專利名稱：截短型溶血鏈球菌溶菌素o及利用其的檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種重組蛋白基因以及試劑盒。更具體而言，涉及一種截短型溶血鏈球菌溶菌素O重組蛋白與ASO檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
溶血鏈球菌溶血素O (Sti^ptolysin 0，SL0)是多種溶血性鏈球菌都會(huì)表達(dá)的一種分泌型蛋白，人在感染溶血性鏈球菌后會(huì)對SLO產(chǎn)生特異抗體。抗鏈球菌溶血素O (ASO)的檢測，是臨床診斷溶血性鏈球菌感染的重要指標(biāo)之一。提純的SLO主要來源于溶血鏈球菌中SLO的提純，以及在大腸桿菌表達(dá)菌株中表達(dá)SLO蛋白并純化。以上兩種方法均存在一些局限性，從溶血鏈球菌中提純SL0，得率低，難以大規(guī)模生產(chǎn)，同時(shí)存在生物安全隱 患；利用原核表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)純化SL0，由于SLO蛋白對細(xì)菌細(xì)胞具有毒性，一般難以大量表達(dá)。在現(xiàn)有技術(shù)中已有人報(bào)道了，每升細(xì)菌培養(yǎng)物(7-8g菌體濕重/升)能純化出38. Smg左右蛋白，而其中目的蛋白的純度只有40% (參見非專利文獻(xiàn)I :Sandra Camprub' I,Marc Bruguera, Francesca Canalias. International Journal of BiologicalMacromolecules,38(2006)134-139)。 175-574全長SLO基因是含有571個(gè)氨基酸殘基(aa)的蛋白，通過結(jié)構(gòu)預(yù)測發(fā)現(xiàn)，這一蛋白大致可以分為前后三個(gè)區(qū)域。其中，第一段區(qū)域1-77個(gè)aa，是胞外分泌信號(hào)肽，具有細(xì)胞毒性；最后一段459-571aa具有細(xì)胞膜鉚定功能，是SLO的毒性相關(guān)結(jié)構(gòu)域(參見非專利文獻(xiàn) 2 Silvia Weis, Michael Palmer. Biochimica et Biophysica Acta,1510(2001)292-299)。我們選擇對101_400aa的片段進(jìn)行克隆表達(dá)?，F(xiàn)有技術(shù)中報(bào)道的表達(dá)方案，一般只去除蛋白的信號(hào)肽部分，表達(dá)剩余大部分蛋白，但因?yàn)槭Ｓ嗖糠值亩拘杂绊懠?xì)胞生長，產(chǎn)量也不高。由非專利文獻(xiàn)I的記載可知，每升細(xì)菌培養(yǎng)物(7_8g濕菌體/升)能純化出38. Smg左右蛋白，而其中目的蛋白的純度只有40%。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明要解決的問題本發(fā)明的目的在于提供一種能在表達(dá)載體中大量表達(dá)SLO的基因以及基因工程菌，并利用該SLO制備ASO檢測試劑盒。解決問題的手段本發(fā)明人將SLO的Domain I和4截去，將剩余的截短的SLO基因克隆到大腸桿菌等表達(dá)載體中，使之大量表達(dá)并利于純化。具體而言，本發(fā)明人提供如下的技術(shù)方案。I. 一種DNA序列，其喊基序列如SEQ ID NO I所不。2. 一種DNA序列，其為編碼如下蛋白質(zhì)的序列(a)氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示；(b)在(a)限定的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸序列且具有溶血鏈球菌溶血素O免疫原性的蛋白質(zhì)。