專利名稱：一種制備黑大蒜及從中提取活性物質(zhì)的方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種制備黑大蒜產(chǎn)品，并能夠從中提取以含有S-烯丙 基-L-半胱氨酸(S-allyl-L-CySteine，SAC)活性物質(zhì)為主的復(fù)合成分的方法，用于人類機(jī) 體免疫系統(tǒng)功能的恢復(fù)。技術(shù)背景
本發(fā)明所及的大蒜屬于百合科蔥屬，是一種主要以無(wú)性生殖為主的植物，分布與全世 界各地，性溫味辣。大蒜具有廣泛的食用和藥用價(jià)值。食用大蒜可增加食欲，促進(jìn)健康，延 緩衰老和預(yù)防疾病。大蒜用于醫(yī)學(xué)領(lǐng)域也已有上千年的歷史，人們用大蒜治療感染、槍傷、 蛇咬、腹瀉、風(fēng)濕、心臟病、糖尿病及其它的一些生理功能紊亂。人們?cè)趯?shí)驗(yàn)中還發(fā)現(xiàn)其具有 降血脂、降血壓、降血糖、抗腫瘤、抗菌、抗氧化和免疫調(diào)節(jié)等功效。大蒜的化學(xué)組成十分復(fù) 雜，其中有生物活性的成分超過(guò)100種。目前知道，鮮大蒜的藥用價(jià)值主要在于含硫化合 物，其含量是洋蔥、椰菜等高有機(jī)硫化合物蔬菜的4倍多，其中最重要的有效成分是大蒜素 (S-Allyl acrylo-1-sulphinothioate, 二烯丙基二硫)。大蒜素的抗腫瘤、抗感染、抗氧化 作用已得到公認(rèn)，被認(rèn)定為是一種預(yù)防癌的植物食品。然而，大蒜的辛辣味過(guò)重，食后呼出 氣味難聞，致使一些人討厭食用大蒜。特別是有些人食入大蒜后刺激胃腸反應(yīng)嚴(yán)重，甚至嘔 吐，難以忍受，也限制了大蒜作為食品的應(yīng)用。近年來(lái)日本學(xué)者首先發(fā)現(xiàn)在控制濕度和溫度的情況下，普通的鮮大蒜(白色，稱為 白大蒜)經(jīng)過(guò)一定處理可由白色變成黑色(稱為黑大蒜)，黑大蒜無(wú)白大蒜原有的辣味，反而 帶有甜味，口感好，仍可直接食用。因此與白大蒜相比可能更具有應(yīng)用前景。但目前的白大 蒜處理成黑大蒜，一個(gè)是工藝條件苛刻，如采用紅外線加誘導(dǎo)液、發(fā)酵后一些營(yíng)養(yǎng)成分丟失 等方面存在的問(wèn)題。

發(fā)明內(nèi)容
1、發(fā)明目的
本發(fā)明提供一種制備黑大蒜及從中提取活性物質(zhì)的方法，其采用簡(jiǎn)便獨(dú)特的技術(shù)從黑 大蒜中提取制備以S-allyl-L-ceisteine有效成分為主的復(fù)合成分，用于免疫系統(tǒng)恢復(fù)。2、技術(shù)方案
一種制備黑大蒜的方法，其特征在于該方法是按照以下步驟進(jìn)行的
(1).取海水，濾紙過(guò)濾，去除雜質(zhì)，高壓滅菌后冷卻；
(2).將鮮大蒜部分去皮，表面噴灑海水；
(3).置大蒜于6(T80°C，70 85%濕度環(huán)境下發(fā)酵20 50天；其中每隔3、天噴灑海水 1次；鮮大蒜逐漸由白變黑，成為黑大蒜；
(4).將黑大蒜置于常溫干燥處保存。步驟(1)中的高溫滅菌是溫度在11(T125°C范圍內(nèi)，保持10 20分鐘。步驟(3)中的最佳優(yōu)選工藝為置大蒜于7(T75°C，75 80%濕度環(huán)境下發(fā)酵30、0 天；其中每隔5天噴灑海水1次。
一種如上所述的從黑大蒜中提取活性物質(zhì)的方法，其特征在于將上述所自制的黑大 蒜烘干、去皮，研碎成粉；與蒸餾水混合后加熱9(T10(TC，廣2小時(shí)后冷卻至室溫；紗布粗實(shí)施例2 (一)黑大蒜的制備方法
1.取海水，濾紙過(guò)濾，去除雜質(zhì)，高壓滅菌(115°C，12分鐘)，冷卻；
2.將鮮大蒜部分去皮，表面噴灑海水；
3.置大蒜于65°C，78%濕度環(huán)境下，發(fā)酵45天。其中每個(gè)7天噴灑海水1次。鮮大蒜 逐漸由白變黑，成為黑大蒜。4.將黑大蒜置于常溫干燥處保存。(二)黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物制備方法
1.制備方法將自制的黑大蒜于80°C烘干、去皮研碎成粉；按每^g黑大蒜粉加
濾后離心留取上清或?yàn)V膜濾過(guò)留取濾過(guò)液；于-6(T8(TC冷凍并干燥，即獲水溶性S-烯丙 基-L-半胱氨酸復(fù)合物。黑大蒜烘干溫度65、5°C，并保持其活性成分。黑大蒜研碎成粉后按每25 30g加IOOml蒸餾水的比例混合。3、優(yōu)點(diǎn)及效果
本發(fā)明系通過(guò)多年研究，建立獨(dú)特的方法制備黑大蒜，采用簡(jiǎn)便獨(dú)特的技術(shù)從黑大蒜 中提取制備以S-allyl-L-ceisteine有效成分為主復(fù)合成分，用于免疫系統(tǒng)恢復(fù)。實(shí)驗(yàn)發(fā) 現(xiàn)并證明該復(fù)合成分具有免疫功能恢復(fù)效應(yīng)，無(wú)毒副作用，可長(zhǎng)期應(yīng)用，抵抗疾病，維持健 康。
