專利名稱：預(yù)測原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移潛力的基因標志物的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于醫(yī)藥學(xué)領(lǐng)域；更具體地，本發(fā)明涉及預(yù)測原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移潛力的基因標志物。
背景技術(shù)：
任何事物的發(fā)生發(fā)展都處于內(nèi)外因共同作用之下，內(nèi)因為主，外因為輔?；蜃鳛樯倪z傳介質(zhì)，在生物體的生、老、病、死中處于基礎(chǔ)內(nèi)因的地位。絕大部分基因通過轉(zhuǎn)錄生成核糖核酸，再翻譯生成蛋白質(zhì)而發(fā)揮生物學(xué)功能。基因的功能雖然主要是通過蛋白質(zhì)來體現(xiàn)，但仍可以通過基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA的含量而部分反映。全基因組表達譜芯片含2萬余個探針，利用DNA雙鏈同源互補的原理在全基因組水平上檢測樣本中所含各種mRNA的含量，因此可在同一時間對待測樣本中全基因組范圍內(nèi)的基因的轉(zhuǎn)錄水平進行檢測，進而推測基因功能。原發(fā)性肝癌是中國最常見的惡性腫瘤之一，其惡性程度高，發(fā)展迅速，治療困難，病死率高。因此，肝癌的盡早診斷就愈發(fā)顯得迫切。然而，迄今為止，本領(lǐng)域?qū)τ谂c原發(fā)性肝癌密切相關(guān)的基因了解甚少，因此本領(lǐng)域迫切需要進一步地分離各種與原發(fā)性肝癌密切相關(guān)的基因，找到對于診斷肝癌的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)或檢測有關(guān)的基因標志物。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的目的在于提供預(yù)測原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移潛力的基因標志物。在本發(fā)明的第一方 面，提供一種多核苷酸集，所述的多核苷酸集包括編碼以下蛋白的多核苷酸(較佳地，由編碼以下蛋白的多核苷酸組成)可溶性運載蛋白家族成員25,脂肪酸去飽和酶，Retbindin,⑶K5調(diào)節(jié)亞基結(jié)合蛋白2，谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶mu 2，腫瘤蛋白p53誘導(dǎo)的核蛋白2，跨膜蛋白123，谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶mu 1，ArfGAP3，與酵母ATG2自噬相關(guān)蛋白2同源的蛋白A，與果蠅巨大幼蟲致死基因同源的蛋白2，Kruppel樣因子13，輔酶脫氫酶I alpha子基I和KIAA0649蛋白。在一個優(yōu)選例中，所述的多核苷酸集包括序列如SEQ ID NO :1_14所示的14種多核苷酸。在本發(fā)明的另一方面，提供所述的多核苷酸集的用途，用于制備測定(或預(yù)測)原發(fā)性肝癌患者的肝癌轉(zhuǎn)移情況或轉(zhuǎn)移潛力的檢測試劑或試劑盒。在另一優(yōu)選例中，所述的試劑是特異性擴增所述的多核苷酸集中各多核苷酸的引物對；或是特異性識別所述的多核苷酸集中各多核苷酸的探針。在本發(fā)明的另一方面，提供一種用于測定(或預(yù)測)原發(fā)性肝癌患者的肝癌轉(zhuǎn)移情況或轉(zhuǎn)移潛力的試劑，其是特異性識別序列如SEQ ID NO :n所示的多核苷酸的探針，所述的探針的核苷酸序列如SEQ ID NO n+14所示；其中η為選自1_14的正整數(shù)。在本發(fā)明的另一方面，提供一種基因芯片，所述的基因芯片包括
