專利名稱：一株好氧除磷菌——惡臭假單胞菌wsh1002及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一株新的好氧除磷菌一惡臭假單胞菌WSH1002及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
目前污水處 理廠除磷技術(shù)主要有生物除磷、化學(xué)沉淀除磷，但成本高且很難達(dá)到排放標(biāo)準(zhǔn)。也有傳統(tǒng)人工濕地除磷工藝填料吸附，但其填料吸附能力有限，且易飽和。目前，國內(nèi)生產(chǎn)的洗衣粉仍廣泛使用三聚磷酸鈉為主要助劑，這就是我們通常所說的含磷洗衣粉。三聚磷酸鈉作為洗衣粉的助劑已為人類服務(wù)了半個(gè)世紀(jì)，對(duì)提高洗衣粉的去污效果起到了很大的作用；它通過絡(luò)合Ca2+、Mg2+等金屬離子起到軟化水的作用；它對(duì)蛋白質(zhì)有膨潤(rùn)、增溶作用，對(duì)脂肪起促進(jìn)乳化的作用，對(duì)塵土等固體污垢有分散作用；它還有堿緩沖作用，即使有酸性污垢存在也能使洗滌液保持一定的堿度，有利于酸性污垢的去除；它還具有吸收水分防止洗衣粉塊的作用。但是，含磷洗衣粉也有嚴(yán)重的缺點(diǎn)，就是在使用后隨著污水被排放在水體中造成水體的富營養(yǎng)化，引起浮游生物大量繁殖瘋長(zhǎng)，形成 “赤潮”。赤潮的危害是使水中溶氧量減少，水質(zhì)惡化，水中生物不能正常生存，嚴(yán)重破壞水產(chǎn)資源。在生物除磷工藝中，目前的相關(guān)技術(shù)處理成本過高，且處理的效果相對(duì)要差。Phostrip法先使污泥微生物處于厭氧或兼氧狀態(tài)下，使積磷細(xì)菌體內(nèi)的磷充分排出，在進(jìn)入好氧條件下吸磷并貯藏于體內(nèi)，然后使這種含磷污泥立即在二沉池內(nèi)沉降，澄清的出水可獲得良好的脫磷效果，池底的含磷污泥一部分剩余污泥的形式排出作為肥料使用，另一部分回流至厭氧池或兼氧池。Phostrip法實(shí)際上是生物脫磷與化學(xué)除磷相相結(jié)合的工藝，是對(duì)A/0工藝的改進(jìn)。該工藝是使部分回流的含磷污泥進(jìn)入一個(gè)專門設(shè)置的厭氧或兼氧放磷池，是含磷微生物在厭氧條件下釋放可溶性的磷酸與水體中，然后將含有高濃度磷的少量上清液導(dǎo)出放磷池，進(jìn)行化學(xué)除磷，將已經(jīng)釋放磷的污泥重新進(jìn)入到好氧池中進(jìn)行吸磷和積磷。該工藝可以進(jìn)一步提高除磷的效率。但該法的處理過程中，菌種的篩選就是一個(gè)很重要的問題，需要有一種優(yōu)秀的菌種予以配合生物處理。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明目的是提供一株能夠有效降解無機(jī)磷的好氧除磷新菌株及其應(yīng)用。本發(fā)明采用的技術(shù)方案是一株好氧除磷菌——惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)WSH1002，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國，武漢，武漢大學(xué)，430072，保藏編號(hào)CCTCC No =M 2010276，保藏日期2010年10月24日。所述惡臭假單胞菌WSH1002的16S rDNA序列如下(已提交NCBI，編號(hào)為 HM218829)gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccaggccttgacatg cagagaactt tccagagatg gattggtgcc ttcgggaact ctgacacagg
tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gtaacgagcgcaacccttgt ccttagttac cagcacgtta tggtgggcac tctaaggaga ctgccggtgacaaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacggc ctgggctacacacgtgctac aatgg tcggt acagagggtt gccaagccgc gaggtggagc taatctcacaaaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagtcg gaatcgctagtaatcgcgaa tcagaatgtc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtcacaccatggg agtgggttgc acacagaagt agctagtcta accttcggga ggacggtaccacggttggat tccg。本發(fā)明的菌株采用多種篩選方法相結(jié)合方式篩選獲得，首先通過添加磷源，富集好氧除磷菌，然后再通過在培養(yǎng)基中添加χ-Pi來快速有效地篩選好氧除磷菌。