專利名稱：用于預(yù)測(cè)對(duì)天冬酰胺酶活性的中和作用的測(cè)試的制作方法
用于預(yù)測(cè)對(duì)天冬酰胺酶活性的中和作用的測(cè)試本發(fā)明涉及診斷患者對(duì)用治療性酶天冬酰胺酶治療的反應(yīng)能力的測(cè)試。本發(fā)明尤其涉及預(yù)測(cè)在給定患者中使用天冬酰胺酶的治療效果的測(cè)試。L-天冬酰胺酶是已應(yīng)用超過30年的治療急性淋巴母細(xì)胞性白血病的化學(xué)治療方案的基本組分。其作用機(jī)制基于血漿氨基酸天冬酰胺的水解，天冬酰胺是淋巴母細(xì)胞腫瘤樣生長(zhǎng)的必要要素。不同于正常細(xì)胞，癌性淋巴母細(xì)胞自身不能產(chǎn)生其天冬酰胺，而是依賴細(xì)胞外來源。用天冬酰胺酶處理使其喪失該必要成分，從而使它們死亡。目前市售的產(chǎn)自微生物的所述酶有三種形式前兩種來自細(xì)菌來源大腸桿菌 (Escherichia coli)和菊歐文氏菌(Erwinia chrysanthemi)，第三種來自聚乙二醇與天然大腸桿菌天冬酰胺酶的共價(jià)鍵偶聯(lián)(PEG-天冬酰胺酶)。盡管其具有相當(dāng)?shù)目拱籽⌒Ч?，但用天冬酰胺酶進(jìn)行的治療與一定數(shù)量的并發(fā)癥相關(guān)，所述并發(fā)癥與該酶的免疫原性有關(guān)。這些并發(fā)癥可反映為臨床表現(xiàn)或沉默失活。許多作者已報(bào)道了超敏反應(yīng)，其嚴(yán)重性從中度過敏反應(yīng)到過敏性休克(Wang等， Journal of Immunological Methods, 239 (200) 75-83) 使用三種形式天冬酰胺酶所觀察到的該類反應(yīng)的發(fā)生通常引起由于害怕更嚴(yán)重反應(yīng)而導(dǎo)致治療停止。此外，天冬酰胺酶導(dǎo)致具有中和特性的循環(huán)抗體的出現(xiàn)，這反映為網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)對(duì)該酶清除的增加和其治療效果的降低(Muller H. J.，Boos J. Crit Rev Oncol/hematol 1998 ； (28) :97-113)。用三種形式的酶(大腸桿菌、歐文氏菌(Erwinia)和PEG-天冬酰胺酶)均發(fā)現(xiàn)這些抗體，在這種情況下，用天冬酰胺酶達(dá)到在延長(zhǎng)時(shí)間段內(nèi)快速且完全地耗盡血漿天冬酰胺的治療目標(biāo)未實(shí)現(xiàn)。這種患者血清中存在的中和因子(主要是抗體)導(dǎo)致的該酶失活不伴隨臨床征兆，對(duì)臨床醫(yī)師而言其是沉默的。因此本發(fā)明人認(rèn)為，臨床醫(yī)師很需要一種快速易用的測(cè)試為他們使用，以用于預(yù)測(cè)患者血清中天冬酰胺酶中和因子(主要是抗體)的存在。該測(cè)試將使得可以調(diào)整酶的施用劑量，或用另一種形式的對(duì)這些中和因子不敏感或敏感性更低的天冬酰胺酶替代所用的天冬酰胺酶。對(duì)于監(jiān)測(cè)患者天冬酰胺酶活性，考慮了幾種可能性 血漿L-天冬酰胺的測(cè)定 血漿L-天冬酰胺酶活性的測(cè)定 抗天冬酰胺酶抗體的測(cè)定血漿天冬酰胺水平是反映天冬酰胺酶所期望達(dá)到的治療作用(快速、完全和持久地去除天冬酰胺)的主要生物化學(xué)參數(shù)。因此對(duì)該測(cè)定已描述了幾種方法。