專利名稱：胎盤(pán)干細(xì)胞群的制作方法
胎盤(pán)干細(xì)胞群本申請(qǐng)是申請(qǐng)日為2006年12月28日、申請(qǐng)?zhí)枮?00680053575. 3、名稱為“胎盤(pán)
干細(xì)胞群”的發(fā)明申請(qǐng)的分案。本申請(qǐng)要求2005年12月29日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?0/754，968的利益；以及2006年12月22日提交的美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?0/846，641的利益。
1.發(fā)明領(lǐng)域本發(fā)明提供了分離的胎盤(pán)干細(xì)胞，胎盤(pán)干細(xì)胞群，包含該干細(xì)胞的組合物，以及獲得該干細(xì)胞的方法。2.
背景技術(shù)：
人類干細(xì)胞是全能或多能前體細(xì)胞，其能產(chǎn)生多種成熟人類細(xì)胞系。有證據(jù)證明，干細(xì)胞可用于恢復(fù)許多，如果不是全部的，組織，以及恢復(fù)生理和解剖功能。許多不同類型的哺乳動(dòng)物干細(xì)胞已經(jīng)被表征。參見(jiàn)，例如，Caplan等，美國(guó)專利號(hào)5，486，359 (人類間充質(zhì)干細(xì)胞)；BoySe等，美國(guó)專利號(hào)5，004，681 (胎兒和新生兒造血干細(xì)胞和祖細(xì)胞)；Boyse等，US 5，192，553 (相同的)；Beltrami等，Cell114(6) :763-766(2003)(心臟干細(xì)胞);Forbes 等，J. Pathol. 197(4) :510-518(2002)(肝干細(xì)胞)。臍帶血和來(lái)源于臍帶血的全部有核細(xì)胞已被用于移植，以部分或完全地恢復(fù)已經(jīng)進(jìn)行消融治療(ablative therapy)的患者的造血功能。3.發(fā)明概述
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本發(fā)明提供了分離的胎盤(pán)干細(xì)胞，胎盤(pán)干細(xì)胞群，包含該干細(xì)胞的組合物，以及獲得該干細(xì)胞的方法。本發(fā)明首先提供了分離的干細(xì)胞，包含這種干細(xì)胞的細(xì)胞群，其中該干細(xì)胞存在于并可分離自胎盤(pán)組織(例如，羊膜、絨毛膜、胎盤(pán)小葉等等)。胎盤(pán)干細(xì)胞顯示干細(xì)胞的一種或多種特性(例如，顯示與干細(xì)胞相關(guān)的標(biāo)記，在未分化狀態(tài)培養(yǎng)時(shí)復(fù)制至少10-20倍，分化成三個(gè)胚層的成熟細(xì)胞，等等)，并能附著于組織培養(yǎng)基質(zhì)(例如，組織培養(yǎng)塑料如組織培養(yǎng)皿或多孔板的表面)。在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞，其是⑶200+或HLA-G+。在特定的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是CD200+和HLA-G+。在特定的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞是CD73+和⑶105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_和CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—、⑶45—、⑶73+和⑶105+。在另一特定的實(shí)施方案中，當(dāng)在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)所述群時(shí)，所述干細(xì)胞促進(jìn)包含胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞群中一種或多種擬胚體的形成。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的胎盤(pán)細(xì)胞群，其包括，例如，被富集的⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞。在不同的實(shí)施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或者至少95%或以上的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞是CD200+、HLA-G+干細(xì)胞。在上述群體的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和⑶105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—或⑶45—。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38_、⑶45_、⑶73+和⑶105+。在其它的特定實(shí)施方案中，所述群體被擴(kuò)增，例如，傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定的實(shí)施方案中，當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)該群體時(shí)，所述群體形成一種或多種擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的干細(xì)胞，其是⑶73+、⑶105+和CD200+。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34-、⑶38-或⑶45'在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34-、⑶38-和⑶45'在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，當(dāng)在允許擬胚體形成的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，所述干細(xì)胞促進(jìn)包含干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞群形成一種或多種擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的胎盤(pán)細(xì)胞群，其包括，例如，被富集的CD73+、CD105+、CD200+干細(xì)胞。在不同的實(shí)施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或者至少95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+干細(xì)胞。在所述群體的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—和⑶45_。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、CD45—和HLA-G+。在其它的特定實(shí)施方案中，所述群體被擴(kuò)增，例如，傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定的實(shí)施方案中，在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)該群體時(shí)，所述群體形成一種或多種擬胚體。本發(fā)明還提供了一種分離的干細(xì)胞，其是⑶200+和0CT-4+。在特定的實(shí)施方案中，干細(xì)胞是CD73+和CD105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34-、CD38-和CD45-。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0)34' 0)38' 0)45' CD73+、CD105+和HLA-G+。在另一 特定的實(shí)施方案中，當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，所述干細(xì)胞促進(jìn)在包含胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一種或多種擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的細(xì)胞群，其包括，例如，富集的CD200+、0CT-4+干細(xì)胞。在不同的實(shí)施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或至少95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞是CD200+、0CT-4+干細(xì)胞。在上述群體的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+和⑶105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、⑶38-或⑶45'在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在其它的特定實(shí)施方案中，所述群體被擴(kuò)增，例如，已經(jīng)傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定實(shí)施方案中，當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)該群體時(shí)，所述群體形成一種或多種擬胚體。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的干細(xì)胞，其是⑶73+和⑶105+，而且當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，其促進(jìn)在包含所述干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一種或多種擬胚體。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT_4+、CD34_、CD381P CD45_。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的胎盤(pán)細(xì)胞群，其包括，例如富集的⑶73+、⑶105+干細(xì)胞，其中在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，形成一種或多種擬胚體。在不同的實(shí)施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或至少95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞是⑶73+、⑶105+干細(xì)胞。在上述群體的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_。在其它的特定實(shí)施方案中，所述群體被擴(kuò)增，例如，已經(jīng)傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的干細(xì)胞，其是⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶200+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和CD200+。在另一特定的實(shí)施方案中，當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，所述干細(xì)胞促進(jìn)在包含胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一種或多種擬胚體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的細(xì)胞群，其包括，例如，富集的⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞。在不同的實(shí)施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或至少95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞是CD73+、CD105+和HLA-G+干細(xì)胞。在上述群 體的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_和CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+。在另一特定實(shí)施方案中，所述群體被擴(kuò)增，例如，已經(jīng)傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定實(shí)施方案中，當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)該群體時(shí)，所述群體形成擬胚體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的干細(xì)胞，其是0CT-4+，而且當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，該細(xì)胞促進(jìn)在包含所述干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一種或多種擬胚體。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶200+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+、⑶105 +、⑶200+、⑶34'⑶38—和⑶45'本發(fā)明還提供了一種分離的細(xì)胞群，其包括，例如富集的0CT-4+的胎盤(pán)干細(xì)胞，其中在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，形成一種或多種擬胚體。