專利名稱：一種干燥保存活性乳酸菌的方法及乳酸菌制劑的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種干燥保存活性乳酸菌的方法及乳酸菌制劑。
背景技術(shù)：
乳酸菌制劑是一種很有效的畜禽養(yǎng)殖用活菌制劑，能改善畜禽的消化和健康水 平。但是乳酸菌普遍對(duì)熱和氧氣都很敏感，乳酸菌一般都是液體培養(yǎng)，成品的干燥和保存對(duì) 產(chǎn)品的質(zhì)量起著決定性作用。采用常規(guī)的氣流干燥，乳酸菌的活性損失一般都要超過(guò)90%以上。即使采用瞬時(shí) 噴霧干燥，活力損失也要超過(guò)85%。干燥后的制劑，在20°C條件下，在空氣中暴露24小時(shí)， 活力損失會(huì)達(dá)到40%以上，給實(shí)際推廣使用造成了很大困難。近年來(lái)，世界各地的畜牧科研工作者在活性乳酸菌的干燥保存方面進(jìn)行了大量研 究，提出了很多高科技的方法，其中比較常用的方法是抽真空冷凍干燥和包埋造粒。真空冷 凍干燥需要消耗大量的電力，生產(chǎn)成本極高，處理1公斤培養(yǎng)液至少需要30元。如果培養(yǎng) 液的干物質(zhì)含量以5.0%計(jì)算，每公斤干燥成品的加工費(fèi)用至少在600元以上。包埋造粒是 在氣流干燥的同時(shí)與載體(一般是一些纖維化合物)快速混合、流態(tài)化造粒，與真空冷凍干 燥相比，操作成本明顯下降，每公斤成品的加工費(fèi)用在20-30元左右，載體的重量約占成品 總量的60%，但是造粒過(guò)程中活性乳酸菌的損失也很高，至少達(dá)到80%以上。傳統(tǒng)的微生物培養(yǎng)液的干燥都是設(shè)法先除去培養(yǎng)液中的自由水。但是對(duì)于乳酸菌 培養(yǎng)液來(lái)說(shuō)，除水是比較困難的單元操作，即使是高濃度的乳酸菌培養(yǎng)液，其含水量一般都 超過(guò)90%，干物質(zhì)的含量不超過(guò)10%，除水通常需要較長(zhǎng)的時(shí)間。對(duì)于厭氧的乳酸菌來(lái)說(shuō)， 與空氣接觸時(shí)間越長(zhǎng)，活力損失也越大。采用氣流干燥的方式除水，在實(shí)際生產(chǎn)中有很大的 困難。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供一種制備乳酸菌菌劑的方法。本發(fā)明所提供的制備乳酸菌菌劑的方法，是將乳酸菌菌體或乳酸菌菌液與特定含 水量的載體混合，得到混合物，即為乳酸菌菌劑。上述方法中，所述特定含水量為5%-8%或5%-7%或6%-8%，具體為5%、6%、 7%或8%，所述百分含量為質(zhì)量百分含量。上述方法中，所述乳酸菌菌液中乳酸菌的濃度為4. 12X109cfu/g-2.0X10ncfu/ g 或 4. 12X109cfu/g-4. 2X10lclcfu/g 或 4. 37X 109cfu/g-2. OXlO^cfu/g，具體為 4. 12X 109cfu/g、4. 37X 109cfu/g、4. 2X1010cfu/g 或 2. 0 X 10ncfu/g。上述方法中，所述乳酸菌菌液的含水量為85 % -99 %或91 % -96 %或 91. 6% -95. 8%或 91. 6% -95. 7%或 91. 6% -93. 0%或 91. 8% -95. 8%或 91. 8% -95. 7% 或93. 0% -95. 8%，具體為91. 6%,91. 8%,93. 0%,95. 7%或95. 8%，所述百分含量為質(zhì)量 百分含量。
上述方法中，所述特定含水量的載體是將原始載體按照包括如下步驟的方法進(jìn)行 處理得到的將所述原始載體在溫度為90°C -120°C或90°C或120°C的條件下氣流干燥，至 得到所述特定含水量的載體；所述氣流干燥的時(shí)間為2小時(shí)；上述方法中，在所述氣流干燥后，在所述混合前，包括如下冷卻步驟將所述特定 含水量的載體冷卻至40°C以下；上述方法中，所述乳酸菌菌液是按照如下方法1)或2)得到的1)發(fā)酵培養(yǎng)所述乳酸菌，得到的發(fā)酵容器內(nèi)的所有物質(zhì)即為所述乳酸菌菌液；和 /或，所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件為溫度為35°C _42°C或35°C或42°C，密封厭氧、時(shí)間為11小 時(shí)-24小時(shí)或11小時(shí)或24小時(shí)；2)將所述乳酸菌與水混合，得到的混合物即為所述乳酸菌菌液；和/或，所述1)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為如下a)或b)或c)所示a)紅糖與純牛奶的混合物，其中純牛奶與紅糖的質(zhì)量配比為92 8 ；b)白砂糖與純牛奶的混合物，其中純牛奶與白砂糖的質(zhì)量配比為92 8 ；c)紅糖與豆?jié){的混合物，其中豆?jié){與紅糖的質(zhì)量配比為94 6;所述豆?jié){為蛋白 質(zhì)濃度為2. 