專(zhuān)利名稱(chēng)：抗骨橋蛋白嵌合抗體、其制備方法及其在制備治療骨質(zhì)疏松藥物中的用途的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物制藥領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明公開(kāi)了一種嵌合抗體、其制備方法及其用途。
背景技術(shù)：
骨質(zhì)疏松癥(Osteoporosis)是人類(lèi)最為常見(jiàn)的一種代謝性骨病,其發(fā)病率已經(jīng)躍居各種常見(jiàn)病的第七位。隨著社會(huì)的發(fā)展，人口老齡化的趨勢(shì)越來(lái)越明顯，與之相應(yīng)的原 發(fā)性骨質(zhì)疏松的發(fā)生率明顯增高，尤其是骨質(zhì)疏松性骨折發(fā)病率很高，甚至有一定的死亡率，給社會(huì)、家庭和個(gè)人帶來(lái)巨大的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。積極防治骨質(zhì)疏松已成為老齡化社會(huì)衛(wèi)生保健的突出問(wèn)題。骨質(zhì)疏松是以骨量減少，骨組織微細(xì)結(jié)構(gòu)退化、破壞，導(dǎo)致骨的脆性增高和骨折危險(xiǎn)性增加為特征的一種全身性骨髂疾病(I)。引起骨質(zhì)疏松的原因較多，但其根本原因是破骨細(xì)胞數(shù)量增多、功能亢進(jìn)，骨吸收速率超過(guò)骨形成。因此，治療骨質(zhì)疏松的策略大多為抑制破骨細(xì)胞。骨橋蛋白(Osteopontin，0ΡΝ)，又稱(chēng)為早期T淋巴細(xì)胞活化因子I (Eta-1)或分泌型磷蛋白I，含有Arg-Gly-Asp (RGD，精氨酸一甘氨酸一天門(mén)冬氨酸)三肽序列，分子量根據(jù)去磷酸化及糖基化形式的不同大約為44-66KD之間，是一種重要的多功能細(xì)胞夕卜基質(zhì)蛋白(Eta_l (osteopontin) an early component of type-1 (cell-mediated)immunity. Science. 2000. 287 :860-864)。OPN在骨組織細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、活化的T細(xì)胞及上皮細(xì)胞等多種細(xì)胞上表達(dá)，在介導(dǎo)細(xì)胞的趨化、粘附、增殖和遷移，腫瘤轉(zhuǎn)移，骨組織的礦化與重建，免疫調(diào)節(jié)，信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)，以及對(duì)感染性疾病的免疫能力等方面有著重要的作用(Osteoprotegerin Ligand Is a Cytokine that Regulates OsteoclastDifferentiation and Activation. Cell,1998. 93 :65-176. Osteopontin role in cellsignaling and cancer progression. TRENDS in Cell Biology 2006. 16 :79-87.)o0PN主要是通過(guò)RGD及非RGD兩個(gè)途徑與細(xì)胞表面的受體相結(jié)合而實(shí)現(xiàn)其功能(Inhibition ofArg-Gly-Asp(RGD)-mediated Cell Adhesion to osteopontin by a Monoclonal Antibodyagainst osteopontin. J. Bio. Chem. 1994. 269 :23280-23285)，RGD 途徑主要是與細(xì)胞表面的整合素受體(αγβ3、αγβ1、αγβ5)結(jié)合,而非RGD途徑主要是與某些⑶44的變異體(V6、V7)結(jié)合，從而介導(dǎo)細(xì)胞的多種生理功能(Intracellular Osteopontin Is anIntegral Component of the CD44-ERM Complex Involved in Cell Migration. JOURNALOF CELLULAR PHYSIOLOGY. 