān)細(xì)胞因子的兩個(gè)ORN(UUGUU⑶UGUU⑶UGUU⑶U；SEQIDNO31；和UUAUUAUUAUUAUUAUUAUU(磷酸二酯主鏈)；SEQIDNO32)進(jìn)行比較。此外，還將CpGODN1826(TCCATGACGTTCCTGACGTT；SEQIDNO36)用作對照。SEQIDNO:3在3小時(shí)和24小時(shí)的時(shí)間點(diǎn)均誘導(dǎo)IFN-α(圖12A和圖12C)和IP-10(圖12B和圖12D)，但在3小時(shí)時(shí)間點(diǎn)沒有誘導(dǎo)顯著量的TNF-a、IL_2、IL-12、IL-6或IL-10(分別為圖13AΕ)。因此，SEQIDNO3僅誘導(dǎo)IFN-α和IFN-a相關(guān)細(xì)胞因子。另外，據(jù)顯示UCAORN會激活來自脾臟的B細(xì)胞和T細(xì)胞。SEQIDNO:3激活脾CD3+T細(xì)胞(圖14A和圖14B)和DX5+B細(xì)胞(圖14C和圖14D)。實(shí)施例5存在UCA基序而不僅是存在U對于IFN-α的誘導(dǎo)很重要在該實(shí)驗(yàn)中顯示，13個(gè)尿苷的存在不足以誘導(dǎo)IFN-α。將來自3個(gè)健康捐獻(xiàn)者的人PBMC與不同量的ORN(SEQIDNO:2630，表8)在DOTAP(起始濃度:2μΜ0RN+25μg/mlD0TAP，在PBS中13連續(xù)稀釋)的存在下一起溫育24h。用適當(dāng)?shù)腅LISA測定上清液<table>tableseeoriginaldocumentpage56</column></row><table>結(jié)果如圖15所示。盡管在SEQIDNO:26、29和30中存在多達(dá)3個(gè)尿苷，這些不帶UCA基序的ORN沒有誘導(dǎo)IFN-α。相反，僅含有嵌入于UCA基序中的一個(gè)U的SEQIDNO27卻誘導(dǎo)了顯著量的IFN-α。實(shí)施例6體內(nèi)細(xì)胞因子誘導(dǎo)具有強(qiáng)TLR-7依賴性在該實(shí)驗(yàn)中顯示，TLR-7缺乏的小鼠不對本發(fā)明的ORN產(chǎn)生反應(yīng)。將TLR9敲除(TLR9K0)和TLR7敲除(TLR7K0)的小鼠與C57BL/6背景小鼠和C57BL/6對照小鼠回交(backcross)(每組η=4)，其后用100μg的選定ORN(SEQIDN0:3、28或31)或作為正對照的在DOTAP(Sigma)中為12的CpGODN1826(SEQIDNO36)或作為負(fù)對照的緩沖鹽水(HBS)進(jìn)行靜脈內(nèi)注射。注射后3小時(shí)，獲取血漿并使用適當(dāng)?shù)腖uminex和ELISA分析IFN-α、IP-10、IL-12和IL-6。結(jié)果如圖16所示。TLR7K0小鼠在應(yīng)答于SEQIDNO:3、28或31時(shí)基本沒有顯示出IFN-α、IP-10、IL-12或IL_6的誘導(dǎo)，而在應(yīng)答于CpGODN時(shí)卻顯示出對這些相同細(xì)胞因子的強(qiáng)勁誘導(dǎo)。相反，TLR9K0小鼠在應(yīng)答于SEQIDNO:3、28或31時(shí)顯示出不同程度的IFN-α、IP-10、IL-12和IL_6的誘導(dǎo)，但在應(yīng)答于CpGODN時(shí)卻對這些相同細(xì)胞因子沒有誘導(dǎo)。對照C57BL/6小鼠在應(yīng)答于SEQIDNO:3、28或31時(shí)顯示出不同程度的IFN-α、IP-10、IL-12和IL-6的誘導(dǎo)，而在應(yīng)答于CpGODN時(shí)顯示出對這些相同細(xì)胞因子的強(qiáng)勁誘導(dǎo)。實(shí)施例7體內(nèi)細(xì)胞因子誘導(dǎo)具有強(qiáng)MyD88依賴性在該實(shí)驗(yàn)中顯示，MyD88缺乏的小鼠不與本發(fā)明的ORN反應(yīng)。MyD88敲除(MyD88K0)的小鼠與C57BL/6背景小鼠和C57BL/6對照小鼠回交(每組n=4)，其后用100μg的選定0RN(SEQIDN0:3、28或31)或作為正對照的在DOTAP(Sigma)中為12的CpGODN1826(SEQIDNO36)或作為負(fù)對照的緩沖鹽水(HBS)進(jìn)行靜脈內(nèi)注射。注射后3小時(shí)，獲取血漿并使用適當(dāng)?shù)腖uminex和ELISA分析IFN-α和ΙΡ-10。結(jié)果如圖17所示。MyD88K0小鼠在應(yīng)答于SEQIDNO:3、28或31時(shí)基本沒有顯示出IFN-α或IP-10的誘導(dǎo)，而在應(yīng)答于CpGODN時(shí)情況類似。相反，對照C57BL/6小鼠在應(yīng)答于SEQIDNO:3、28或31時(shí)以及應(yīng)答于CpGODN時(shí)均顯示出強(qiáng)勁的IFN-α和IP-10誘導(dǎo)?？偠灾景l(fā)明已經(jīng)確定了一種新的負(fù)責(zé)誘導(dǎo)IFN-α(很可能是TLR7介導(dǎo))而幾乎不激活如IL-12、IFN-Y或TNF-α等其它細(xì)胞因子(很可能是TLR8介導(dǎo))的主鏈特異性基序。決定這些性質(zhì)的最小基序是rU-rC-rA。主鏈?zhǔn)橇姿岫??；谠摂?shù)據(jù)的最優(yōu)基序是rN-rC-rU-rC-rA-rN，其中N=C、A、G但不是U(對于最小的TLR8介導(dǎo)的細(xì)胞因子應(yīng)答而言)。