專利名稱：一種核苷酸切除修復(fù)交叉互補組1基因多態(tài)性及酶切檢測試劑盒的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本實用新型涉及ー種檢測試劑盒，尤其是涉及一種核苷酸切除修復(fù)交叉互補組I基因多態(tài)性及酶切檢測試劑盒。
背景技術(shù)：
核苷酸切除修復(fù)交叉互補組I (excision repair cross complementing 1，ERCC1)是核苷酸剪切修復(fù)家族中的ー個重要成員，定位于19號染色體上，基因全長 15 X 103bp，含10個外顯子，編碼297個氨基酸的蛋白，ERCCl基因的表達產(chǎn)物與DNA修復(fù)酶缺乏互補基因F(XPF)形成緊密的異ニ聚體(ERCC1-XPF)，該ニ聚體是ー個特異性的連結(jié)5'端的核酸內(nèi)切酶，具有損傷識別和切除5'端的雙重作用，ERCCl在NER中起到限速或調(diào)節(jié)作用。核苷酸切除修復(fù)(nucleotide excision repair, NER)是細胞內(nèi)最重要的修復(fù)方式，，能修復(fù)外因?qū)е碌腄NA損傷，在維持基因組功能完整性、抗癌過程中起到極為重要的作用。NER的修復(fù)通過切除藥物或者紫外線等損傷的DNA而形成的DNA加合物，以互補鏈為模板復(fù)制并修復(fù)損傷DNA來維護基因組的完整性。而DNA損傷修復(fù)能力增強有時是引起腫瘤細胞耐藥的ー個重要因素。ERCCl修復(fù)作用呈現(xiàn)單核苷酸多態(tài)性，單核苷酸多態(tài)性(single nucleotidepolymorphism, SNP)指在基因組水平上由單個核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性，ERCCl基因在118位密碼子有ー個C — T的突變，從而影響ERCCl蛋白的表達水平。許多研究指出118C/T單核苷酸多態(tài)可能與鉬類化療藥耐藥相關(guān)，抑制ERCCl的表達可克服鉬類耐藥性，提高治療效果。鉬類藥物是最常用的腫瘤化療藥物之一，包括順鉬、卡鉬和奧沙利鉬等。其藥理學(xué)機制主要是通過引起腫瘤細胞內(nèi)DNA的交聯(lián)，阻礙DNA合成與復(fù)制，從而抑制腫瘤細胞的生長。DNA修復(fù)是鉬類藥物耐藥性產(chǎn)生的主要原因。因此，化學(xué)致癌物代謝酶，即藥物代謝酶基因多態(tài)性檢測尤其是ERCCl基因多態(tài)性及酶切的檢測對于腫瘤病人的個體化用藥及腫瘤發(fā)病機制研究至關(guān)重要。但目前臨床檢測ERCCl基因多態(tài)性及酶切的檢測試劑原料需多方配備，實驗過程分布進行，耗時較長，容易污染，所以探索一種檢測ERCCl基因多態(tài)性及酶切快速可靠的方法已經(jīng)成為臨床試驗研究的熱點問題。

實用新型內(nèi)容為了解決上述技術(shù)問題，本實用新型提供一種核苷酸切除修復(fù)交叉互補組I基因多態(tài)性及酶切檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、引物試劑瓶4、酶混合液試劑瓶5、BsrD I混合物試劑瓶6、去離子水試劑瓶7、固定座3上設(shè)置有PCR管8、酶切管9、加樣器吸頭10。[0008]進ー步地，所述固定座3還設(shè)置有孔11?？?0設(shè)置用來分別將PCR管8、酶切管9、加樣器吸頭10固定，以防止遺撒?？?1的形狀依據(jù)不同PCR管、加樣器吸頭的形狀和大小而設(shè)置。所述引物為特異性擴增ERCCl的引物，上游引物序列為5' -gcagagctcacctgaggaac-3';下游引物；予列為5' -gaggtgcaagaagaggtgga-3'。引物濃度為I Oumo I/し所述酶混合液包括濃度為O. 4mmol/L的dNTPs, 3mmol/L的Mg2+, IOx緩沖液，I. 25U/25 μ I 的 rTaq。所述BsrD I 混合物包括 IOx NEB 緩沖液 2，lmg/ml 的 IOx BSA，2000U/ml 的 BsrdI。本實用新型與現(xiàn)有產(chǎn)品相比，具有如下積極有益的效果I、本試劑盒結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計合理、使用方便、制造容易、檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測核苷酸切除修復(fù)交叉互補組I基因多態(tài)性效果時具有敏感性高、特異性強、耗時短等優(yōu)點。2、本試劑盒將檢測核苷酸切除修復(fù)交叉互補組I基因多態(tài)性和酶切檢測合在一起，使檢測效率更高，更方便。