2000 :184 :118-130)?？偟恼f(shuō)來(lái)，細(xì)胞所分泌的OPN經(jīng)過(guò)磷酸化、糖基化，然后再經(jīng)過(guò)凝血酶的剪切等一系列表達(dá)后修飾作用，以多種形式存在于機(jī)體中，每種形式可能有其獨(dú)特的功能，但目前的研究還不能充分說(shuō)明，有待進(jìn)一步的研究與探討。目前已證實(shí)OC的增殖活化在關(guān)節(jié)炎病灶骨侵蝕的發(fā)病機(jī)制中起著決定性的作用，各個(gè)環(huán)節(jié)使OC過(guò)度增殖或異?；钴S，打破了骨代謝的平衡，骨破壞占據(jù)優(yōu)勢(shì)。骨吸收的關(guān)鍵事件是OC連接到骨表面的礦化基質(zhì)上，實(shí)驗(yàn)證明OPN在OC拋錨的骨表面高度表達(dá)，而且OPN特異性受體一整合素也被證明優(yōu)先表達(dá)于OC胞膜的相應(yīng)區(qū)域。這可以證明在骨吸收的過(guò)程中，OPN通過(guò)連接整合素以及礦化的骨基質(zhì)實(shí)現(xiàn)OC拋錨于骨吸收部位的骨礦化基質(zhì)° Tani-Ishii 等(Osteopontin antisense deoxyoligonucIeotides inhibitbone resorption by mouse osteoclasts in vitro. J Periodontal Res,1997. 32 (6)480-6.)，在研究OPN對(duì)體外共培養(yǎng)體系中OC的分化和骨吸收的影響實(shí)驗(yàn)中發(fā)現(xiàn)OPN反義寡核苷酸能夠減少抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)陽(yáng)性細(xì)胞的數(shù)量，同時(shí)牙本質(zhì)切片上的骨吸收面積減少了。研究發(fā)現(xiàn)，在鈣化組織中，OPN能夠誘導(dǎo)破骨細(xì)胞的聚集，促進(jìn)礦化組織的吸收。將大鼠鈣化的骨盤(pán)植入其肌組織中，野生鼠的骨質(zhì)吸收速度要比OPN基因敲除的大鼠快的多，而且OPN缺失的大鼠其骨盤(pán)機(jī)化的程度和破骨細(xì)胞粘附的數(shù)量也明顯減少(Osteopontin an interfacial extracellular matrix protein in mineralizedtissues. Connect Tissue Res. 1996 ;35 (1-4) :197-205)。但有學(xué)者的研究卻表明，OPN 對(duì)正常生理性的骨發(fā)生中破骨細(xì)胞的生成是沒(méi)有影響的，而僅僅在在病理?xiàng)l件下，OPN對(duì)破骨細(xì)胞生成具有有重要的促進(jìn)作用。比如卵巢切除術(shù)后的小鼠(絕經(jīng)后骨質(zhì)疏松癥模型)，破骨細(xì)胞數(shù)量明顯增加，然而OPN敲除小鼠的卵巢切除后，破骨細(xì)胞數(shù)量無(wú)明顯增加，骨質(zhì)疏 松也明顯改善(Osteopontin-deficient mice are resistant to ovariectomy-inducedbone resorption, Proc. Natl. Acad. Sci. USA 96 (1999) 8156-8160)。同樣的，在機(jī)械壓力所致的骨質(zhì)吸收模型中，OPN缺陷小鼠也沒(méi)觀(guān)察到明顯的骨質(zhì)吸收及破骨細(xì)胞的數(shù)量改變(Enhancement of ostaoclastic bone resorption and suppression of osteoblasticbone formation in response to reduced mechanical stress do not occur in theabsenoe of osteopontin，J. Exp. Med. 193 (2001) 399-404) 這些研究結(jié)果均表明，OPN 與破骨細(xì)胞的分化或者生物學(xué)功能是密切相關(guān)的。