它們大部分是基于將通過高效液相色譜分離待測(cè)定樣品的組分的階段和熒光檢測(cè)或通過質(zhì)譜定量整合在一起。這些方法很繁瑣，需要專業(yè)人員，并且其費(fèi)用和花費(fèi)的時(shí)間不適于常規(guī)臨床應(yīng)用。最近，Verma等描述了一種快速測(cè)定天冬酰胺的方法，其基于L-天冬酰胺酶和有色指示劑在多種基質(zhì)(硝酸纖維素膜、硅凝膠或藻酸鈣珠)上的共固定。當(dāng)將這些支持物之一與患者血清樣品接觸時(shí)，固定化的L-天冬酰胺酶會(huì)降解存在的天冬酰胺。該水解反應(yīng)后產(chǎn)生的銨能使酚紅指示劑變色。盡管該方法似乎滿足了應(yīng)用簡(jiǎn)單及迅速的要求，作者沒有提供可證實(shí)它的數(shù)據(jù)，對(duì)其準(zhǔn)確性仍存有疑問。除了缺乏可簡(jiǎn)單快速使用的經(jīng)驗(yàn)證的方法之外，血漿L-天冬酰胺的測(cè)定受以下因素的限制。在體內(nèi)，通過天冬酰胺酶作用實(shí)現(xiàn)的天冬酰胺降解被天冬酰胺的生理產(chǎn)生所平衡，而在體外，所述酶對(duì)天冬酰胺的催化作用將持續(xù)。作為直接結(jié)果，當(dāng)血清樣品來自于經(jīng)天冬酰胺酶治療的患者時(shí)，剩余量的酶的存在會(huì)導(dǎo)致天冬酰胺水平檢測(cè)的偏差，其會(huì)“虛假地”低于生理水平(Boos 等，European journal of cancer (1996) 32，1544-1550)。對(duì)分析過程的這種干擾導(dǎo)致結(jié)果與所檢測(cè)患者中天冬酰胺酶的生理活性之間缺乏相關(guān)性。已描述了幾種測(cè)定血漿L-天冬酰胺酶的方法，最常用的方法基于將含有L-天冬酰胺酶的血清在含有L-天冬酰胺的緩沖液中孵育，而后在終止反應(yīng)后，用Nessler試劑測(cè)定產(chǎn)生的銨。Orsormeau等提出了一個(gè)更快更準(zhǔn)確的自動(dòng)化的變化方案以監(jiān)測(cè)用L-天冬酰胺酶治療的患者(J.L. Orsonneau等，Ann Biol Clin 2004,62:568-72)。該方法基于谷氨酸脫氫酶的作用，其利用L-天冬酰胺酶水解L-天冬酰胺時(shí)產(chǎn)生的銨將α-酮戊二酸轉(zhuǎn)變成谷氨酸。谷氨酸脫氫酶α -酮戊二酸 +NH/+NADPH — L-谷氨酸 +NADP+H20在該反應(yīng)中，反應(yīng)過程中被氧化的NADPH的量相當(dāng)于樣品中所含的氨的量，并可通過檢測(cè)光密度的降低來測(cè)定。由此可監(jiān)測(cè)銨生成的動(dòng)力學(xué)并計(jì)算L-天冬酰胺酶的活性。 盡管該方法使監(jiān)測(cè)患者的L-天冬酰胺酶活性成為可能，它也沒提供關(guān)于存在于血清中的因子對(duì)該酶的中和作用的任何預(yù)測(cè)信息。Wang等開發(fā)了用于定量患者血漿樣品中抗天冬酰胺酶IgG的標(biāo)準(zhǔn)化ELISA測(cè)試(B. Wang 等，Journal of Immunological Methods 239 0000)75-83)。該測(cè)試用于在臨床研究范圍內(nèi)測(cè)量患者血清中存在的抗天冬酰胺酶抗體的濃度，所述患者患急性淋巴母細(xì)胞性白血病，并用L-天冬酰胺酶治療并且出現(xiàn)或未出現(xiàn)過敏反應(yīng)(M. H. Woo等， Leukemia(1998) 12,1527-1533).