3. —種溶血鏈球菌溶血素0，其特征在于，(a)氨基酸序列如SEQ ID NO 2所示；(b)在(a)限定的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸序列且具有溶血鏈球菌溶血素O免疫原性的蛋白質(zhì)。4. 一種表達(dá)載體,其含有權(quán)利要求I或2所述的DNA序列。5. 一種制備溶血鏈球菌溶血素O的方法，包括用技術(shù)方案4所述的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化體，獲得重組的制備溶血鏈球菌溶血素O。6.根據(jù)技術(shù)方案5所述的方法，其特征在于，宿主細(xì)胞是大腸桿菌。 7. 一種抗溶血鏈球菌溶血素O檢測試劑盒，其特征在于，包含緩沖液、疊氮鈉以及包被技術(shù)方案3所述的溶血鏈球菌溶血素O的膠乳。8. 一種抗溶血鏈球菌溶血素O檢測試劑盒的制備方法，其特征在于，包含如下工序a)將膠乳微球用緩沖液稀釋，將緩沖液溶解的技術(shù)方案3所述的溶血鏈球菌溶血素O加入到所述膠乳微球的稀釋液中，室溫?cái)嚢韬?，收集沉淀?用緩沖液重懸所述沉淀，調(diào)整所述膠乳濃度至規(guī)定濃度。技術(shù)效果根據(jù)本發(fā)明，截短的SLO序列能使SLO蛋白的產(chǎn)量大大提高，每升細(xì)菌培養(yǎng)物能純化得到150mg以上的SLO蛋白，純度90%以上。將SLO重組抗原用來研制ASO膠乳增強(qiáng)試劑盒，發(fā)現(xiàn)研制的ASO試劑盒檢測臨床標(biāo)本結(jié)果和對照ASO試劑盒測試結(jié)果相關(guān)性很好，證明表達(dá)的SLO依然保持了特異的免疫原性。


圖I是ASO試劑定標(biāo)曲線，曲線中的每一個(gè)點(diǎn)代表一個(gè)含量的校準(zhǔn)品，X軸表示ASO含量，Y軸表示吸光度；圖2是自制試劑和對照試劑測定50人份血清相關(guān)性分析相關(guān)性圖表；圖3是表不SLO基因的克隆的電泳圖；圖4是經(jīng)IPTG的誘導(dǎo)過的截短型SLO蛋白電泳圖，(+)表示經(jīng)IPTG的誘導(dǎo)，(_)表示未經(jīng)IPTG的誘導(dǎo)；圖5是上清液和沉淀中的截短型SLO蛋白電泳圖。
具體實(shí)施例方式本發(fā)明的截短型溶血鏈球菌溶菌素O基因本發(fā)明提供一種堿基序列如SEQ ID NO 1所示的DNA序列，以及編碼如SEQ IDNO :2所示的氨基酸序列的DNA序列。根據(jù)簡并密碼子原理，簡并密碼子之間的突變并不改變氨基酸序列，這種突變不會(huì)影響蛋白質(zhì)本身的性質(zhì)，因此，這一類的變異也屬于本申請的專利保護(hù)范圍之內(nèi)。此外，與本發(fā)明提供的DNA序列對應(yīng)的RNA序列也可實(shí)現(xiàn)本發(fā)明的效
果O作為本發(fā)明的對象的基因序列，并不限于前述SEQ ID NO :1所示的DNA序列以及其中的簡并密碼子突變序列，還包括編碼與該蛋白質(zhì)具有同等功能的蛋白質(zhì)的其他基因序列。作為具有同等功能的蛋白質(zhì)，例如可以為在SEQ ID NO :2限定的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸序列且具有SLO免疫原性的蛋白質(zhì)。本發(fā)明的基因序列可以通過PCR方式從鏈球菌(Streptococcus pyogenes)的基因組DNA中擴(kuò)增，或可通過基因合成獲得，國內(nèi)可以進(jìn)行基因合成的公司有上海生工，上海旭冠，北京英駿等。本發(fā)明的蛋白質(zhì)本發(fā)明還提供一種溶血鏈球菌溶血素0，其特征在于，(a)氨基酸序列如SEQ IDN0:2所示；(b)在(a)限定的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸序列且具有SLO免疫原性的蛋白質(zhì)。