專(zhuān)利名稱(chēng)：一種核糖核苷酸還原酶1基因表達(dá)檢測(cè)試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實(shí)用新型涉及ー種檢測(cè)試劑盒，尤其是涉及一種核糖核苷酸還原酶I基因表達(dá)檢測(cè)試劑盒。
背景技術(shù)：
近年來(lái)，隨著分子生物學(xué)的發(fā)展，國(guó)內(nèi)外對(duì)細(xì)胞癌變的研究已進(jìn)入到分子水平，人們發(fā)現(xiàn)DNA修復(fù)和復(fù)制的缺陷是細(xì)胞發(fā)生癌變的重要機(jī)制。核糖核苷酸還原酶(RR)在癌組織表達(dá)異常增高，同時(shí)其催化產(chǎn)物脫氧核糖核苷酸(dNTP)是DNA損傷修復(fù)及復(fù)制過(guò)程中必不可少的原料，因此RR的功能完善與否對(duì)腫瘤的發(fā)生、發(fā)展和防治均有重要影響。RRMl是RR的一個(gè)亞單位，它是DNA合成通路中的限速酶，它能逆轉(zhuǎn)ニ磷酸核苷酸 成為ニ磷酸脫氧核苷酸屬于腫瘤抑制基因，定位于染色體11P15. 5區(qū)域，含19個(gè)外顯子。該區(qū)域是ー個(gè)可出現(xiàn)于多種惡性腫瘤的雜合子丟失(loss of heterozygosity,L0H)區(qū)域，稱(chēng)為L(zhǎng)0H11A。人們很早就發(fā)現(xiàn)在胃癌、食管癌和乳腺癌等存在11ρ15. 5的雜合性丟失，因此認(rèn)為該區(qū)域的丟失與惡性腫瘤的轉(zhuǎn)移有關(guān)系。另外，也有研究表明，這種雜合性缺失與預(yù)后有一定的相關(guān)性，具有LOH丟失的非小細(xì)胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)患者預(yù)后較差，生存期較沒(méi)有LOH的患者短；但是，也有臨床研究的結(jié)果顯示，高水平表達(dá)RRMl的患者其預(yù)后較差；這樣的結(jié)果與之前的RRMl作為抑癌基因高表達(dá)時(shí)抑制腫瘤侵襲的結(jié)論有所不同。通過(guò)對(duì)比出現(xiàn)不同結(jié)果的臨床研究所選擇的病例發(fā)現(xiàn)，早期的NSCLC患者単獨(dú)接受手術(shù)治療吋，高表達(dá)RRMl則預(yù)后較好，而晚期僅接受含吉西他濱方案化療的患者RRMl高表達(dá)卻預(yù)后較差，說(shuō)明RRMl的預(yù)測(cè)意義因患者的分期和治療方案的不同有所改變。眾多研究證實(shí)DNA修復(fù)基因的修復(fù)能力與癌癥的發(fā)病和耐藥有夫。一般認(rèn)為，DNA修復(fù)基因修復(fù)カ低者癌癥發(fā)生的風(fēng)險(xiǎn)較正常人明顯增加，而修復(fù)力高者則易對(duì)化療藥物耐藥使化療失敗。RRMl是細(xì)胞內(nèi)在DNA損傷修復(fù)能力的代表，因而也是顯示病變組織內(nèi)累積性DNA損傷程度的生物標(biāo)志。RRMl高表達(dá)可相對(duì)消弱藥物對(duì)RRMl的抑制作用，進(jìn)而導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞對(duì)藥物的敏感性降低。RRMl在所有的腫瘤細(xì)胞中都存在表達(dá)，而且表達(dá)水平差異很大。臨床研究已證實(shí)RRMl與吉西他濱耐藥相關(guān)。因此，檢測(cè)RRMl的表達(dá)對(duì)于腫瘤患者的治療和預(yù)后有著重要意義。

實(shí)用新型內(nèi)容為了解決上述技術(shù)問(wèn)題，本實(shí)用新型提供一種核糖核苷酸還原酶I基因表達(dá)檢測(cè)試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、在固定座3上設(shè)有容器孔，其容器孔中分別放置去離子水試劑瓶4、擴(kuò)增引物管5、白蛋白內(nèi)參引物管6、SYBRpremix Ex Taq(含R0X)管7。上述各種液體分別裝在容器內(nèi)，插入容器孔內(nèi)。所訴容器孔的大小根據(jù)去離子水試劑瓶4、擴(kuò)增引物管5、白蛋白內(nèi)參引物管6、SYBR premix Ex Taq管7的大小而變化。所述擴(kuò)增引物為特異性擴(kuò)增ERCCl的引物，上游引物序列為5 ' -CAAGGTCGTGTCCGCAAAG-3 ';下游引物序列為 5 ' -GGTGCCTGTTTCCGTCTGA-3 ';所述白蛋白內(nèi)參引物上游引物序列為5 ' -TTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3 '，下游引物序列為5 ' -CAGCCTGGATAGCAACGTACA-3 '。