在不同的實(shí)施方案中，至少10%、至少20%、至少30%、至少40%、至少50%、至少60%、至少70%、至少80%、至少90%、或至少95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞是0CT-4+胎盤(pán)干細(xì)胞。在上述群體的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73 +和CD105 +。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、CD38_*CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+、⑶105 +、⑶200+、⑶34'⑶38—和⑶45'在另一特定實(shí)施方案中，所述群體被擴(kuò)增，例如，已經(jīng)傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種在此描述的分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其根據(jù)以下方法生成，包括灌注哺乳動(dòng)物胎盤(pán)，該胎盤(pán)已經(jīng)被排出臍帶血而且被灌注以除去殘余血液；用灌注溶液灌注所述胎盤(pán)；收集所述灌注溶液，其中灌注后的所述灌注溶液中含有包括胎盤(pán)干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群；和從所述細(xì)胞群分離大量所述胎盤(pán)干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，灌注溶液通過(guò)臍靜脈和臍動(dòng)脈，并在它從胎盤(pán)流出以后進(jìn)行收集。在另一特定的實(shí)施方案中，灌注溶液通過(guò)臍靜脈，并從臍動(dòng)脈收集，或者通過(guò)臍動(dòng)脈并從臍靜脈收集。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種在此描述的分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其根據(jù)以下方法生成，包括用組織裂解酶消化胎盤(pán)組織以獲得包含胎盤(pán)干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群，并從所述胎盤(pán)細(xì)胞的剩余物中分離大量胎盤(pán)干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)組織是全部胎盤(pán)、羊膜、絨毛膜、羊膜 和絨毛膜的組合，或任何上述的組合。在其它的特定實(shí)施方案中，組織裂解酶是胰蛋白酶或膠原酶。在更特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了任何上述的分離的干細(xì)胞，其中所述干細(xì)胞以可檢測(cè)地高于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的水平表達(dá)一種或多種基因，其中所述一種或多種基因選自 ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-U B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G,ICAMU IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP, MATN2、MEST, NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PJP2, RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A，而且其中所述骨髓來(lái)源的干細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)行了多次傳代培養(yǎng)，以等于所述胎盤(pán)干細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)行的傳代數(shù)。在AffymetrixGhNLCiUP81陣列上找到相應(yīng)于這些基因的序列。這些基因也可以下列GenBank登錄號(hào)找到NM_001615 (ACTG2)、BC065545 (ADARBI)，(NM_181847 (AMIG02)、AY358590 (ARTS-1)、BC074884 (B4GALT6)、BC008396 (BCHE)、BC020196(Cllorf9)、BC031103 (CD200)、NM_001845 (⑶L4A1)、NM_001846 (C0L4A2)、BC052289(CPA4)、BC094758(DMD)、AF293359(DSC3)、NM_001943(DSG2)、AF338241(EL0VL2)、AY336105 (F2RL1)、NM_018215 (FUJ10781)、AY416799 (GATA6)、BC075798 (GPR126)、NM_016235 (GPRC5B)、AF340038 (ICAMl)、BC000844 (IER3)、BC066339 (IGFBP7)、BC013142 (ILIA)、BT019749 (IL6)、BC007461 (IL18)、BC072017 (KRT18)、BC075839 (KRT8)、BC060825 (LIPG)、BC065240 (LRAP)、BCO10444 (MATN2)、BCO 1 1908 (MEST)、BC068455 (NFE2L3)、NM_014840 (NUAKl)、AB006755 (PCDH7)、NM_014476 (PDLIM3)、BC126199 (PKP-2)、BC090862 (RTNl)、BC002538 (SERPINB9)、BC023312 (ST3GAL6)、BC001201 (ST6GALNAC5)、BC126160 或 BC065328 (SLC12A8)、BC025697 (TCF21)、BC096235 (TGFB2)、BC005046 (VTN)和 BC005001 (ZC3H12A)，自 2006 年 12 月起。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞以可檢測(cè)地高于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的水平表達(dá) ACTG2、ADARB1、AMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、Cl Iorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G, ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKUPCDH7、PDLIM3, PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和 ZC3H12A。在更特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了上述的任何分離的干細(xì)胞群，其中所述干細(xì)胞以可檢測(cè)地高于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的水平表達(dá)一種或多種基因，其中所述一種或多種基因選自 ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-l、B4GALT6、BCHE、Cllorf9、CD200、C0L4Al、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G,ICAM1、IER3、IGFBP7、IL1A、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和ZC3H12A，其中所述的骨髓來(lái)源的干細(xì)胞群已經(jīng)進(jìn)行多次傳代培養(yǎng)，以等于所述胎盤(pán)干細(xì)胞進(jìn)行的傳代數(shù)，其中所述的骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞群的細(xì)胞數(shù)等于所述分離的干細(xì)胞群的細(xì)胞數(shù)。在更特定的實(shí)施方案中，分離的干細(xì)胞群以可檢測(cè)地高于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的水平表達(dá) ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、Cl Iorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G,ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDLIM3, PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和 ZC3H12A。在選擇細(xì)胞群的方法的更特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了選擇一種上述的細(xì)胞群的方法，包括選擇以可檢測(cè)地高于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的水平表達(dá)一種或多種基因的細(xì)胞，其中所述的一種或多種基因選自ACTG2、ADARB1、AMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、C11orf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G, ICAM l、IER3、IGFBP7、IL1A5、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP,MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PKP2、RTN1、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A，而且其中所述骨髓來(lái)源的干細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)行了多次傳代培養(yǎng)，以等于所述胎盤(pán)干細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)行的傳代數(shù)。在更特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇以可檢測(cè)地高于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的水平表達(dá)ACTG2、ADARBU AMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE、Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ1078U GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G, ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAK1、PCDH7、PDUM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A 的細(xì)胞。本發(fā)明還提供了包含一種或多種本發(fā)明干細(xì)胞的組合物，其中所述干細(xì)胞已經(jīng)從胎盤(pán)中分離。因此，本發(fā)明進(jìn)一步提供了包含干細(xì)胞的組合物，其中所述干細(xì)胞是CD200+和HLA-G+。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+和⑶105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、CD38-和CD45'在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0)34' CD38' CD45' CD73+、CD105+、CD200+ 和 HLA-G+。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了包含干細(xì)胞的組合物，其中所述干細(xì)胞是⑶73+、⑶105+和⑶200+。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38-和⑶45'在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45—和HLA-G+。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種包含干細(xì)胞的組合物，其中所述干細(xì)胞是⑶200+和0CT-4 +。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+和⑶105 +。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34' CD38' CD45' CD73+、CD105+和HLA-G+。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種包含干細(xì)胞的組合物，該干細(xì)胞是⑶73+和CD105+，其中在允許形成擬胚體的條件下，所述干細(xì)胞促進(jìn)在分離的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成擬胚體，該分離的胎盤(pán)細(xì)胞群包含所述干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶200+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+、⑶200+、⑶34_、CD38-和 CD45'在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種包含干細(xì)胞的組合物，該干細(xì)胞是⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是OCT-4+、CD200+、CD34' CD38-和CD45'在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種包含干細(xì)胞的組合物，該干細(xì)胞是0CT-4 +，其中在允許形成擬胚體的條件下，所述干細(xì)胞促進(jìn)在分離的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成擬胚體，該分離的胎盤(pán)細(xì)胞群包含所述干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和⑶105 +。