專利名稱：C9orf135基因、其編碼的蛋白及其抗體的應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及基因C90RF135的應用，具體講，涉及基因C90RF135、其編碼的蛋白以及該蛋白的抗體的應用及其試劑盒。
背景技術：
新基因C90RF135位于人類第13號染色體，編碼蛋白區(qū)(OTS)長度690個核苷核，編碼229個氨基酸，經(jīng)過SWISSP0RT工具分析氨基酸殘基的序列，發(fā)現(xiàn)有一個單跨膜結構域，將該蛋白分為胞外區(qū)、跨膜區(qū)和胞內區(qū)，并且有I個潛在的N-糖基化位點(表I)，其中文獻 Liu T, Qian ff. -J. , Gritsenko M. A. , et al. Human plasma N-glycoproteomeanalysis by immunoaffinity subtraction，hydrazide chemistry, and massspectrometry. J. Proteome Res. 4 :2070-2080 (2005)提不該蛋白為糖基化蛋白。該蛋白的 結構域的預測如下表所示。 表I C9orfl35編碼蛋白質(NP—001010940)的可能結構域
權利要求
1.基因C90RF135、其編碼的蛋白以及該蛋白的抗體在診斷或檢測精子畸形中的應用。
2.根據(jù)權利要求I所述的應用，其特征在于，所述的檢測方法包括定量PCR檢測法、ELISA免疫檢測法、免疫印跡法；優(yōu)選ELISA免疫檢測法。
3.根據(jù)權利要求2所述的應用，其特征在于，采用定量PCR法檢測基因C90RF135的表達，用定量PCR儀檢測，當待測組的基因C90RF135水平低于正常參比組基因C90RF135水平1/3時，判定為精子畸形； 采用ELISA免疫檢測法檢測C90RF135編碼的蛋白時，當待測組的基因C90RF135編碼的蛋白質水平低于正常參比組基因C90RF135水平的一半時，判定為精子畸形。
4.一種用于診斷或檢測精子畸形的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒為定量PCR的試劑盒，包括提取精子RNA的試劑盒、正常參比組的RNA、逆轉錄試劑、C90RF135基因的引物、內參的引物，SYBR熒光試劑盒，所述內參采用魚精蛋白I。
5.根據(jù)權利要求4所述的試劑盒，其特征在于，所述的C90RF135基因前引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示，C90RF135基因后引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 2所示；魚精蛋白I如引物的核昔酸序列如SEQ ID NO :3所不,魚精蛋白I后引物的核昔酸序列如SEQID NO 4 所示。
6.一種用于診斷或檢測精子畸形的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒采用免疫檢測法，包括提取精子蛋白質的試劑盒、C90RF135抗體包被的孔板、C90RF135的單克隆或多克隆抗體、作為濃度參比標準的C90RF135純化蛋白、第二抗體、ELISA顯色試劑，用于檢測的酶標儀，其中，C90RF135抗體為單抗或多抗。
7.一種用于診斷或檢測衰老引起的精子活力下降及精子畸形的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒采用免疫檢測法，包括提取精子蛋白質的試劑盒、C90RF135抗體包被的孔板、C90RF135的單克隆或多克隆抗體、作為濃度參比標準的C90RF135純化蛋白、第二抗體、ELISA顯色試劑，用于檢測的酶標儀，其中，C90RF135抗體為單抗或多抗。
8.根據(jù)權利要求6或7任一權利要求所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中的C90RF135的單克隆或多克隆抗體為兔源，所述的第二抗體選自辣根過氧化物酶羊抗兔IgG0
9.根據(jù)權利要求6或7任一權利要求所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒的使用方法為將C90RF135抗體包被的96孔板，加入提取的精子蛋白質，再加入C90RF135抗體混合，溫育，洗去非特異性吸附的蛋白，加入二抗和顯色劑；用原核表達的C90RF135蛋白作為參考的標準品，按濃度從高到低倍比稀釋，繪制標準曲線；通過測定待測精子蛋白質的吸光度，計算其含量；其中，C90RF135抗體為單抗或多抗。
10.基因C90RF135、其編碼的蛋白以及該蛋白的抗體在作為男性避孕藥的潛在靶點中的應用。
11.根據(jù)權利要求10所述的應用，其特征在于，通過比較待測化合物對正常精子的C90RF135表達水平有無抑制作用，從而判定待測化合物是否有藥效。
12.基因C90RF135、其編碼的蛋白以及該蛋白的抗體在檢測胚胎干細胞分化中的應用。
13.根據(jù)權利要求12所述的應用，其特征在于，所述的檢測方法包括定量PCR檢測法、ELISA免疫檢測法。
14.根據(jù)權利要求13所述的應用，其特征在于，當采用定量PCR檢測法時，當待測組的基因C90RF135的水平不低于胚胎干細胞組50%時，判定為未分化；當采用免疫檢測法時，當待測組的基因C90RF135編碼的蛋白質的水平不低于胚胎干細胞組50%時，判定為未分化。
15.一種用于檢測胚胎干細胞分化的試劑盒，所述試劑盒包括RNA提取試劑盒、正常參比組的RNA、逆轉錄試劑、C90RF135基因的引物、內參的引物、SYBR熒光試劑盒，所述內參采用GAPDH。
16.根據(jù)權利要求15所述的試劑盒，其特征在于，所述的C90RF135基因前引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 1所示，C90RF135基因后引物的核苷酸序列如SEQ ID NO 2所示；內參GAPDH前引物的核苷酸序列如SEQ ID NO :5所示，后引物的核苷酸序列如SEQ IDNO :6所/Jn ο
17.一種用于檢測胚胎干細胞分化的試劑盒，所述試劑盒包括蛋白質提取試劑盒、 C90RF135抗體包被的96孔板、C90RF135的單克隆或多克隆抗體、作為濃度參比標準的C90RF135純化蛋白、第二抗體、ELISA顯色試劑，用于檢測的酶標儀，其中，C90RF135抗體為單抗或多抗。
全文摘要
本發(fā)明涉及基因C9ORF135的應用，具體講涉及基因C9ORF135、其編碼的蛋白以及該蛋白的抗體的應用及其試劑盒。本發(fā)明提出基因C9ORF135、其編碼的蛋白以及該蛋白的抗體在診斷、檢測或治療精子畸形中的應用，在作為男性避孕藥的潛在靶點中的應用、在診斷、檢測或治療衰老引起的精子活力下降及精子畸形中的應用，以及在檢測胚胎干細胞分化中的應用，本發(fā)明還提出用于檢測精子畸形的試劑盒、用于篩選男性避孕藥物的試劑盒、用于檢測胚胎干細胞分化的試劑盒及其使用方法。
文檔編號C12Q1/68GK102827921SQ20111015947
公開日2012年12月19日 申請日期2011年6月14日 優(yōu)先權日2011年6月14日
發(fā)明者李凌松, 周士新, 文錦華 申請人:李凌松, 周士新, 文錦華