引物包括擴(kuò)增引物和白蛋白內(nèi)參引物，引物濃度為lOumol/し所述SYBR premix Ex Taq(含 ROX) (2*Conc.)含有 O. 4mmol/L 的 dNTPs, 4mmol/L的Mg2+，2xBuffer，lU/20y I 的 Ex Taq HS, 1U/20 μ I Tli RnaseH, lmmol/L SYBR Green 1，O. lmmol/L ROX Reference Dye。本實(shí)用新型與現(xiàn)有產(chǎn)品相比，具有如下積極有益的效果本試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理、使用方便、制造容易、檢測(cè)過(guò)程不易受污染；本試劑盒在檢測(cè)ー種核糖核苷酸還原酶I基因表達(dá)時(shí)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)。

圖I為本實(shí)用新型的整體結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實(shí)施方式
以下結(jié)合附圖和實(shí)施例對(duì)本實(shí)用新型進(jìn)行進(jìn)ー步說(shuō)明。表I為本實(shí)用新型PCR反應(yīng)體系。如圖I所示，本實(shí)用新型的一個(gè)實(shí)施例為ー種核糖核苷酸還原酶I基因表達(dá)檢測(cè)試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、在固定座3上設(shè)有容器孔，其容器孔中分別放置去離子水試劑瓶4、擴(kuò)增引物管5、白蛋白內(nèi)參引物管6、SYBR premix Ex Taq管7。容器孔的大小根據(jù)去離子水試劑瓶4、擴(kuò)增引物管5、白蛋白內(nèi)參引物管6、SYBR premix Ex Taq管7的大小而變化。所述擴(kuò)增引物為特異性擴(kuò)增ERCCl的引物，上游引物序列為5 ' -CAAGGTCGTGTCCGCAAAG-3 ';下游引物序列為 5 ' -GGTGCCTGTTTCCGTCTGA-3 ';所述白蛋白內(nèi)參引物上游引物序列為5 ' -TTCTACAATGAGCTGCGTGTG-3 '，下游引物序列為5 ' -CAGCCTGGATAGCAACGTACA-3 '。引物包括擴(kuò)增引物和白蛋白內(nèi)參引物，引物濃度為lOumol/し所述SYBR premix Ex Taq(含 ROX) (2*Conc.)含有 0. 4mmol/L 的 dNTPs, 4mmol/L的Mg2+，2xBuffer，lU/20y I 的 Ex Taq HS, 1U/20 μ I Tli RnaseH, lmmol/L SYBR Green 1，0. lmmol/L ROX Reference Dye。操作方法I)制備模板新鮮組織或石蠟組織，常規(guī)提取RNA，并及時(shí)反轉(zhuǎn)錄成cDNA。2)反應(yīng)體系將各反應(yīng)物質(zhì)按照如下表I中反應(yīng)體系進(jìn)行配比表I
權(quán)利要求1. 一種核糖核苷酸還原酶I基因表達(dá)檢測(cè)試劑盒，包括盒體(I)、盒蓋(2)、固定座(3)、在固定座(3)上設(shè)有容器孔，其特征在于，容器孔中分別放置去離子水試劑瓶(4)、擴(kuò)增引物管(5)、白蛋白內(nèi)參引物管(6)、SYBR premix Ex Taq (含ROX)管(7)。
專(zhuān)利摘要本實(shí)用新型公開(kāi)一種核糖核苷酸還原酶1基因表達(dá)檢測(cè)試劑盒，包括盒體1、盒蓋2、固定座3、去離子水試劑瓶4、擴(kuò)增引物容器孔5、白蛋白內(nèi)參引物容器孔6、SYBR premix Ex Taq(含ROX)容器孔7。本試劑盒結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單、設(shè)計(jì)合理、使用方便、制造容易、檢測(cè)過(guò)程不易受污染；本試劑盒在檢測(cè)核糖核苷酸還原酶1基因表達(dá)時(shí)具有敏感性高、特異性強(qiáng)、耗時(shí)短等優(yōu)點(diǎn)。
文檔編號(hào)C12Q1/68GK202519260SQ2012201628
公開(kāi)日2012年11月7日 申請(qǐng)日期2012年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月17日
發(fā)明者井昶雯, 吳建中, 曹海霞, 王卓, 馬蓉 申請(qǐng)人:井昶雯, 吳建中, 曹海霞, 王卓, 馬蓉