該作者證明，不管是在過敏反應(yīng)出現(xiàn)前或后進(jìn)行檢測(cè)，抗天冬酰胺酶抗體濃度的中值在出現(xiàn)過敏反應(yīng)的患者中都更高。他們得出結(jié)論，在臨床實(shí)踐中采用該檢測(cè)利于預(yù)測(cè)過敏反應(yīng)的未來發(fā)生。然而，該檢測(cè)的預(yù)測(cè)價(jià)值是值得懷疑的；出現(xiàn)過敏反應(yīng)前所測(cè)的抗天冬酰胺酶抗體濃度的變化范圍有交疊，它們分別為 對(duì)于隨后出現(xiàn)過敏反應(yīng)的患者，OD為0. 001-0. 375單位； 對(duì)于隨后未出現(xiàn)過敏反應(yīng)的患者，OD為0. 004-0. 064單位。此外，抗體濃度的測(cè)量沒有提供關(guān)于患者中天冬酰胺酶的藥理活性和血清中所存在因子的可能中和作用的任何信息。E. H. Panosyan 等，J. Pediatr. Hematol. Oncol. 2004，26，4 :217-226 調(diào)查了患者血清中的抗天冬酰胺酶抗體和天冬酰胺酶的酶活性。該作者描述了采用患者血清樣品作為抗天冬酰胺酶抗體來源而進(jìn)行的離體中和測(cè)定。將血清樣品與天然或PEG-天冬酰胺酶的抗原溶液一起孵育，并測(cè)量剩余的天冬酰胺酶的酶活性。該作者最終推薦在臨床環(huán)境下對(duì)血清抗天冬酰胺酶抗體進(jìn)行標(biāo)準(zhǔn)監(jiān)測(cè)。因此，本發(fā)明的目的是提出能克服現(xiàn)有技術(shù)缺點(diǎn)并能在給定時(shí)刻了解患者是否具有可中和天冬酰胺酶活性的因子的新方法。所述方法必須有具有完全預(yù)測(cè)性的優(yōu)點(diǎn)，即它必須不需要向待診斷患者施用所述酶的階段。其必須反映患者對(duì)任何形式的天冬酰胺酶的反應(yīng)能力。因此，所述患者可為第一次用該酶治療的患者，或已用天冬酰胺酶治療或者目前正用天冬酰胺酶治療的患者。其能檢測(cè)可中和之前或目前治療所用酶之活性的因子的存在，這使了解用該酶進(jìn)行的治療是否可被恢復(fù)或繼續(xù)和任選地調(diào)整成為可能。該方法還能檢測(cè)可中和考慮用于所述患者治療中的酶之活性的因子的存在，這使確證或排除特定酶的使用成為可能。該認(rèn)識(shí)將在治療形式(劑量、給藥方案)或者酶或其施用形式的選擇方面為專業(yè)人員提供比現(xiàn)有技術(shù)的方法恰當(dāng)?shù)枚嗟闹笇?dǎo)。所述中和因子或不存在或以足夠低水平存在而能用所檢測(cè)酶進(jìn)行治療(任選地加強(qiáng)劑量或劑量方案)?；蛘咚鲋泻鸵蜃拥拇嬖谒綄?duì)于繼續(xù)或開始這樣的治療而言過高，則本發(fā)明使得有可能檢測(cè)和/或建議使用另一種酶形式或?qū)λ鲋泻鸵蜃用舾行愿突虿幻舾行问降拿?例如包含于生物載體中的酶)的替代性方法。因此，本發(fā)明的目的是提出一種確定患者的血樣中是否存在中和天冬酰胺酶活性之因子的體外方法。本發(fā)明還旨在提出一種體外確定患者(i)對(duì)天冬酰胺酶治療陽性應(yīng)答或(ii)對(duì)其不應(yīng)答或(iii)僅不完全應(yīng)答的能力的方法。本發(fā)明還旨在提出用于預(yù)測(cè)用天冬酰胺酶治療的效果或預(yù)測(cè)該酶不會(huì)立即成為活性被中和因子顯著滅活的對(duì)象這一事實(shí)的方法。