專利名稱:用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法
技術領域:
本發(fā)明屬于生物工程技術領域,涉及一種生產(chǎn)乙醇的方法,更具體地是涉及一種 用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法。
背景技術:
甜高粱是高光效C4作物,其生物學產(chǎn)量極高,一般每公頃可生產(chǎn)糧食2. 25 6t、 鮮莖稈60 75t,莖稈富含糖分,汁液含量高達50% 70%,含糖量12% 22%。甜高粱 產(chǎn)量高,栽培容易,用途極廣,加之莖稈中所含的糖極易轉化為乙醇,每公頃僅莖稈就可產(chǎn) 乙醇大約7875L,而乙醇又是汽油的代用品,僅從國家能源安全,經(jīng)濟發(fā)展和環(huán)境保護方面 講,以甜高粱為原料發(fā)展燃料乙醇有廣闊的前景。印度的試驗結果表明,每公頃甘蔗的酒精 產(chǎn)量為4000 5000L/年,而甜高粱可達5700-6500L/年。美國每公頃甜高粱每年的酒精 產(chǎn)量達6106L,而號稱太陽能最有效轉換器的甘蔗只有4680L。以甜高粱為原料生產(chǎn)乙醇過程中有其優(yōu)點,也有其缺點。主要的優(yōu)點是生物質經(jīng) 簡單加工后就可以直接發(fā)酵利用,不需酶處理。主要缺點包括季節(jié)性、糖榨取和作物的貯存 性。甜高粱收獲季節(jié)濕度大,達到70-80%,是汁液中自然微生物利用碳水化合物的理想環(huán) 境,從而導致腐敗。即使莖稈捆扎室溫貯存,可利用的碳水化合物也容易腐敗。運動發(fā)酵單胞菌,為革蘭氏陰性菌,是自然界中迄今為止唯一已知的將丙酮酸脫 羧酶及乙醇脫氫酶與獨特的Enter-Doudoroff(ED)代謝途徑相耦聯(lián)高效生產(chǎn)乙醇的微生 物。與傳統(tǒng)的用于乙醇發(fā)酵生產(chǎn)的微生物如釀酒酵母相比,運動發(fā)酵單胞菌具有以下幾個 優(yōu)點(1)每代謝一分子葡萄糖僅產(chǎn)生一分子ATP,因此生成的生物量較少,酒精產(chǎn)量接近 理論最大值(96% );⑵代謝速度快,比酵母高近5倍;(3)產(chǎn)物專一性高,生長需要的營養(yǎng) 簡單;(4)與釀酒酵母一樣,運動發(fā)酵單胞菌也是公認的安全菌株,發(fā)酵菌體經(jīng)簡單處理后 可作為動物飼料或肥料。運動發(fā)酵單胞菌僅能代謝葡萄糖、果糖和蔗糖,而甜高粱莖稈汁液 中的糖主要是這三種糖,因此用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈汁液具有競爭優(yōu)勢。目前,利用甜高粱莖稈生產(chǎn)乙醇研究較多的是利用甜高粱莖稈汁液或籽粒加汁液 的方法進行發(fā)酵生產(chǎn),如中國專利申請?zhí)?200710304648. 8《一種利用甜高粱制備乙醇的方 法》、申請?zhí)?200510076833. 7《甜高粱秸稈汁液生產(chǎn)乙醇的方法》等,這些專利申請中公開 的甜高粱莖稈汁液中糖濃度較低,生產(chǎn)出的乙醇濃度低,這在工業(yè)生產(chǎn)上其經(jīng)濟性較差。利用甜高粱莖稈固態(tài)發(fā)酵生產(chǎn)乙醇的研究也很多,但存在許多缺點(1)固態(tài)發(fā) 酵體積大,酵母使用量大;(2)發(fā)酵周期長;(3)蒸餾能耗高;(4)產(chǎn)生大量廢渣,即使能作 飼料,但其含水量大,干燥工序需要消耗更多能量。
發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的是克服現(xiàn)有技術中存在的甜高粱莖稈汁液液體發(fā)酵生產(chǎn)的乙醇濃 度較低的不足,甜高粱莖稈固體發(fā)酵發(fā)酵周期長、酵母使用量大等缺點,提供一種用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法。本發(fā)明的技術方案概述如下用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法,由下述步驟組 成(1)機械壓榨甜高粱莖稈,獲得糖液;(2)濃縮所述糖液得到糖汁,使糖汁中總糖的質量濃度達到45% -65% ;(3)調節(jié)步驟(2)獲得的糖汁的濃度,得到總糖的質量濃度為5%-15%的稀糖汁, 調節(jié)PH至3. 