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200 +。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73 +、CD105 +、CD200 +、CD34' CD38-和 CD45'在上述組合物的更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞以可檢測(cè)地高于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞的水平表達(dá)一種或多種基因，其中所述一種或多種基因選自ACTG2、ADARBUAMIG02、ARTS-1、B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPR126、GPRC5B、HLA-G、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP`, MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3, PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN 和 ZC3H12A，而且其中所述骨髓來(lái)源的干細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)行了多次傳代培養(yǎng)，以等于所述胎盤(pán)干細(xì)胞已經(jīng)進(jìn)行的傳代數(shù)。在上述組合物的一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞以可檢測(cè)高于分離的骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞群的水平表達(dá) ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-U B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FLJ10781、GATA6、GPRl26、GPRC5B、HLA-G、ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN和ZC3H12A，其中所述的干細(xì)胞群和所述的骨髓來(lái)源的間充質(zhì)細(xì)胞群具有相等的細(xì)胞數(shù)。在另一特定的實(shí)施方案中，任何上述的組合物包括基質(zhì)。在更特定的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)是三維支架。在另一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)包括膠原蛋白、明膠、層粘連蛋白、纖粘連蛋白、果膠、鳥(niǎo)氨酸或玻連蛋白。在另一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)是羊膜或羊膜來(lái)源的生物材料。在另一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)包括胞外膜蛋白。在另一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)包括合成的化合物。在另一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)包括生物活性化合物。在另一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述的生物活性化合物是生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、抗體、或小于5，000道爾頓的有機(jī)分子。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種組合物，其包括任何上述干細(xì)胞或任何上述干細(xì)胞群調(diào)節(jié)的培養(yǎng)基。在特定的實(shí)施方案中，任何這種組合物包括不來(lái)源于胎盤(pán)的干細(xì)胞。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞。在另一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是間充質(zhì)干細(xì)胞。在另一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是骨髓-來(lái)源的干細(xì)胞。在另一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是造血祖細(xì)胞。在另一個(gè)更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是體干細(xì)胞。在一個(gè)更加特定的實(shí)施方案中，所述體干細(xì)胞是神經(jīng)干細(xì)胞、肝干細(xì)胞、胰腺干細(xì)胞、內(nèi)皮干細(xì)胞、心臟干細(xì)胞或肌肉干細(xì)胞。本發(fā)明還提供了生產(chǎn)來(lái)源于哺乳動(dòng)物胎盤(pán)的干細(xì)胞群的方法。在一實(shí)施方案中，例如，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質(zhì)，和(b)表達(dá)CD200和HLA-G的細(xì)胞；和從其它細(xì)胞中分離所述的細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質(zhì)，和(b)表達(dá)CD73、CD105和CD200的細(xì)胞；和從其它的細(xì)胞分離所述的細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質(zhì)，和(b)表達(dá)CD200和0CT-4的細(xì)胞；和從其它的細(xì)胞分離所述的細(xì)胞以形成細(xì)胞群。仍然在另一特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質(zhì)，(b)表達(dá)CD73和CD105，和(c)當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下用胎盤(pán)細(xì)胞群培養(yǎng)時(shí)，促進(jìn)形成一種或多種擬胚體的細(xì)胞；和從其它的細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質(zhì)，和(b)表達(dá)CD73、CD105和HLA-G的細(xì)胞；和從其它的細(xì)胞中分離所述的細(xì)胞以形成細(xì)胞群。本發(fā)明還提供了一種生產(chǎn)細(xì)胞群的方法，包括選擇(a)附著于基質(zhì)，(b)表達(dá)0CT-4，和(c)當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下用胎盤(pán)細(xì)胞群培養(yǎng)時(shí)，促進(jìn)形成一種或多種擬胚體的細(xì)胞；和從其它的細(xì)胞中分離所述細(xì)胞以形成細(xì)胞群。在任何上述方法的特定的實(shí)施方案中，所述基質(zhì)包括纖粘連蛋白。在另一特定的實(shí)施方案中，該方法包括選擇表達(dá)ABC-p的細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，該方法包括選擇顯示出至少一種特異于間充質(zhì)干細(xì)胞的特性的細(xì)胞。在更特定的實(shí)施方案中，所述特異于間充質(zhì)干細(xì)胞的特性是表達(dá)⑶29、表達(dá)⑶44、表達(dá)⑶90、或表達(dá)上述的組合。在該方法的另一特定的實(shí)施方案中，使用抗體完成所述選擇。在另一特定的實(shí)施方案中，使用流式細(xì)胞儀完成所述選擇。在另一特定的實(shí)施方案中，使用磁珠完成所述選擇。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇由熒光激活細(xì)胞分類術(shù)來(lái)完成。在上述方法的另一特定的實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群被擴(kuò)增。本發(fā)明還提供了一種生產(chǎn)干細(xì)胞系的方法，包括用編碼生長(zhǎng)促進(jìn)蛋白的DNA序列轉(zhuǎn)化干細(xì)胞；和把所述干細(xì)胞暴露于促進(jìn)所述生長(zhǎng)促進(jìn)蛋白生產(chǎn)的條件下。在特定的實(shí)施方案中，所述生長(zhǎng)促進(jìn)蛋白是v-myc、N-myc、c-myc、p53、SV40大T抗原、多瘤大T抗原、Ela腺病毒或人乳頭瘤病毒E7蛋白。在更特定的實(shí)施方案中，所述DNA序列是可調(diào)控的。在更特定的實(shí)施方案中，所述DNA序列是四環(huán)素可調(diào)控的。在另一特定的實(shí)施方案中，所述生長(zhǎng)促進(jìn)蛋白具有可調(diào)控活性。在另一特定的實(shí)施方案中，所述生長(zhǎng)促進(jìn)蛋白是溫度敏感突變體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了低溫貯藏的干細(xì)胞群。例如，本發(fā)明提供一種⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞 已經(jīng)被低溫貯藏，而且其中所述群體被包含在容器中。本發(fā)明還提供一種⑶73+、⑶105+、⑶200+干細(xì)胞群，其中所述干細(xì)胞已經(jīng)被低溫貯藏，而且其中所述群體被包含在容器中。本發(fā)明還提供一種⑶200+、0CT-4+干細(xì)胞群，其中所述干細(xì)胞已經(jīng)被低溫貯藏，而且其中所述群體被包含在容器中。本發(fā)明還提供了一種⑶73+、⑶105+干細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞已經(jīng)被低溫貯藏，其中所述群體被包含在容器中，而且當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下，用胎盤(pán)細(xì)胞群進(jìn)行培養(yǎng)時(shí)，其中所述干細(xì)胞促進(jìn)形成一種或多種擬胚體。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種⑶73+、⑶105+、HLA-G+干細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞已經(jīng)被低溫貯藏，而且其中所述群體被包含在容器中。本發(fā)明還提供了一種0CT-4+干細(xì)胞群，其中所述細(xì)胞已經(jīng)被低溫貯藏，其中所述群體被包含在容器中，而且當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下，用胎盤(pán)細(xì)胞群培養(yǎng)時(shí)，其中所述干細(xì)胞促進(jìn)形成一種或多種擬胚體。在任一上述低溫貯藏的群體的特定實(shí)施方案中，所述容器是袋子。在不同的特定實(shí)施方案中，所述群體包括大約、至少、或最多I X IO6個(gè)所述干細(xì)胞、5 X IO6個(gè)所述干細(xì)胞、I X IO7個(gè)所述干細(xì)胞、5 X IO7個(gè)所述干細(xì)胞、I X IO8個(gè)所述干細(xì)胞、5 X IO8個(gè)所述干細(xì)胞、I X IO9個(gè)所述干細(xì)胞、5 X IO9個(gè)所述干細(xì)胞、或I X IOltl個(gè)所述干細(xì)胞。在任何上述低溫貯藏的群體的其它特定實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已經(jīng)傳代大約、至少、或至多5次、至多10次、至多15次或至多20次。在任何上述低溫貯藏的群體的另一特定實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞已經(jīng)在所述容器中被擴(kuò)增。3.1 定義如這里使用的，術(shù)語(yǔ)“SH2”指結(jié)合標(biāo)記⑶105上的抗原表位的抗體。因此，被稱為SH2+的細(xì)胞是CD105+。如這里使用的，術(shù)語(yǔ)“SH3”和“SH4”指結(jié)合標(biāo)記CD73上的抗原表位的抗體。因此，被稱為SH3+和/或SH4+的細(xì)胞是CD73+。如這里使用的，術(shù)語(yǔ)“分離的 干細(xì)胞”指基本上與從中獲取該干細(xì)胞的組織例如胎盤(pán)中的其它的、非干細(xì)胞分離的干細(xì)胞。干細(xì)胞是“分離的”，如果至少50%、60%、70%、80%、90%,95%或至少99%的與該干細(xì)胞天然締合的非干細(xì)胞，或顯示不同的標(biāo)記模式的干細(xì)胞，被從該干細(xì)胞中除去，例如，在收集和/或培養(yǎng)干細(xì)胞期間。如這里使用的，術(shù)語(yǔ)“分離的細(xì)胞群”指基本上與從中獲取該細(xì)胞群的組織例如胎盤(pán)的其它細(xì)胞分離的細(xì)胞群。干細(xì)胞是“分離的”，如果至少50%、60%、70%、80%、90%、95%或至少99%的與該細(xì)胞群、或獲得該細(xì)胞群的細(xì)胞天然締合的細(xì)胞，也即顯示不同的標(biāo)記模式的干細(xì)胞，被從該干細(xì)胞中除去，例如，在收集和/或培養(yǎng)干細(xì)胞期間。