因此，本發(fā)明涉及預(yù)測(cè)天冬酰胺酶是否可在患者中有活性的方法，其中體外測(cè)量獲取自所述患者的樣品中中和天冬酰胺酶活性的因子的存在，所述樣品為可能包含所述中和因子的血液、血漿、血清或衍生基質(zhì)。本發(fā)明涉及對(duì)獲取自患者的可能包含所述中和因子的血液、血漿、血清或衍生基質(zhì)樣品中能中和天冬酰胺酶活性之因子的存在進(jìn)行體外測(cè)量的方法，其包括將所述樣品與天冬酰胺酶混合，孵育所述混合物，然后測(cè)量混合物中剩余的天冬酰胺酶活性，這反映了樣品中(并繼而反映了患者體內(nèi))中和因子的存在，并允許對(duì)其進(jìn)行測(cè)定和定量。該方法能定性和定量地診斷患者中天冬酰胺酶中和因子的存在。中和因子不僅指抗天冬酰胺酶抗體，還包括其它可抑制天冬酰胺酶或者其酶活性的任何因子，例如蛋白酶，如人天冬酰胺酰內(nèi)肽酶。本發(fā)明還涉及預(yù)測(cè)給定的天冬酰胺酶在給定患者中是否可有活性的方法。該方法包括體外測(cè)定患者對(duì)天冬酰胺酶治療的應(yīng)答能力，其中對(duì)獲取自所述患者的可能包含中和天冬酰胺酶之因子的血液、血漿、血清或衍生基質(zhì)樣品實(shí)施所述方法，其包括將所述樣品與所述天冬酰胺酶混合，孵育所述混合物，然后測(cè)量混合物中所述天冬酰胺酶的剩余酶活性， 這反映了樣品中(并繼而反映了患者體內(nèi))能中和天冬酰胺酶活性的中和因子的存在并能對(duì)其進(jìn)行確定和定量，因此反映了患者對(duì)用該酶治療的應(yīng)答能力。因此本發(fā)明提供了檢測(cè)天冬酰胺酶在特定患者中效力的方法。根據(jù)中和因子的存在與否并任選地根據(jù)其水平，所述過程與方法有可能確定患者是否可能(i)對(duì)天冬酰胺酶的治療陽性應(yīng)答還是(ii)對(duì)其無應(yīng)答，還是(iii)僅僅不完全應(yīng)答。
所述樣品可來自目前正用天冬酰胺酶治療的患者，或來自已用天冬酰胺酶治療的
^^ ο所述樣品還可來自從未用任一種天冬酰胺酶或這種天冬酰胺酶治療的患者。本檢測(cè)中所用的天冬酰胺酶可為在對(duì)患者進(jìn)行的治療中正在用或用過的天冬酰胺酶。所述天冬酰胺酶還可為期望在患者中測(cè)試以預(yù)測(cè)其效力的不同來源的酶。還可同時(shí)或依次測(cè)試多種酶以確定最適合患者的治療。因此，本發(fā)明提供了預(yù)測(cè)用天冬酰胺酶治療的效果或預(yù)測(cè)該酶不會(huì)立即被中和因子顯著滅活這一事實(shí)的方法。本發(fā)明適用于所有形式的天冬酰胺酶，如L-天冬酰胺酶。我們可提及獲取自任何細(xì)菌來源的天然酶，例如產(chǎn)自大腸桿菌的L-天冬酰胺酶、產(chǎn)自歐文氏菌的酶、突變酶或經(jīng)修飾的酶，例如PEG化酶(PEG-天冬酰胺酶)，但不限于此。該酶也可為天然、合成或重組來源的。其可為游離的或包含在生物載體中，例如在紅細(xì)胞中。混合物中天冬酰胺酶的剩余活性可通過向所述混合物中加入天冬酰胺(優(yōu)選 L-天冬酰胺)以及試劑系統(tǒng)來檢測(cè)，所述試劑系統(tǒng)能檢測(cè)活性天冬酰胺酶對(duì)天冬酰胺的酶促降解。根據(jù)一個(gè)有利的方案，所述方法包括以下階段(a)將所述樣品與已知量的天冬酰胺酶一起孵育；(b)將前述混合物與已知量的天冬酰胺一起孵育，優(yōu)選地使得天冬酰胺的量相對(duì)于天冬酰胺酶的量而言是飽和的；(c)將前述混合物與所述能測(cè)定所述剩余酶活性的試劑系統(tǒng)一起孵育；(d)定性或定量評(píng)價(jià)酶活性的損失或存留，其與所述樣品中中和天冬酰胺酶活性的因子的存在或含量相關(guān)。