5-5. 0,并加入青霉素,使青霉素濃度為0. l-1000U/ml ;(4)接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,培養(yǎng);(5)流加所述步驟(2)獲得的糖汁,進行發(fā)酵;(6)精餾,獲得乙醇,再經(jīng)脫水,得燃料乙醇。所述步驟(4)為接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,在30士5°C、攪拌轉速為40-500rpm 的條件下培養(yǎng)至運動發(fā)酵單胞菌的濃度達到1. OX IO8個細胞/ml以上。所述步驟(5)為流加所述步驟(2)獲得的糖汁,糖汁流加的速度控制在發(fā)酵液中 總糖的質量濃度在12%以下,待發(fā)酵液中乙醇的體積濃度為7% 8%時停止流加,采用間 歇發(fā)酵、半連續(xù)發(fā)酵、連續(xù)發(fā)酵或帶有運動發(fā)酵單胞菌回用的發(fā)酵方式發(fā)酵,待發(fā)酵液中乙 醇的體積濃度為12. 0% -14. 0%,殘總糖的質量濃度在2. 0%以下,殘還原糖的質量濃度為 0.2%以下時停止發(fā)酵。本發(fā)明的優(yōu)點是濃縮的糖汁不用額外添加防腐劑就可以在貯存罐中貯存,避免 因防腐劑而影響運動發(fā)酵單胞菌的生長及發(fā)酵;發(fā)酵周期短< 52h ;乙醇得率高在90%以 上。本發(fā)明采用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液進行燃料乙醇生產(chǎn),發(fā)酵分 為兩個階段,即種子培養(yǎng)階段和發(fā)酵階段。種子培養(yǎng)采用逐級放大的方式,節(jié)省出發(fā)種子 液;運動發(fā)酵單胞菌為細菌,發(fā)酵速度比酵母快,發(fā)酵周期相對較短;本發(fā)明采用液體深層 發(fā)酵,不產(chǎn)生大量的含水量很大的固體物質,節(jié)省干燥固體物質的能耗,因此能耗相對較 低。
具體實施例方式下面結合具體實施例對本發(fā)明作進一步的說明。實施例1用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法,由下述步驟組 成(1)機械壓榨甜高粱莖稈,獲得糖液;(2)濃縮所述糖液得到糖汁,使糖汁中總糖的質量濃度達到50%貯存于貯存罐中 存放;(3)加水調節(jié)步驟(2)獲得的糖汁的濃度,得到總糖的質量濃度為10%的稀糖汁, 調節(jié)pH至4. 0,并加入青霉素,使青霉素濃度為10U/ml ;(4)接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,在30士5°C、攪拌轉速為IOOrpm的條件下培養(yǎng)至 運動發(fā)酵單胞菌的濃度達到1. OX IO8個細胞/ml以上;
(5)流加所述步驟(2)獲得的糖汁,糖汁流加的速度控制在發(fā)酵液中總糖的質量 濃度在10%以下,待發(fā)酵液中乙醇的體積濃度為7%時停止流加,采用間歇發(fā)酵,待發(fā)酵液 中乙醇的體積濃度為13. 0%以上,殘總糖的質量濃度在2. 0%以下,殘還原糖的質量濃度 為0.2%以下時停止發(fā)酵;(6)精溜,獲得乙醇,再經(jīng)脫水,得燃料乙醇。乙醇得率為92.6%。實施例2用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法,由下述步驟組 成(1)機械壓榨甜高粱莖稈,獲得糖液;(2)濃縮所述糖液得到糖汁,使糖汁中總糖的質量濃度達到45%貯存于貯存罐中 存放;(3)加水調節(jié)調節(jié)步驟(2)獲得的糖汁的濃度,得到總糖的質量濃度為5%的稀糖 汁,調節(jié)PH至4. 5,并加入青霉素,使青霉素濃度為1000U/ml ;(4)接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,在30士5°C、攪拌轉速為IOOrpm的條件下培養(yǎng)至 運動發(fā)酵單胞菌的濃度達到1. OX IO8個細胞/ml ;(5)流加所述步驟(2)獲得的糖汁,糖汁流加的速度控制在發(fā)酵液中總糖的質量 濃度在8 %以下,待發(fā)酵液中乙醇的體積濃度為8 %時停止流加,采用間歇發(fā)酵,待發(fā)酵液 中乙醇的體積濃度為12. 