如這里使用的，術(shù)語(yǔ)“胎盤(pán)干細(xì)胞”指來(lái)源于哺乳動(dòng)物胎盤(pán)的干細(xì)胞或祖細(xì)胞，無(wú)論其形態(tài)，細(xì)胞表面標(biāo)記，或原代培養(yǎng)以后的傳代數(shù)。然而，如這里使用的術(shù)語(yǔ)“胎盤(pán)干細(xì)胞”不指滋養(yǎng)層。細(xì)胞被認(rèn)為是“干細(xì)胞”，如果該細(xì)胞保留干細(xì)胞的至少一種特性，例如，與一種或多種干細(xì)胞類型相關(guān)的標(biāo)記或基因表達(dá)模式；在培養(yǎng)中復(fù)制至少10-40次的能力；分化成具有所有3胚層的細(xì)胞的能力；缺乏成熟(也即，分化的)細(xì)胞特性，等等。術(shù)語(yǔ)“胎盤(pán)干細(xì)胞”和“胎盤(pán)來(lái)源的干細(xì)胞”可以互換使用。如這里使用的，當(dāng)該標(biāo)記是高于背景可檢測(cè)的時(shí)，干細(xì)胞對(duì)于特定的標(biāo)記是“陽(yáng)性的”。例如，胎盤(pán)干細(xì)胞對(duì)于例如CD73是陽(yáng)性的，因?yàn)镃D73在胎盤(pán)干細(xì)胞中是可檢測(cè)的，其呈現(xiàn)可檢測(cè)地高于背景的量(例如，與同種型對(duì)照相比較)。當(dāng)該標(biāo)記可用于從至少一種其它的細(xì)胞類型中區(qū)別該細(xì)胞時(shí)，或當(dāng)通過(guò)該細(xì)胞呈遞或表達(dá)時(shí)，該標(biāo)記可用于選擇或分離該細(xì)胞時(shí)，細(xì)胞對(duì)于該標(biāo)記也是陽(yáng)性的。在例如，抗體介導(dǎo)的檢測(cè)的上下文中，“陽(yáng)性”，作為特定的細(xì)胞表面標(biāo)記存在的指示，是指當(dāng)使用特異于該標(biāo)記的抗體，例如熒光標(biāo)記抗體時(shí)，該標(biāo)記是可檢測(cè)的；“陽(yáng)性”還指細(xì)胞其以產(chǎn)生信號(hào)的量帶有該標(biāo)記，例如，在細(xì)胞計(jì)數(shù)器中，該信號(hào)可檢測(cè)地高于背景。例如，細(xì)胞是“CD200+”，其中細(xì)胞用特異于CD200的抗體可檢測(cè)地標(biāo)記，而且來(lái)自抗體的信號(hào)可檢測(cè)地高于對(duì)照(例如，背景)。相反地，在同樣的上下文中，“陰性”指當(dāng)使用標(biāo)記特異性的抗體時(shí)，細(xì)胞表面標(biāo)記與背景相比不能檢測(cè)到。例如，細(xì)胞是“⑶34_”，其中細(xì)胞不能用⑶34特異性的抗體可檢測(cè)地標(biāo)記。除非這里另有說(shuō)明，分化(“⑶”)標(biāo)記簇使用抗體進(jìn)行檢測(cè)。如果使用RT-PCR，0CT-4是可檢測(cè)的，那么認(rèn)為0CT-4存在，而且細(xì)胞是“0CT-4+”。4.附圖簡(jiǎn)述

圖1:來(lái)自灌注液(A)、羊膜(B)、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板⑶或臍帶(E)的胎盤(pán)干細(xì)胞的活力。X軸上的數(shù)字表示從中獲得干細(xì)胞的胎盤(pán)。圖2:通過(guò)FACSCalibur確定的來(lái)自灌注液(A)、羊膜⑶、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板(D)或臍帶(E)的HLA ABC7⑶457⑶347⑶133+細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。X軸上的數(shù)字表示從中獲得干細(xì)胞的胎盤(pán)。圖3:通過(guò)FACS Aria確定的來(lái)自灌注液(A)、羊膜⑶、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板⑶或臍帶(E)的HLA ABC7⑶45_/⑶347⑶133+細(xì)胞的百分?jǐn)?shù)。X軸上的數(shù)字表示從中獲得干細(xì)胞的胎盤(pán)。圖4:在來(lái)源于胎盤(pán)灌注液的干細(xì)胞中HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、⑶90、CD105、CD117、CD200 的表達(dá)。圖5:在來(lái)源于羊膜的干細(xì)胞中 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 的表達(dá)。圖6:在來(lái)源于絨 毛膜的干細(xì)胞中HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、⑶90、CD105、CD117、CD200 的表達(dá)。圖7:在來(lái)源于羊膜-絨毛膜板的干細(xì)胞中HLA-G、⑶10、⑶13、⑶33、⑶38、⑶44、CD90、CD105、CD117、CD200 的表達(dá)。圖8:在來(lái)源于臍帶的干細(xì)胞中 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 的表達(dá)。圖9:在來(lái)源于灌注液(A)、羊膜(B)、絨毛膜(C)、羊膜-絨毛膜板(D)或臍帶(E)的干細(xì)胞中表達(dá)的 HLA-G、CD10、CD13、CD33、CD38、CD44、CD90、CD105、CD117、CD200 的平均表達(dá)。圖10:本研究中使用的羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來(lái)源的干細(xì)胞(BM-MSC)和人皮膚成纖維細(xì)胞(NHDF)細(xì)胞系的培養(yǎng)時(shí)間進(jìn)程。所有的培養(yǎng)物都使用相同的接種和傳代密度進(jìn)行生長(zhǎng)和繁殖。圓圈表示用于RNA分離的培養(yǎng)物。正好在衰老之前收獲晚期培養(yǎng)物。在38次倍增時(shí)收獲兩個(gè)UC培養(yǎng)物(UC-38)，以比較胰蛋白酶消化對(duì)基因表達(dá)的作用。所有的其它培養(yǎng)物在RNA分離之前直接在它們的培養(yǎng)瓶中進(jìn)行裂解。圖11:在羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來(lái)源的干細(xì)胞(BM-MSC)和人皮膚成纖維(DF)細(xì)胞中的8215個(gè)基因相對(duì)表達(dá)水平的線條圖。X軸上標(biāo)明的與每個(gè)細(xì)胞系相關(guān)的數(shù)字表示，在評(píng)價(jià)基因表達(dá)水平之前，細(xì)胞系被培養(yǎng)的天數(shù)。通過(guò)GeneSpring軟件分析的RNA表達(dá)數(shù)據(jù)產(chǎn)生該圖表。AC-03作為選定條件。圖12:顯示在羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來(lái)源的干細(xì)胞(BM-MSC)和人皮膚成纖維細(xì)胞(DF)細(xì)胞的AC-03中過(guò)表達(dá)>6倍的基因的所有基因列表的子集。X軸上標(biāo)明的與每個(gè)細(xì)胞系相關(guān)的數(shù)字表示，在評(píng)價(jià)基因表達(dá)水平之前，細(xì)胞系被培養(yǎng)的天數(shù)。通過(guò)GeneSpring軟件分析的RNA表達(dá)數(shù)據(jù)產(chǎn)生該圖表。AC-03作為選定條件。圖13:通過(guò)倍率變化過(guò)濾發(fā)現(xiàn)羊膜/絨毛膜(AC)、臍帶(UC)、骨髓來(lái)源的干細(xì)胞(BM-MSC)和人皮膚成纖維細(xì)胞(DF)細(xì)胞胎盤(pán)干細(xì)胞特異性或臍帶干細(xì)胞特異性基因。X軸上標(biāo)明的與每個(gè)細(xì)胞系相關(guān)的數(shù)字表示，在評(píng)價(jià)基因表達(dá)水平之前，細(xì)胞系被培養(yǎng)的天數(shù)。通過(guò)GeneSpring軟件分析的RNA表達(dá)數(shù)據(jù)產(chǎn)生該圖表。AC-03作為選定條件。5.發(fā)明詳述5.1胎盤(pán)干細(xì)胞和胎盤(pán)干細(xì)胞群胎盤(pán)干細(xì)胞是這樣的干細(xì)胞，可獲自胎盤(pán)或其部分，其附著于組織培養(yǎng)基質(zhì)并具有分化成非胎盤(pán)細(xì)胞類型的能力。胎盤(pán)干細(xì)胞可以是胎兒或母親來(lái)源的(也即，可以分別具有胎兒或者母親的基因型)。優(yōu)選地，本發(fā)明的胎盤(pán)干細(xì)胞和胎盤(pán)干細(xì)胞群是胎兒來(lái)源的。胎盤(pán)干細(xì)胞群，或包含胎盤(pán)干細(xì)胞的細(xì)胞群，可包括單獨(dú)胎兒或母親來(lái)源的胎盤(pán)干細(xì)胞，或者可包括胎兒與母親來(lái)源的胎盤(pán)干細(xì)胞的混合群體。胎盤(pán)干細(xì)胞，和包括胎盤(pán)干細(xì)胞的細(xì)胞群，可通過(guò)下面所述的形態(tài)學(xué)、標(biāo)記和培養(yǎng)特性進(jìn)行鑒定和選擇。

5.1.1物理學(xué)和形杰學(xué)特征本發(fā)明的胎盤(pán)干細(xì)胞，當(dāng)在原代培養(yǎng)或細(xì)胞培養(yǎng)中培養(yǎng)時(shí)，附著于組織培養(yǎng)基質(zhì)，例如，組織培養(yǎng)容器表面(例如，組織培養(yǎng)塑料)。培養(yǎng)中的胎盤(pán)干細(xì)胞呈現(xiàn)一般的成纖維樣、星形形態(tài)，帶有許多從中央細(xì)胞體伸出的細(xì)胞質(zhì)突。但是，胎盤(pán)干細(xì)胞是與在相同條件下培養(yǎng)的成纖維細(xì)胞相比形態(tài)學(xué)可區(qū)分的，因?yàn)樘ケP(pán)干細(xì)胞顯示比成纖維細(xì)胞更大數(shù)量的這種突出。胎盤(pán)干細(xì)胞也與造血干細(xì)胞是形態(tài)學(xué)可區(qū)分的，造血干細(xì)胞在培養(yǎng)中一般呈現(xiàn)更圓，或鵝卵石的形態(tài)。5.1. 2細(xì)朐表面，分子和遺傳標(biāo)記本發(fā)明的胎盤(pán)干細(xì)胞和胎盤(pán)干細(xì)胞群表達(dá)大量的標(biāo)記，其可用于鑒定和/或分離干細(xì)胞，或包含該干細(xì)胞的細(xì)胞群。本發(fā)明的胎盤(pán)干細(xì)胞和干細(xì)胞群(也即，兩個(gè)或更多個(gè)胎盤(pán)干細(xì)胞)，包括直接從胎盤(pán)或其任何部分(例如，羊膜、絨毛膜、胎盤(pán)子葉等等)獲得的干細(xì)胞和包含干細(xì)胞的細(xì)胞群。胎盤(pán)干細(xì)胞群也包括培養(yǎng)中的胎盤(pán)干細(xì)胞群(也即，兩個(gè)或更多個(gè))，和容器例如袋子中的群體。但是，胎盤(pán)干細(xì)胞不是滋養(yǎng)層。本發(fā)明的胎盤(pán)干細(xì)胞一般表達(dá)標(biāo)記CD73、CD105、CD200、HLA-G和/或0CT-4，而不表達(dá)CD34、CD38或CD45。胎盤(pán)干細(xì)胞也可以表達(dá)HLA-ABC (MHC-1)和HLA-DR。這些標(biāo)記可用于鑒定胎盤(pán)干細(xì)胞，和區(qū)別其它的干細(xì)胞類型與胎盤(pán)干細(xì)胞。因?yàn)樘ケP(pán)干細(xì)胞能表達(dá)⑶73和⑶105，它們具有間充質(zhì)干細(xì)胞樣特性。然而，由于胎盤(pán)干細(xì)胞能表達(dá)CD200和HLA-G，一種胎兒特異性標(biāo)記，它們可以與間充質(zhì)干細(xì)胞，例如，骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞區(qū)分開(kāi)，骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞既不表達(dá)⑶200也不表達(dá)HLA-G。同樣，缺乏⑶34、⑶38和/或CD45的表達(dá)可鑒定胎盤(pán)干細(xì)胞為非造血干細(xì)胞。因此，在一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了分離的干細(xì)胞，其是⑶200+或HLA-G+。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200+和HLA-G+.在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—或⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—和⑶45'在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+和⑶105+。在另一特定的實(shí)施方案中，在允許形成擬胚體的條件下，所述CD200+或HLA-G+干細(xì)胞促進(jìn)在包含該干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成擬胚體。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不顯示這些標(biāo)記的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了一種從大量胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，包括選擇CD200+或HLA-G+胎盤(pán)細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是胎盤(pán)干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇為CD200+與HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為CD73+與CD105+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和⑶105+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇在允許形成擬胚體的條件下，促進(jìn)在包含該干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成擬胚體的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的細(xì)胞群包括，例如，富集的⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述群是胎盤(pán)細(xì)胞群。