專利名稱：一種高耐受性產(chǎn)酯酵母菌株及其應(yīng)用的制作方法
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明屬于生物化工領(lǐng)域，具體涉及一種高耐受性產(chǎn)酯酵母菌株及其應(yīng)用。
背景技術(shù)：
產(chǎn)酯酵母，亦稱生香酵母，大多屬于異型漢遜氏酵母，具有較強的氧化特性和產(chǎn)酯能力，是白酒產(chǎn)香的主要菌種之一。白酒是一種含有豐富香味物質(zhì)的蒸餾酒，酯類在白酒的香味形成中有特別重要的作用。如何提高白酒中酯類的含量，是白酒生產(chǎn)者普遍關(guān)注的問題。白灑中的酯類，根據(jù)其香型的不同，其主要酯的種類和含量都不相同。一般在清香型大曲和川法小曲酒中是乙酸乙酯的含量最多。它是在發(fā)酵過程中由酵母菌所產(chǎn)生，其代謝產(chǎn)生途徑是在酵母菌細胞內(nèi)產(chǎn)生。目前大多數(shù)小曲白酒釀造企業(yè)普遍出現(xiàn)白酒中乙酸乙酯含量較低，分析其原因有:入池后高發(fā)酵力菌株的生長，導(dǎo)致基質(zhì)中乙醇含量過高，影響乙酸乙酯的生成。因為當(dāng)基質(zhì)中乙醇含量超過4%，酯化作用受到抑制；其次可能由于多菌株的生長，導(dǎo)致基質(zhì)的溫度、PH發(fā)生變化，影響乙酸乙酯的生成。因此，選育適應(yīng)性好、高耐受性、高產(chǎn)乙酸乙酯酵母成為解決這一問題的關(guān)鍵點。

發(fā)明內(nèi)容
本發(fā)明的首要目的在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺點與不足，提供一種高耐受性產(chǎn)酯酵母菌株。

本發(fā)明的另一目的在于提供上述高耐受性產(chǎn)酯酵母菌株的應(yīng)用。本發(fā)明的目的通過下述技術(shù)方案實現(xiàn):
一種高耐受性產(chǎn)酯酵母菌株異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01，該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心(保藏日期:2013年4月I日，保藏地址:中國.武漢.武漢大學(xué))，其分類命名為產(chǎn)酯酵母 BTL-YOl Hansenula anomala BTL-YOI，保藏編號為 CCTCC NO:M2013115。所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl來源于一株分離于小曲酒生產(chǎn)用曲的異常漢遜氏酵母菌株(保藏編號為CCTCC NO:M2013115，可以從中國典型培養(yǎng)物保藏中心或湖北工業(yè)大學(xué)輕工學(xué)部釀酒實驗室購買)，通過耐性(溫度、PH和乙醇濃度耐性)馴化后得到。所述的異常 漢遜氏酵母菌BTL-YOl的培養(yǎng)特征為:YEro固體培養(yǎng)基(酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，瓊脂20g，加水至lOOOmL，pH6.0-6.5) 32°C培養(yǎng)24h，菌落呈圓形，白色，凸起，邊緣光滑，表面干燥有脂質(zhì)感，菌落易挑取，菌落大小為0.05-0.10cm。所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl于400倍顯微鏡觀察的菌體形態(tài)特征為:菌體有圓形或橢圓形，大小為3.66X5.48 μ m (平均)；美蘭染色，大部分(80-90%)細胞不著色，為無色，少部分呈藍色，可以見著液泡；繁殖方式為一端出芽繁殖。
所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl的生物學(xué)特征為:其最高耐受溫度為38°C，最適生長溫度在32°C;耐酸性能好，在pH為I的環(huán)境中仍然生長良好，最適生長pH為4 ;最高耐受酒精濃度為12% (體積濃度)。所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl的穩(wěn)定性特征為:在YEH)固體培養(yǎng)基32°C培養(yǎng)24h，連續(xù)傳代10代培養(yǎng)，其培養(yǎng)特征及形態(tài)特征均無變化，該菌株的生物學(xué)性狀穩(wěn)定。