由此已經(jīng)對本發(fā)明的至少一個(gè)實(shí)施方式的幾個(gè)方面進(jìn)行了描述，應(yīng)該理解的是，本領(lǐng)域技術(shù)人員將易于進(jìn)行各種變化、修改和改進(jìn)。這些變化、修改和改進(jìn)應(yīng)該是本公開的一部分，且應(yīng)該處于本發(fā)明的主旨和范圍內(nèi)。因此，前述說明和附圖僅僅是示例性的。權(quán)利要求一種組合物，所述組合物包含包含免疫刺激RNA基序rN1-rC-rU-rC-rA-rN2的長度為4～100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物在基序rC-rU-rC-rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中N1和N2中的至少一個(gè)不是A7，且其中rN1-rC-rU-rC-rA-rN2不是GCUCAA，和輸送載具，其中所述輸送載具是脂質(zhì)體、非離子囊泡、脂質(zhì)復(fù)合體、聚合物復(fù)合體、脂質(zhì)聚合物復(fù)合體、油包水(W/O)乳液、水包油(O/W)乳液、水包油包水多重乳液、微乳液、納米乳液、膠束、樹枝狀聚合物、病毒顆粒、類病毒顆粒、聚合物納米顆粒或聚合物微粒，且其中所述組合物不含lipofectin。2.如權(quán)利要求1所述的組合物，所述組合物還包含抗原。3.如權(quán)利要求2所述的組合物，所述抗原與聚合物接合。4.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述rNi-rC-rU-rC-rA-rR基序包含修飾的核苷堿基，所述修飾的核苷堿基選自次黃嘌呤、肌苷、8-氧代腺嘌呤及其7-位取代的衍生物、二氫尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、S-(C1-C6)烷基尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-(C2-C6)烯基尿嘧啶、5-(C2-C6)炔基尿嘧啶、5-羥甲基尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥基胞嘧啶、5-(C1-C6)烷基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-(C2-C6)烯基胞嘧啶、5-(C2-C6)炔基胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2，4-二氨基嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、8-氮雜嘌呤、取代的7-脫氮嘌呤、7-脫氮-7-位取代嘌呤、7-脫氮-8-位取代嘌呤、氫(無堿基殘基)及其任何組合。5.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述聚合物在rNi-rC-rU-rC-rA-rR基序之外還包含至少一個(gè)修飾的核苷堿基，其中所述修飾的核苷堿基選自次黃嘌呤、肌苷、8-氧代腺嘌呤及其7-位取代的衍生物、二氫尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、5-(C1-C6)烷基尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-(C2-C6)烯基尿嘧啶、5-(C2-C6)炔基尿嘧啶、5-羥甲基尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥基胞嘧啶、5-(C1-C6)烷基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-(C2-C6)烯基胞嘧啶、5-(C2-C6)炔基胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、N2-二甲基鳥嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤、7-脫氮-7-位取代鳥嘌呤、7-脫氮-7-(C2-C6)炔基鳥嘌呤、7-脫氮-8-位取代鳥嘌呤、8-羥基鳥嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、8-氧代鳥嘌呤、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2，4-二氨基嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、8-氮雜嘌呤、取代的7-脫氮嘌呤、7-脫氮-7-位取代嘌呤、7-脫氮-8-位取代嘌呤、氫(無堿基殘基)及其任何組合。6.如權(quán)利要求1所述的組合物，所述組合物還包含與所述聚合物共價(jià)相連的親脂部分。7.如權(quán)利要求6所述的組合物，其中所述親脂部分選自膽留烯基、棕櫚酰基和脂肪?；?。8.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述聚合物不包含CpG基序。9.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述聚合物不包含CCGAGCCGAG⑶CACC(SEQIDNO35)。10.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述聚合物的長度為420單元。11.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述聚合物的長度為1025單元。12.