0% (質(zhì)量百分含量)的豆?jié){；和/或，所述乳酸菌菌體為培養(yǎng)所述乳酸菌后得到的濕菌體。上述方法中，所述乳酸菌為禽畜用乳酸菌(主要是以細(xì)菌為主，進(jìn)行同型乳酸發(fā) 酵乳酸菌、異型乳酸發(fā)酵乳酸菌、兼型乳酸發(fā)酵乳酸菌和雙歧乳酸發(fā)酵乳酸菌)；所述禽畜用乳酸菌為嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、發(fā)酵乳 If 胃(Lactobacillus fermentium)、才直 ？L If |if (Lactobacillus piantarum)、^ ■ 乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、動(dòng)物雙歧桿菌、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、屎腸球菌(Enterococcus faecium)、或獎(jiǎng)腸球菌(Enterococcus faecalis)；所述嗜熱鏈球菌(Str印tococcus thermophilus)為嗜熱鏈球菌 (Streptococcusthermophilus)CGMCC No. 1. 1864，所述發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus ferment ium)為發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus ferment ium) CGMCC 1. 880，所述植物乳 桿菌(Lactobacillusplantarum)為植物乳桿菌(Lactobacillus piantarum)CGMCC 1. 485，所述嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)為嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC 1. 1878，所述唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)為唾液乳桿菌 (Lactobacillus salivarius)CGMCC 1. 1881，所述原腸王求菌(Enterococcus faecium) ^jM 腸球菌(Enterococcusfaecium) CGMCC 1. 2025,所述獎(jiǎng)腸球菌(Enterococcus faecalis) 為糞腸球菌(Enterococcus faecalis)CGMCC 1.101。上述方法中，所述原始載體或所述特定含水量的載體為禽畜飼料原料；所述禽畜飼料原料為麥粉、麥麩和/或玉米粉；所述原始載體的含水量為14% (質(zhì)量百分含量)。上述方法中，所述特定含水量的載體與所述乳酸菌菌液的質(zhì)量比為 920kg (60kg-160kg)或 920kg (60kg_140kg)或 920kg (60kg_120kg)或 920kg (60kg-100kg)或 920kg (80kg_160kg)或 920kg (80kg_140kg)或 920kg (80kg-120kg)或 920kg (100kg_160kg)或 920kg (100kg_140kg)或920kg (120kg-160kg)，具體為 920kg 60kg,920kg 80kg,920kg 100kg、 920kg 120kg,920kg 140kg 或 920kg 160kg。上述方法中，所述乳酸菌菌劑中所述乳酸菌的濃度為3. 36X 109cfu/ g-1. 23X1010cfu/g 或 3. 36X 109cfu/g-6. 18X 109cfu/g 或 3. 36 X 109cfu/g-5. 5X109cfu/g 或 3. 36 X 109cfu/g-4. 37 X 109cfu/g 或 4. 12 X 109cfu/g-l. 23 X 1010cfu/g 或 4. 12 X 109cfu/ g-6. 18X109cfu/g 或 4. 12X109cfu/g-5. 5X109cfu/g 或 4. 37 X 109cfu/g-l. 23X1010cfu/ g 或 4. 37X 109cfu/g-6. 18X109cfu/g 或 5. 5X109cfu/g-l. 23X10lclcfu/g，具體為 3. 36X 109cfu/g、4. 12X 109cfu/g、4. 37 X 109cfu/g、5. 5 X 109cfu/g、6. 18X 109cfu/g 或 1. 23X1010cfu/g ；上述方法中，所述乳酸菌菌劑的含水量為10% -25%或11% -19%或11% -17% 或 11% -16% 或 11% -14% 或 13% -19% 或 13% -17% 或 13% -16% 或 14% -19% 或 14% -17%或 15% -19%，具體為 11. 