具體實(shí)施例方式
本發(fā)明涉及采用獨(dú)特的方法制備黑大蒜產(chǎn)品，并采用現(xiàn)代生物提取技術(shù)從中提取制備 以含有S-烯丙基-L-半胱氨酸(S-allyl-L-cysteine，SAC)活性物質(zhì)為主的復(fù)合成分，用 于人類機(jī)體免疫系統(tǒng)功能恢復(fù)。實(shí)施例1 (一)黑大蒜的制備方法
1.取海水，濾紙過(guò)濾，去除雜質(zhì)，高壓滅菌(121°C，15分鐘)，冷卻；
2.將鮮大蒜部分去皮，表面噴灑海水；
3.置大蒜于7(T75°C，75、0%濕度環(huán)境下，發(fā)酵3(Γ40天。其中每個(gè)5天噴灑海水1 次。鮮大蒜逐漸由白變黑，成為黑大蒜。4.將黑大蒜置于常溫干燥處保存。(二)黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物制備方法
1.制備方法將自制的黑大蒜于80°C烘干、去皮研碎成粉；按每30g黑大蒜粉 加IOOml蒸餾水的比例混合，加熱9(T100°C，廣2小時(shí)后冷卻；紗布粗濾過(guò)后，所述離心 (3000^6000轉(zhuǎn)/分鐘，2(Γ40分鐘)留取上清或?yàn)V膜(分子量為2萬(wàn))濾過(guò)留取濾過(guò)液； 于-80°C冷凍、冷凍真空干燥，即獲水溶性S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物。2. S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物組成主要成分為S-allyl-L-ceisteine，其他 成分包括酪氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和碳水化合物等。主 要成分S-allyl-L-ceisteine的分子結(jié)構(gòu)是IOOml蒸餾水的比例混合，加熱9(Γ100 ，廣2小時(shí)后冷卻；紗布粗濾過(guò)后，離心留取上清或 濾膜濾過(guò)留取濾過(guò)液；于-80°C冷凍、冷凍真空干燥，即獲水溶性S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù) 合物。2. S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物組成主要成分為S-allyl-L-ceisteine，其他 成分包括酪氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、亮氨酸、異亮氨酸和碳水化合物等。實(shí)施例3 (一)黑大蒜的制備方法
1.取海水，濾紙過(guò)濾，去除雜質(zhì)，高壓滅菌(124°C，18分鐘)，冷卻；
2.將鮮大蒜部分去皮，表面噴灑海水；
3.置大蒜于78°C，83%濕度環(huán)境下，發(fā)酵25天。其中每個(gè)4天噴灑海水1次。鮮大蒜 逐漸由白變黑，成為黑大蒜。4.將黑大蒜置于常溫干燥處保存。 (二)黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物制備方法
1.制備方法將自制的黑大蒜于68°C烘干、去皮研碎成粉；按每28g黑大蒜粉加 IOOml蒸餾水的比例混合，加熱9(Γ100 ，廣2小時(shí)后冷卻；紗布粗濾過(guò)后，離心留取上清或 濾膜濾過(guò)留取濾過(guò)液；于_65°C冷凍、冷凍真空干燥，即獲水溶性S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù) 合物。2. S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物組成主要成分為S-allyl-L-ceisteine，提取 量范圍在0. Γ1. 5mg/g黑大蒜，其他成分包括酪氨酸、甘氨酸、丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸、 亮氨酸、異亮氨酸和碳水化合物等。以主要含有黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合成分組方，制備的各種直接，間接 用于人類免疫系統(tǒng)改善恢復(fù)目的的各種藥品，保健產(chǎn)品制劑，其劑型可以為水劑、片劑、丸 齊U、沖劑、膠囊。對(duì)黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物免疫系統(tǒng)功能恢復(fù)效應(yīng)的研究