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述聚合物的長度為1519單元。13.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中每個(gè)聚合物單元都是核糖核苷酸。14.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中聚合物單元是核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸的混合物。15.如權(quán)利要求14所述的組合物，其中所述脫氧核糖核苷酸包括處于所述聚合物的5’端的TCG基序。16.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述聚合物的至少一個(gè)單元是氨基酸。17.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述聚合物與TLR9激動劑相連。18.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述TLR9激動劑是小分子。19.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述聚合物與TLR7激動劑相連。20.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中所述聚合物與TLR8激動劑相連。21.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中N1包含至少一個(gè)A。22.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中N1包含至少一個(gè)C。23.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中N1包含至少一個(gè)G。24.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中N1包含至少一個(gè)T。25.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中N2包含至少一個(gè)A。26.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中N2包含至少一個(gè)C。27.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中N2包含至少一個(gè)G。28.如權(quán)利要求1所述的組合物，其中N2包含至少一個(gè)T。29.一種組合物，所述組合物包含包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中州3-以2-比-沖-比-^-以3-州4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C，和輸送載具，其中所述輸送載具是脂質(zhì)體、非離子囊泡、脂質(zhì)復(fù)合體、聚合物復(fù)合體、脂質(zhì)聚合物復(fù)合體、油包水(W/0)乳液、水包油(0/W)乳液、水包油包水(W/0/W)多重乳液、微乳液、納米乳液、膠束、樹枝狀聚合物、病毒顆粒、類病毒顆粒、聚合物納米顆?；蚓酆衔镂⒘＃移渲兴鼋M合物不含lipofectin。30.如權(quán)利要求29所述的組合物，所述組合物還包含抗原。31.如權(quán)利要求30所述的組合物，其中所述抗原與聚合物接合。32.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4基序包含修飾的核苷堿基，所述修飾的核苷堿基所述修飾的核苷堿基選自次黃嘌呤、肌苷、8-氧代腺嘌呤及其7-位取代的衍生物、二氫尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、5-(C「C6)烷基尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-(C2-C6)烯基尿嘧啶、5-(C2-C6)炔基尿嘧啶、5_羥甲基尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥基胞嘧啶、S-(C1-C6)烷基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-(C2-C6)烯基胞嘧啶、5-(C2-C6)炔基胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2，4_二氨基嘌呤、2，6_二氨基嘌呤、8-氮雜嘌呤、取代的7-脫氮嘌呤、7-脫氮-7-位取代嘌呤、7-脫氮-8-位取代嘌呤、氫(無堿基殘基)及其任何組合。33.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述聚合物在rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4基序之外還包含至少一個(gè)修飾的核苷堿基，其中所述修飾的核苷堿基選自次黃嘌呤、肌苷、8_氧代腺嘌呤及其7-位取代的衍生物、二氫尿嘧啶、假尿嘧啶、2-硫代尿嘧啶、4-硫代尿嘧啶、5-氨基尿嘧啶、5-(C「C6)烷基尿嘧啶、5-甲基尿嘧啶、5-(C2-C6)烯基尿嘧啶、5-(C2-C6)炔基尿嘧啶、5-羥甲基尿嘧啶、5-氯尿嘧啶、5-氟尿嘧啶、5-溴尿嘧啶、5-羥基胞嘧啶、5-(C1-C6)烷基胞嘧啶、5-甲基胞嘧啶、5-(C2-C6)烯基胞嘧啶、5-(C2-C6)炔基胞嘧啶、5-氯胞嘧啶、5-氟胞嘧啶、5-溴胞嘧啶、N2-二甲基鳥嘌呤、7-脫氮鳥嘌呤、8-氮雜鳥嘌呤、7-脫氮-7-位取代鳥嘌呤、7-脫氮-7-(C2-C6)炔基鳥嘌呤、7-脫氮-8-位取代鳥嘌呤、8-羥基鳥嘌呤、6-硫代鳥嘌呤、8-氧代鳥嘌呤、2-氨基嘌呤、2-氨基-6-氯嘌呤、2，4-二氨基嘌呤、2，6-二氨基嘌呤、8-氮雜嘌呤、取代的7-脫氮嘌呤、7-脫氮-7-位取代嘌呤、7-脫氮-8-位取代嘌呤、氫(無堿基殘基)及其任何組合。