27%或 12. 88%或 14. 43%或 15. 92%或 17. 36%或 18. 74%，所述百分含量為質(zhì)量百分含量。由上述任一所述方法得到的乳酸菌菌劑也屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。所述乳酸菌制 劑為禽畜用乳酸菌菌劑。本發(fā)明的最后一個(gè)目的是提供一種干燥保存活性乳酸菌的方法，是按照上述任一 所述制備乳酸菌菌劑的方法進(jìn)行操作，即干燥保存了活性乳酸菌。本發(fā)明是用經(jīng)過(guò)干燥的麥麩、麥粉或者玉米粉為載體(含水量在5. 0%左右)，吸 附乳酸菌菌液，使混合物的水分含量在11-20%之間，從而使乳酸菌處于休眠狀態(tài)，不易失 活。將干燥冷卻后的載體以大比例與乳酸菌培養(yǎng)液混合，可以迅速地吸附培養(yǎng)液中的游離 水。實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明方法使菌劑活菌損失小、質(zhì)量穩(wěn)定，保質(zhì)期長(zhǎng)、使用效果更佳，省去了乳 酸菌菌液的脫水操作步驟，顯著提高活性乳酸菌的回收率。另外，本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)便，大 大降低了生產(chǎn)成本。雖然成品中乳酸菌的濃度比較低，但是由于生產(chǎn)成本很低，對(duì)于畜禽用 乳酸菌制劑來(lái)說(shuō)，添加的比例可以比較大，只要載體是飼料原料，就不會(huì)對(duì)飼料的營(yíng)養(yǎng)配比 造成困難。
具體實(shí)施例方式下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無(wú)特殊說(shuō)明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無(wú)特殊說(shuō)明，均可從商業(yè)途徑得到。干燥保存方法包括如下步驟1、載體的干燥，2、乳酸菌菌液的獲得，3、干燥載體與 乳酸菌菌液混合，4、保存。載體可為禽畜飼料，具體可為麥麩(麥麩可以事先經(jīng)過(guò)粉碎過(guò)篩)、麥粉、或者玉 米粉。此類載體的正常含水量一般在14%左右。1、含水量的檢測(cè)方法及計(jì)算方法參照GB/T6435-2006 (等同于IS06496 1999)。2、檢測(cè)菌劑中菌的存活率和活菌損失情況的方法如下取l.OOg樣品，用無(wú)菌生理鹽水做梯度稀釋。取稀釋度為10_5至10_7的稀釋液 0. 5mL，均勻涂布在固體瓊脂培養(yǎng)基上。每個(gè)稀釋度做5個(gè)重復(fù)，在37°C厭氧培養(yǎng)48小時(shí)， 統(tǒng)計(jì)形成的菌落數(shù)量。樣品中活性乳酸菌數(shù)量A = DXN/0. 5
D 樣品的稀釋倍數(shù)；N 對(duì)應(yīng)稀釋度下的平均菌落數(shù)；0. 5 取樣量(0. 5mL)。配制 無(wú)菌生理鹽水配制濃度為0. 9%的氯化鈉溶液lOOOmL，在120°C消毒滅菌30分鐘，自然冷
卻后備用?；罹鷵p失情況的表征X = 100% X (A0-Ax)/A。；(X 活菌損失率-X 產(chǎn)品中起始活菌含量；AX 在測(cè)定時(shí)產(chǎn)品中的活菌含量)表1-1、固體瓊脂培養(yǎng)基的組成 酵母浸出汁粉購(gòu)自上海億欣生物工程有限公司，產(chǎn)品目錄號(hào)為L(zhǎng)P0021。下面詳細(xì)說(shuō)明實(shí)施例1、活性乳酸菌的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌劑一、菌劑的制備方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)(一)載體的干燥載體為麥粉。選取常規(guī)的無(wú)霉變商品大麥，粉碎，過(guò)20目篩。對(duì)麥粉進(jìn)行120°C氣流干燥2小時(shí)，檢測(cè)其含水量。結(jié)果表明，干燥后的麥粉的含 水量為5% (質(zhì)量百分含量)。將干燥后的麥粉收集在緩沖倉(cāng)內(nèi)，抽氣冷卻至40°C。