階段(a)中的孵育時(shí)間尤其地為1-60分鐘。酶含量尤其地為0. l_5IU/ml。滅活或去除測(cè)試樣品中任何痕量的活性酶可以是有用并有利的。因此，根據(jù)一個(gè)特征，在階段(a)之前進(jìn)行去除或滅活存在于樣品中的任何天冬酰胺酶的階段(％)。作為變化方法，階段(a)之前可以進(jìn)行測(cè)量樣品中天冬酰胺酶基線含量的階段 ( )，這使得有可能確定所述活性為零或可忽略，或者從通過本方法測(cè)得的所述活性中減去基線含量。作為變化方法，由于檢測(cè)前已知施用給患者的酶的半衰期，可在最后一次施用與采取血樣之間留出必要的時(shí)間。根據(jù)一個(gè)具體的實(shí)施方案，階段(a)之后是去除抗體-天冬酰胺酶免疫復(fù)合物的階段(al)。所述去除可通過離心容易地實(shí)現(xiàn)，從而階段(b)中涉及的混合物為上清液。優(yōu)選地，離心以3000-25000g在指定速度下進(jìn)行1-30分鐘。根據(jù)一個(gè)特征，所述試劑系統(tǒng)對(duì)天冬酰胺酶使天冬酰胺發(fā)生酶促降解而產(chǎn)生的銨離子的出現(xiàn)是敏感的。因此，中和因子的存在可通過進(jìn)行定量消耗銨離子的反應(yīng)來確定或檢測(cè)。所述銨離子的消耗可通過檢測(cè)混合物光密度(吸光度)的降低來跟蹤，有利地進(jìn)行定量跟蹤。尤其地進(jìn)行以下反應(yīng)(1)天冬酰胺酶+天冬酰胺一天冬氨酸+NH4+
(2) α -酮戊二酸+NH/+NADPH+谷氨酸脫氫酶(催化劑)一谷氨酸+NADP++H20與天冬酰胺的孵育優(yōu)選與飽和量的天冬酰胺(相對(duì)于引入的酶量)(尤其地為 10-50mg/ml) 一起進(jìn)行 2_60 分鐘。尤其地，與試劑系統(tǒng)一起孵育進(jìn)行3-20分鐘。因此，本發(fā)明提供了確定患者是否有可能⑴對(duì)用天冬酰胺酶的治療陽性應(yīng)答還是(ii)對(duì)其無應(yīng)答，還是(iii)僅不完全應(yīng)答的方法。因此該方法能確定用所述測(cè)試酶進(jìn)行治療或排除其可能性，或者決定更改給藥方案或用不同的天冬酰胺酶(尤其地包封在生物載體中的形式)治療患者。因此，本發(fā)明還涉及一種治療患者中天冬酰胺酶敏感性病理狀態(tài)的方法，其包括(A)實(shí)施體外測(cè)定患者對(duì)用給定形式的天冬酰胺酶(尤其是游離或經(jīng)修飾形式) 治療的反應(yīng)能力的方法，其中對(duì)獲取自所述患者的可能包含天冬酰胺酶中和因子的血液、 血漿、血清或衍生基質(zhì)樣品實(shí)施所述方法，其包括將所述樣品與所述形式的天冬酰胺酶混合，孵育所述混合物，然后測(cè)量所述混合物中剩余天冬酰胺酶活性并確定所述中和活性以及患者(i)對(duì)這種形式天冬酰胺酶治療陽性應(yīng)答或(ii)對(duì)其不應(yīng)答或(iii)僅不完全應(yīng)答的能力，和(B)在情況(i)中用該天冬酰胺酶治療所述病理狀態(tài)，或在其它情況下用另一種形式的天冬酰胺酶治療所述病理狀態(tài)。根據(jù)一個(gè)優(yōu)選的實(shí)施方案，天冬酰胺酶的其它形式是包封或包含在生物載體中的天冬酰胺酶，尤其是包封于紅細(xì)胞中。