此類蛋白質(zhì)可以為由SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列中缺失、取代、插入和/或添 加上述數(shù)量的氨基酸殘基后的氨基酸序列組成，且具有SLO免疫原性的蛋白質(zhì)。此外，此類蛋白質(zhì)還可以為具有與SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列有約70%以上、更優(yōu)選為80%以上、進(jìn)一步優(yōu)選為90%以上、最優(yōu)選為95%以上的同一性的氨基酸序列且具有SLO免疫原性的蛋白質(zhì)。此類蛋白質(zhì)可通過使用《MolecularCloning 3》、《Current Protocols inMolecular Biology))等記載的定點(diǎn)誘變法獲得。本發(fā)明中，在蛋白質(zhì)的氨基酸序列中取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸序列，是指在同一序列中的任意I個(gè)或多個(gè)氨基酸序列的位置上的I個(gè)或多個(gè)氨基酸殘基取代、缺失或添加，并且可同時(shí)發(fā)生取代、缺失或添加中的兩種以上。下面例舉可互相取代的氨基酸殘基，同一組中包含的氨基酸殘基可互相取代。A組亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、纈氨酸、正纈氨酸、丙氨酸、2-氨基丁酸、蛋氨酸、O-甲基絲氨酸、叔丁基甘氨酸、叔丁基丙氨酸、環(huán)己基丙氨酸組天冬氨酸、谷氨酸、異天冬氨酸、異谷氨酸、2-氨基己二酸、2-氨基辛二酸；(組天冬酰胺、谷氨酰胺山組賴氨酸、精氨酸、鳥氨酸、2，4- 二氨基丁酸、2，3- 二氨基丙酸；E組脯氨酸、3-羥基脯氨酸、4-羥基脯氨酸；F組絲氨酸、蘇氨酸、高絲氨酸；G組苯丙氨酸、酪氨酸。本發(fā)明的蛋白質(zhì)也可以通過Fmoc法(芴甲氧羰基法)、tBoc法(叔丁氧羰基法)等化學(xué)合成法合成。并且，也可以利用Advanced Chem Tech公司、鉬金埃爾默(PerkinElmer) >Pharmacia 公司、Protein Technology Installment 公司、Synthecell-Vega 公司、PerSeptive公司、島津制作所等制造的肽合成儀進(jìn)行化學(xué)合成。本發(fā)明的載體及使用該載體轉(zhuǎn)化的大腸桿菌本發(fā)明提供含有上述基因序列的載體，所述載體是指攜帶靶DNA片段進(jìn)入宿主細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增和表達(dá)的工具。作為載體，可例舉出質(zhì)粒、噬菌體、病毒、粘粒等生物工程領(lǐng)域中常用的載體。本發(fā)明的載體通常包括表達(dá)盒，該表達(dá)盒含有的結(jié)構(gòu)要素為(I)在宿主細(xì)胞內(nèi)可轉(zhuǎn)錄的啟動(dòng)子；(2)在該啟動(dòng)子的正義方向或反義方向上連接的上述基因序列；以及
(3)涉及RNA分子的轉(zhuǎn)錄終止以及多聚腺苷化作用，在宿主內(nèi)起作用的信號(hào)。本發(fā)明中，優(yōu)選表達(dá)載體為pET28b載體，優(yōu)選宿主為大腸桿菌DH5a、DE3，但本發(fā)明的載體和宿主并不限于此。分子克隆技術(shù)通常特指基因克隆(gene cloning)或DNA重組技術(shù)(recombinantDNA technology)?；蚩寺≈饕á龠B接外源基因和克隆載體，構(gòu)建重組DNA分子，②將重組DNA分子轉(zhuǎn)入受體細(xì)胞，使外源基因隨受體細(xì)胞分裂而得以復(fù)制、繁殖?；蚩寺〉幕痉椒ㄖ饕幸韵虏僮骱徒Y(jié)果(I)包括有目的基因在內(nèi)的DNA片斷插入到空載體中，空載體包括可以包括多種常見的檢測標(biāo)記(例如熒光標(biāo)記、抗生素標(biāo)記等報(bào)告基因)和酶切位點(diǎn)。