專利名稱：一種細菌耐藥基因的檢測試劑盒的制作方法
技術領域：
本實用新型屬于生物技術領域，涉及一種細菌耐藥基因的檢測試劑盒。
背景技術：
I型新德里金屬β -內(nèi)酰胺酶基因是科學家發(fā)現(xiàn)的一種新型細菌耐藥基因，它編碼一種新的金屬-β -內(nèi)酰胺酶，能水解幾乎所有的β -內(nèi)酰胺類抗菌藥物，使細菌幾乎對所有抗生素耐藥，很難治愈。此外，由于該基因?qū)儆诳梢苿拥倪z傳因子，因此可以在不同細菌基因組間傳遞，使更多細菌變得耐藥。目前，針對外來傳染病的實驗室快速檢測技術主要采用的是免疫學檢測及核酸檢測技術，尤其是以聚合酶鏈式反應技術為代表的核酸檢測技術，能夠非常靈敏的檢測到各種傳染病的病原體。而實時熒光定量聚合酶鏈式反應技術以其特異性強、定量、敏感、方便等優(yōu)點已得到全世界的公認，越來越廣泛用于病原體等諸多檢測。其中探針法以其對目標序列的高特異性、高重復性及設計簡單的特點而更為常用。實時熒光定量聚合酶鏈式反應技術檢測病原體的成功應用就是研發(fā)出成熟、標準的試劑盒。 目前國內(nèi)還沒有運用該技術檢測“超級細菌” I型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶基因的試劑盒。
發(fā)明內(nèi)容本實用新型的目的在于提供一種細菌耐藥基因的檢測試劑盒，采用探針及實時熒光定量聚合酶鏈式反應技術，可以快速、準確地檢測國際旅行人員和貨物是否攜帶了具有I 型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶基因的“超級細菌”，保障國家公共衛(wèi)生安全。本實用新型采用的技術方案一種細菌耐藥基因的檢測試劑盒，包括盒體、盒蓋、 襯墊，其盒體內(nèi)設置有定性檢測細菌耐藥基因I型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶基因的檢測試劑及盛裝容器。所述的盒體內(nèi)設置有上襯墊、下襯墊，上襯墊、下襯墊為分體或整體結(jié)構，上襯墊和下襯墊上設置有數(shù)個上下相互對應的孔位。所述的上襯墊和下襯墊上的孔位內(nèi)分別放置有盛裝有探針法熒光定量聚合酶鏈式反應液的容器、盛裝有脫氧核糖核酸聚合酶的容器、盛裝有陰性對照品的容器、盛裝有陽性對照品的容器。所述的盛裝有探針法熒光定量聚合酶鏈式反應液的容器內(nèi)設置有熒光定量聚合酶鏈式反應緩沖液、氯化鎂、探針、四種脫氧核糖核苷三磷酸及檢測用引物，檢測用引物為一對，即上游引物和下游引物，四種脫氧核糖核苷三磷酸為三磷酸腺嘌呤脫氧核苷酸、三磷酸鳥嘌呤脫氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脫氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脫氧核苷酸。所述的盛裝有陽性對照品的容器內(nèi)設置有含有I型新德里金屬β -內(nèi)酰胺酶基因的脫氧核糖核酸樣本，盛裝有陰性對照品的容器內(nèi)設置有無I型新德里金屬β -內(nèi)酰胺酶基因的脫氧核糖核酸樣本。所述的盒蓋為分體或與盒體連為一體結(jié)構。本實用新型采用新型探針及實時熒光定量聚合酶鏈式反應技術，定性檢測細菌耐藥基因I型新德里金屬內(nèi)酰胺酶基因，經(jīng)“超級細菌”陽性菌株和從國際旅行人員及貨物采集的樣本分離得到的病原菌進行驗證，證明該“超級細菌” I型新德里金屬β -內(nèi)酰胺酶基因檢測試劑盒切實可行，可以靈敏快速，特異準確地檢測國際旅行人員和貨物是否感染了攜帶該基因的“超級細菌”，為保障我國國境衛(wèi)生檢疫安全建立了一道堅實的屏障。

圖1為本實用新型結(jié)構示意圖；圖2為本實用新型的內(nèi)部結(jié)構示意圖。
具體實施方式