具體如下 從馴化好的活性污泥中篩選出單菌落，然后根據(jù)不同的菌種在富磷和限磷的葡萄糖-MOPS 培養(yǎng)基中生長(zhǎng)時(shí)表達(dá)堿性磷酸激酶對(duì)x-Pi (5-bromo-4-chloro-3-indoly-phosphate)分解情況不同而產(chǎn)生不同色斑，除磷菌在富磷和限磷的培養(yǎng)基中都產(chǎn)生藍(lán)斑的性能，通過在培養(yǎng)基中添加x-Pi的方法，來有效地篩選好氧除磷菌。其步驟依次是取樣，富集培養(yǎng)，初篩，復(fù)篩，最后得到一株在好氧條件下，能降解模擬污水中的磷能力較高的菌株。本發(fā)明還涉及所述的惡臭假單胞菌在微生物降解處理含磷廢水中的應(yīng)用。處理對(duì)象主要包括人們?nèi)粘Ｉa(chǎn)生活中排放的含磷廢水以及工業(yè)生產(chǎn)中排放的含磷廢水，相對(duì)而言，后者的含磷量更高，涉及范圍小，治理更為重要。其中的磷主要以化合物的形態(tài)存在，例如磷酸及磷酸鹽類。優(yōu)選的，所述微生物降解在28 32°C下進(jìn)行。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在提供了一株性能較好氧除磷菌，該菌株可以有效的去除污水中的磷，在一定程度上為污水處理和治理方面提供基礎(chǔ)。
具體實(shí)施例方式下面結(jié)合具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步描述，但本發(fā)明的保護(hù)范圍并不僅限于此實(shí)施例1 菌株的篩選(1)菌株來源a、江南大學(xué)環(huán)境工程實(shí)驗(yàn)室性能穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)室規(guī)模A/0反應(yīng)器沉淀池中剩余污泥；b、江南大學(xué)環(huán)境工程實(shí)驗(yàn)室性能穩(wěn)定的實(shí)驗(yàn)室規(guī)模MBR反應(yīng)器曝氣池中活性污泥；C、梅村污水處理廠訓(xùn)話好的活性污泥；(2)培養(yǎng)基富集培養(yǎng)基牛肉膏3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g，KH2PO4 0. 02g，水 lOOOmL，pH 7· 2 7. 4。初篩培養(yǎng)基:100ml的 10XM0PS 混合物(5. 372g M0PS+0. 717gTricine+30ml 離子水，IOmol/L的KOH調(diào)節(jié)pH至7. 4，總體積到44ml，加入0.01% 1 mL新制的FeSO4溶液， 按下列順序加溶液5ml 1. 9mol/LNH4Cl, 1 mL 0. 276mol/L K2SO4,0. 025mol 0. 02mol/L,CaCl2 · 2Η20，0· 2ImL 2. 5mol/L MgCl2 · 6Η20, IOmL 5mol/L NaCl，0. 02mL 微量元素混合液， 38. 7mL 去離子水)，葡萄糖 0. Ig, 0. 0087g/0. 1732g K2HPO4, χ-Pi (50 μ g/mL)。菌體擴(kuò)大培養(yǎng)基牛肉膏3g，蛋白胨10g, NaCl 5g，KH2PO4 0. 02g,水IOOOmL, ρΗ7· 2 7· 4。檢測(cè)培養(yǎng)基乙酸鈉925mg，蛋白胨O.lg，酵母膏O.Olg，NaCl 0. 05g, KH2PO4 65. 5mg, MgCl2 · 7H20 153. 7mg, CaCl2 25mg。(3)富集培養(yǎng)將從污水處理廠取得的活性污泥接入富集培養(yǎng)基，每天更換新鮮培養(yǎng)基。裝液量100/250ml，搖床培養(yǎng)24h，30°C，150rpm，轉(zhuǎn)接10次。(4)初篩將富集好的菌液進(jìn)行稀釋，在固體擴(kuò)大培養(yǎng)基上進(jìn)行涂布，然后置于 30°C培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，培養(yǎng)2 3天。挑選形態(tài)不同的菌同時(shí)在富磷和限磷的初篩培養(yǎng)基上劃線分離，將在兩種培養(yǎng)基上都出 現(xiàn)的藍(lán)色單菌落的菌再次在擴(kuò)大培養(yǎng)基上劃線分離，對(duì)劃線分離得到的單菌落保存到斜面上，供復(fù)篩用。(5)復(fù)篩將初篩保存的菌株接入菌體擴(kuò)大培養(yǎng)基，30°C，150rpm，培養(yǎng)24h，然后按5%的比例分別接入IOOmL檢測(cè)培養(yǎng)基，培養(yǎng)12h，30°C，150rpm，測(cè)定接種前后磷的變化。 磷的測(cè)定采用鉬銻抗分光光度法。經(jīng)篩選獲得一株性能較好的菌株，經(jīng)16S rDNA分子鑒定為Pseudomonas putida， 保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，保藏編號(hào)CCTCC No =M 2010276。實(shí)施例2 好氧除磷菌的應(yīng)用(1)培養(yǎng)基擴(kuò)大培養(yǎng)基牛肉膏3g，蛋白胨 10g, NaCl 5g，KH2PO4 0. 02g，水 lOOOmL，ρΗ7· 2 7. 4。檢測(cè)培養(yǎng)基乙酸鈉925mg，蛋白胨O.lg，酵母膏O.Olg，NaCl 0. 05g, KH2PO4 65. 5mg, MgCl2 · 7H20 153. 7mg, CaCl2 25mg。(2)工藝條件溫度30°C ；搖床轉(zhuǎn)速150rpm ；裝液量100/250mL無流加；菌體干重的測(cè)定菌體在IOOOOrpm條件下離心5min，棄去上清夜在105°C條件下