重組載體可以采用空載體本身多克隆位點(diǎn)的多種核酸內(nèi)切酶(如Ndel、NcoI、EcoRI、HindIII，BamHI等)，可以先用酶線性化空載體，與采用相同核酸內(nèi)切酶處理的目的基因片段相連接，構(gòu)建本發(fā)明的重組表達(dá)載體。本發(fā)明選用NcoI和XhoI雙酶切pET28b及其連接的PCR產(chǎn)物片段，經(jīng)連接酶連接，構(gòu)建本發(fā)明的重組pET28b-SL0。(2)重組載體pET28b_SL0可以通過生物分子學(xué)領(lǐng)域常見的方法重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)或者轉(zhuǎn)染到宿主細(xì)胞中，如氯化鈣法化學(xué)轉(zhuǎn)化，高壓電擊轉(zhuǎn)化，本發(fā)明優(yōu)選化學(xué)法進(jìn)行轉(zhuǎn)化；所述的宿主細(xì)胞可以為原核細(xì)胞或者真核細(xì)胞，包括大腸桿菌、枯草芽孢桿菌、畢赤酵母細(xì)胞或者動(dòng)植物細(xì)胞，本發(fā)明優(yōu)選大腸桿菌細(xì)胞BL21 (DE3)。 (3)將重組表達(dá)質(zhì)粒pET28b-SL0轉(zhuǎn)化至BL21 (DE3)細(xì)胞中后，即得到生產(chǎn)SLO抗原的基因工程菌株，基因工程菌株經(jīng)過大量培養(yǎng)、誘導(dǎo)后，可以通過離心方法分析重組細(xì)胞和培養(yǎng)基，用高壓勻漿或者超聲的方法破碎細(xì)胞，用離心或者過濾方法去除細(xì)胞碎片，用親和層析方法從上清液中純化SLO抗原。對純化的SLO抗原可以用如下方法進(jìn)行純度確定，如電泳分析法(SDS-PAGE)、抗原抗體法、蛋白質(zhì)譜法、擴(kuò)散分析、恒溶度法等。本發(fā)明的ASO檢測試劑盒以及使用方法本發(fā)明所述SLO抗原基因工程菌的構(gòu)建方法和一種可以定量檢測溶血素“O”試劑盒。優(yōu)選的情況下,本發(fā)明的試劑盒包括SLO抗原、聚苯乙烯微球和牛血清白蛋白等，聚苯乙烯微球在試劑盒中的作用是起到膠乳增強(qiáng)作用，牛血清白蛋白是起穩(wěn)定試劑作用，由于用本發(fā)明所述的方法可以制備大量表達(dá)的SLO抗原，并且重組抗原的特異性很好，所以用本發(fā)明所述的SLO抗原制備的抗鏈球菌素O測定試劑盒具有靈敏度高的優(yōu)點(diǎn)，并且可以進(jìn)行規(guī)模化制備。免疫膠乳增強(qiáng)試劑盒由兩種試劑組成試劑I為酸堿緩沖液+0. 1%BSA溶液，試劑2為將包被好的微球用試劑I充分懸浮的乳濁液?？梢允褂玫木彌_液包括PH6. 0-8. O的磷酸鹽緩沖液(50mM)，pH 8. 5-9. 5的硼酸緩沖液，pH 8. 0-9. 5的Tris-HCl緩沖液，pH 8. 0-9. 6的碳酸緩沖液。優(yōu)選pH 7. 0-8. O的緩沖液，但不僅限于上述緩沖液組分。為了保證乳濁液的分散性，有時(shí)也可以添加O. 1% TritonX-IOO0為了保證目的蛋白在試劑盒中的穩(wěn)定性，可加入一定比例的疊氮鈉(O. 01% -O. 1% ), DTT(ImM)等試劑?？规溓蚓豋測定試劑盒臨床上用于測定人體血清或血漿中抗鏈球菌素O的含量。鏈球菌素O(SLO)是鏈球菌的一種胞外產(chǎn)物，它能溶解細(xì)胞膜從而導(dǎo)致溶血。抗鏈球菌素(ASO)是SLO的抗體。ASO測試能為早期的鏈球菌感染提供證據(jù)，主要應(yīng)用于急性風(fēng)濕熱、鏈球菌感染后的血管球性腎炎、患有咽炎的個(gè)人以及其它急性感染的檢驗(yàn)。上述ASO檢測試劑盒的制備方法，包含如下工序a)用濃度為50mM的pH 7. O的磷酸鹽緩沖液，將膠乳微球進(jìn)行稀釋，在分光光度計(jì)上檢測OD值為2. 0-2. 5 (波長600nm，光徑Icm),將緩沖液溶解的抗原加入到所述膠乳微球的稀釋液中，以50rpm/min的攪拌速度，在室溫下攪拌3小時(shí)，25000g條件下離心I小時(shí)，收集沉淀，；b)用含有O. I % BSA的pH為7. O的磷酸鹽緩沖液重懸沉淀，并將濃度調(diào)整至OD值為I. 