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的發(fā)明人克隆了人和小鼠OPN基因，真核表達(dá)了人和小鼠的OPN蛋白，并通過(guò)細(xì)胞融合-雜交瘤的方法制備了多株抗人OPN單克隆抗體。建立膠原誘導(dǎo)的DBA/1J小鼠關(guān)節(jié)炎模型、卵巢切除術(shù)(OVX)誘導(dǎo)的小鼠骨質(zhì)疏松模型。在上述兩種模型中，發(fā)現(xiàn)鼠源1A18單克隆抗體能夠有效的保護(hù)骨質(zhì)疏松癥的發(fā)生。為此，對(duì)該株鼠源抗OPN抗體進(jìn)行了嵌合改造，并進(jìn)一步檢測(cè)其在上述骨質(zhì)疏松模型中的作用。


圖I. 1A18重鏈(A)輕鏈(B)可變區(qū)的核苷酸序列圖2. 1A18重鏈恒定區(qū)(A)和輕鏈恒定區(qū)⑶的核苷酸序列圖3嵌合抗體H1A18純化后SDS-PAGE4.嵌合抗體H1A18與抗原結(jié)合活性比較圖5.嵌合抗體H1A18對(duì)CIA小鼠關(guān)節(jié)骨吸收的保護(hù)作用圖6.嵌合抗體H1A18對(duì)CIA小鼠尿液中D_pyr水平的影響圖7.嵌合抗體H1A18對(duì)CIA小鼠血清中TRAP5b水平的影響圖8.嵌合抗體H1A18對(duì)CIA小鼠破骨細(xì)胞數(shù)量的影響圖9. OVX模型小鼠經(jīng)嵌合抗體H1A18治療后脛骨μ CT的變化
圖10. OVX模型小鼠經(jīng)嵌合抗體H1A18治療后脛骨破骨細(xì)胞數(shù)量的變化圖11嵌合抗體H1A18對(duì)小鼠破骨細(xì)胞分化的影響圖12嵌合抗體H1A18對(duì)小鼠破骨細(xì)胞骨吸收功能的影響
具體實(shí)施例方式以下實(shí)施例、試驗(yàn)例僅僅對(duì)本發(fā)明進(jìn)行更進(jìn)一步的說(shuō)明，不應(yīng)理解為對(duì)本發(fā)明的限制。實(shí)施例I. 1A18可變區(qū)基因克隆和序列測(cè)定收集5 X IO6 I X IO7 雜交瘤細(xì)胞 1A18 克隆，用 TRIzol (Invitrogen Cat. No. 15596-026)抽提其總RNA，根據(jù)小鼠抗體恒定區(qū)序列，設(shè)計(jì)引物如下HGSPl :5’ -GATACTGTGATCTGTTTG-3’HGSP2 :5， -TCGCAGATGAGTCTGGAC-3，HGSP3 :5， -ATGAACACACTCACATTG-3，LGSPl :5’ -GAGGTTATGACTTTCATAGTCAGC-3’LGSP2 :5， -AACACTGTCCAGGACACCATCTCG-3’LGSP3 :5， -TCTGGGATAGAAGTTGTTCATGAG-3’采用Invitrogen 5’RACE kit (Cat. No. 18374-058)，分別以 HGSPl，LGSPl 為引物，合成第一鏈cDNA ;在TdT和dCTP作用下，給第一鏈cDNA 3’端加poly C尾；分別以HGSP2，HGSP3、LGSP2，LGSP3為5，引物，通過(guò)巢式PCR得到VH、VL的PCR產(chǎn)物；將PCR產(chǎn)物裝入PGEM-T載體中；挑取克隆抽提質(zhì)粒，限制性?xún)?nèi)切酶鑒定得到陽(yáng)性克隆，通過(guò)測(cè)序確定其序列。結(jié)果獲得1A18可變區(qū)序列，其重鏈、輕鏈可變區(qū)核苷酸序列分別為SEQ ID N0:1和SEQID NO :2(又見(jiàn)圖 I)。實(shí)施例2.抗OPN嵌合抗體H1A18輕、重鏈恒定區(qū)基因的克隆用淋巴細(xì)胞分離液(鼎國(guó)生物技術(shù)發(fā)展公司產(chǎn)品)分離健康人淋巴細(xì)胞，用Trizol試劑(Invitrogen公司產(chǎn)品)提取總RNA，根據(jù)文獻(xiàn)(Cell，1980，22 =197-207)和文獻(xiàn)(Nucleic Acids Research, 1982,10 :4071-4079)報(bào)道的序列分別設(shè)計(jì)引物采用 RT-PCR反應(yīng)擴(kuò)增抗體重鏈和輕鏈恒定區(qū)基因。