參照圖1、圖2所示，一種細菌耐藥基因的檢測試劑盒，主要包括盒體1、盛裝有脫氧核糖核酸聚合酶的容器2、上襯墊3、盒蓋4、下襯墊5、盛裝有陰性對照品的容器6、盛裝有陽性對照品的容器7、盛裝有探針法熒光定量聚合酶鏈式反應液的容器8等；其盒體1內(nèi)設置有定性檢測細菌耐藥基因I型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶基因的各種檢測試劑及盛裝容器；所述的盒體1內(nèi)設置有上襯墊3、下襯墊5，上襯墊3、下襯墊5可以是分體或整體結(jié)構； 上襯墊3和下襯墊5上設置有數(shù)個上下相互對應的孔位，各孔位內(nèi)分別放置有現(xiàn)有技術的盛裝有探針法熒光定量聚合酶鏈式反應液的容器8、盛裝有脫氧核糖核酸聚合酶的容器2、 盛裝有陰性對照品的容器6、盛裝有陽性對照品的容器7等；盒體1上設置有盒蓋4。本試劑盒保存于-20攝氏度，盡量減少反復凍融。所述的盛裝有探針法熒光定量聚合酶鏈式反應液的容器8內(nèi)設置有熒光定量聚合酶鏈式反應緩沖液、氯化鎂、探針、四種脫氧核糖核苷三磷酸、檢測用引物，所述的探針為 5’ -FAM-CGCACCGAATGTCTGGCAGCACAC-BHQ1-3’，四種脫氧核糖核苷三磷酸為三磷酸腺嘌呤脫氧核苷酸、三磷酸鳥嘌呤脫氧核苷酸、三磷酸胸腺嘧啶脫氧核苷酸、三磷酸胞嘧啶脫氧核苷酸。檢測用引物為一對，包括上游引物F :5’ -ACCCGGCATGTCGAGATAGG-3’及下游引物 R:5’ -CGGTTTGGCGATCTGGTTTTC-3’ ；用于檢測I型新德里金屬β -內(nèi)酰胺酶基因。上述探針及檢測試劑均為現(xiàn)有技術，可市售。所述的盛裝有陽性對照品的容器7內(nèi)設置有含有I型新德里金屬β -內(nèi)酰胺酶基因的脫氧核糖核酸樣本，盛裝有陰性對照品的容器6內(nèi)設置有無I型新德里金屬β -內(nèi)酰胺酶基因的脫氧核糖核酸樣本。本實用新型的使用方法每次檢測均應設置陽性對照品和陰性對照品；擴增檢測在實時熒光定量聚合酶鏈式反應儀上進行，分為三個反應管，其中一個反應管為被檢測樣品，陽性對照品和陰性對照品各需要一個反應管，每管中總體積為25微升，其中探針法熒光定量聚合酶鏈式反應液為19微升，脫氧核糖核酸聚合酶為1微升，檢測樣品為5微升，檢測樣品即基因組脫氧核糖核酸或陽性對照品或陰性對照品。反應條件為95攝氏度30秒， 95攝氏度5秒和60攝氏度20秒為一個循環(huán)，循環(huán)四十次，在退火階段檢測熒光；反應完成后在熒光定量聚合酶鏈式反應儀上進行終點熒光讀取，根據(jù)得到的二維熒光圖和實時擴增曲線讀取被檢測樣品是否含有I型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶基因。
權利要求1.一種細菌耐藥基因的檢測試劑盒，包括盒體、盒蓋、襯墊，其特征在于盒體(1)內(nèi)設置有定性檢測細菌耐藥基因I型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶基因的檢測試劑及盛裝容器。
2.根據(jù)權利要求1所述的細菌耐藥基因的檢測試劑盒，其特征在于所述的盒體(1)內(nèi)設置有上襯墊C3)、下襯墊(5)，上襯墊C3)、下襯墊( 為分體或整體結(jié)構，上襯墊C3)和下襯墊( 上設置有數(shù)個上下相互對應的孔位。
3.根據(jù)權利要求2所述的細菌耐藥基因的檢測試劑盒，其特征在于所述的上襯墊(3) 和下襯墊( 上的孔位內(nèi)分別放置有盛裝有探針法熒光定量聚合酶鏈式反應液的容器 (8)、盛裝有脫氧核糖核酸聚合酶的容器O)、盛裝有陰性對照品的容器(6)、盛裝有陽性對照品的容器⑵。
4.根據(jù)權利要求1所述的細菌耐藥基因的檢測試劑盒，其特征在于所述的盒蓋(4)為分體或與盒體(1)連為一體結(jié)構。
專利摘要本實用新型涉及一種細菌耐藥基因的檢測試劑盒。包括盒體、盒蓋、襯墊，其盒體內(nèi)設置有定性檢測細菌耐藥基因I型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶基因的檢測試劑及盛裝容器；采用新型探針及實時熒光定量聚合酶鏈式反應技術，定性檢測細菌耐藥基因I型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶基因，經(jīng)“超級細菌”陽性菌株和從國際旅行人員及貨物采集的樣本分離得到的病原菌進行驗證，該“超級細菌”I型新德里金屬β-內(nèi)酰胺酶基因檢測試劑盒切實可行，可以靈敏快速，特異準確地檢測國際旅行人員和貨物是否感染了攜帶該基因的“超級細菌”，為保障我國國境衛(wèi)生檢疫安全建立了一道堅實的屏障。
文檔編號C12Q1/68GK202297608SQ201120386560

公開日2012年7月4日 申請日期2011年10月12日 優(yōu)先權日2011年10月12日
發(fā)明者劉豐, 孫麗萍, 張曉龍, 李新, 李海山, 王艷, 陳春霞, 韓輝 申請人:中國檢驗檢疫科學研究院