固相載體；以及有序固定在所述固相載體上的探針，所述的探針特異性地對應(yīng)于SEQ IDNO n所示的序列，其中η為選自1-14的正整數(shù)。在另一優(yōu)選例中，所述的探針是特異性識別序列SEQ ID NO η所示的多核苷酸的探針，所述的探針的核苷酸序列如SEQ ID Ν0:η+14所示。在另一優(yōu)選例中，所述的探針含有互補結(jié)合區(qū)和/或與固相載體相連的連接區(qū)。在本發(fā)明的另一方面，提供所述的基因芯片的用途，用于制備測定(或預(yù)測)原發(fā)性肝癌患者的肝癌轉(zhuǎn)移情況或轉(zhuǎn)移潛力的試劑盒。在本發(fā)明的另一方面，提供一種測定(或預(yù)測)原發(fā)性肝癌患者的肝癌轉(zhuǎn)移情況或轉(zhuǎn)移潛力的試劑盒，所述的試劑盒中含有所述的基因芯片。在另一優(yōu)選例中，所述的試劑盒中還包括核酸抽提液、顯色液或雜交液。本發(fā)明的其它方面由于本文的公開內(nèi)容，對本領(lǐng)域的技術(shù)人員而言是顯而易見的。


圖1、以MDS算法轉(zhuǎn)換后的已發(fā)生轉(zhuǎn)移肝癌樣本(紅色點或淺色點)和未發(fā)生轉(zhuǎn)移肝癌樣本(藍色點或深色點)在三維空間內(nèi)的散點圖。
具體實施方式
本發(fā)明人通過檢測兩種肝癌患者來源的(分別為腫瘤切除手術(shù)后在觀察期內(nèi)腫瘤“已發(fā)生轉(zhuǎn)移的”和“未發(fā)生轉(zhuǎn)移的”患者)原發(fā)性肝癌的癌組織樣本的基因表達譜水平，用統(tǒng)計學(xué)方法，首次從中篩選出14個特異性的基因。經(jīng)檢驗證明，這些特異性的基因標志物可非常有效地用于區(qū)分原發(fā)性肝癌的高轉(zhuǎn)移潛力樣本和低轉(zhuǎn)移潛力樣本。基因標志物及其用途原發(fā)性肝癌是我國最常見的惡性腫瘤之一。本發(fā)明人采用芯片雜交的方法得到原發(fā)肝癌患者的已發(fā)生轉(zhuǎn)移的肝癌樣本和未發(fā)生轉(zhuǎn)移的肝癌樣本的全基因組表達譜，通過比較兩種肝癌組織的表達譜，得到高轉(zhuǎn)移潛力樣本與低轉(zhuǎn)移潛力樣本間差異表達的基因。在這些差異基因中，使用C-SVC分類器(高斯核函數(shù))算法篩選得到分類準確度為100%的一組分類器(含14個基因)。由這14個基因組成的分類器，可預(yù)測肝癌病人原發(fā)肝癌是否有轉(zhuǎn)移，其預(yù)測準確度達到100%。可以把這14個基因開發(fā)成小型基因芯片或RT-PCR試劑盒用于肝癌轉(zhuǎn)移的預(yù)測。所述的14個基因如下KIAA1896，F(xiàn)ADS3，RTBDN, FLJ10867, GSTM2，C20orfll0, POR頂IN, GSTMl, CENTG3, KIAA0404, LLGL2, KLF13, NDUFAl, KIAA0649?；诒景l(fā)明人的新發(fā)現(xiàn)，可以以上述14個基因作為檢測(確定、鑒定或診斷)肝癌轉(zhuǎn)移情況或轉(zhuǎn)移潛力的標志物(標記物)。通過分析這些基因的表達情況，從而得知受試者的肝癌是否已發(fā)生轉(zhuǎn)移，或可早期評估受試者肝癌轉(zhuǎn)移的可能性，為疾病的診斷或預(yù)后提供依據(jù)?？刹捎酶鞣N技術(shù)來檢測上述基因的表達情況，這些技術(shù)均包含在本發(fā)明中?；蛩缴希瑱z測可以針對cDNA，也可針對基因組DNA，或針對mRNA ;可用的已有技術(shù)如(但不限于)基因芯片技術(shù)、探針雜交技術(shù)、聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)、Southern印跡法、DNA序列分析等。作為本發(fā)明的一種選擇方式，通過定量或半定量的聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)法來分析樣品中上述基因的表達情況以及表達量，從而可做出判斷。