在不同的實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細(xì)胞是CD200+、HLA-G+干細(xì)胞。優(yōu)選地，至少大約70%的所述細(xì)胞是CD200+、HLA-G+干細(xì)胞。更優(yōu)選地，至少大約90%、95%或99%的所述細(xì)胞是⑶200+、HLA-G+干細(xì)胞。在分離的群的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞還是CD73+和CD105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞還是⑶34'⑶38-或⑶45'在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞還是⑶34'⑶38'⑶45'CD73+和CD105+。在另一特定實(shí)施方案中，當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)該群體時(shí)，所述分離的群產(chǎn)生一種或多 種擬胚體。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些標(biāo)記的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了一種從大量胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞群的方法,包括選擇這樣的胎盤(pán)細(xì)胞群,其中至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述細(xì)胞是CD200+、HLA-G+干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶73+與⑶105+的干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_，⑶38_或⑶45_的干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+和⑶105+的干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇還包括選擇當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)時(shí)，形成一種或多種擬胚體的胎盤(pán)干細(xì)胞群。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的干細(xì)胞，其是⑶73+、⑶105+和CD200+。在特定的實(shí)施方案中，所述分離的干細(xì)胞是分離的胎盤(pán)干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，分離的CD73+、CD105+和CD200+干細(xì)胞促進(jìn)在包含該干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一種或多種擬胚體。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不顯示這些標(biāo)記的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了一種從大量胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，包括選擇⑶73+、⑶105+和⑶200+胎盤(pán)細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是胎盤(pán)干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇另外包括選擇⑶73+、⑶105+和⑶200+的干細(xì)胞，且當(dāng)在允許促進(jìn)形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，其促進(jìn)在胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一種或多種擬胚體，該胎盤(pán)細(xì)胞群包含該干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的細(xì)胞群包括，例如，富集的⑶73+、CD105+、CD200+干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞。在不同的實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群中至少大約70%的所述細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，所述細(xì)胞群中至少大約90%、95%或99%的所述細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+干細(xì)胞。在所述群體的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、CD38—或⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_和HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)時(shí)，所述細(xì)胞群產(chǎn)生一種或多種擬胚體。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了一種從大量胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞群的方法,包括選擇這樣的胎盤(pán)細(xì)胞群,其中至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約`60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為HLA-G+的干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_或⑶45_的干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_工045_和HLA-G+的干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇另外包括選擇當(dāng)在允許生產(chǎn)擬胚體的條件下培養(yǎng)時(shí)，產(chǎn)生一種或多種擬胚體的胎盤(pán)細(xì)胞群。本發(fā)明還提供了一種分離的干細(xì)胞，其是⑶200+和0CT-4+。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD105+。在特定的實(shí)施方案中，干細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，當(dāng)在允許生產(chǎn)擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，干細(xì)胞促進(jìn)通過(guò)胎盤(pán)細(xì)胞群生產(chǎn)一種或多種擬胚體，該胎盤(pán)細(xì)胞群包含該干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不顯示這些標(biāo)記的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了一種從大量胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，包括選擇CD200+和0CT-4+胎盤(pán)細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是胎盤(pán)干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+、⑶105+和HLA-G+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)該群體時(shí)，還促進(jìn)在包含該干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中產(chǎn)生一種或多種擬胚體的胎盤(pán)干細(xì)胞。本發(fā)明還提供了一種分離的細(xì)胞群包括，例如，富集⑶200+、0CT-4+的干細(xì)胞。在不同的實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細(xì)胞是⑶200+、0CT-4+干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，至少大約70%的所述細(xì)胞是所述的⑶200+、0CT-4+干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，至少大約90%、95%或99%的所述細(xì)胞是CD200+、0CT-4+干細(xì)胞。在分離的群體的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+和⑶105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在另一特定的實(shí)施方案中，當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)時(shí)，該群體產(chǎn)生一種或多種擬胚體。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。 在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了一種從大量胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞群的方法,包括選擇這樣的胎盤(pán)細(xì)胞群,其中至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述細(xì)胞是CD200+、0CT-4+干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶73+與⑶105+的干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為HLA-G+的干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞還是⑶34'⑶38'⑶45'⑶73+、⑶105+和HLA-G+的干細(xì)胞。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的干細(xì)胞，其是⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是胚胎干細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34—、CD38—、CD45—、0CT-4+和CD200+。在另一特定的實(shí)施方案中，當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)該群體時(shí)，所述干細(xì)胞促進(jìn)在包含所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成擬胚體。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了一種從大量胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，包括選擇CD73+、CD105+和HLA-G+胎盤(pán)細(xì)胞，其中所述細(xì)胞是胎盤(pán)干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_或⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_和⑶45_的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為0CT-4+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶200+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇還為⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+的胎盤(pán)細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，所述選擇包括選擇當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，還促進(jìn)在包含所述干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一種或多種擬胚體的胎盤(pán)細(xì)胞。本發(fā)明還提供了一種分離的細(xì)胞群，其包括，例如，富集的⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是胎盤(pán)干細(xì)胞。在不同的實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、或至少大約60%的所述細(xì)胞是⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，至少大約70%的所述細(xì)胞是⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在另一實(shí)施方案中，至少大約90%、95%或99%的所述細(xì)胞是⑶73+、⑶105+和HLA-G+干細(xì)胞。