專利名稱：融合蛋白GPR85-Gi1α及其編碼基因和應用的制作方法
技術領域：
本發(fā)明涉及一種融合蛋白GPR85-Gila及其編碼基因和應用。
背景技術：
G蛋白(G-protein)是一種在細胞內信號傳導途徑中起著重要作用的GTP結合蛋白，由a，β，Y三個不同亞基組成。G蛋白具有GTP酶活性，有a，β，Υ三聚體G蛋白、低分子量的單體小G蛋白和高分子量的其他G蛋白三類。G蛋白偶聯(lián)受體(G-protein coupled receptor),是一種與三聚體G蛋白偶聯(lián)的細胞表面受體，含有7個穿膜區(qū)，是迄今發(fā)現(xiàn)的最大的受體超家族，其成員有1000多個。G蛋白偶聯(lián)受體與配體結合后通過激活所偶聯(lián)的G蛋白，啟動不同的信號轉導通路并導致各 種生物效應。G蛋白偶聯(lián)受體與其配基-激素、神經遞質和細胞激素等相互作用，并且充當促進或關閉一很多功能生物過程的分子開關。G蛋白偶聯(lián)受體在血壓調節(jié)、炎癥和心理疾病等多種疾病中扮演關鍵角色?，F(xiàn)代新藥研究與開發(fā)的關鍵首先是尋找、確定和制備藥物篩選靶-分子藥靶。藥物靶點是指藥物在體內的作用結合位點，包括基因位點、受體、酶、離子通道、核酸等生物大分子。選擇確定新穎的有效藥靶是新藥開發(fā)的首要任務。迄今已發(fā)現(xiàn)作為治療藥物靶點的總數約500個，而G-蛋白偶聯(lián)的受體(GPCR)靶點占其中受體的絕大多數。高通量藥物篩選是開發(fā)藥物早期階段的最重要工具之一。

發(fā)明內容
本發(fā)明的目的是提供一種融合蛋白GPR85_Gil a及其編碼基因和應用。本發(fā)明提供的蛋白質，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質；(b)將(a)的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有G蛋白抗原活性的由序列I衍生的蛋白質。為了使(a)中的蛋白質便于純化，可在(a)的蛋白質的氨基末端或羧基末端連接上如表I所示的標簽。表I標簽的序列
標簽殘基序列
~Poly-Arg5-6(通常為 5 個) RRRRR
~Poly-His2-10(通常為 6 個) HHHHHH
~FlM8DYKDDDDK
權利要求
1.一種蛋白質，是如下(a)或(b) (a)由序列表中序列I所示的氨基酸序列組成的蛋白質； (b)將(a)的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有G蛋白抗原活性的由序列I衍生的蛋白質。
2.編碼權利要求I所述蛋白的基因。
3.如權利要求2所述的基因，其特征在于所述基因是如下I)至4)中任一所述的DNA分子 1)序列表中序列2自5’末端I至2172位核苷酸所示的DNA分子； 2)序列表中序列2所示的DNA分子； 3)在嚴格條件下與I)或2)限定的DNA序列雜交且編碼具有G蛋白抗原活性的蛋白的DNA分子； 4)與I)或2)限定的DNA序列具有90%以上同源性且編碼具有G蛋白抗原活性的蛋白的DNA分子。
4.含有權利要求2或3所述基因的重組表達載體、表達盒、重組細胞或重組菌。
5.如權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于所述重組表達載體為將權利要求2或3所述基因插入pFASTBacl質粒的多克隆位點得到的重組質粒。
6.如權利要求4所述的重組表達載體，其特征在于所述重組表達載體為將權利要求5所述重組質粒導入大腸桿菌DHlOBac菌株，通過菌內重組得到的含有權利要求2或3所述基因的桿狀病毒質粒。
7.一種制備權利要求I所述蛋白的方法，包括如下步驟 (1)將權利要求6所述桿狀病毒質粒轉染昆蟲細胞，培養(yǎng)后收集上清，即為Pl代病毒液； (2)將所述Pl代病毒液感染昆蟲細胞，培養(yǎng)后得到權利要求I所述蛋白。
8.如權利要求7所述的方法，其特征在于所述昆蟲細胞為sf9細胞；所述步驟(I)中，所述培養(yǎng)的培養(yǎng)時間為72小時；所述步驟(2)中，所述感染的感染劑量為MOI = 5，所述培養(yǎng)的培養(yǎng)時間為72h。
9.一種表達權利要求I所述蛋白的試劑盒，包括大腸桿菌DHlOBac菌株、昆蟲細胞和權利要求4或5所述的重組表達載體。
10.權利要求I所述蛋白在藥物篩選中的應用。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種融合蛋白GPR85-Gi1α及其編碼基因和應用。本發(fā)明提供的融合蛋白，是如下(a)或(b)(a)由序列表中序列1所示的氨基酸序列組成的蛋白質；(b)將(a)的氨基酸序列經過一個或幾個氨基酸殘基的取代和/或缺失和/或添加且具有G蛋白抗原活性的由序列1衍生的蛋白質。單獨的GPR85或Gi1α蛋白脫離了生命狀態(tài)(活細胞環(huán)境)是無法結合在一起的，需要借助細胞內環(huán)境，才能結合成為被Gi1α蛋白特異性抗體識別的蛋白復合物。而本發(fā)明提供的融合蛋白，脫離了生命狀態(tài)(活細胞環(huán)境)即具有Gi1α蛋白的抗原活性，可以作為體外篩選系統(tǒng)，對候選的作為藥物的化合物或小分子進行篩選(考察其能否與融合蛋白結合)。
文檔編號C12N15/866GK102863536SQ20111018562
公開日2013年1月9日 申請日期2011年7月4日 優(yōu)先權日2011年7月4日
發(fā)明者劉永學, 彭明麗, 吳芳明, 陳曦, 韓春光, 白月霞 申請人:中國人民解放軍軍事醫(yī)學科學院放射與輻射醫(yī)學研究所