較佳地，通過RT-PCR實現(xiàn)檢測?；蛐酒鳛楸景l(fā)明的一種優(yōu)選方式，采用基因芯片技術(shù)來檢測上述基因的表達情況。所述的基因芯片上包含針對上述基因的探針；更優(yōu)選的，所述的基因芯片上包含針對兩種或兩種以上所述基因的探針；最優(yōu)選的，所述的基因芯片上包含針對所述14種基因的探針。本發(fā)明所述的基因芯片，包括固相載體和有序固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針由10-100個(更特別的為20-80個；更特別的為30-70個)連續(xù)核苷酸組成。所述探針還可以在其5’端包含一段氨基修飾的1-30聚的聚脫氧胸苷酸(聚dT)。所述固相載體可采用基因芯片領(lǐng)域的各種常用材料，例如但不限于尼龍膜，經(jīng)活性基團(如醛基、氨基、異硫晴酸基等)修飾的玻片或硅片、未修飾的玻片、塑料片等。本發(fā)明的基因芯片的制備可采用生物芯片的常規(guī)制造方法。例如，如果固相載體采用的是修飾玻片或硅片，探針的5’端含有氨基修飾的聚dT串，可將寡核苷酸探針配制成溶液，然后點樣儀將其點在修飾玻片或硅片，排列成預(yù)定的序列或陣列，然后通過放置過夜來固定，就可得到本發(fā)明的基因芯片。如果寡核苷酸探針不含氨基修飾，則其制備方法也可參照王申五主編的《基因診斷技術(shù)-非放射性操作手冊》J. L. erisi, V. R.1yer,P. O. BROWN. Exploring the metabolic and genetic control of gene expression on agenomic scale. Science, 1997 ；278 680和馬立人,蔣中華主編.生物芯片.北京化學(xué)工業(yè)出版社,2000，1-130。另一個方面，本發(fā)明還提供了一種通過基因芯片檢測人組織中所述基因表達譜的方法，包括步驟 (I)提供分離自人組織的RNA樣品，在所述的RNA上設(shè)置標記物；(2)將⑴的RNA與所述的芯片接觸，使所述的RNA與固相載體上的寡核苷酸探針發(fā)生雜交反應(yīng)，從而在固相載體上形成“寡核苷酸探針-RNA” 二元復(fù)合物；(3)檢測(2)形成的二元復(fù)合物的標記物，從而確定人組織中相應(yīng)的基因的表達
-1'TfeP曰。本發(fā)明所述的RNA與芯片之間的固相雜交按照本領(lǐng)域的經(jīng)典方法進行，本領(lǐng)域一般人員依據(jù)經(jīng)驗容易確定有關(guān)緩沖液、探針和樣本濃度、預(yù)雜交溫度、雜交溫度以及時間等的最適條件?；蛘咭部梢詤⒄铡斗肿涌寺嶒炛改稀分兴龅摹Ｈ缓蟾鶕?jù)標記信號在芯片上的位置、強度等信息獲取待測信息。若擴增產(chǎn)物用熒光基團標記，也可直接用熒光檢測設(shè)備(如激光共聚焦掃描儀Scanarray3000等)獲取待測信息。對核酸樣本進行標記的標記基團包括但不限于地高辛分子(DIG)、生物素分子(Bio)、熒光素及其衍生生物分子(FITC等)、其他熒光分子(如Cy3、Cy5等)、堿性磷酸酶(AP)、辣根過氧化物酶(HRP)等。這些標記及其標記方法都已是本領(lǐng)域眾所周知的常規(guī)技術(shù)，也可以參照王申五主編的《基因診斷技術(shù)-非放射性操作手冊》J.薩姆布魯克，D.W.拉塞爾主編，《分子克隆實驗指南》，科學(xué)出版社，2002年；馬立人，蔣中華主編.生物芯片.北京化學(xué)工業(yè)出版社，2000，1-130。將上述核酸樣本與基因芯片進行雜交時，可以先將基因芯片與預(yù)雜交緩沖液進行預(yù)雜交。核酸樣本與基因芯片之間的固相雜交按照本領(lǐng)域的經(jīng)典方法進行，本領(lǐng)域一般人員依據(jù)經(jīng)驗容易確定有關(guān)緩沖液、探針和樣本濃度、預(yù)雜交溫度、雜交溫度以及時間等的最適條件。