2-1. 4 (波長600nm，光徑Icm)。實(shí)施例下面，通過實(shí)施例對本發(fā)明進(jìn)行更進(jìn)一步的說明，但是，本發(fā)明并不限于如下實(shí)施例。實(shí)驗(yàn)材料I 菌種本實(shí)驗(yàn)用到的大腸桿菌DH5 α和BL21 (DE3)購自天根公司。鏈球菌Streptococcus pyogenes由軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院提供。
2 載體本實(shí)驗(yàn)涉及到的表達(dá)載體pET28b由本實(shí)驗(yàn)室保存。3 引物本實(shí)驗(yàn)用到的引物SL0-1/SL0-2均為生工合成。SL0-1 ATCGCATATG AAACAAAACACTGCTAGTACAGAAAC,附加 NdeI 酶切位點(diǎn)；SL0_2 ATCGCTCGAG AGCTTCATTGCTGACACCTTTTC,附加 XhoI 酶切位點(diǎn)。4培養(yǎng)基LB培養(yǎng)基蛋白胨10g/L酵母粉5g/LNaCl10g/L121 20min 滅菌。5 其他本實(shí)施例中所用到的Taq酶與dNTP、限制性內(nèi)切酶，修飾酶與連接酶等購自Takara 公司，鎮(zhèn)柱購自 GE Company 的 HisTrap H. P。實(shí)施例I截短的SLO基因的克隆和表達(dá)載體的構(gòu)建將鏈球菌菌種接種于肉浸液肉湯培養(yǎng)基(Meat Infusion Broth)，37 °C震蕩培養(yǎng)18-24小時(shí)。離心收集菌體,沉淀重新懸浮于Iml ΤΕ(ρΗ8·0)中。加入6μ1 50mg/ml的溶菌酶，37°C作用 2h，再加入 2mol/L NaCl 50 μ 1,10% SDS 110 μ 1，20mg/ml 的蛋白酶K 3μ 1，50°C作用15min。之后將菌液分到IOml離心管中，加等體積的酚氯仿異戊醇(25 24 1)，混勻后放置5min。12000rpm離心lOmin，吸取上清。重復(fù)抽提兩次。在上清中加入0. 6倍體積的異丙醇,混勻，室溫放置lOmin。12000rpm離心IOmin,沉淀用75%的乙醇洗滌、涼干后，溶于50 μ I ddH20中。按照SLO基因序列設(shè)計(jì)引物SL0-1/SL0-2，以純化的鏈球菌DNA為模板，擴(kuò)增SLO的第100-400位aa的基因序列，約0. 9kb，參見圖3，預(yù)計(jì)表達(dá)得到的蛋白大小為30_35kD。將擴(kuò)增正確的目的條帶回收，用NcoI和XhoI消化后，連入同樣酶切的pET28b載體。轉(zhuǎn)化大腸桿菌DH5a，提取質(zhì)粒并酶切鑒定，得到的陽性克隆命名為pET28b-SL0。將酶切鑒定為陽性的質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)菌種BL21(DE3)，然后涂布在含有卡那霉素(100ug/ml)的LB固體培養(yǎng)基上，經(jīng)抗性篩選可以得到SLO抗原基因工程菌。酶切陽性的質(zhì)粒測序，測序結(jié)果表明表達(dá)載體構(gòu)建正確。實(shí)施例2截短型SLO蛋白的表達(dá)
從LB固體培養(yǎng)基上挑選SLO基因工程菌落，分別接種于含有100ug/ml的LB培養(yǎng)基中37°C過夜培養(yǎng)，第二天I : 1000稀釋于LB培養(yǎng)基中，37°C培養(yǎng)至0D2. 0，加入終濃度ImM的IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)，4小時(shí)后收獲菌液。將未加IPTG的菌液作為未誘導(dǎo)的對照。分別取誘導(dǎo)前后的菌液各500 μ 1，離心后去上清，菌體用200 μ I的蛋白上樣緩沖液重懸，煮沸5min后離心，上清用于SDS-PAGE檢測?？