尤其地，它們是通過紅細(xì)胞溶解及重封(resealing) 產(chǎn)生的，例如根據(jù)法國(guó)專利申請(qǐng)No. 0408667的教導(dǎo)?？墒芤嬗谠摲椒ǖ牟±頎顟B(tài)尤其包括白血病，例如急性淋巴細(xì)胞性白血病。我們也可提及(但不限于)實(shí)體腫瘤(W02007/103290)，尤其是胰腺癌和卵巢癌?，F(xiàn)在通過實(shí)施例更詳細(xì)地描述本發(fā)明，本實(shí)施例闡釋但并不限制本發(fā)明。
實(shí)施例實(shí)施例1 用L-天冬酰胺酶對(duì)兔進(jìn)行免疫第一次免疫前采集幾毫升兔血清以獲得免疫前血清。然后用500 μ gL-天冬酰胺酶(Kidrolase OPI-EUSA Limonest France)注射兔4次。在第一次與第二次免疫之間及第二次與第三次免疫之間采集血清。最后，在最后免疫后，收集全部血清并保存于-20°C。 將最終血清根據(jù)其總蛋白質(zhì)濃度(雙縮脲法)和總免疫球蛋白濃度進(jìn)行表征。實(shí)施例2 純化兔總IgG用Sigma的pure IA試劑盒(#PURE1A)從包含抗天冬酰胺酶IgG的最終血清中純化兔總IgG。簡(jiǎn)言之，在純化IgG前通過離心或經(jīng)0.45 μ m濾器過濾而使2ml血清澄清。之后向2ml澄清血清中加入細(xì)1 “結(jié)合緩沖液”。按照Sigma推薦方案將混合物過柱后洗脫。 為了使其可注射入動(dòng)物，將總IgG置于閾值為10000道爾頓的過濾柱中離心以用PBS替換洗脫緩沖液。實(shí)施例3a 測(cè)量中間血清對(duì)L-天冬酰胺酶酶活性的抑制(混合物測(cè)定)L-Orsonneau "Automatic kinetic assay of plasmaL—asparaginase activity in therapeutic monitoring of acute lymphoblastic leukaemias，，，Ann Biol Clin，62 :568-572 發(fā)表的方案實(shí)施。首先使用中間血清(在第一次與第二次免疫之間獲得)來測(cè)量對(duì)酶活性的抑制。 所用L-天冬酰胺酶的濃度為2IU/ml。將所述酶與系列稀釋的血清一起于37°C預(yù)孵育15 分鐘，之后檢測(cè)混合物中的酶活性。結(jié)果如表1所示表權(quán)利要求
1.用于預(yù)測(cè)天冬酰胺酶是否可在患者中有活性的方法，其中對(duì)獲取自所述患者的樣品中中和天冬酰胺酶活性的因子的存在進(jìn)行體外測(cè)量，所述樣品為可能包含所述中和因子的血液、血漿、血清或衍生基質(zhì)的樣品。
2.權(quán)利要求1的方法，其包括將所述樣品與所述天冬酰胺酶混合，孵育所述混合物， 然后測(cè)量所述混合物中所述天冬酰胺酶的剩余活性，并確定所述中和因子的存在或?qū)ζ涠俊?br> 3.權(quán)利要求1或2的方法，其特征在于所述樣品來自目前正用天冬酰胺酶治療的患者， 或來自用天冬酰胺酶治療過的患者。
4.權(quán)利要求1至3中任一項(xiàng)的方法，其中通過向所述混合物中添加天冬酰胺和適于測(cè)定所述剩余酶活性的試劑系統(tǒng)來測(cè)量所述混合物中天冬酰胺酶的剩余活性。
5.權(quán)利要求4的方法，其包括以下階段(a)將所述樣品與已知量的所述天冬酰胺酶一起孵育；(b)將前述混合物與已知量的天冬酰胺一起孵育；(c)將前述混合物與所述適于測(cè)定所述剩余酶活性的試劑系統(tǒng)一起孵育；(d)定性或定量評(píng)價(jià)酶活性的損失或存留，其與所述樣品中所述天冬酰胺酶中和因子的存在或含量相關(guān)。