34.如權(quán)利要求29所述的組合物，所述組合物還包含與所述聚合物共價(jià)相連的親脂部分。35.如權(quán)利要求34所述的組合物，其中所述親脂部分選自膽留烯基、棕櫚酰基和脂肪?；?。36.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述聚合物不包含CpG基序。37.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述聚合物不包含CCGAGCCGAG⑶CACC(SEQIDNO35)。38.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述聚合物的長度為420單元。39.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述聚合物的長度為1025單元。40.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述聚合物的長度為1519單元。41.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中每個(gè)聚合物單元都是核糖核苷酸。42.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中聚合物單元是核糖核苷酸和脫氧核糖核苷酸的混合物。43.如權(quán)利要求42所述的組合物，其中所述脫氧核糖核苷酸包括處于所述聚合物的5’端的TCG基序。44.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述聚合物的至少一個(gè)單元是氨基酸。45.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述聚合物與TLR9激動劑相連。46.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述TLR9激動劑是小分子。47.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述聚合物與TLR7激動劑相連。48.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中所述聚合物與TLR8激動劑相連。49.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中X2是八。50.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中X2是C。51.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中X2是6。52.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中X3是八。53.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中X3是C。54.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中X3是6。55.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中N3包含至少一個(gè)A。56.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中N3包含至少一個(gè)C。57.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中N3包含至少一個(gè)G。58.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中N3包含至少一個(gè)U。59.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中N4包含至少一個(gè)A。60.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中N4包含至少一個(gè)C。61.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中N4包含至少一個(gè)G。62.如權(quán)利要求29所述的組合物，其中N4包含至少一個(gè)U。63.一種方法，所述方法包括使能產(chǎn)生干擾素α(IFN-α)的免疫細(xì)胞與長度為4100單元的單鏈聚合物接觸，所述單鏈聚合物的量能有效地誘導(dǎo)產(chǎn)生治療上顯著量的IFN-a，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN^rC-rU-rC-rA-rR且在基序rC-rU-rC-rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中N1和N2中的至少一個(gè)不是A7,且其中rNfrC-rU-rC-rA-rR不是GCUCAA或UUAUCGUAX!CUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C，其中所述聚合物不與Iipofectin—起配制。