然后根據(jù)標記信號在基因芯片上的位置、強度等信息獲取待測信息。若擴增產(chǎn)物用熒光基團標記，也可直接用熒光檢測設(shè)備(如激光共聚焦掃描儀Scanarray3000等)獲取待測信息。檢測試劑盒本發(fā)明還提供一種用于檢測所述基因的表達情況的試劑盒。所述的試劑盒可用于檢測受試者肝癌是否發(fā)生轉(zhuǎn)移或可用于檢測所述基因的表達譜。所述的試劑盒中包括本發(fā)明所述的芯片。更優(yōu)選的，所述的試劑盒中還含有用于標記RNA樣品的標記物，以及與所述標記物相對應(yīng)的底物。此外，所述的試劑盒中還可包括用于提取RNA、PCR、雜交、顯色等所需的各種試劑，包括但不限于抽提液、擴增液、雜交液、酶、對照液、顯色液、洗液、抗體等。此外，所述的試劑盒中還可包括使用說明書和/或芯片圖像分析軟件。所述的芯片圖像分析軟件比如BaiO公司的BaiO ArrayDoctor 2. O, Media Cybernetics公司的Arraypro 4.0。下面結(jié)合具體實施例，進一步闡述本發(fā)明。應(yīng)理解，這些實施例僅用于說明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規(guī)條件如J.薩姆布魯克等編著， 分子克隆實驗指南，科學(xué)出版社，2002中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件。除非另外說明，否則百分比和份數(shù)按重量計算。除非另行定義，文中所使用的所有專業(yè)與科學(xué)用語與本領(lǐng)域熟練人員所熟悉的意義相同。此外，任何與所記載內(nèi)容相似或均等的方法及材料皆可應(yīng)用于本發(fā)明中。文中所述的較佳實施方法與材料僅作示范之用。實施例1、RNA樣本的制備組織樣本49例癌組織(包括28例已發(fā)生轉(zhuǎn)移樣本和21例未發(fā)生轉(zhuǎn)移樣本)來自于原發(fā)性肝癌患者的手術(shù)切除標本，這些標本來自于浙江大學(xué)第一附屬醫(yī)院和啟東肝癌研究所；10例正常肝來自于意外死亡者。上述所有標本的取得均通過上海市政府授權(quán)的WHO合作組織倫理委員會的同意。組織樣本的臨床資料包括性別、年齡、腫瘤大小、病理分級(Edmonson)、肝硬化與否、轉(zhuǎn)移與否、復(fù)發(fā)與否、HBV和HCV感染情況等。所有患者術(shù)前都沒有接受化療，術(shù)后隨訪最長達60個月?；蛐酒蚪M表達譜芯片，采用博奧生物有限公司(http://www.capitalbio.com)的晶芯 人類全基因組寡核苷酸微陣列芯片V1. O (雙通道芯片)，含22000余個基因探針。組織總RNA提取1.樣品的收集和保存離體組織切割成小塊后立即置于液氮中速凍，然后可以移至-80°C冰箱保存。2.組織塊破碎組織塊放于液氮中研磨成粉，每克組織加入ImlTrizol (Invitrogen 公司)。3.總RNA抽提按每毫升Trizol加O. 2ml的氯仿，劇烈振蕩15秒，室溫孵育2_3分鐘；4°C，10，000g離心15分鐘；將無色上清液移入新的離心管中，加O. 5ml異丙醇，室溫孵育10分鐘，IOOOOg 4°C離心10分鐘；倒掉上清，O. 75ml75% (v/v)乙醇洗滌，4°C，7，500g離心5分鐘；倒掉上清，室溫干燥RNA沉淀5-10分鐘(勿使RNA完全干燥)，用DEPC處理后的無RNA酶H2O溶解沉淀。4.分光光度計法定量RNA，并取少量Total RNA進行電泳，檢查RNA是否降解。實施例2、篩選差異顯著的基因28例已發(fā)生轉(zhuǎn)移的癌樣本與正常肝樣本(10例混合)、21例未發(fā)生轉(zhuǎn)移的癌樣本與正常肝樣本(10例混合)分別用cy3和cy5兩種熒光染料標記，與全基因組表達譜芯片上的探針競爭性雜交。雜交后的芯片用晶芯 LuXScan IOK微陣列芯片掃描儀掃描獲得結(jié)果圖像，再通過其隨機附帶的LuxScan 3. O通用微陣列圖像分析軟件對雜交結(jié)果定量。