PCR產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳純化回收并克隆到pGEM-Τ載體中，測(cè)序驗(yàn)證后確認(rèn)獲得了正確的克隆。結(jié)果獲得了輕、重鏈恒定區(qū)核苷酸序列分別為 SEQ ID NO 3 和 SEQ ID NO :4(又見(jiàn)圖 2)。實(shí)施例3抗OPN嵌合抗體H1A18的構(gòu)建及蛋白表達(dá)采用長(zhǎng)引物重疊PCR(Overlapping PCR)的方法分別合成1A18的CDR移植抗體重、輕鏈可變區(qū)基因(HlAlSHa和HlAlSLa)，并使重鏈可變區(qū)基因的5’端含有限制酶位點(diǎn)HindIII, 端含有限制酶位點(diǎn)Nhe I，使輕鏈可變區(qū)的5’端含有限制酶位點(diǎn)HindIII，3’端含有人抗體輕鏈恒定區(qū)5’端的互補(bǔ)序列。針對(duì)重鏈和輕鏈基因，分別合成8段長(zhǎng)為75bp左右且相互間有20bp重疊的寡核苷酸引物，經(jīng)過(guò)三次重疊PCR合成基因(如圖I所示)①將引物a和b，c和d，e和f，g和h分別混合進(jìn)行PCR反應(yīng)，得到產(chǎn)物ab、cd、ef、gh。②將引物a、d與上一輪PCR產(chǎn)物ab、cd相混合后進(jìn)行擴(kuò)增，同樣將引物e、h與上一輪PCR產(chǎn)物ef、gh相混合進(jìn)行擴(kuò)增，分別得到產(chǎn)物ad和eh。③將引物a、h與上一輪PCR產(chǎn)物ad、eh相混合進(jìn)行PCR擴(kuò)增，得到產(chǎn)物ah，最后瓊脂糖凝膠電泳分離擴(kuò)增產(chǎn)物，回收目的條帶并克隆到PGEM-T載體中，篩選陽(yáng)性克隆測(cè)序，分別得到pGEM-VHlA18Ha和pGEMT_VHlA18La。PCR采用Roche公司的高保真擴(kuò)增系統(tǒng)，反應(yīng)條件均為95°C 5分鐘；94°C 45秒，55°C 45秒，720C 55秒，30個(gè)循環(huán)；72°C 7分鐘。將構(gòu)建成功的重鏈和輕鏈用脂質(zhì)體法共轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)嵌合抗體細(xì)胞株，在無(wú)血清培養(yǎng)基重大量培養(yǎng)，Protein A柱親和層析純化，SDS-PAGE電泳檢驗(yàn)抗體純度。結(jié)果表明抗體的純度在95%以上(如圖3)。實(shí)施例4嵌合抗體與抗原結(jié)合活性檢測(cè)
將構(gòu)建成功的重鏈和輕鏈用脂質(zhì)體法共轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞，篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)嵌合抗體細(xì)胞株，在無(wú)血清培養(yǎng)基重大量培養(yǎng)，Protein A柱親和層析純化后，蛋白定量。2ug/mlOPN包被ELISA板，用ELISA方法檢測(cè)嵌合抗體特異性結(jié)合OPN的活性。結(jié)果表明嵌合抗體H1A18的OPN結(jié)合活性與鼠源抗體C1A18基本相同。結(jié)果如圖4所示。實(shí)施例5嵌合抗體H1A18對(duì)CIA小鼠關(guān)節(jié)骨吸收的保護(hù)作用IOOug雞II型膠原和等體積的弗氏完全佐劑乳化后，經(jīng)DBA/1J (雄性，8-10周)尾部皮下初次免疫；21天后進(jìn)行再次免疫，即將IOOug雞II型膠原和等體積的弗氏不完全佐劑乳化后，尾部皮下再次免疫。將2次免疫后的小鼠分成2組，分別給予對(duì)照抗體(小鼠IgG, 200ug/body)、H1A18單抗(200ug/body) ；2組均腹腔給藥,從第二次免疫當(dāng)天開(kāi)始給藥，隔天給藥，連續(xù)六次。取H1A18單抗和對(duì)照治療組小鼠，于二次免疫后30天行X-ray檢測(cè)，觀(guān)察各發(fā)病關(guān)節(jié)的骨質(zhì)破壞情況。