烘至恒重，稱重。(3)好氧除磷菌的應(yīng)用將斜面上的除磷菌(CCTCC No =M 2010276)挑取一環(huán)接入擴(kuò)大培養(yǎng)基，在30°C， 150rpm的條件下培養(yǎng)24h，然后按1 %體積比分別接入富含磷元素的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基 (牛肉膏 3g，蛋白胨 10g，NaCl 5g,KH2PO4 0. 02g，水 lOOOmL，pH7. 2 7. 4)中，30°C，150rpm， 培養(yǎng)7h后，取一定量的發(fā)酵液在SOOOrpm的條件下離心5min，檢測(cè)上清液中的磷含量，結(jié)果見表1。表1 菌株的除磷能力測(cè)試
IS DCW 初始磷含量~7h后磷含量
mg P/h/g號(hào) (g/L )(mg/L )(mg/L )
10 1.3152.5121
結(jié)論本發(fā)明菌株 去除磷的能力可達(dá)0. 02g P/h/g菌體干重以上，當(dāng)初始磷濃度為15mg/L時(shí)，7h去除率達(dá)到80%以上。
權(quán)利要求
1.一株好氧除磷菌——惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)WSH1002，保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國，武漢，武漢大學(xué)，430072，保藏編號(hào)CCTCC NO :M 2010276， 保藏日期2010年10月24日。
2.如權(quán)利要求1所述的惡臭假單胞菌WSH1002，其特征在于所述惡臭假單胞菌WSH1002的16S rDNA序列如下gcccgcacaa gcggtggagc atgtggttta attcgaagca acgcgaagaa ccttaccagg ccttgacatg cagagaactt tccagagatg gattggtgcc ttcgggaact ctgacacagg tgctgcatgg ctgtcgtcag ctcgtgtcgt gagatgttgg gttaagtccc gtaacgagcg caacccttgt ccttagttac cagcacgtta tggtgggcac tctaaggaga ctgccggtga caaaccggag gaaggtgggg atgacgtcaa gtcatcatgg cccttacggc ctgggctaca cacgtgctac aatggtcggt acagagggtt gccaagccgc gaggtggagc taatctcaca aaaccgatcg tagtccggat cgcagtctgc aactcgactg cgtgaagtcg gaatcgctag taatcgcgaa tcagaatgtc gcggtgaata cgttcccggg ccttgtacac accgcccgtc acaccatggg agtgggttgc acacagaagt agctagtcta accttcggga ggacggtacc acggttggat tccgo
3 如權(quán)利要求1所述的惡臭假單胞菌WSH1002在微生物降解處理含磷廢水中的應(yīng)用。
4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于所述微生物降解在28 32°C下進(jìn)行。
全文摘要
本發(fā)明提供了新的好氧除磷菌——惡臭假單胞菌(Pseudomonas putida)及其應(yīng)用。該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，地址中國，武漢，武漢大學(xué)，430072，保藏編號(hào)CCTCC NoM 2010276，保藏日期2010年10月24日。該菌株去除磷的能力可達(dá)0.02g P/h/g菌體干重以上，當(dāng)初始磷濃度為15mg/L時(shí)，7h去除率達(dá)到80％以上。本發(fā)明的有益效果主要體現(xiàn)在提供了一株性能較好氧除磷菌，該菌株可以有效的去除污水中的磷，在一定程度上為污水處理和治理方面提供基礎(chǔ)。
文檔編號(hào)C12R1/40GK102181375SQ20101058054
公開日2011年9月14日 申請(qǐng)日期2010年12月9日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月9日
發(fā)明者丁青松, 仲小敏, 劉斌, 堵國成, 徐甦, 王天文, 鄭展望, 陳堅(jiān) 申請(qǐng)人:江蘇商達(dá)水務(wù)有限公司