0%以上,殘總糖的質量濃度在2. 0%以下,殘還原糖的質量濃度 為0.2%以下時停止發(fā)酵;(6)精餾,獲得乙醇,再經(jīng)脫水,得燃料乙醇。乙醇得率為93. %。實施例3用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法,由下述步驟組 成(1)機械壓榨甜高粱莖稈,獲得糖液;(2)濃縮所述糖液得到糖汁,使糖汁中總糖的質量濃度達到65%貯存于貯存罐中 存放;(3)加水調節(jié)調節(jié)步驟(2)獲得的糖汁的濃度,得到總糖的質量濃度為15%的稀 糖汁,調節(jié)PH至3. 5,并加入青霉素,使青霉素濃度為0. lU/ml ;(4)接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,在30士5°C、攪拌轉速為40rpm的條件下培養(yǎng)至 運動發(fā)酵單胞菌的濃度達到1. OX IO8個細胞/ml以上;(5)流加所述步驟(2)獲得的糖汁,糖汁流加的速度控制在發(fā)酵液中總糖的質量 濃度在12%以下,待發(fā)酵液中乙醇的體積濃度為8%時停止流加,采用半連續(xù)發(fā)酵,待發(fā)酵 液中乙醇的體積濃度為14.0%,殘總糖的質量濃度在2.0%以下,殘還原糖的質量濃度為 0.2%以下時停止發(fā)酵;(6)精餾,獲得乙醇,再經(jīng)脫水,得燃料乙醇。乙醇得率為91. 5%。實施例4用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法,由下述步驟組 成(1)機械壓榨甜高粱莖稈,獲得糖液;
5糖汁中總糖的質量濃度達到55%貯存于貯存罐中 存放;(3)加水調節(jié)調節(jié)步驟(2)獲得的糖汁的濃度,得到總糖的質量濃度為8%的稀糖 汁,調節(jié)PH至5.0,并加入青霉素,使青霉素濃度為100U/ml ;(4)接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,在30士5°C、攪拌轉速為300rpm的條件下培養(yǎng)至 運動發(fā)酵單胞菌的濃度達到1. OX IO8個細胞/ml以上;(5)流加所述步驟(2)獲得的糖汁,糖汁流加的速度控制在發(fā)酵液中總糖的質量 濃度在11%以下,待發(fā)酵液中乙醇的體積濃度為7%時停止流加,采用連續(xù)發(fā)酵,待發(fā)酵 液中乙醇的體積濃度為12. 5 %,殘總糖的質量濃度在2. O %以下,殘還原糖的質量濃度為 0.2%以下時停止發(fā)酵;(6)精餾,獲得乙醇,再經(jīng)脫水,得燃料乙醇。乙醇得率為93. 2%。實施例5用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法,由下述步驟組 成(1)機械壓榨甜高粱莖稈,獲得糖液;(2)濃縮所述糖液得到糖汁,使糖汁中總糖的質量濃度達到50%貯存于貯存罐中 存放;(3)加水調節(jié)調節(jié)步驟(2)獲得的糖汁的濃度,得到總糖的質量濃度為10%的稀 糖汁,調節(jié)pH至4. 5,并加入青霉素,使青霉素濃度為5U/ml ;(4)接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,在30士5°C、攪拌轉速為500rpm的條件下培養(yǎng)至 運動發(fā)酵單胞菌的濃度達到1. OX IO8個細胞/ml以上;(5)流加所述步驟(2)獲得的糖汁,糖汁流加的速度控制在發(fā)酵液中總糖的質 量濃度在12%以下,待發(fā)酵液中乙醇的體積濃度為8%時停止流加,采用帶有運動發(fā)酵單 胞菌回用的發(fā)酵方式發(fā)酵,待發(fā)酵液中乙醇的體積濃度為14.0%,殘總糖的質量濃度在 2. 0%以下,殘還原糖的質量濃度為0. 2%以下時停止發(fā)酵;(6)精餾,獲得乙醇,再經(jīng)脫水,得燃料乙醇。乙醇得率為92.4%。實施例6用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法,由下述步驟組 成(1)機械壓榨甜高粱莖稈,獲得糖液;(2)濃縮所述糖液得到糖汁,使糖汁中總糖的質量濃度達到52%貯存于貯存罐中 存放;(3)加水調節(jié)調節(jié)步驟(2)獲得的糖汁的濃度,得到總糖的質量濃度為6%的稀糖 汁,調節(jié)PH至4. 2,并加入青霉素,使青霉素濃度為2U/ml ;(4)接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,在30士5°C、攪拌轉速為200rpm的條件下培養(yǎng)至 運動發(fā)酵單胞菌的濃度達到1. O X IO8個細胞/ml以上;(5)流加所述步驟(2)獲得的糖汁,糖汁流加的速度控制在發(fā)酵液中總糖的質量 濃度在10%以下,待發(fā)酵液中乙醇的體積濃度為7%時停止流加,采用間歇發(fā)酵,待發(fā)酵