所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl能夠以含葡萄糖的培養(yǎng)基作為發(fā)酵基質(zhì)靜置培養(yǎng)，可獲得酯香味突出，乙酸乙酯含量較高的發(fā)酵液；其最佳產(chǎn)酯培養(yǎng)方式為靜止培養(yǎng)；產(chǎn)酯最佳培養(yǎng)基為小麥糖化液，小麥糖化液的制備如下:以小麥為原料，將其粉碎后，稱取200g，加一定量的水煮沸，糊化IOmin ;待冷卻至50_60°C后，加入糖化酶保溫糖化1_2小時，然后過濾，補水至IOOOmL,加葡萄糖將其糖度調(diào)節(jié)至8度。上述異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl在釀酒中的應(yīng)用。將所述的高耐受性產(chǎn)酯酵母菌株制成液體種子液或強化曲投入清香型大曲及川法小曲白酒釀造生產(chǎn)；或者單獨發(fā)酵，將發(fā)酵液加入糟醅中一起蒸酒，可提高酒體中乙酸乙酯含量，改善酒質(zhì)，提高經(jīng)濟效益。本發(fā)明相對于現(xiàn)有技術(shù)具有如下優(yōu)點和效果:
本發(fā)明高耐受性異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl對溫度、pH和酒精濃度的耐受性高，乙酸乙酯產(chǎn)量高；以小麥糖化液作為產(chǎn)酯培養(yǎng)基其產(chǎn)乙酸乙酯量可達到3.903g/L ;將其用于釀酒可以提高白酒總酯含量，改善酒質(zhì)。
具體實施例方式以下實施例用于進一步說明本發(fā)明，但不應(yīng)理解為對本發(fā)明的限制。若未特別指明，實施例中所用的技術(shù) 手段為本領(lǐng)域技術(shù)人員所熟知的常規(guī)手段。實施例1高耐受性產(chǎn)酯酵母菌株異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl的獲得
從小曲酒廠生產(chǎn)用曲中分離到產(chǎn)乙酸乙酯酵母菌異常漢遜氏酵母菌株(可以從中國典型培養(yǎng)物保藏中心或湖北工業(yè)大學(xué)輕工學(xué)部釀酒實驗室購買)，菌株的保藏采用YEro固體斜面培養(yǎng)基，其配方為:酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，瓊脂20g，加水至IOOOmL,pH6.0-6.5，115°C滅菌30min。菌株的培養(yǎng)也采用YETO培養(yǎng)基。菌株的培養(yǎng)方式可選用兩種:(I)液體培養(yǎng)制種子液:把菌株接種于YEro液體培養(yǎng)基(酵母膏10g，蛋白胨20g，葡萄糖20g，加水至IOOOmL, ρΗ6.0-6.5，)中，在30°C溫度下，120rpm搖瓶培養(yǎng)20h ；(2)固體培養(yǎng)活化菌株:接種于YEH)固體瓊脂培養(yǎng)基中，于30°C培養(yǎng)箱培養(yǎng)20h。將異常漢遜氏酵母菌株分別進行溫度梯度，pH梯度及乙醇濃度梯度的逐級馴化，最終得到異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01 (該菌株于2013年4月I日交于中國典型培養(yǎng)物保藏中心保藏，保藏地址:中國.武漢.武漢大學(xué)，其分類命名為產(chǎn)酯酵母BTL-Y01 Hansenulaanomala BTL-Y01，保藏編號為 CCTCC NO:M2013115。)。實施例2高耐受性產(chǎn)酯酵母菌株異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01的耐受性測試
溫度耐受性實驗:將活化后的異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01培養(yǎng)液按無菌操作法分別接種到裝有50mL YEPD液體培養(yǎng)基的三角瓶中，將接種后的培養(yǎng)管置于搖床上，分別放置在30°C、32°C、35°C、38°C、40°C下，120rpm振蕩培養(yǎng)24h后，測定600nm波長下的OD值，濃度大的菌液可以作適當(dāng)稀釋，經(jīng)稀釋后測得的OD值乘以稀釋倍數(shù)，即為培養(yǎng)液實際的OD值。從表I中可以看出，異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01在38°C下仍能有一定的生長量，在40°C菌株幾乎沒有生長。因此該菌株的最高耐受溫度為38°C，最適生長溫度32°C。表I不同溫度下異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl的生長情況