在上述群體的特定實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_或⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_和CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD200+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和⑶200+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了一種從大量胎盤(pán)細(xì)胞中選擇胎盤(pán)干細(xì)胞群的方法，包括選擇胎盤(pán)細(xì)胞群，其中大多數(shù)所述細(xì)胞是⑶73+、⑶105+和HLA-G+。在特定的實(shí)施方案中，所述多數(shù)細(xì)胞還是CD34_、0038_和/或CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述多數(shù)細(xì)胞還是⑶200+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述多數(shù)細(xì)胞還是⑶34_、⑶38_、⑶45_、0CT-4+和 CD200+。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的干細(xì)胞，其是⑶73+和⑶105+，而且當(dāng)在允許形成擬胚體的條件 下培養(yǎng)所述群體時(shí)，其促進(jìn)在包含所述干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一種或多種擬胚體。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_或CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38_和⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT_4+、CD34_、CD381P CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的胎盤(pán)細(xì)胞群，其包括，例如富集的⑶73+、⑶105+干細(xì)胞，其中在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，形成一種或多種擬胚體。在不同的實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞是⑶73+、⑶105+干細(xì)胞。在上述群體的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—或⑶45—。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34—、⑶38—和⑶45—。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是0CT-4+、⑶34_、⑶38_和⑶45_。在其它的特定實(shí)施方案中，所述群體被擴(kuò)增，例如，已經(jīng)傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的干細(xì)胞，其是0CT-4+，而且當(dāng)在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)所述群體時(shí)，其促進(jìn)在包含所述干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞群中形成一種或多種擬胚體。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶34_、⑶38—或⑶45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶200+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34'⑶38-和⑶45'在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。本發(fā)明還提供了一種分離的細(xì)胞群，其包括，例如富集的0CT-4+干細(xì)胞，其中在允許形成擬胚體的條件下培養(yǎng)時(shí)，所述群體形成一種或多種擬胚體。在不同的實(shí)施方案中，至少大約10%、至少大約20%、至少大約30%、至少大約40%、至少大約50%、至少大約60%、至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、或至少大約95%的所述分離的胎盤(pán)細(xì)胞是0CT-4+干細(xì)胞。在上述群體的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD73+和CD105+。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是CD34_、CD38_*CD45_。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶200+。在更特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞是⑶73+、⑶105+、⑶200+、⑶34'⑶38—和CD45_。在另一特定實(shí)施方案中，所述群體被擴(kuò)增，例如，已經(jīng)傳代至少I次、至少3次、至少5次、至少10次、至少15次、或至少20次。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明還提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞，其是⑶10+、⑶34_、⑶105+和⑶200+。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其中至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述胎盤(pán)干細(xì)胞是⑶10+、⑶34'⑶105+、⑶200+。在上述實(shí)施方案的特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞另外是⑶90+和⑶45_。在特定的實(shí)施方案中，所述干 細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，在所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群中至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞，其HLA-A，B，C_、⑶45_、⑶133_和⑶34_。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其中至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述胎盤(pán)干細(xì)胞是HLA-A，B，C—、〇045_、00133_和CD34_。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，在所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種獲得胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，該胎盤(pán)干細(xì)胞是HLA-A，B，C_、⑶45_、⑶133_和⑶34_，其包括從胎盤(pán)灌注液中分離所述細(xì)胞。
在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞，其是⑶10+、⑶13+、⑶33+、⑶45_、⑶117_和⑶133_。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其中至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述胎盤(pán)干細(xì)胞是⑶10+、⑶13+、⑶33+、⑶45_、⑶117_和⑶133_。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，在所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種獲得胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，所述胎盤(pán)干細(xì)胞是⑶10+、⑶13+、⑶33+、⑶45_、⑶117—和⑶133_，該方法包括從胎盤(pán)灌注液中分離所述細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞，其是⑶10_、⑶33_、⑶44+、⑶45_和⑶117_。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其中至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述胎盤(pán)干細(xì)胞是OTlO'⑶33_、OT44+、⑶45_和⑶117_。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，在所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種獲得胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，該胎盤(pán)干細(xì)胞是⑶10_、⑶33_、⑶44+、⑶45_、⑶117_，該方法包括從胎盤(pán)灌注液中分離所述細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明 提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞，其是⑶10_、⑶13_、⑶33_、⑶45_和⑶117_。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其中至少大約70%、至少大約80%、至少大約90%、至少大約95%或至少大約99%的所述胎盤(pán)干細(xì)胞是OTlO'⑶13_、⑶33_、⑶45_和⑶117_。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，在所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種獲得胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，該胎盤(pán)干細(xì)胞是⑶10_、⑶13_、⑶33_、⑶45_和⑶117_，該方法包括從胎盤(pán)灌注液中分離所述細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞，其是HLAA，B，C_、⑶45_、CD34' CD133、其對(duì) CD10、CD13、CD38、CD44、CD90、CD105、CD200 和 / 或 HLA-G 呈陽(yáng)性，和 /或CD117呈陰性。本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其中所述干細(xì)胞是HLA
A,B，C\ CD45' CD34' CD133、而且該群體中至少大約 20%、25%、30%、35%、40%、45%、50%、55%、60%、65%、70%、75%、80%、85%、90%、95%、98% 或大約 99% 的干細(xì)胞對(duì) CD10、CD13、CD38、CD44、⑶90、⑶105、⑶200和/或HLA-G呈陽(yáng)性，和/或?qū)Β?17呈陰性。在特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不是干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞分離開(kāi)。在另一特定的實(shí)施方案中，所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，在所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群與不顯示這些特性的胎盤(pán)干細(xì)胞分離開(kāi)。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種獲得胎盤(pán)干細(xì)胞的方法，所述細(xì)胞是HLA A，B，C_、CD45_、CD34' CD133_ 和對(duì) CD10、CD13、CD38、CD44、CD90、CD105、CD200 和 / 或 HLA-G 呈陽(yáng)性，和 /或?qū)D117呈陰性，該方法包括從胎盤(pán)灌注液中分離所述細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種胎盤(pán)干細(xì)胞，其是如通過(guò)抗體結(jié)合確定的⑶200+和⑶10+，和如通過(guò)抗體結(jié)合和RT-PCR確定的⑶117_。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種胎盤(pán)干細(xì)胞，其是⑶10+、⑶29'⑶54+、⑶200+、HLA-G+、HLA I類-和P _2_小球蛋白 ' 在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了胎盤(pán)干細(xì)胞，其中至少一種標(biāo)記的表達(dá)比間充質(zhì)干細(xì)胞(例如，骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞)至少高2倍。在另一特定的實(shí)施方案中，所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一特定的實(shí)施方案中，在所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群中至少大約90%、至少大約95%、或至少大約99%的所述細(xì)胞是非母親來(lái)源的。