由此，得到28例有轉(zhuǎn)移樣本對正常樣本(有轉(zhuǎn)移/正常，Metastasis/Normal)mRNA芯片和21例無轉(zhuǎn)移樣本對正常樣本(無轉(zhuǎn)移/正常,Non-Metastasis/Normal)mRNA芯片的表達譜數(shù)據(jù)。將上述28例有轉(zhuǎn)移/正常和10例無轉(zhuǎn)移/正常的芯片結(jié)果首先用LOWESS (局部加權(quán)回歸分析)歸一化。之后，經(jīng)歸一化后的有轉(zhuǎn)移/正常(Metastasis/Normal)、無轉(zhuǎn)移/正常(Non-Metastasis/Normal)的芯片結(jié)果取以2為底的對數(shù)(Iog2X)，使用經(jīng)兩組T檢驗方法(因為有轉(zhuǎn)移樣本 和無轉(zhuǎn)移樣本來源于不同病人)校正后的隨機方差模型(RVM)篩選得到有轉(zhuǎn)移/無轉(zhuǎn)移(Metastasis/Non-Metastasis)的顯著差異基因。為驗證基因差異的顯著性不是由巧合引起的，本發(fā)明人引入上述T檢驗方法后再對數(shù)據(jù)隨機重排1000次，檢測一個基因在通過前述方法篩選后被檢定為顯著性差異基因的假陽性率(FDR, False Discovery Rate)。在上述統(tǒng)計學(xué)方法中，只有p值< 0. 05的基因才會被篩選為顯著性差異基因。分類器(可區(qū)分兩類組織的基因)的篩選與驗證為尋找用于區(qū)分兩類樣本(有轉(zhuǎn)移與無轉(zhuǎn)移)，本發(fā)明人使用Matlab軟件的Lib-SVM工具包，使用C-SVC (參數(shù)C的支持矢量分類器)和V-SVC (參數(shù)V的支持矢量分類器)兩種方法，并各自米用四種核函數(shù)(linear kernel,ploy kernel, gauss kernel, tanhkernel)，共計8種方法構(gòu)建SVM分類器。SVM(support vector machine,支持矢量機)分類器是兩類樣本間差異基因的差異倍數(shù)的對數(shù)值的非線性函數(shù)，它尋找能最大化兩類樣本間距離的超平面，因而可以最好地區(qū)分兩類樣本。為檢驗分類器的分類準確度，本發(fā)明人選用在所有的交叉檢驗方法中最穩(wěn)定的10乘10折交叉檢驗法。10折交叉檢驗法，是將樣本總體分成10個子份，每次選I個子份作為測試數(shù)據(jù)集，其余9個子份作為訓(xùn)練數(shù)據(jù)集，重復(fù)10次(每次以不同的一個子份作為測試數(shù)據(jù)集)。如此得到的10個檢驗結(jié)果相結(jié)合形成對分類器分類準確度的一個評估值。再由8種算法中選擇分類準確度最高的一種作為最佳分類器。為直觀地顯示同組樣本間的相似以及不同組樣本間的相異，本發(fā)明人在3維視效中引入多維標度法(multidimensional scaling,MDS)。MDS算法以被分類器(一組基因)定義的樣本-樣本間相似度矩陣為基礎(chǔ)，確定每一個樣本在低維空間內(nèi)的位置，并使之適應(yīng)于三維視效。在此三維空間中，兩樣本越接近，則它們越相似；反之，若兩樣本相距越遠，則它們之間越不同。結(jié)果篩選差異基因時以P值< O. 05為界。有轉(zhuǎn)移樣本與無轉(zhuǎn)移旁樣本(有轉(zhuǎn)移/無轉(zhuǎn)移,Metastasis/Non-Metastasis)之間，共有90個顯著差異基因。以這些差異基因作為分類器候選基因。套入8種SVM分類器算法并使用前述的10乘10折的交叉檢驗來驗證分類器的分類準確度。經(jīng)1000次數(shù)據(jù)置換的10乘10折交叉驗證得到分類器后，為測試該分類器的預(yù)測能力，本發(fā)明人隨機挑選10個樣本作為未知樣本，以該分類器對每個樣本的組織來源(有轉(zhuǎn)移或無轉(zhuǎn)移)進行預(yù)測，觀察其預(yù)測準確度。綜合8種算法，由C-SVC(gauSSkernel，高斯核函數(shù))這一算法得到的分類準確度最高。這一算法得到的用于區(qū)分有轉(zhuǎn)移與無轉(zhuǎn)移樣本的14個基因組成的分類器，見表1，其分類準確度可達到100%，對未知樣本的預(yù)測準確率達到100%。表1、組成分類器的 14個基因