64.一種方法，所述方法包括使能產(chǎn)生干擾素a(IFN-a)的免疫細(xì)胞與長度為4100單元的單鏈聚合物接觸，所述單鏈聚合物的量能有效地誘導(dǎo)產(chǎn)生治療上顯著量的IFN-a，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA_rX3-rN4，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X1是A或C，其中所述聚合物不與Iipofectin—起配制。65.如權(quán)利要求63或64所述的方法，其中所述免疫細(xì)胞應(yīng)答于所述聚合物而不產(chǎn)生顯著量的腫瘤壞死因子a(TNF-Q)066.如權(quán)利要求63或64所述的方法，其中所述免疫細(xì)胞應(yīng)答于所述聚合物而不產(chǎn)生顯著量的干擾素Y(TNF-Y)067.如權(quán)利要求63或64所述的方法，其中所述免疫細(xì)胞應(yīng)答于所述聚合物而不產(chǎn)生顯著量的白細(xì)胞介素12(IL-12)。68.如權(quán)利要求63或64所述的方法，其中所述方法在體內(nèi)進(jìn)行。69.如權(quán)利要求63所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。70.如權(quán)利要求64所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。71.如權(quán)利要求63或64所述的方法，其中所述聚合物包含至少一個(gè)在所述免疫刺激基序之外的穩(wěn)定化鍵。72.如權(quán)利要求71所述的方法，其中所述穩(wěn)定化鍵處在5’端和/或3’端。73.如權(quán)利要求63或64所述的方法，其中所述聚合物包含15個(gè)在所述免疫刺激基序之外的穩(wěn)定化鍵。74.如權(quán)利要求73所述的方法，其中所述穩(wěn)定化鍵處在5’端和/或3’端。75.—種哮喘治療方法，所述方法包括對患有哮喘的受試對象施用哮喘治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rNrrC-rU-rC-rA-rN2并且在基序rC-rU_rC_rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中K和N2中的至少一個(gè)不是A7，且其中rNi-rC-rU-rC-rA-r^不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中是A或C。76.—種哮喘治療方法，所述方法包括對患有哮喘的受試對象施用哮喘治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4,其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和隊(duì)相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中\(zhòng)是A或C077.如權(quán)利要求75或76所述的方法，所述方法還包括對受試對象施用過敏原。78.如權(quán)利要求77所述的方法，其中所述聚合物與所述抗原接合。79.如權(quán)利要求75所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。80.如權(quán)利要求76所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。81.—種過敏病況的治療方法，所述方法包括對患有過敏病況的受試對象施用過敏病況治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rNfrC-rU-rC-rA-rR并且在基序rC-rU_rC_rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中K和N2中的至少一個(gè)不是A7，且其中rNi-rC-rU-rC-rA-r^不是G⑶CAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中是A或C。82.—種過敏病況的治療方法，所述方法包括對患有過敏病況的受試對象施用過敏病況治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X!是A或C。83.如權(quán)利要求81或82所述的方法，所述方法還包括對受試對象施用過敏原。84.如權(quán)利要求83所述的方法，其中所述聚合物與所述過敏原接合。85.如權(quán)利要求81所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。86.如權(quán)利要求82所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。87.—種癌癥治療方法，所述方法包括對患有癌癥的受試對象施用癌癥治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rNrrC-rU-rC-rA-rN2并且在基序rC-rU_rC_rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中K和N2中的至少一個(gè)不是A7，且其中rNi-rC-rU-rC-rA-r^不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中是A或C。