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其中大量所述的胎盤(pán)干細(xì)胞是醛脫氫酶(ALDH)陽(yáng)性，如通過(guò)醛脫氫酶活性分析確定的。這種分析是本領(lǐng)域已知的(參見(jiàn)，例如，Bostian&Berts, Biochem. J.，173，787，(1978))。在特定的實(shí)施方案中，所述的ALDH分析使用ALDLI __U1；作為醛脫氫酶活性的標(biāo)記(Aldagen, Inc.，Ashland, Oregon)。在特定的實(shí)施方案中，所述的大量為所述細(xì)胞群中大約3%到大約25%的細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種分離的臍帶干細(xì)胞群，其中大量所述的臍帶干細(xì)胞是醛脫氫酶(ALDH)陽(yáng)性，如通過(guò)醛脫氫酶活性分析確定的，其使用ALUm丄UOiV作為醛脫氫酶活性的指示物。在特定的實(shí)施方案中，所述的大量為所述細(xì)胞群中大約3%到大約25%的細(xì)胞。在另一實(shí)施方案中，所述胎盤(pán)干細(xì)胞或臍帶干細(xì)胞群，顯示比具有相同的細(xì)胞數(shù)和在相同條件下培養(yǎng)的骨髓來(lái)源的間充質(zhì)群高至少3倍，或至少5倍的ALDH活性。本發(fā)明提供了任何上述的胎盤(pán)干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群，其中所述干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群已經(jīng)傳代至少1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、12、14、16、18或20次、或更多，或擴(kuò)增了 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、 12、14、16、18、20、22、24、26、28、30、32、34、36、38 或 40 群體倍增，或更多。在任何上述胎盤(pán)細(xì)胞或細(xì)胞群的特定的實(shí)施方案中，所述群中細(xì)胞，或至少大約95%或大約99%的細(xì)胞的染色體組型是正常的。在任何上述胎盤(pán)細(xì)胞或細(xì)胞群的另一特定的實(shí)施方案中，細(xì)胞，或細(xì)胞群中的細(xì)胞，是非母親來(lái)源的。帶有任何的上述標(biāo)記組合的分離的胎盤(pán)干細(xì)胞或分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群可以任何比例組合。本發(fā)明還提供了任何兩種或多種上述胎盤(pán)干細(xì)胞群的分離或富集，以形成胎盤(pán)干細(xì)胞群。例如，本發(fā)明提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其包括由如上所述的標(biāo)記組合中的一個(gè)來(lái)限定的第一胎盤(pán)干細(xì)胞群，和由如上所述的另一個(gè)標(biāo)記組合限定的第二胎盤(pán)干細(xì)胞群，其中所述的第一和第二群體以大約1:99、2:98、3:97、4:96、5:95、10:90、20:80、30:70、40:60、50:50、60:40、70:30、80:20、90:10、95:5、96:4、97:3、98:2 或大約 99:1 的比例組合。以同樣的方式，任何的3、4、5或多種上述的胎盤(pán)干細(xì)胞或胎盤(pán)干細(xì)胞群可以進(jìn)行組合。本發(fā)明進(jìn)一步提供了胎盤(pán)干細(xì)胞，其通過(guò)使用或不使用酶消化來(lái)破壞胎盤(pán)組織，接著進(jìn)行培養(yǎng)(參見(jiàn)5. 2. 3節(jié))或灌注(參見(jiàn)5. 2. 4節(jié))來(lái)獲得。例如，本發(fā)明提供了一種分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其根據(jù)以下方法生產(chǎn)包括灌注哺乳動(dòng)物胎盤(pán)，該胎盤(pán)已經(jīng)被排出臍帶血而且被灌注以除去殘余血液；用灌注溶液灌注所述胎盤(pán)；收集所述灌注溶液，其中灌注后的所述灌注溶液含有包括胎盤(pán)干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群；和從所述細(xì)胞群中分離大量所述胎盤(pán)干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，灌注溶液通過(guò)臍靜脈和臍動(dòng)脈，并在它從胎盤(pán)中流出后進(jìn)行收集。通過(guò)這種方法生產(chǎn)的胎盤(pán)干細(xì)胞群一般包含胎兒和母親的細(xì)胞的混合物。在另一特定的實(shí)施方案中，灌注溶液通過(guò)臍靜脈并從臍動(dòng)脈收集，或者通過(guò)臍動(dòng)脈并從臍靜脈收集。通過(guò)這種方法產(chǎn)生的胎盤(pán)干細(xì)胞群一般基本上是專門(mén)胎兒來(lái)源的；也即，例如，該群體中大于90%、95%、99%或99. 5%的胎盤(pán)干細(xì)胞是胎兒來(lái)源的。在不同的實(shí)施方案中，包含在從胎盤(pán)的灌注液中獲得的細(xì)胞群內(nèi)的胎盤(pán)干細(xì)胞是所述胎盤(pán)細(xì)胞群的至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99. 5%。在另一特定的實(shí)施方案中，通過(guò)灌注收集的胎盤(pán)干細(xì)胞包含胎兒的細(xì)胞和母親的細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，通過(guò)灌注收集的胎盤(pán)干細(xì)胞是至少50%、60%、70%、80%、90%、95%、99%或至少99. 5%的胎兒的細(xì)胞。在另一特定的實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了一種包括通過(guò)灌注收集的分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群組合物，其中所述的組合物包括用于收集胎盤(pán)干細(xì)胞的至少一部分灌注溶液。

本發(fā)明進(jìn)一步提供了一種在此描述的分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群，其根據(jù)以下方法生成，包括用組織裂解酶消化胎盤(pán)組織以獲得包含胎盤(pán)干細(xì)胞的胎盤(pán)細(xì)胞群，并從所述胎盤(pán)細(xì)胞的剩余物中分離大量的胎盤(pán)干細(xì)胞。全部胎盤(pán)，或胎盤(pán)的任何部分均可消化以獲得胎盤(pán)干細(xì)胞。在特定的實(shí)施方案中，例如，所述胎盤(pán)組織是全部胎盤(pán)、羊膜、絨毛膜、羊膜和絨毛膜的組合，或任何上述的組合。在其它的特定實(shí)施方案中，組織裂解酶是胰蛋白酶或膠原酶。在不同的實(shí)施方案中，包含在從消化胎盤(pán)中獲得的細(xì)胞群內(nèi)的胎盤(pán)干細(xì)胞，是所述胎盤(pán)細(xì)胞群的至少 50%、60%、70%、80%、90%、95%、99% 或至少 99. 5%?；蚍植紙D證實(shí)了分離的胎盤(pán)干細(xì)胞和分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群可和其它的細(xì)胞，例如間充質(zhì)干細(xì)胞，例如骨髓來(lái)源的干細(xì)胞區(qū)別開(kāi)。這里描述的胎盤(pán)干細(xì)胞，可根據(jù)一種或多種基因的表達(dá)與間充質(zhì)干細(xì)胞區(qū)別開(kāi)，相較于骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞，該表達(dá)是胎盤(pán)干細(xì)胞或臍帶干細(xì)胞特異性的。特別地，胎盤(pán)干細(xì)胞可根據(jù)一種或多種基因的表達(dá)與間充質(zhì)干細(xì)胞區(qū)分開(kāi)，該表達(dá)在胎盤(pán)干細(xì)胞中顯著高于(也即，至少高兩倍)在間充質(zhì)干細(xì)胞中，其中一種或多種基因是ACTG2、ADARBl、AMIG02、ARTS-1, B4GALT6、BCHE, Cllorf9、CD200、C0L4A1、C0L4A2、CPA4、DMD、DSC3、DSG2、EL0VL2、F2RL1、FU10781、GATA6、GPRl26、GPRC5B、HLA-G,ICAMl、IER3、IGFBP7、ILIA、IL6、IL18、KRT18、KRT8、LIPG、LRAP、MATN2、MEST、NFE2L3、NUAKl、PCDH7、PDLIM3、PKP2、RTNl、SERPINB9、ST3GAL6、ST6GALNAC5、SLC12A8、TCF21、TGFB2、VTN、ZC3H12A，或任何上述的組合，其中當(dāng)干細(xì)胞在相同條件下生長(zhǎng)時(shí)，這些基因在胎盤(pán)干細(xì)胞或臍帶干細(xì)胞中的表達(dá)高于在骨髓來(lái)源的干細(xì)胞中。在特定的實(shí)施方案中，胎盤(pán)干細(xì)胞特異性基因或臍帶干細(xì)胞特異性基因是CD200。這些基因的表達(dá)水平可用于確認(rèn)胎盤(pán)細(xì)胞群的身份，確定包含至少大量胎盤(pán)干細(xì)胞的細(xì)胞群，等等。其身份被確認(rèn)的胎盤(pán)干細(xì)胞群，可以是純系的，例如，從單個(gè)胎盤(pán)干細(xì)胞擴(kuò)增的胎盤(pán)干細(xì)胞群，或混合的干細(xì)胞群，例如，僅含有從多個(gè)胎盤(pán)干細(xì)胞擴(kuò)增的胎盤(pán)干細(xì)胞的細(xì)胞群，或含有胎盤(pán)干細(xì)胞和至少一種其它類型的細(xì)胞的細(xì)胞群。這些基因的表達(dá)水平可被用于選擇胎盤(pán)干細(xì)胞群。例如，如果一種或多種這些基因的表達(dá)在來(lái)自細(xì)胞群的樣本中顯著高于等同的間充質(zhì)干細(xì)胞群，可以選擇該細(xì)胞群，如純系擴(kuò)增的細(xì)胞。這種選擇可以是從大量胎盤(pán)干細(xì)胞群中選擇群體，從身份未知的大量細(xì)胞群中選擇群體等。可以相較于間充質(zhì)干細(xì)胞對(duì)照中所述一種或多種基因的表達(dá)水平，根據(jù)一種或多種這種基因的表達(dá)水平來(lái)選擇胎盤(pán)干細(xì)胞。在一實(shí)施方案中，含有等量間充質(zhì)干細(xì)胞的樣本中所述一種或多種基因的表達(dá)水平被作為對(duì)照。在另一實(shí)施方案中，用于在一定條件下測(cè)試胎盤(pán)干細(xì)胞的對(duì)照，是表示在所述條件下間充質(zhì)干細(xì)胞中所述一種或多種基因的表達(dá)水平的數(shù)值。本發(fā)明的胎盤(pán)干細(xì)胞，在原代培養(yǎng)中，或在包含60%DMEM_LG (Gibco)、40%MCDB-201 (Sigma)、2% 胎牛血清(FCS) (Hyclone Laboratories)、I X 胰島素-轉(zhuǎn)鐵蛋白-硒(ITS)、1X亞油酸牛血清白蛋白(LA-BSA)、10_9M地塞米松(Sigma)、10_4M抗壞血酸2_磷酸酯(Sigma)、10ng/ml表皮生長(zhǎng)因子(EGF) (R&D Systems)、10ng/ml血小板來(lái)源的生長(zhǎng)因子(I3DGF-BB) (R&DSystems)和IOOU青霉素/1000U鏈霉素的培養(yǎng)基中增殖期間，顯示上面的特性(例如，細(xì)胞表面標(biāo)記和/或基因表達(dá)分布圖的組合)。如上所述分離的胎盤(pán)干細(xì)胞群和胎盤(pán)干細(xì)胞群一般可包含大約、至少、或至多IX 105、5X 105、1X 106、5X 106、1X 107、5X 107、1X 108、5X 108、1X 109、5X109、1X 1010、5X1010UX10n或更多的胎盤(pán)干細(xì)胞。5.1. 3培養(yǎng)中的牛長(zhǎng)這里描述的胎盤(pán)干細(xì)胞的生長(zhǎng)，對(duì)于任何哺乳動(dòng)物細(xì)胞，部分地取決于選擇用于生長(zhǎng)的特定培養(yǎng)基。在適宜條件下，胎盤(pán)干細(xì)胞在3-5天內(nèi)一般會(huì)數(shù)量倍增。在培養(yǎng)期間，本發(fā)明的胎盤(pán)干細(xì)胞附著于培養(yǎng)中的基質(zhì)，例如組織培養(yǎng)容器的表面(例如，組織培養(yǎng)皿塑料、纖粘連蛋白涂層的塑料等等)，而且形成單細(xì)胞層。