如果緩沖倉(cāng)內(nèi)的物料不超過(guò)1噸，冷卻時(shí)間一般不超過(guò)2小時(shí)，干燥后麥粉的含水 量只增加0. 3%左右，對(duì)后續(xù)的吸附操作影響很小。必要時(shí)可在冷卻完成后，將干燥后的麥 粉進(jìn)行抽真空包裝以防止吸濕回潮，包裝袋的容量在10-50公斤之間比較合適。( 二)乳酸菌菌液的獲得乳酸菌為嗜熱鏈球菌(Str印tococcus thermophilus，也稱為唾液鏈球菌嗜熱亞 種Str印tococcus salivarius) CGMCC No. 1. 1864，購(gòu)自中國(guó)微生物菌種保藏管理委員會(huì)普 通微生物中心(簡(jiǎn)稱CGMCC)。嗜熱鏈球菌種子液的培養(yǎng)方法如下將嗜熱鏈球菌接種于種子培養(yǎng)基(表1-2) 中，在37°C恒溫培養(yǎng)30小時(shí)，得到嗜熱鏈球菌種子液。表1-2、種子培養(yǎng)基組成 將嗜熱鏈球菌的種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中(接種量為0. 5% )，在35°C條件下密 封厭氧培養(yǎng)11小時(shí)，得到的發(fā)酵容器內(nèi)的所有物質(zhì)即為嗜熱鏈球菌菌液，其中活菌的濃度 為Z-OXlO^cfu/g。菌液中干物質(zhì)的百分含量為7.0%左右(即菌液的含水量為93.0%，
質(zhì)量百分含量)。發(fā)酵培養(yǎng)基按照如下方法配制將紅糖(或白砂糖)溶解于無(wú)抗生素(或抗生素 殘留量不超過(guò)0.5mg/kg)的純牛奶中，純牛奶與紅糖(或白砂糖)的質(zhì)量配比為92 8，得 到培養(yǎng)基。將培養(yǎng)基在95°C至105°C條件下消毒10分鐘至15分鐘，冷卻至40°C以下。(三)干燥載體與乳酸菌菌液混合取920kg含水量為5%的麥粉與60kg乳酸菌菌液混合，得到980kg混合物，即為乳 酸菌劑成品；檢測(cè)乳酸菌劑成品的含水量和活菌情況。菌劑成品的組成如下菌劑由本實(shí)施例中的乳酸菌菌液與含水量為5%的麥粉組成，乳酸菌菌液與含水量為5%的麥粉的質(zhì)量比為15.3 1 ；菌劑的含水量為11. 27%，菌 劑中乳酸菌的起始濃度為1.23X101(lCfU/g。(四)包裝保存將制備得到的乳酸菌制劑成品裝于致密性很好的包裝袋中，抽真空密封。二、菌劑的保存期及活菌損失情況將真空包裝的菌劑置于常溫中保存，在保存時(shí)間為1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月時(shí)，分別 檢測(cè)菌劑中活菌損失情況。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)。將菌劑在環(huán)境溫度為25°C的環(huán)境下保存，結(jié)果參見表1-3 表1-3 嗜熱鏈球菌制劑保存試驗(yàn)(25°C )，真空保存，含水量11. 27% 實(shí)施例2、活性乳酸的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌劑一、菌劑的制備方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)(一 )載體的干燥載體為玉米粉。干燥方法與實(shí)施例1中所述相同，干燥后的玉米粉的含水量為7%。將干燥后的玉 米粉冷卻至40°C。必要時(shí)可在冷卻完成后，將干燥后的玉米粉進(jìn)行抽真空包裝以防止吸濕回潮。( 二)乳酸菌菌液的獲得乳酸菌為發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentium)CGMCC 1.880，購(gòu)自中國(guó)微生 物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。下述發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus ferment ium)的培養(yǎng)方法為現(xiàn)有技術(shù)。發(fā)酵乳桿菌種子液的獲得方法將發(fā)酵乳桿菌接種于種子培養(yǎng)基中，在37°C恒溫培養(yǎng)26小時(shí)，得到發(fā)酵乳桿菌種 子液。表2-1、種子培養(yǎng)基 將乳酸菌種子液接種于發(fā)酵培養(yǎng)基中，接種量為2.0%，在42°C條件下密封厭 氧培養(yǎng)24小時(shí)，得到的發(fā)酵容器內(nèi)的所有物質(zhì)即為發(fā)酵乳桿菌菌液，其中活菌的濃度 為4.2X101(lCfU/g菌液，菌液中干物質(zhì)的質(zhì)量百分含量為8.4% (即菌液的含水量為 91. 6% )。發(fā)酵培養(yǎng)基按照如下方法配制向蛋白質(zhì)濃度為2.0% (質(zhì)量百分含量)的豆?jié){ 中加入紅糖(豆?jié){與紅糖的質(zhì)量配比為94 6)，在40°C至80°C條件下緩慢溶解。接著在 95°C至105°C條件下消毒15分鐘至20分鐘，冷卻至40°C以下。(三)干燥載體與乳酸菌菌液混合取920kg含水量為7%的玉米粉與80kg乳酸菌菌液混合，得到1000kg混合物，即 為乳酸菌劑成品；檢測(cè)乳酸菌劑成品的含水量，檢測(cè)乳酸菌劑成品中活菌情況。菌劑由本實(shí)施例中的乳酸菌菌液與含水量為7%的玉米粉混合而成，乳酸菌菌液 與干燥的玉米粉的質(zhì)量比為11. 