88.—種癌癥治療方法，所述方法包括對患有癌癥的受試對象施用癌癥治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4,其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和隊(duì)相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X!是A或C。89.如權(quán)利要求87或88所述的方法，所述方法還包括對受試對象施用癌抗原。90.如權(quán)利要求89所述的方法，其中所述聚合物與所述抗原接合。91.如權(quán)利要求87或88所述的方法，所述方法還包括對受試對象施用第二癌癥藥物。92.如權(quán)利要求91所述的方法，其中所述癌癥藥物是卡鉬、紫杉醇、順鉬、5-氟尿嘧啶、阿霉素、泰素和吉西他濱中的一種或多種。93.如權(quán)利要求87所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。94.如權(quán)利要求88所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。95.一種傳染病治療方法，所述方法包括對患有傳染病的受試對象施用傳染病治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rNrrC-rU-rC-rA-rN2并且在基序rC-rU_rC_rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中K和N2中的至少一個(gè)不是A7，且其中rNi-rC-rU-rC-rA-r^不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中是A或C。96.一種傳染病治療方法，所述方法包括對患有傳染病的受試對象施用傳染病治療用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4，其中相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X!是A或C。97.如權(quán)利要求95或96所述的方法，所述方法還包括對受試對象施用微生物抗原。98.如權(quán)利要求97所述的方法，其中所述聚合物與所述抗原接合。99.如權(quán)利要求95所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。100.如權(quán)利要求96所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。101.一種用于在受試對象中誘導(dǎo)Thl樣免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括對受試對象施用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rNi-rC-rU-rC-rA-rR并且在基序rC-rU_rC_rA之外不含U，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈，其中K和N2中的至少一個(gè)不是A7，且其中rNi-rC-rU-rC-rA-r^不是G⑶CAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中是A或C。102.一種用于在受試對象中誘導(dǎo)Thl樣免疫應(yīng)答的方法，所述方法包括對受試對象施用有效量的長度為4100單元的單鏈聚合物，其中所述聚合物包含免疫刺激RNA基序rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4，其中X2和X3相互獨(dú)立地不存在或者為選自由C、G和A構(gòu)成的核苷酸及其核苷酸類似物的核苷酸，其中N3和N4相互獨(dú)立地不存在或者為一個(gè)或多個(gè)核苷酸，其中所述聚合物包含磷酸二酯主鏈且不包含兩個(gè)A7基序，且其中rN3-rX2-rC-rU-rC-rA-rX3-rN4不是GCUCAA或UUAUCGUAXfUCAC(SEQIDNO:34)，其中X!是A或C。103.如權(quán)利要求101或102所述的方法，所述方法還包括對受試對象施用抗原。104.如權(quán)利要求103所述的方法，其中所述聚合物與所述抗原接合。105.如權(quán)利要求101所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。106.如權(quán)利要求102所述的方法，其中將所述聚合物以權(quán)利要求162中任一項(xiàng)所述的組合物的形式進(jìn)行施用。全文摘要本發(fā)明提供了含有特定序列依賴性免疫刺激RNA基序的免疫刺激聚合物和所述免疫刺激聚合物的使用方法以及包含所述聚合物的組合物。所述序列依賴性免疫刺激RNA基序和包含所述基序的聚合物是TLR7和TLR7相關(guān)細(xì)胞因子IFN-α的有力的選擇性誘導(dǎo)劑。文檔編號C12N15/117GK101821392SQ200880111398公開日2010年9月1日申請日期2008年8月8日優(yōu)先權(quán)日2007年8月13日發(fā)明者喬爾格·H·沃爾默,馬里恩·尤爾科申請人:科勒制藥有限責(zé)任公司