捡R斯亮藍(lán)的染色結(jié)果顯示，經(jīng)過IPTG的誘導(dǎo)，在預(yù)測的分子量處有一條特異的濃集的蛋白條帶，而未誘導(dǎo)的菌體則沒有，具體結(jié)果請見圖4。選擇表達(dá)水平高的菌株為工程菌株。誘導(dǎo)后的細(xì)菌超聲破碎后離心，分別取上清和沉淀進(jìn)行SDS-PAGE檢測，結(jié)果表明重組蛋白大部分以可溶形式存在于上清中，具體結(jié)果請見圖5。SDS電泳結(jié)果表明，在預(yù)期大小(30_35kD)很大一部分SLO蛋白都以可溶的形式在上清中存在，因此可用鎳柱親和層析的方法將目的蛋白純化。純化后電泳檢測結(jié)果表明，目的蛋白的純度可以達(dá)到95%以上。IL培養(yǎng)基大約可純化150mg目的蛋白。重組SLO蛋白的免疫原性測定本試驗(yàn)用ELISA方法驗(yàn)證了重組蛋白的免疫原性。ElISA吸光治讀數(shù)如表I所示。以BSA包被的小孔為陰性對照，對照與樣品各做3個(gè)重復(fù)，ASO的稀釋度為I : 20000。ELISA數(shù)據(jù)表明，重組的SLO蛋白與ASO有很強(qiáng)的特異免疫反應(yīng)。表ISLO重組蛋白的ELISA檢測
權(quán)利要求
1.一種溶血鏈球菌溶血素O，其特征在于， (a)所述溶血鏈球菌溶血素O的氨基酸序列如SEQID NO 2所示；或者 (b)所述溶血鏈球菌溶血素O的氨基酸序列在(a)限定的氨基酸序列中經(jīng)過取代、缺失或添加一個(gè)或幾個(gè)氨基酸，并且所述溶血鏈球菌溶血素O具有溶血鏈球菌溶血素O免疫原性。
2.—種DNA，其序列編碼權(quán)利要求I所述的溶血鏈球菌溶血素O。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的DNA，其序列如SEQID N0:1所示。
4.一種表達(dá)載體，其含有權(quán)利要求2或3所述的DNA序列。
5.一種制備溶血鏈球菌溶血素O的方法，其包括用權(quán)利要求4所述的表達(dá)載體轉(zhuǎn)化宿主細(xì)胞，培養(yǎng)轉(zhuǎn)化體，獲得重組的制備溶血鏈球菌溶血素O。
6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于，所述宿主細(xì)胞是大腸桿菌。
7.一種抗溶血鏈球菌溶血素O檢測試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包含緩沖液、疊氮鈉以及包被權(quán)利要求I所述的溶血鏈球菌溶血素O的膠乳。
8.根據(jù)權(quán)利要求7所述的抗溶血鏈球菌溶血素O檢測試劑盒，其中，包含如下工序a)將膠乳微球用緩沖液稀釋，將緩沖液溶解權(quán)利要求I所述的溶血鏈球菌溶血素O加入到所述膠乳微球的稀釋液中，室溫?cái)嚢韬?，收集沉淀?用緩沖液重懸所述沉淀，調(diào)整所述膠乳濃度至規(guī)定濃度。
全文摘要
本發(fā)明提供一種截短型溶血鏈球菌溶菌素O基因與ASO檢測試劑盒。本發(fā)明人克隆部分SLO基因片段，將該部分的SLO基因克隆到大腸桿菌等表達(dá)載體中，使之產(chǎn)量表達(dá)并利于純化。具體而言，本發(fā)明人提供一種DNA序列，其堿基序列如SEQ ID NO1所示。根據(jù)本發(fā)明，截短的SLO序列能使SLO蛋白的產(chǎn)量大大提高，每升細(xì)菌培養(yǎng)物能純化得到150mg以上的SLO蛋白，純度90％以上，經(jīng)過免疫學(xué)實(shí)驗(yàn)證明，這一分段表達(dá)的SLO依然保持了特異的免疫原性。
文檔編號(hào)C12N15/63GK102964435SQ20111025582
公開日2013年3月13日 申請日期2011年8月31日 優(yōu)先權(quán)日2011年8月31日
發(fā)明者不公告發(fā)明人 申請人:北京利德曼生化股份有限公司研發(fā)中心