5 1 ；菌劑的含水量為12. 88%，菌劑成品中乳酸菌的濃度 為 3. 36X 109cfu/go(四)包裝保存將制備得到的乳酸菌制劑成品裝于致密性很好的包裝袋中，抽真空密封。二、菌劑的保存期及活菌損失情況將真空包裝的菌劑置于常溫中保存，在保存時(shí)間為1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月時(shí)，分別 檢測(cè)菌劑中菌存活率情況。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)。菌的存活率如表2-2所示。表2-2 發(fā)酵乳桿菌制劑保存試驗(yàn)(25 °C )，真空保存，含水量12. 88% 實(shí)施例3、活性乳酸的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌劑一、菌劑的制備方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)(一)載體的干燥載體為麥麩。對(duì)麥麩進(jìn)行90°C氣流干燥2小時(shí)，檢測(cè)其含水量，結(jié)果表明，干燥后的麥麩的含水量為8%。將干燥后的麥麩冷卻至40°C。必要時(shí)可在冷卻完成后，將干燥后的麥麩進(jìn)行抽真空包裝以防止吸濕回潮。(二)乳酸菌菌液的獲得乳酸菌為發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentium)CGMCC 1.880，購(gòu)自中國(guó)微生 物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。乳酸菌培養(yǎng)方法與實(shí)施例2中所述相同。得到的菌液中活菌的濃度為 4. 2 X 1010cfu/g菌液，菌液的含水量為95.8%。(三)干燥載體與乳酸菌菌液混合取920kg含水量為8%的麥麩與100kg乳酸菌菌液混合，得到1020kg混合物，即為 乳酸菌劑成品；檢測(cè)乳酸菌劑成品的含水量，檢測(cè)乳酸菌劑成品中活菌損失情況。菌劑由本實(shí)施例中的乳酸菌菌液與含水量為8%的麥麩混合而成，乳酸菌菌液與 含水量為8%的麥麩的質(zhì)量比為9. 2 1 ；菌劑的含水量為14. 43%，菌劑中乳酸菌的濃度 為 4. 12X109cfu/go(四)包裝保存將制備得到的乳酸菌制劑成品裝于致密性很好的包裝袋中，抽真空密封。二、菌劑的保存期及活菌損失情況將真空包裝的菌劑置于常溫中保存，在保存時(shí)間為10天、1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月時(shí)， 分別檢測(cè)菌劑中活菌損失情況。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，菌的存活率如表3所示。表3 發(fā)酵乳桿菌制劑保存試驗(yàn)(25°C )，真空保存，含水量14. 43% 實(shí)施例4、活性乳酸的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌劑一、菌劑的制備方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)(一)載體的干燥載體為玉米粉。對(duì)玉米粉進(jìn)行90°C氣流干燥2小時(shí)，檢測(cè)其含水量，結(jié)果表明，干燥后的玉米粉的 含水量為6%。將干燥后的玉米粉冷卻至40°C。必要時(shí)可在冷卻完成后，將干燥后的玉米粉進(jìn)行抽真空包裝以防止吸濕回潮。(二)乳酸菌菌液的獲得乳酸菌為植物乳桿菌(Lactobacillus pi ant arum) CGMCC 1.485購(gòu)自中國(guó)微生物
菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。乳酸菌培養(yǎng)方法如實(shí)施例2中所述。得到的菌液中活菌的濃度為3. 8X 101(lCfU/g 菌液，菌液的含水量為95.7%。(三)干燥載體與乳酸菌菌液混合取920kg含水量為6%的玉米粉與120kg乳酸菌菌液混合，得到1040kg混合物，即 為乳酸菌劑成品；檢測(cè)乳酸菌劑成品的含水量，檢測(cè)乳酸菌劑成品中活菌損失情況。