權(quán)利要求
1.一種多核苷酸集，其特征在于，所述的多核苷酸集包括編碼以下蛋白的多核苷酸 可溶性運載蛋白家族成員25,脂肪酸去飽和酶,Retbindin,⑶K5調(diào)節(jié)亞基結(jié)合蛋白2,谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶mu 2，腫瘤蛋白p53誘導(dǎo)的核蛋白2，跨膜蛋白123，谷胱甘肽硫轉(zhuǎn)移酶mu 1，ArfGAP3，與酵母ATG2自噬相關(guān)蛋白2同源的蛋白A，與果蠅巨大幼蟲致死基因同源的蛋白2，Kruppel樣因子13，輔酶脫氫酶Ialpha子基I和KIAA0649蛋白。
2.如權(quán)利要求1所述的多核苷酸集，其特征在于，所述的多核苷酸集包括序列如SEQID NO: 1-14所示的14種多核苷酸。
3.權(quán)利要求1或2所述的多核苷酸集的用途，其特征在于，用于制備測定原發(fā)性肝癌患者的肝癌轉(zhuǎn)移情況或轉(zhuǎn)移潛力的檢測試劑或試劑盒。
4.如權(quán)利要求3所述的用途，其特征在于，所述的試劑是特異性擴增權(quán)利要求1或2所述的多核苷酸集中各多核苷酸的引物對；或是特異性識別權(quán)利要求1或2所述的多核苷酸集中各多核苷酸的探針。
5.一種用于測定原發(fā)性肝癌患者的肝癌轉(zhuǎn)移情況或轉(zhuǎn)移潛力的試劑，其是特異性識別序列如SEQ ID NO :n所示的多核苷酸的探針，所述的探針的核苷酸序列如SEQ ID NO n+14所示；其中η為選自1-14的正整數(shù)。
6.一種基因芯片，其特征在于，所述的基因芯片包括 固相載體；以及 有序固定在所述固相載體上的探針，所述的探針特異性地對應(yīng)于SEQ IDNO η所示的序列，其中η為選自1-14的正整數(shù)。
7.如權(quán)利要求6所述的基因芯片，其特征在于，所述的探針是特異性識別序列SEQIDNO η所示的多核苷酸的探針,所述的探針的核苷酸序列如SEQ IDNO η+14所示。
8.權(quán)利要求6或7所述的基因芯片的用途，用于制備測定原發(fā)性肝癌患者的肝癌轉(zhuǎn)移情況或轉(zhuǎn)移潛力的試劑盒。
9.一種測定原發(fā)性肝癌患者的肝癌轉(zhuǎn)移情況或轉(zhuǎn)移潛力的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中含有權(quán)利要求6或7所述的基因芯片。
10.如權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于，所述的試劑盒中還包括核酸抽提液、顯色液或雜交液。
全文摘要
本發(fā)明涉及預(yù)測原發(fā)性肝癌轉(zhuǎn)移潛力的基因標志物。本發(fā)明人通過檢測原發(fā)性肝癌患者的無轉(zhuǎn)移癌組織樣本以及有轉(zhuǎn)移癌組織樣本的基因表達譜水平，用統(tǒng)計學(xué)方法，首次從中篩選出14個特異性的基因。經(jīng)檢驗證明，這些特異性的基因標志物可非常有效地用于預(yù)測原發(fā)性肝癌患者的肝癌轉(zhuǎn)移情況或轉(zhuǎn)移潛力。
文檔編號C12Q1/68GK103060312SQ20111032640
公開日2013年4月24日 申請日期2011年10月24日 優(yōu)先權(quán)日2011年10月24日
發(fā)明者何祥火, 魏霖, 梁琳慧, 顧健人 申請人:上海市腫瘤研究所