結(jié)果如圖5，與對(duì)照治療組相比，H1A18單抗治療組小鼠各趾間關(guān)節(jié)骨吸收不明顯；H1A18單抗治療組骨礦物質(zhì)密度明顯增加。提示H1A18單抗對(duì)骨吸收具有良好的保護(hù)作用。實(shí)施例6嵌合抗體H1A18對(duì)CIA小鼠尿液中D_pyr水平的影響收集不同治療組DBA/1J小鼠二次免疫后第30天的尿液，小鼠D-pyrELISA試劑盒檢測(cè)D-pyr(R&D公司)的水平。結(jié)果如圖6所示，H1A18單抗治療組尿液中D_pyr明顯低于對(duì)照組。提示H1A18單抗對(duì)骨吸收具有良好的保護(hù)作用。實(shí)施例7嵌合抗體H1A18對(duì)CIA小鼠血清中TRAP5b水平的影響收集不同治療組DBA/1J小鼠二次免疫后第30天的血液，小鼠TRAP5b ELISA試劑盒檢測(cè)TRAP5b的水平。結(jié)果如圖7所示，H1A18單抗治療組血清中TRAP5b明顯低于對(duì)照組。提示H1A18單抗對(duì)骨吸收具有良好的保護(hù)作用。實(shí)施例8嵌合抗體H1A18對(duì)CIA小鼠破骨細(xì)胞數(shù)量的影響于CIA小鼠二次免疫后30天取關(guān)節(jié)組織進(jìn)行石蠟包埋切片，各實(shí)驗(yàn)組組織切片脫蠟至水后，加入TRAP染色液，37°C水浴，避光孵育I小吋，蘇木精染色2分鐘，風(fēng)干，封片。結(jié)果如圖8所示,與對(duì)照治療組相比，H1A18單抗治療組破骨細(xì)胞數(shù)量減少。實(shí)施例90VX模型小鼠經(jīng)嵌合抗體H1A18治療后脛骨μ CT的變化取6周雌性野生型Β6小鼠，1%戊巴比妥那麻酔，背部備皮，沿背部后正中線(xiàn)作ー長(zhǎng)約O. 5 I. Ocm的皮膚切ロ，沿皮下組織分別向左右游離手術(shù)切ロ皮膚，先將皮膚切ロ向左側(cè)水平牽開(kāi)約O. 5cm，透過(guò)菲薄的肌層，在切ロ視野中可見(jiàn)ー乳白色發(fā)亮的脂肪團(tuán)，紫靠腎臟下極。用鑷子提起脂肪團(tuán)表面的肌層，沿腰大肌外側(cè)緣用眼科剪縱形剪開(kāi)肌層，長(zhǎng)約O. 5cm，在該脂肪團(tuán)中即可找到小鼠左側(cè)卵巣。行卵巣切除后，用5/0絲線(xiàn)單純縫合一針修復(fù)剪開(kāi)的肌層，同法可切除小鼠右側(cè)卵巣。修復(fù)剪開(kāi)的肌層，最后用5/0絲線(xiàn)ー針縫合皮膚切口。同上法假手術(shù)作為對(duì)照組。OVX后將WT小鼠分成2組，分別給予對(duì)照抗體(人IgG，200ug/body)、H1A18單抗(200ug/body);所有治療組均腹腔給藥,從OVX后8天開(kāi)始給藥，隔4天給藥，連續(xù)七次。于OVX后36天取小鼠脛骨行μ CT檢測(cè)，觀(guān)測(cè)各個(gè)實(shí)驗(yàn)組脛骨骨質(zhì)疏松參數(shù)。結(jié)果如圖9，與對(duì)照治療組相比，Η1Α18單抗治療組脛骨的骨密度(BMD)、骨體積分?jǐn)?shù)(BV/TV)、骨小梁數(shù)量顯著增加；而骨小梁間隙則下降。提示Η1Α18單抗對(duì)OVX所致的骨質(zhì)破壞具有保護(hù)作用。實(shí)施例10. OVX模型小鼠經(jīng)嵌合抗體Η1Α18治療后脛骨破骨細(xì)胞數(shù)量的變化OVX方法同10，各實(shí)驗(yàn)組組織切片脫蠟至水后，加入TRAP染色液，37°C水浴，避光孵育I小時(shí)，蘇木精染色2分鐘，風(fēng)干，封片；各實(shí)驗(yàn)組組織切片脫蠟至水后，加入蘇木精染色2分鐘，伊紅復(fù)染5分鐘，烘干，封片。結(jié)果見(jiàn)圖10，與對(duì)照治療組相比，H1A18單抗治療組破骨細(xì)胞數(shù)量減少。提示H1A18單抗對(duì)OVX所致的骨質(zhì)破壞具有保護(hù)作用。