菌劑由本實(shí)施例中的乳酸菌菌液與含水量為6%的玉米粉混合而成，乳酸菌菌液 與含水量為6%的玉米粉的質(zhì)量比為7. 7 1 ；菌劑的含水量為15. 92%，菌劑中乳酸菌的 濃度為 4. 37X 109cfu/g。(四)包裝保存將制備得到的乳酸菌制劑成品裝于致密性很好的包裝袋中，抽真空密封。二、菌劑的保存期及活菌損失情況將真空包裝的菌劑置于常溫中保存，在保存時(shí)間為1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月時(shí)，分別 檢測(cè)菌劑中活菌損失情況。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)。結(jié)果參見表4:表4 植物乳桿菌制劑保存試驗(yàn)(25 °C )，真空保存，含水量15. 92% 實(shí)施例5、活性乳酸的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌劑一、菌劑的制備方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)(一)載體的干燥載體為麥粉。對(duì)麥粉進(jìn)行90°C氣流干燥2小時(shí)，檢測(cè)其含水量，結(jié)果表明，干燥后的麥粉的含水 量為5%。將干燥后的麥粉冷卻至40°C。必要時(shí)可在冷卻完成后，將干燥后的麥粉進(jìn)行抽真空包裝以防止吸濕回潮。(二)乳酸菌菌液的獲得乳酸菌為發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentium)CGMCC 1.880，購(gòu)自中國(guó)微生 物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。乳酸菌培養(yǎng)方法與實(shí)施例2中所述相同。得到的菌液中活菌的濃度為 4. 2 X 1010cfu/g菌液，菌液的含水量為95.7%。(三)干燥載體與乳酸菌菌液混合取920kg干燥后的麥粉與140kg乳酸菌菌液混合，得到1060kg混合物，即為乳酸 菌劑成品；檢測(cè)乳酸菌劑成品的含水量，檢測(cè)乳酸菌劑成品中活菌損失情況。菌劑由本實(shí)施例中的乳酸菌菌液與干燥的麥粉混合而成，乳酸菌菌液與干燥的麥 粉的質(zhì)量比為6.6 1 ；菌劑的含水量為17.36%，菌劑中乳酸菌的濃度為5.5\109(^\1/8。(四)包裝保存將制備得到的乳酸菌制劑成品裝于致密性很好的包裝袋中，抽真空密封。二、菌劑的保存期及活菌損失情況將真空包裝的菌劑置于常溫中保存，在保存時(shí)間為1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月時(shí)，分別 檢測(cè)菌劑中活菌損失情況。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，菌的存活率如表5所示。表5 發(fā)酵乳桿菌制劑保存試驗(yàn)(25 °C )，真空保存，含水量17. 36% 實(shí)施例6、活性乳酸的干燥保存方法及得到的乳酸菌菌劑一、菌劑的制備方法(也即活性乳酸菌的干燥保存方法)(一)載體的干燥載體為麥麩。對(duì)麥麩進(jìn)行90°C氣流干燥2小時(shí)，檢測(cè)其含水量，結(jié)果表明，干燥后的麥麩的含水 量為6%。將干燥后的麥麩冷卻至40°C。必要時(shí)可在冷卻完成后，將干燥后的麥麩進(jìn)行抽真空包裝以防止吸濕回潮。(二)乳酸菌菌液的獲得乳酸菌為發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus fermentium)CGMCC 1.880，購(gòu)自中國(guó)微生 物菌種保藏管理委員會(huì)普通微生物中心。乳酸菌培養(yǎng)方法與實(shí)施例1中所述相同。得到的菌液中活菌的濃度為 4. 2X 1010cfu/g菌液，菌液的含水量為91.8%。(三)干燥載體與乳酸菌菌液混合取920kg干燥后的麥麩與160kg乳酸菌菌液混合，得到1080kg混合物，即為乳酸 菌劑成品；檢測(cè)乳酸菌劑成品的含水量，檢測(cè)乳酸菌劑成品中活菌損失情況。菌劑由本實(shí)施例中的乳酸菌菌液與干燥的麥麩混合而成，乳酸菌菌液與干燥的麥 麩的質(zhì)量比為5.8 1;菌劑的含水量為18.74%，菌劑中乳酸菌的濃度為6.18\109(^\1/8。(四)包裝保存將制備得到的乳酸菌制劑成品裝于致密性很好的包裝袋中，抽真空密封。二、菌劑的保存期及活菌損失情況將真空包裝的菌劑置于常溫中保存，在保存時(shí)間為1個(gè)月、3個(gè)月、6個(gè)月時(shí)，分別 檢測(cè)菌劑中活菌損失情況。實(shí)驗(yàn)設(shè)3次重復(fù)，菌的存活率如表6所示。表6:發(fā)酵乳桿菌制劑保存試驗(yàn)(25°C)，真空保存，含水量18. 74% 綜上所述，成品含水量不超過(guò)15%時(shí)，菌劑保存6個(gè)月后，活菌損失不超過(guò)50%， 完全可以滿足實(shí)際應(yīng)用的要求。在畜禽飼料中添加0. 至0.3%就能顯著改善畜禽的健 康狀況，養(yǎng)殖場(chǎng)的氨味明顯減少。在工業(yè)化干燥操作中，高溫氣流干燥1噸含水量為14%的麥粉，最終含水量達(dá)到 5%,即獲得干燥成品約900公斤，需要的操作費(fèi)用約250元(包括電耗、煤耗和人工費(fèi))。這 些載體可以吸附干物質(zhì)含量為10%的高濃度乳酸菌培養(yǎng)液100公斤，獲得活菌濃度降低10 倍的活菌制劑1噸，含水量仍然為14%左右；若每kg成品一個(gè)單獨(dú)真空包裝，整個(gè)1000kg成品的總生產(chǎn)成本不超過(guò)4000元，因此，本發(fā)明方法大大降低了生產(chǎn)成本。