6液中乙醇的體積濃度為12.6%,殘總糖的質量濃度在2.0%以下,殘還原糖的質量濃度為 0.2%以下時停止發(fā)酵;(6)精餾,獲得乙醇,再經(jīng)脫水,得燃料乙醇。乙醇得率為93. 1%。各實施例中所用的運動發(fā)酵單胞菌種子液的培養(yǎng)為運動發(fā)酵單胞菌原菌種I斜面試管I液體試管培養(yǎng)I三角瓶培養(yǎng)I卡氏罐培養(yǎng)種子液的培養(yǎng)方法在行業(yè)內(nèi)是常規(guī)操作,所用培養(yǎng)基為RM液體培養(yǎng)基(2%葡萄 糖、酵母浸膏、0.2%磷酸二氫鉀)及RM固體培養(yǎng)基(2%葡萄糖、酵母浸膏、0.2%磷 酸二氧鉀、1.8%瓊脂)。
權利要求
用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法,其特征是由下述步驟組成(1)機械壓榨甜高粱莖稈,獲得糖液;(2)濃縮所述糖液得到糖汁,使糖汁中總糖的質量濃度達到45% 65%;(3)調節(jié)步驟(2)獲得的糖汁的濃度,得到總糖的質量濃度為5% 15%的稀糖汁,調節(jié)pH至3.5 5.0,并加入青霉素,使青霉素濃度為0.1 1000U/ml;(4)接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,培養(yǎng);(5)流加所述步驟(2)獲得的糖汁,進行發(fā)酵;(6)精餾,獲得乙醇,再經(jīng)脫水,得燃料乙醇。
2.根據(jù)權利要求1所述的用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇 的方法,其特征是所述步驟(4)為接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,在30士5°C、攪拌轉速為 40-500rpm的條件下培養(yǎng)至運動發(fā)酵單胞菌的濃度達到1. OX IO8個細胞/ml以上。
3.根據(jù)權利要求1所述的用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇 的方法,其特征是所述步驟(5)為流加所述步驟(2)獲得的糖汁,糖汁流加的速度控制在 發(fā)酵液中總糖的質量濃度在12%以下,待發(fā)酵液中乙醇的體積濃度為7% 8%時停止流 加,采用間歇發(fā)酵、半連續(xù)發(fā)酵、連續(xù)發(fā)酵或帶有運動發(fā)酵單胞菌回用的發(fā)酵方式發(fā)酵,待 發(fā)酵液中乙醇的體積濃度為12. 0% -14. 0%,殘總糖的質量濃度在2. 0%以下,殘還原糖的 質量濃度為0. 2%以下時停止發(fā)酵。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種用運動發(fā)酵單胞菌發(fā)酵甜高粱莖稈濃縮汁液生產(chǎn)燃料乙醇的方法,由如下步驟組成(1)機械壓榨甜高粱莖稈,獲得糖液;(2)濃縮糖液成糖汁;(3)調節(jié)糖汁的濃度,使總糖的質量濃度為5%-15%的稀糖汁,調節(jié)pH,加入青霉素;(4)接入運動發(fā)酵單胞菌種子液,培養(yǎng);(5)流加步驟(2)獲得的糖汁,發(fā)酵;(6)精餾,獲得乙醇,脫水,得燃料乙醇。本發(fā)明的優(yōu)點是濃縮的糖汁不用額外添加防腐劑就可以在貯存罐中貯存,避免因防腐劑而影響運動發(fā)酵單胞菌的生長及發(fā)酵;發(fā)酵周期短<52h,乙醇得率高在90%以上。
文檔編號C12R1/01GK101914575SQ20101024172
公開日2010年12月15日 申請日期2010年7月30日 優(yōu)先權日2010年7月30日
發(fā)明者張敏華, 張鯤, 洪解放, 鄒少蘭, 馬媛媛 申請人:天津大學