我們建立的使白色鮮大蒜由白變黑成為黑大蒜的方法，不是有菌發(fā)酵，而是無(wú)菌發(fā)酵 過(guò)程。在發(fā)酵過(guò)程中鮮大蒜中的g_谷氨酰-S-烯丙基-L-半胱氨酸(g-glutamyl-S-all yl-L-CySteine，GSAC)絕大部分變成了 S-烯丙基-L-半胱氨酸。我們創(chuàng)造的水加熱提取法 將以S-烯丙基-L-半胱氨酸為主體的水溶性有效活性成分提取出來(lái)，稱為S-烯丙基-L-半 胱氨酸復(fù)合物。這與市面上已有的從鮮大蒜中提取制備的大蒜素和大蒜油有本質(zhì)不同。有關(guān)黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物免疫系統(tǒng)功能恢復(fù)效應(yīng)的實(shí)施例如 下
實(shí)施例一(動(dòng)物實(shí)驗(yàn)例)
目的探討黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物對(duì)正常機(jī)體的免疫功能促進(jìn)作用。 具體實(shí)施方法(一)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及處理將BALB/c小鼠40只分成5組，每組5只，共8 組，其中編號(hào)第1-7組為實(shí)驗(yàn)組，編號(hào)第8組為對(duì)照組。將黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸 復(fù)合物用生理鹽水配制成lmg/ml的溶液。實(shí)驗(yàn)組每天腹腔注射100 μ 1的黑大蒜S-烯丙 基-L-半胱氨酸復(fù)合物溶液，對(duì)照組每天腹腔注射100 μ 1的生理鹽水。連續(xù)注射5天。于 末次注射后的1-7天，從第1組開始，每天處死一組小鼠，第7天將第7組和第8組小鼠一 齊處死。(二)樣品的采集與檢測(cè)1、脾細(xì)胞分離
及其懸液的制備頸椎脫位處死小鼠，制備脾細(xì)胞懸液。采用ELISA法檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中細(xì)胞因子IL-2、TNF- α、IFN- γ以及IL-4的分泌水平；LDH釋放法檢測(cè)NK細(xì)胞的殺傷活 性；Griss法檢測(cè)脾細(xì)胞培養(yǎng)上清中NO分泌水平。(三)結(jié)果與結(jié)論結(jié)果為1、小鼠注射黑 大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物實(shí)驗(yàn)組(15)末次注射后4-6天，相比照組(2. 5) NK細(xì) 胞殺傷活性顯著性升高。2、黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物實(shí)驗(yàn)組脾細(xì)胞分泌細(xì)胞 因子 IL-2 (15. 5)、IFN-Y (105)和 TNF-a (68)較對(duì)照組(分別為 2. 5，17，27)顯著升 高，IL-4的分泌無(wú)變化。3、黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物實(shí)驗(yàn)組脾細(xì)胞產(chǎn)生NO 分泌水平(28)較對(duì)照組(11)顯著升高。結(jié)論為黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物可 以正常增強(qiáng)機(jī)體的細(xì)胞免疫功能，包括NK細(xì)胞、Thl淋巴細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞的功能，降 低過(guò)敏反應(yīng)的應(yīng)答。實(shí)施例二 (動(dòng)物實(shí)驗(yàn))
目的探討黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物促進(jìn)免疫低功小鼠的免疫功能的作 用。具體實(shí)施方法按0. 1，0. 25和0. 5mL劑量給C57BL/6小鼠灌胃的黑大蒜S-烯丙 基-L-半胱氨酸復(fù)合物，每日1次，連續(xù)7天，并在給藥的第1日和2日同時(shí)腹腔注射環(huán)磷 酰胺造成免疫功能低下模型，第9日檢測(cè)小鼠免疫功能的變化。結(jié)果1.黑大蒜S-烯丙 基-L-半胱氨酸復(fù)合物可促進(jìn)免疫低功鼠的脾淋巴細(xì)胞增殖，免疫低功模型組為1. 0，實(shí)驗(yàn) 處理組為1. 5 ；2.增強(qiáng)NK細(xì)胞殺傷活性；免疫低功模型組為12. 5，實(shí)驗(yàn)處理組為25. 8 ；3. 提高免疫效應(yīng)分子TNF-a，免疫低功模型組為11，實(shí)驗(yàn)處理組為Μ; IFN-g,免疫低功模 型組為7，實(shí)驗(yàn)處理組為15 ；及一氧化氮(NO)的產(chǎn)生水平，免疫低功模型組為3，實(shí)驗(yàn)處 理組為10。結(jié)論黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物可增強(qiáng)固有免疫細(xì)胞和特異性免 疫細(xì)胞的活性，調(diào)節(jié)細(xì)胞因子和效應(yīng)分子的分泌，使免疫低功小鼠的免疫功能恢復(fù)。實(shí)施例三