權(quán)利要求
一種制備乳酸菌菌劑的方法，是將乳酸菌菌體或乳酸菌菌液與特定含水量的載體混合，得到混合物，即為乳酸菌菌劑。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于所述特定含水量為5%-8%或5% -7% 或6% -8%，具體為5%、6%、7%或8%，所述百分含量為質(zhì)量百分含量。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的方法，其特征在于所述乳酸菌菌液中乳酸菌的濃度 為 4. 12X 109cfu/g-2. OX 10ncfu/g 或 4. 12X 109cfu/g-4. 2X1010cfu/g 或 4. 37X 109cfu/ g-2. OX 10ncfu/g,具體為 4. 12X 109cfu/g、4. 37X 109cfu/g、4. 2X 10lclcfu/g 或 2. OXlO^cfu/g。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3中任一所述的方法，其特征在于所述乳酸菌菌液的含水量 為 85 % -99 % 或 91 % -96 % 或 91. 6 % -95. 8 % 或 91. 6 % -95. 7 % 或 91. 6 % -93. 0 % 或 91. 8% -95. 8 %或 91. 8 % -95. 7 % 或 93. 0 % -95. 8%,具體為 91. 6%,91.8%,93. 0 95. 7%或95. 8%，所述百分含量為質(zhì)量百分含量。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4中任一所述的方法，其特征在于權(quán)利要求2-4中任一所述特定 含水量的載體是將原始載體按照包括如下步驟的方法進(jìn)行處理得到的將所述原始載體在 溫度為90°C -120°C或90°C或120°C的條件下氣流干燥，至得到所述特定含水量的載體；和 /或，所述氣流干燥的時(shí)間為2小時(shí)；和/或，所述方法中，在所述氣流干燥后，在所述混合前，包括如下冷卻步驟將所述特 定含水量的載體冷卻至40°C以下；和/或，所述乳酸菌菌液是按照如下方法1)或2)得到的1)發(fā)酵培養(yǎng)所述乳酸菌，得到的發(fā)酵容器內(nèi)的所有物質(zhì)即為所述乳酸菌菌液；和/或， 所述發(fā)酵培養(yǎng)的條件為溫度為35°C _42°C或35°C或42°C，密封厭氧、時(shí)間為11小時(shí)-24 小時(shí)或11小時(shí)或24小時(shí)；，2)將所述乳酸菌與水混合，得到的混合物即為所述乳酸菌菌液；和/或，所述1)中，所述發(fā)酵培養(yǎng)所用的培養(yǎng)基為如下a)或b)或c)所示a)紅糖與純牛奶的混合物，其中純牛奶與紅糖的質(zhì)量配比為92 8；b)白砂糖與純牛奶的混合物，其中純牛奶與白砂糖的質(zhì)量配比為92 8；c)紅糖與豆?jié){的混合物，其中豆?jié){與紅糖的質(zhì)量配比為94 6;所述豆?jié){為蛋白質(zhì)濃 度為2. 0% (質(zhì)量百分含量)的豆?jié){；和/或，所述乳酸菌菌體為培養(yǎng)所述乳酸菌后得到的濕菌體。
6.根據(jù)權(quán)利要求1-5中任一所述的方法，其特征在于所述乳酸菌為禽畜用乳酸菌；或，所述禽畜用乳酸菌為嗜熱鏈球菌(Streptococcus thermophilus)、發(fā)酵乳If |if (Lactobacillus ferment ium)、才直 ？L If |if (Lactobacillus pi ant arum)、^ ■ 乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)、動(dòng)物雙歧桿菌、唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)、屎腸球菌(Enterococcus faecium)、或獎(jiǎng)腸球菌(Enterococcus faecalis)；或，所述嗜熱鏈球菌(Str印tococcus thermophilus)為嗜熱鏈球菌 (Streptococcusthermophilus)CGMCC No. 1. 1864，所述發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus ferment ium)為發(fā)酵乳桿菌(Lactobacillus ferment ium) CGMCC 1. 880，所述植物乳 桿菌(Lactobacillusplantarum)為植物乳桿菌(Lactobacillus piantarum)CGMCC(1. 