6.權(quán)利要求5的方法，其包括在(a)階段之前去除或失活所述樣品中可能存在的任何天冬酰胺酶的( )階段。
7.權(quán)利要求5的方法，其包括在(a)階段之前測(cè)量所述樣品中天冬酰胺酶基線含量的 (a0)階段。
8.權(quán)利要求4至7中任一項(xiàng)的方法，其中所述試劑系統(tǒng)對(duì)由于天冬酰胺酶酶促降解天冬酰胺而產(chǎn)生的銨離子的出現(xiàn)敏感。
9.權(quán)利要求8的方法，其利用定量消耗所述銨離子的反應(yīng)。
10.權(quán)利要求9的方法，其中通過測(cè)量所述混合物的光密度降低來測(cè)量所述銨離子的定量消耗。
11.權(quán)利要求4至10中任一項(xiàng)的方法，其利用如下反應(yīng)(1)天冬酰胺酶+天冬酰胺一天冬氨酸+NH4+(2)α -酮戊二酸+NH/+NADPH+谷氨酸脫氫酶(催化劑)—谷氨酸+NADP++H20
12.前述權(quán)利要求中的任一項(xiàng)的方法，其包括確定所述患者(i)對(duì)此形式天冬酰胺酶治療陽性應(yīng)答或(ii)對(duì)其不應(yīng)答或(iii)僅不完全應(yīng)答的能力。
13.權(quán)利要求12的方法，其包括在(ii)和(iii)的情況下決定用其它天冬酰胺酶治療所述患者。
14.權(quán)利要求12的方法，其包括在(i)的情況下決定用這種天冬酰胺酶治療所述患者。
15.權(quán)利要求13的方法，其中所述其它天冬酰胺酶是包含于生物載體中、優(yōu)選地包封于紅細(xì)胞中的天冬酰胺酶。
16.治療患者中天冬酰胺酶敏感性病理狀態(tài)的方法，其包括(A)實(shí)施體外確定患者對(duì)用給定形式的天冬酰胺酶(尤其是游離或經(jīng)修飾形式)治療的應(yīng)答能力的方法，其中對(duì)獲取自所述患者的可能包含天冬酰胺酶中和因子的血液、血漿、 血清或衍生基質(zhì)的樣品實(shí)施所述方法，其包括將所述樣品與所述形式的天冬酰胺酶混合，孵育所述混合物，然后測(cè)量所述混合物中剩余天冬酰胺酶活性以及所述患者(i)對(duì)這種形式的天冬酰胺酶治療陽性應(yīng)答或(ii)對(duì)其不應(yīng)答或(iii)僅不完全應(yīng)答的能力，和(B)在(i)的情況下用該天冬酰胺酶治療所述病理狀態(tài)，或在(ii)和(iii)的情況下用其它形式的天冬酰胺酶治療所述病理狀態(tài)。
17.權(quán)利要求16的方法，其中所述其它形式由包含所述天冬酰胺酶的生物載體組成， 優(yōu)選由包封了所述天冬酰胺酶的紅細(xì)胞組成。
全文摘要
一種體外測(cè)量獲取自患者的可能含有天冬酰胺酶中和因子的血液、血漿、血清或衍生基質(zhì)樣品中能中和天冬酰胺酶活性之因子的存在的方法，其包括將所述樣品與天冬酰胺酶混合，孵育所述混合物，然后測(cè)量混合物中剩余的天冬酰胺酶活性并確定所述中和因子的存在或?qū)ζ涠?。用于預(yù)測(cè)天冬酰胺酶治療效果的方法。
文檔編號(hào)C12Q1/37GK102272323SQ200980154044
公開日2011年12月7日 申請(qǐng)日期2009年11月6日 優(yōu)先權(quán)日2008年11月7日
發(fā)明者揚(yáng)·戈德弗蘭 申請(qǐng)人:愛瑞泰克藥物公司