當(dāng)在合適的條件下培養(yǎng)時(shí)，包含本發(fā)明的胎盤(pán)干細(xì)胞的分離的胎盤(pán)細(xì)胞群形成擬胚體，也即細(xì)胞的三維簇生長(zhǎng)在附著的干細(xì)胞層的頂上。擬胚體內(nèi)的細(xì)胞表達(dá)與極早期干細(xì)胞相關(guān)的標(biāo)記，例如，0CT-4、Nanog、SSEA3和SSEA4。擬胚體內(nèi)的細(xì)胞一般不附著于培養(yǎng)基質(zhì)，如這里描述的胎盤(pán)干細(xì)胞那樣，但是在培養(yǎng)期間仍然附著于粘附細(xì)胞。擬胚體細(xì)胞的活力依賴于附著的胎盤(pán)干細(xì)胞，因?yàn)樵谌狈Ω街母杉?xì)胞時(shí)不能形成擬胚體細(xì)胞。附著的胎盤(pán)干細(xì)胞因此促進(jìn)胎盤(pán)細(xì)胞群中一種或多種擬胚體的生長(zhǎng)，該胎盤(pán)細(xì)胞群包含附著的胎盤(pán)干細(xì)胞。不希望受理論的約束，擬胚體的細(xì)胞被認(rèn)為在附著的胎盤(pán)干細(xì)胞上生長(zhǎng)，很像胚胎干細(xì)胞生長(zhǎng)于細(xì)胞的滋養(yǎng)層。間充質(zhì)干細(xì)胞，例如，骨髓來(lái)源的間充質(zhì)干細(xì)胞，在培養(yǎng)中不生長(zhǎng)擬胚體。5. 2獲得胎盤(pán)干細(xì)胞的方法5. 2.1干細(xì)胞收集組合物本發(fā)明進(jìn)一步提供了收集和分離胎盤(pán)干細(xì)胞的方法。通常，使用生理學(xué)可接受的溶液，例如，干細(xì)胞收集組合物，可從哺乳動(dòng)物胎盤(pán)中獲得干細(xì)胞。干細(xì)胞收集組合物詳細(xì)描述于 2005 年 12 月 29 日提交的，題目為 “Improved Medium for Collecting PlacentalStem Cells and Preserving Organs” 的相關(guān)美國(guó)臨時(shí)申請(qǐng)?zhí)?60/754，969 中。干細(xì)胞收集組合物可包含適于收集和/或培養(yǎng)的干細(xì)胞的任何生理學(xué)可接受的溶液，例如，鹽溶液(例如、磷酸緩沖鹽溶液、Kreb’ s溶液、改良的Kreb’ s溶液、Eagle’ s溶液、0. 9%NaCl等等)，培養(yǎng)基(例如，DMEM、H. DMEM等等)，等等。干細(xì)胞收集組合物可包含一種或多種組分，其有助于保藏胎盤(pán)干細(xì)胞，也即，從收集的時(shí)間到培養(yǎng)的時(shí)間內(nèi)，防止胎盤(pán)干細(xì)胞死亡，或延遲胎盤(pán)干細(xì)胞的死亡，降低細(xì)胞群中死亡的胎盤(pán)干細(xì)胞的數(shù)目等等。這種組分可以是，例如，凋亡抑制劑(例如，半胱氨酸蛋白酶抑制劑或JNK抑制劑)；血管擴(kuò)張劑(例如，硫酸鎂、抗高血壓藥物、心鈉素(ANP)、促腎上腺皮質(zhì)激素、促腎上腺皮質(zhì)激素釋放激素、硝普酸鈉、肼苯噠嗪、腺苷三磷酸、腺嘌呤核苷、硫酸吲哚氯甲?；蛄蛩徭V、磷酸二酯酶抑制劑，等等)；壞死抑制劑(例如，2-(lH-吲哚_3_基)-3-戍燒基氨基-順丁烯二酰亞胺、二硫代氨基甲酸批咯燒，或氯硝安定)；TNF-a抑制劑；和/或攜帶氧的全氟化碳(例如，全氟代辛基溴、全氟代癸基溴，等等)。干細(xì)胞收集組合物可包含一種或多種組織降解酶，例如，金屬蛋白酶、絲氨酸蛋白酶、中性蛋白酶、RNA酶、或DNA酶，等等。這些酶包括但不限于,膠原酶(例如,膠原酶1、I1、III或IV、來(lái)自溶組織梭狀芽胞桿菌的膠原酶，等等)；中性蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶、彈性蛋白酶、胰蛋白酶、LIBERASE、透明質(zhì)酸酶，等等。干細(xì)胞收集組合物可包含殺菌的或細(xì)菌抑制有效量的抗生素。在某些非限制性實(shí)施方案中，抗生素是大環(huán)內(nèi)酯(例如，托普霉素)、頭孢菌素(例如，頭孢氨芐、頭孢拉定、頭孢氨呋肟、頭孢丙烯、氯頭孢菌素、頭孢克肟或頭孢羥氨芐)、克拉霉素、紅霉素、青霉素(例如，青霉素V)或喹諾酮(例如，氧氟沙星、環(huán)丙沙星或諾氟沙星)、四環(huán)素、鏈霉素，等等。在特定的實(shí)施方案中，抗生素對(duì)革蘭氏(+)和/或革蘭氏(_)細(xì)菌，例如，銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌，等等有效。干細(xì)胞收集組合物還可以含有一種或多種下列化合物腺嘌呤核苷(大約ImM到大約50mM) ；D-葡萄糖(大約20mM到大約IOOmM);鎂離子(大約ImM到大約50mM);分子量大于20，000道爾頓的大分子，在一實(shí)施方案中，以足以保持內(nèi)皮完整性和細(xì)胞活力的量存在(例如，合成的或天然存在的膠`體，多糖如右旋糖酐或聚乙二醇，以大約25g/l到大約100g/l,或大約40g/l到大約60g/l存在)；抗氧化劑(例如,丁基輕基苯甲醚、2，6-二叔丁基對(duì)甲酚、谷胱甘肽、維生素C或維生素E、以大約25 ii M到大約IOOii M存在)；還原劑(例如，N-乙酰半胱氨酸，以大約0.1mM到大約5mM存在)；防止鈣進(jìn)入到細(xì)胞中的試劑(例如，維拉帕米，以大約2 u M到大約25 ii M存在)；硝化甘油(例如，大約0. 05g/L到大約0. 2g/L);抗凝血藥，在一實(shí)施方案中，以足以幫助防止殘余血液凝固的量存在(例如，肝素或水蛭素，以大約1000單位/I到大約100，000單位/I的濃度存在)；或含有阿米洛利的化合物(例如，阿米洛利、乙基異丙基阿米洛利、環(huán)六亞甲基阿米洛利、二甲基阿米洛利或異丁基阿米洛利，以大約1. 0 ii M到大約5 ii M存在)。5. 2. 2胎盤(pán)的收集和處理一般，人胎盤(pán)在出生后胎盤(pán)排出后不久回收。在優(yōu)選的實(shí)施方案中，在告知同意以后，而且在取得患者的完整病史且將其與胎盤(pán)相關(guān)聯(lián)以后，從患者中回收胎盤(pán)。優(yōu)選地，病史在產(chǎn)后繼續(xù)。這種病史可用于協(xié)調(diào)胎盤(pán)或從其收獲的干細(xì)胞的隨后的應(yīng)用。例如，根據(jù)病史，人胎盤(pán)干細(xì)胞可用作與該胎盤(pán)相關(guān)的嬰兒或嬰兒的雙親、同胞或其它的親屬的個(gè)性化藥物。回收胎盤(pán)干細(xì)胞之前，除去臍帶血和胎盤(pán)血。在某些實(shí)施方案中，在產(chǎn)后回收胎盤(pán)中臍帶血。胎盤(pán)可以進(jìn)行常規(guī)的臍帶血回收程序。一般，使用針或套管，借助于重力，給胎盤(pán)放血(參見(jiàn)，例如，Anderson,美國(guó)專利號(hào)5, 372, 581 ；Hessel等，美國(guó)專利號(hào)5，415，665)。針或套管通常放入臍靜脈中，而且可以輕輕地按摩胎盤(pán)以幫助從胎盤(pán)中排出臍帶血。這種臍帶血回收可以商業(yè)化地進(jìn)行，例如，LifeBank USA, Cedar Knolls, N.J. , ViaCord, CordBlood Registry and Cryocell。優(yōu)選地,胎盤(pán)通過(guò)重力排空而不進(jìn)行進(jìn)一步操作，以便在臍帶血回收期間將組織破壞最小化。一般，胎盤(pán)從分娩或出生房間被轉(zhuǎn)移到另一個(gè)位置，例如，實(shí)驗(yàn)室，用于回收臍帶血和通過(guò)，例如，灌注或組織解離來(lái)收集干細(xì)胞。胎盤(pán)優(yōu)選在無(wú)菌的，隔熱的轉(zhuǎn)運(yùn)裝置中進(jìn)行轉(zhuǎn)運(yùn)(保持胎盤(pán)的溫度為20-28°C )，例如，通過(guò)把近端臍帶夾緊的胎盤(pán)放在無(wú)菌的拉鏈-鎖塑料袋中，然后放入保溫容器中。在另一實(shí)施方案中，基本上如未決美國(guó)專利號(hào)7，147，626所述，把胎盤(pán)放在臍帶血收集試劑盒中轉(zhuǎn)運(yùn)。優(yōu)選地，在分娩之后4至24小時(shí)內(nèi)把胎盤(pán)轉(zhuǎn)運(yùn)到實(shí)驗(yàn)室。在某些實(shí)施方案中，在臍帶血回收之前，近端臍帶被夾緊，優(yōu)選在插入到胎盤(pán)圓盤(pán)的4-5cm(厘米)內(nèi)。在其它的實(shí)施方案中，在臍帶血回收以后，但是在胎盤(pán)的進(jìn)一步處理之前，夾緊近端臍帶。在干細(xì)胞收集之前，胎盤(pán)可以儲(chǔ)存在無(wú)菌條件下，而且是室溫或者5到25°C (攝氏度)的溫度。在灌注胎盤(pán)以除去任何殘余的臍帶血之前，胎盤(pán)可以儲(chǔ)存4到24小時(shí)、高達(dá)48小時(shí)、或長(zhǎng)于48小時(shí)。在一實(shí)施方案中，從娩出后大約0小時(shí)到大約2小時(shí)收獲胎盤(pán)。胎盤(pán)優(yōu)選于5到25°C (攝氏度)儲(chǔ)存在抗凝血溶液中。適合的抗凝血溶液是本領(lǐng)域公知的。例如，可以使用肝素或華法林鈉的溶液。在一優(yōu)選實(shí)施方案中，抗凝血溶液包括肝素溶液(例如，l%w/w,在1: 1000溶液中)。在收集胎盤(pán)干細(xì)胞之前，被放血的胎盤(pán)優(yōu)選儲(chǔ)存至多36小時(shí)。哺乳動(dòng)物胎盤(pán)或其部分，一旦通常如同上述收集和制備，可采用本領(lǐng)域已知的任何方式處理，例如，可以灌注或裂解，例如，用一種或多種組織裂解酶消化，以獲得干細(xì)胞。5. 2. 3胎盤(pán)組織的物理裂解和酶消化在一實(shí)施方案中 ，通過(guò)物理裂解完整器官的部分，從哺乳動(dòng)物胎盤(pán)中收集干細(xì)胞。例如，胎盤(pán)或其部分可以被例如壓碎、剪切、切碎、切割成小片、斬碎、浸潰等等。然后可以培養(yǎng)組織以獲得干細(xì)胞群。一般地，使用例如干細(xì)胞收集組合物來(lái)裂解胎盤(pán)組織(參見(jiàn)5. 2.1節(jié)和下文)。在物理裂解和/或酶消化以及干細(xì)胞回收之前，可以把胎盤(pán)解剖成很多部分。胎盤(pán)干細(xì)胞可以從羊膜、絨毛膜、臍帶、胎盤(pán)子葉，或其任何組合的全部或部分，包括從全部胎盤(pán)中獲得。優(yōu)選地，胎盤(pán)干細(xì)胞可從包括羊膜和絨毛膜的胎盤(pán)組織中獲得。一般地，通過(guò)裂解一小塊胎盤(pán)組織，例如，大約 1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、20、30、40、50、60、70、80、90、100、200、300、400、500、600、700、800、900或大約1000立方毫米體積的一塊胎盤(pán)組織，來(lái)獲得胎盤(pán)干細(xì)胞。可以使用任何物理裂解方法，只要該裂解方法能保持所述器官中大量，更優(yōu)選大多數(shù)，更優(yōu)選至少60%、70%、80%、90%、95%、98%或99%的細(xì)胞存活，如通過(guò)例如臺(tái)盼藍(lán)排除法所確定的。干細(xì)胞通常在胎盤(pán)娩出后的大約第一個(gè)3天內(nèi)的任何時(shí)間內(nèi)從胎盤(pán)或其部分中收集，但是優(yōu)選娩出后的大約8小時(shí)到大約18小時(shí)。在特定的實(shí)施方案中，裂解的組織在適于胎盤(pán)干細(xì)胞增殖的組織培養(yǎng)基中培養(yǎng)(參見(jiàn)，例如以下5. 3節(jié)，描述了胎盤(pán)干細(xì)胞的培養(yǎng))。
在另一特定的實(shí)施方案中，通過(guò)胎盤(pán)組織的物理裂解來(lái)收集干細(xì)胞，其中物理裂解包括酶消化，其可能使用一種或多種組織消化酶來(lái)實(shí)現(xiàn)。胎盤(pán)或其部分，也可被物理裂解和用一種或多種酶消化，得到的物質(zhì)然后浸于，或混合到干細(xì)胞收集組合物中。優(yōu)選的干細(xì)胞收集組合物包括一種或多種組織裂解酶。酶消化優(yōu)選使用酶的組合，例如，基質(zhì)金屬蛋白酶和中性蛋白酶的組合，如膠原酶和分散酶的組合。在一實(shí)施方案中，胎盤(pán)組織的酶消化使用基質(zhì)金屬蛋白酶、中性蛋白酶和用于消化透明質(zhì)酸的粘液分解酶的組合，如膠原酶、分散酶和透明質(zhì)酸酶的組合，或LIBERASE(Boehringer MannheimCorp.，Indianapolis, Ind.)和透明質(zhì)酸酶的組合?？捎糜诹呀馓ケP(pán)組織的其它酶包括木瓜蛋白酶、脫氧核糖核酸酶、絲氨酸蛋白酶，如胰蛋白酶、胰凝乳蛋白酶或彈性蛋白酶。絲氨酸蛋白酶可以被血清中的a 2微小球蛋白抑制，因此用于消化的培養(yǎng)基通常是無(wú)血清的。EDTA和DNA酶通常用于酶消化，以增加細(xì)胞回收的效率。消化物優(yōu)選地進(jìn)行稀釋，以便避免截留粘性消化液內(nèi)的干細(xì)胞。可以使用組織消化酶的任何組合。組織消化酶的典型濃度包括，例如，膠原酶I和膠原酶IV為50-200U/mL，分散酶為l_10U/mL，彈性蛋白酶為10_100U/mL。蛋白酶可以組合使用，也即，兩種或多種蛋白酶處于相同的消化反應(yīng)中，或可以連續(xù)使用以便釋放胎盤(pán)干細(xì)胞。例如，在一實(shí)施方案中，胎盤(pán)或其部分，在37°C下，首先用大約I到大約2mg/ml的合適量的膠原酶I消化例如30分鐘，接著用濃度為大約0. 25%的胰蛋白酶消化例如10分鐘。絲氨酸蛋白酶優(yōu)選在使用其它酶之后接連應(yīng)用。在另一實(shí)施方案中，在用干細(xì)胞收集組合物分離干細(xì)胞之前，可通過(guò)將螯合劑，例如乙二醇雙(2-氨乙基醚)-N，N，N，N，-四乙酸(EGTA)或乙二胺四乙酸(EDTA)，添加到包含干細(xì)胞的干細(xì)胞收集組合物中，或添加到組織在其中被裂解和/或消化的溶液中，來(lái)進(jìn)
一步裂解組織。 在一實(shí)施方案中，消化可以如下進(jìn)行。獲得大約I克胎盤(pán)組織，并切碎。在含有大約lmg/mL膠原酶IA和大約0. 25%胰蛋白酶的IOmL溶液中，在振蕩器中以大約100RPM在37°C下消化組織。消化物用培養(yǎng)基洗滌3次，將洗滌過(guò)的細(xì)胞接種到2個(gè)T-75培養(yǎng)瓶中。然后通過(guò)差異性貼壁來(lái)分離細(xì)胞，并表征例如活力、細(xì)胞表面標(biāo)記、分化等等。應(yīng)當(dāng)理解，當(dāng)整個(gè)胎盤(pán)，或胎盤(pán)的部分包含胎兒和母親的細(xì)胞時(shí)(例如，胎盤(pán)的部分包含絨毛膜或子葉)，收集的胎盤(pán)干細(xì)胞將包括來(lái)源于胎兒和母親來(lái)源的胎盤(pán)干細(xì)胞的混合物。當(dāng)胎盤(pán)的部分不含有，或含有可以忽略數(shù)量的母親的細(xì)胞(例如，羊膜)時(shí)，收集的胎盤(pán)干細(xì)胞幾乎只包括胎兒胎盤(pán)干細(xì)胞。干細(xì)胞可通過(guò)差速胰蛋白酶消化(參見(jiàn)以下5. 2. 5節(jié))，接著在新鮮的增殖培養(yǎng)基中，在一個(gè)或多個(gè)新的培養(yǎng)容器中培養(yǎng)，可選地接著進(jìn)行第二次差速胰蛋白酶消化步驟，從裂解的組織中分離。5. 2. 4胎盤(pán)灌注胎盤(pán)干細(xì)胞也可以通過(guò)哺乳動(dòng)物胎盤(pán)的灌注來(lái)獲得。灌注哺乳動(dòng)物胎盤(pán)以獲得干細(xì)胞的方法公開(kāi)于，例如，Hariri，美國(guó)申請(qǐng)
發(fā)明者薩沙·道恩·阿布拉門(mén)遜, 詹姆士·W·愛(ài)丁格, 赫伯特·費(fèi)萊克, 羅伯特·J·哈黎里, 克利斯登·S·拉巴左, 馬里安·佩雷拉, 王佳倫, 葉倩 申請(qǐng)人:人類起源公司