圖I為本實用新型的整體結(jié)構(gòu)示意圖。
具體實施方式
以下結(jié)合附圖和實施例對本實用新型進行進ー步說明。表I為本實用新型PCR反應(yīng)體系。如圖I所示，本實用新型的一個實施例為ー種核苷酸切除修復(fù)交叉互補組I基因多態(tài)性及酶切檢測試劑盒，包括盒體I、盒蓋2、固定座3、引物試劑瓶4、酶混合液試劑瓶5、BsrD I混合物試劑瓶6、去離子水試劑瓶7、固定座3上設(shè)置有PCR管8、酶切管9、加樣器吸頭10。所述固定座3還設(shè)置有孔11。孔11設(shè)置用來分別將PCR管8、酶切管9、加樣器吸頭10固定，以防止遺撒?？?1的形狀依據(jù)不同PCR管、加樣器吸頭的形狀和大小而設(shè)置。所述引物為特異性擴增ERCCl的引物，上游引物序列為5 ' -gcagagctcacctgaggaac-3 ';下游引物序列為5' -gaggtgcaagaagaggtgga-3 ',引物濃度為I Oumo I/し所述酶混合液包括濃度為O. 4mmol/L的dNTPs, 3mmol/L的Mg2+, IOx緩沖液，I. 25U/25 μ I 的 rTaq ο所述BsrD I mixture 包括 IOx NEB 緩沖液 2, lmg/ml 的 IOx BSA, 2000U/ml 的BsrdI0操作方法I)取模板 DNA取病人全血1ml，常規(guī)提取DNA，取IulDNA作為模板。2)反應(yīng)體系將各反應(yīng)物質(zhì)按照如下表I中反應(yīng)體系進行配比[0027]表I
權(quán)利要求1.一種核苷酸切除修復(fù)交叉互補組I基因多態(tài)性及酶切檢測試劑盒，其特征在于，包括盒體(I)、盒蓋(2)、固定座(3)、引物試劑瓶(4)、酶混合液試劑瓶(5)、BsrD I混合物試劑瓶(6)、去離子水試劑瓶(7)、固定座(3)上設(shè)置有PCR管(8)、酶切管(9)、加樣器吸頭(10)。
2.根據(jù)權(quán)利要求I所述的ー種核苷酸切除修復(fù)交叉互補組I基因多態(tài)性及酶切檢測試劑盒，其特征在于，所述固定座⑶還設(shè)置有孔(11)。
專利摘要本實用新型公開一種核苷酸切除修復(fù)交叉互補組1基因多態(tài)性及酶切檢測試劑盒，包括盒體1、盒蓋2、固定座3、引物試劑瓶4、酶混合液試劑瓶5、Bs rD I混合物試劑瓶6、去離子水試劑瓶7、PCR管8、酶切管9、加樣器吸頭10、孔11。本試劑盒結(jié)構(gòu)簡單、設(shè)計合理、使用方便、制造容易、檢測過程不易受污染；本試劑盒在檢測核苷酸切除修復(fù)交叉互補組1基因多態(tài)性及酶切檢測具有敏感性高、特異性強、耗時短等優(yōu)點。
文檔編號C12Q1/68GK202519261SQ201220162888

公開日2012年11月7日 申請日期2012年4月17日 優(yōu)先權(quán)日2012年4月17日
發(fā)明者吳建中, 曹海霞, 王卓, 路平, 馬蓉 申請人:吳建中, 曹海霞, 王卓, 路平, 馬蓉