觀察黑大蒜S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物對(duì)腫瘤患者化療致免疫細(xì)胞數(shù)量、比例和功 能降低的抵抗和恢復(fù)作用?；颊邚埬?，女，65歲，患肺癌晚期，經(jīng)化療后檢測(cè)外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)表明患 者⑶4+T細(xì)胞明顯下降(25)，⑶8+T細(xì)胞(包括抑制細(xì)胞)明顯上升(48)，⑶4+T/⑶8+T比 值明顯下降(0.52)，NK明顯下降(2%)，整個(gè)免疫系統(tǒng)已經(jīng)明顯失衡。我們采用口服黑大蒜 S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物，IOmg/每天，連續(xù)3個(gè)月，患者外周血淋巴細(xì)胞亞群檢測(cè)表 明⑶4+T細(xì)胞明顯(35)，⑶8+T細(xì)胞(包括抑制細(xì)胞)明顯下降(25)，⑶4+T/⑶8+T比值明 顯上升(1.4)，NK明顯上升(8%)?；颊呙庖呦到y(tǒng)恢復(fù)近正常值，繼續(xù)維持治療3個(gè)月，患者 免疫系統(tǒng)指標(biāo)穩(wěn)定。
權(quán)利要求
1.一種制備黑大蒜的方法，其特征在于該方法是按照以下步驟進(jìn)行的(1)取海水，濾紙過(guò)濾，去除雜質(zhì)，高壓滅菌后冷卻；(2)將鮮大蒜部分去皮，表面噴灑海水；(3)置大蒜于6(T80°C，70 85%濕度環(huán)境下發(fā)酵20 50天；其中每隔3、天噴灑海水1 次；鮮大蒜逐漸由白變黑，成為黑大蒜；(4)將黑大蒜置于常溫干燥處保存。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備黑大蒜的方法，其特征在于步驟(1)中的高溫滅菌 是溫度在11(T125°C范圍內(nèi)，保持1(Γ20分鐘。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種制備黑大蒜的方法，其特征在于步驟(3)中的最佳優(yōu)選 工藝為置大蒜于7(T75°C，75 80%濕度環(huán)境下發(fā)酵30 40天；其中每隔5天噴灑海水1次。
4.一種如權(quán)利要求1所述的從黑大蒜中提取活性物質(zhì)的方法，其特征在于將權(quán)利要 求1所自制的黑大蒜烘干、去皮，研碎成粉；與蒸餾水混合后加熱9(T10(TC，廣2小時(shí)后冷卻 至室溫；紗布粗濾后離心留取上清或?yàn)V膜濾過(guò)留取濾過(guò)液；于-6(T8(TC冷凍并干燥，即獲 水溶性S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的從黑大蒜中提取活性物質(zhì)的方法，其特征在于黑大蒜烘干 溫度65、5°C，并保持其活性成分。
6.根據(jù)權(quán)利要求4所述的從黑大蒜中提取活性物質(zhì)的方法，其特征在于黑大蒜研碎 成粉后按每25 30g加IOOml蒸餾水的比例混合。
全文摘要
本發(fā)明涉及一種制備黑大蒜產(chǎn)品，并能夠從中提取以含有S-烯丙基-L-半胱氨酸活性物質(zhì)為主的復(fù)合成分的方法，用于人類機(jī)體免疫系統(tǒng)功能的恢復(fù)。其特征在于先取海水過(guò)濾，高壓滅菌后冷卻；表面噴灑海水；置大蒜于60~80℃,70~85%濕度環(huán)境下發(fā)酵；每隔一定時(shí)間噴灑海水1次；鮮大蒜逐漸由白變黑，成為黑大蒜；將黑大蒜烘干研碎成粉；與蒸餾水混合后加熱、冷卻；紗布粗濾后離心留取上清或?yàn)V膜濾過(guò)留取濾過(guò)液；于-60~80℃冷凍并干燥，即獲水溶性S-烯丙基-L-半胱氨酸復(fù)合物。本發(fā)明的目的是用簡(jiǎn)便獨(dú)特的技術(shù)從黑大蒜中提取制備以S-allyl-L-ceisteine有效成分為主的復(fù)合成分，用于免疫系統(tǒng)恢復(fù)。
文檔編號(hào)A23L1/218GK102077965SQ201010587079
公開日2011年6月1日 申請(qǐng)日期2010年12月14日 優(yōu)先權(quán)日2010年12月14日
發(fā)明者單風(fēng)平, 呂昌龍, 呂超 申請(qǐng)人:呂昌龍