權(quán)利要求
1.一種高耐受性產(chǎn)酯酵母菌株異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于:該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，其分類命名為產(chǎn)酯酵母BTL-YOl Hansenula anomalaBTL-YOI，保藏編號為 CCTCC NO:M2013115。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于該菌株培養(yǎng)特征為:YEPD固體培養(yǎng)基32°C培養(yǎng)24h，菌落呈圓形，白色，凸起，邊緣光滑，表面干燥有脂質(zhì)感，菌落易挑取，菌落大小為0.05-0.10cm。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于該菌株于400倍顯微鏡觀察的菌體形態(tài)特征為:菌體有圓形或橢圓形，大小為3.66X5.48 μ m ;美蘭染色，大部分細胞不著色，為無色，少部分呈藍色，可以見著液泡；繁殖方式為一端出芽繁殖。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于該菌株的生物學(xué)特征為:最高耐受溫度為38°C，最適生長溫度在32°C;耐酸性能好，在pH為I的環(huán)境中生長良好，最適生長pH為4 ;最聞耐受:酒精濃度為12%。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于該菌株的穩(wěn)定性特征為:在YEro固體培養(yǎng)基32°C培養(yǎng)24h，連續(xù)傳代10代培養(yǎng)，其培養(yǎng)特征及形態(tài)特征均無變化，該菌株的生物學(xué)性狀穩(wěn)定。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于該菌株產(chǎn)酯的培養(yǎng)方式為靜置培養(yǎng)。
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-Y01，其特征在于該菌株產(chǎn)酯的培養(yǎng)基為小麥糖化液；小麥糖化液的制備為:以小麥為原料，將其粉碎后，稱取200g，加一定量的水煮沸，糊化IOmin ;待冷卻至50-60°C后，加入糖化酶保溫糖化1_2小時，然后過濾，補水至IOOOmL,加葡萄糖將其糖度調(diào)節(jié)至8度。
8.權(quán)利要求1-7任一·項所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl在釀酒中的應(yīng)用。
9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的應(yīng)用，其特征在于:將權(quán)利要求1-7任一項所述的異常漢遜氏酵母菌BTL-YOl制成液體種子液或強化曲投入清香型大曲及川法小曲白酒釀造生產(chǎn)；或?qū)?quán)利要求1-7任一項所述的異常漢遜氏酵母菌單獨發(fā)酵，將發(fā)酵液加入糟醅中一起蒸酒。
全文摘要
本發(fā)明公開了一種高耐受性產(chǎn)酯酵母菌株及其應(yīng)用，屬于生物化工領(lǐng)域。該菌株保藏于中國典型培養(yǎng)物保藏中心，分類命名為產(chǎn)酯酵母BTL-Y01 Hansenula anomala BTL-Y01，保藏編號為CCTCC NOM2013115。BTL-Y01最高耐受溫度為38℃，最適生長溫度在32℃；耐酸性能好，在pH為1的環(huán)境中生長良好，最適生長pH為4；最高耐受酒精濃度為12%。其靜置培養(yǎng)發(fā)酵產(chǎn)乙酸乙酯高于搖床振蕩培養(yǎng)，以小麥糖化液作為產(chǎn)酯培養(yǎng)基其產(chǎn)乙酸乙酯量可達到3.903g/L。該菌株適用于釀酒中，能夠提高白酒中乙酸乙酯及總酯含量，提升清香型白酒的典型風(fēng)味，改善酒質(zhì)，提高經(jīng)濟效益。
文檔編號C12R1/78GK103232946SQ201310191489
公開日2013年8月7日 申請日期2013年5月22日 優(yōu)先權(quán)日2013年5月22日
發(fā)明者方尚玲, 陳茂彬, 汪江波, 鎮(zhèn)達, 薛棟升, 李銳利, 嚴錦 申請人:湖北工業(yè)大學(xué)