485，所述嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)為嗜酸乳桿菌(Lactobacillus acidophilus)CGMCC 1. 1878，所述唾液乳桿菌(Lactobacillus salivarius)為唾液乳桿菌 (Lactobacillus salivarius)CGMCC 1. 1881，所述原腸王求菌(Enterococcus faecium) ^jM 腸球菌(Enterococcusfaecium) CGMCC 1. 2025,所述獎(jiǎng)腸球菌(Enterococcus faecalis) 為糞腸球菌(Enterococcus faecalis)CGMCC 1. 101 ；和/或，所述原始載體或所述特定含水量的載體為禽畜飼料原料；和/或，所述禽畜飼 料原料為麥粉、麥麩和/或玉米粉；和/或，所述原始載體的含水量為14% (質(zhì)量百分含 量)O
7.根據(jù)權(quán)利要求1-6中任一所述的方法，其特征在于所述特定含水量的載體 與所述乳酸菌菌液的質(zhì)量比為920kg (60kg-160kg)或920kg (60kg-140kg) 或 920kg (60kg-120kg)或 920kg (60kg-100kg)或 920kg (80kg-160kg)或 920kg (80kg-140kg)或 920kg (80kg_120kg)或 920kg (100kg_160kg)或 920kg (100kg-140kg)或 920kg (120kg_160kg)，具體為 920kg 60kg,920kg 80kg、 920kg 100kg,920kg 120kg,920kg 140kg 或920kg 160kg。
8.根據(jù)權(quán)利要求1-7中任一所述的方法，其特征在于所述乳酸菌菌劑中所述乳酸 菌的濃度為 3. 36X 109cfu/g-l. 23X1010cfu/g 或 3. 36 X 109cfu/g-6. 18X109cfu/g 或 3. 36X 109cfu/g-5. 5X 109cfu/g 或 3. 36 X 109cfu/g-4. 37X 109cfu/g 或 4. 12X 109cfu/ g-1. 23X1010cfu/g 或 4. 12X109cfu/g-6. 18X 109cfu/g 或 4. 12 X 109cfu/g-5. 5X109cfu/g 或 4. 37X 109cfu/g-l. 23X1010cfu/g 或 4. 37 X 109cfu/g-6. 18X109cfu/g 或 5. 5X109cfu/ g-1. 23X 1010cfu/g,具體為 3. 36X 109cfu/g、4. 12X 109cfu/g、4. 37X 109cfu/g、 5. 5X 109cfu/g、6. 18X109cfu/g 或 1. 23X1010cfu/g ；所述乳酸菌菌劑的含水量為10% -25%或11% -19%或11% -17%或11% -16% 或 11% -14% 或 13% -19% 或 13% -17% 或 13% -16% 或 14% -19% 或 14% -17% 或 15% -19%，具體為 11. 27%或 12. 88%或 14. 43%或 15. 92%或 17. 36%或 18. 74%，所述百 分含量為質(zhì)量百分含量。
9.由權(quán)利要求1-8中任一所述方法獲得的乳酸菌菌劑。
10.一種干燥保存活性乳酸菌的方法，是按照權(quán)利要求1-8中任一所述制備乳酸菌菌 劑的方法進(jìn)行操作，即干燥保存了活性乳酸菌。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種干燥保存活性乳酸菌的方法及乳酸菌制劑。本發(fā)明的制備乳酸菌菌劑的方法，是將乳酸菌菌體或乳酸菌菌液與特定含水量的載體混合，得到混合物，即為乳酸菌菌劑。實(shí)驗(yàn)證明本發(fā)明方法使菌劑活菌損失小、質(zhì)量穩(wěn)定，保質(zhì)期長(zhǎng)、使用效果更佳，省去了乳酸菌菌液的脫水操作步驟，顯著提高活性乳酸菌的回收率。另外，本發(fā)明方法操作簡(jiǎn)便，大大降低了生產(chǎn)成本。雖然成品中乳酸菌的濃度比較低，但是由于生產(chǎn)成本很低，對(duì)于畜禽用乳酸菌制劑來(lái)說(shuō)，添加的比例可以比較大，只要載體是飼料原料，就不會(huì)對(duì)飼料的營(yíng)養(yǎng)配比造成困難。
文檔編號(hào)C12N1/20GK101843296SQ20101016863
公開日2010年9月29日 申請(qǐng)日期2010年5月4日 優(yōu)先權(quán)日2010年5月4日
發(fā)明者曹云鶴, 李德發(fā), 胡婷, 董冰, 陸文清 申請(qǐng)人:中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)