實(shí)施例11嵌合H1A18單抗對(duì)破骨細(xì)胞分化的影響 6-10周齡雄性B6小鼠斷頸處死，無(wú)菌條件下分離股骨及肱骨；剪斷兩側(cè)骨骺端，用Iml注射針頭將-MEM(含1000U/ml青霉素、1000U/ml鏈霉素，2mM/L的L-谷胺酰氨，10%胎牛血清，30ng/ml的M-CSF)輕輕沖洗骨髓腔；收集骨髓細(xì)胞混合液，于40 μ m濾網(wǎng)過(guò)濾并接種至直徑IOcm的培養(yǎng)皿中，37°C，5% CO2培養(yǎng)24h ;收集未貼壁的細(xì)胞，IOOOrpm離心5min，沉淀用-MEM(含1000U/ml青霉素，1000U/ml鏈霉素，2mM/L的L-谷胺酰氨，10%胎牛血清，30ng/ml的M-CSF，50ng/ml的RANKL)培養(yǎng)液重懸，計(jì)數(shù)并調(diào)整細(xì)胞濃度為I X 107/ml后接種于6孔培養(yǎng)扳中，每孔接種2ml ;培養(yǎng)48h后，PBS漂洗，以去除未黏附的細(xì)胞，以貼壁的骨髓單核細(xì)胞作為誘導(dǎo)破骨細(xì)胞的前體細(xì)胞；細(xì)胞每2天換液I次,每次換液50%。培養(yǎng)8天后用TRAP染色，TRAP+多核細(xì)胞(3個(gè)或3個(gè)以上)為破骨細(xì)胞。在WT小鼠破骨細(xì)胞分化過(guò)程中，加入不同濃度(5 μ g/ml, 10 μ g/ml, 20 μ g/ml,30 μ g/ml)HlA18單抗，PBS和30 μ g/ml人IgG作為對(duì)照，TRAP染色后，隨機(jī)取10個(gè)視野分別對(duì)不同濃度破骨細(xì)胞進(jìn)行計(jì)數(shù)，結(jié)果如圖11，與人IgG組相比，20 μ g/ml和30 μ g/mlH1A18單抗組破骨細(xì)胞數(shù)量顯著減少，提示H1A18單抗可以抑制破骨細(xì)胞分化。實(shí)施例12嵌合H1A18單抗對(duì)破骨細(xì)胞骨吸收功能的影響分離B6小鼠骨髓單核細(xì)胞，調(diào)整細(xì)胞濃度為5X 105/ml后接種于預(yù)先置放骨片的96孔培養(yǎng)扳中，每孔接種200 μ 1，加入不同濃度H1A18單抗，細(xì)胞每2天換液I次，每次換液50%;誘導(dǎo)8天后,把貼有細(xì)胞的骨片取出，IM的氫氧化氨浸泡過(guò)夜；1 %甲苯胺藍(lán)染液室溫下染色3min，蒸餾水清洗后自然涼干；光鏡下對(duì)破骨細(xì)胞吸收陷窩(圓形、橢圓形和臘腸等典型形態(tài)，邊界清楚的藍(lán)色異染區(qū))觀(guān)察采像；利用IPP軟件(版本5. 0)對(duì)陷窩面積進(jìn)行處理，每個(gè)實(shí)驗(yàn)組取5個(gè)骨片進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。實(shí)驗(yàn)結(jié)果見(jiàn)圖12，相比于對(duì)照抗體組，H1A18單抗對(duì)小鼠的破骨細(xì)胞骨吸收能力有抑制作用，而且具有劑量依賴(lài)性。
權(quán)利要求
1.一種抗骨橋蛋白嵌合抗體H1A18。
2.—種核酸分子，編碼權(quán)利要求I所述的抗骨橋蛋白嵌合抗體H1A18。
3.權(quán)利要求2所述的核酸分子，其中編碼抗骨橋蛋白嵌合抗體H1A18重鏈可變區(qū)的序列為SEQ ID NO :1，編碼抗骨橋蛋白嵌合抗體H1A18輕鏈可變區(qū)的序列為SEQ ID NO :2。
4.權(quán)利要求3所述的的核酸分子，其中編碼抗骨橋蛋白嵌合抗體H1A18重鏈恒定區(qū)的序列為SEQ ID NO :3，編碼抗骨橋蛋白嵌合抗體H1A18輕鏈恒定區(qū)的序列為SEQ ID NO :4。
5.權(quán)利要求I所述的抗骨橋蛋白嵌合抗體H1A18在制備治療骨質(zhì)疏松藥物中的用途。
全文摘要
本發(fā)明屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，更具體地，本發(fā)明公開(kāi)了一種抗骨橋蛋白嵌合抗體H1A18，編碼此抗體的核酸分子及其在制備治療骨質(zhì)疏松藥物中的用途。
文檔編號(hào)C12N15/13GK102757499SQ201110105740
公開(kāi)日2012年10月31日 申請(qǐng)日期2011年4月26日 優(yōu)先權(quán)日2011年4月26日
發(fā)明者戴建新, 李博華, 樊克興, 王華菁, 郭亞軍 申請(qǐng)人:中國(guó)人民解放軍第二軍醫(yī)大學(xué)