一種希氏乳桿菌及其應(yīng)用的制作方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種希氏乳桿菌，該菌株為希氏乳桿菌Lactobacillus?hilgardii，于2013年9月3日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC?No.8099，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。該菌株發(fā)酵24小時后發(fā)酵液pH可降低至4.7，收集發(fā)酵液，經(jīng)HPLC檢測發(fā)酵液中的乳酸含量達到14g/L，說明該菌株可用于黃酒釀造，有利于抑制雜菌的生長，并有助于改善黃酒的風味。
【專利說明】一種希氏乳桿菌及其應(yīng)用
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001 ] 本發(fā)明涉及一種乳桿菌及其應(yīng)用，特別是一種希氏乳桿菌及其應(yīng)用。
【背景技術(shù)】
[0002]黃酒主要是以谷物(南方主要是以糯米，北方是黍米和玉米)為原料，以麥曲為糖化劑，以黃酒酵母或活性干酵母為發(fā)酵劑，經(jīng)浸米、蒸煮、糖化、發(fā)酵、壓榨、過濾、煎酒、貯存、勾兌而成的一種低酒度的發(fā)酵原酒。按照生產(chǎn)工藝可以分為傳統(tǒng)黃酒和機械化黃酒生產(chǎn)工藝，而傳統(tǒng)黃酒工藝的特色在于“冬漿冬水”和“長時間浸米”。
[0003]將浸米漿水加入到黃酒發(fā)酵醪中釀制黃酒是傳統(tǒng)黃酒工藝的特色，但是長時間的浸米工藝卻給黃酒生產(chǎn)帶來了不少了難題。一方面，傳統(tǒng)黃酒的浸米需要占用大量的浸米場地和浸米容器，并且浸米主要是在露天環(huán)境下進行的，這樣在浸米過程會網(wǎng)羅空氣中的所有微生物，在經(jīng)過長時間的浸米后，浸米水的表面會呈現(xiàn)白膜，主要有霉菌、野生酵母菌和醋酸菌等多種細菌；此種方式導(dǎo)致浸米漿水中既存在有利的微生物，也存在有害的微生物，所以浸米漿水的好壞直接決定了黃酒發(fā)酵的成敗，這也是導(dǎo)致傳統(tǒng)黃酒發(fā)酵不易控制，黃酒品質(zhì)不穩(wěn)定的主要原因。另一方面，經(jīng)過長時間浸米后，原料米表面的糊粉層會進入到米漿水中，并隨米漿水進入發(fā)酵醪中，糊粉層中的蛋白質(zhì)會在麥曲混合酶及其他酶系的作用下產(chǎn)生大量的氨基酸，而大量的氨基酸會使黃酒的口感粗糙，甚至影響風味，在追求黃酒“淡、干、爽”的趨勢下，這一弊端會更加突出，所以胡普信提出應(yīng)該降低浸米漿水的使用量，尤其是應(yīng)該摒棄對陳米浸米漿水的使用。第三，長時間的浸米會產(chǎn)生大量的含有高濃度B0D5、CODCr的浸米漿水，據(jù)統(tǒng)計，生產(chǎn)I噸黃酒，將產(chǎn)生2噸浸米漿水，一個年產(chǎn)5萬噸的黃酒企業(yè)，至少產(chǎn)生10萬噸的米漿廢水。而這些浸米漿水只有部分能被利用，其余的將作為污水排出，排出的廢水會嚴重的污染水資源，導(dǎo)致魚類大量死亡，還可能導(dǎo)致水的富營養(yǎng)化。據(jù)測定，紹興某年產(chǎn)5萬噸的黃酒廠生產(chǎn)過程中浸米漿水的B0D5達到25000mg/L，CODCr達到60000mg/L，屬于高濃`度的有機廢水，不符合排放標準。若將這些浸米漿水進行處理，又會產(chǎn)生巨大的費用:每年對浸米漿水的處理費用高達22.5萬元；處理設(shè)施投入需要200多萬元；設(shè)備折舊加上運行費用，每年要支出40多萬元。
[0004]所以，針對傳統(tǒng)黃酒浸米漿水存在的上述問題，有必要通過一定的方式摒棄對傳統(tǒng)黃酒浸米漿水的使用，但是目前無法解決在摒棄使用浸米漿水后能保證黃酒發(fā)酵順利進行的問題。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0005]本發(fā)明提供了一種黃酒釀酒有益乳酸桿菌，分類學(xué)命名為希氏乳桿菌，于2013年9月3日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCCN0.8099，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。
[0006]應(yīng)用上述菌株希氏乳桿菌CGMCC N0.8099開發(fā)的直投式發(fā)酵劑及其應(yīng)用也屬于本發(fā)明要求保護的范圍。[0007]本發(fā)明還提供一種應(yīng)用上上述希氏乳桿菌在黃酒釀造中的應(yīng)用方法，是將活化和擴大培養(yǎng)后的希氏乳桿菌Lactobacillus hilgardii應(yīng)用于黃酒釀造,所述希氏乳桿菌接種量為 0.1%-0.3%ο
[0008]菌株16SrDNA基因，PCR產(chǎn)物送樣測序，16SrDNA測序結(jié)果與NCBI中數(shù)據(jù)比對，菌株與Lactobacillus hilgardii 10EB0204有95%的同源性，可以認為是希氏乳桿菌Lactobacillus hilgardii。
[0009]應(yīng)用本發(fā)明提供的希氏乳桿菌發(fā)酵24小時后發(fā)酵液pH可降低至4.7，收集發(fā)酵液，經(jīng)HPLC檢測發(fā)酵液中的乳酸含量達到14g/L。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1為希氏乳桿菌Lactobacillus hilgardii在M17培養(yǎng)基培養(yǎng)基上的菌落特征
[0011]圖2為希氏乳桿菌Lactobacillus hilgardii的菌體形態(tài)
【具體實施方式】
[0012]實施例1菌株篩選
[0013]從番茄汁碳酸鈣培養(yǎng)基上挑選出具有溶鈣圈，M17培養(yǎng)基上挑選出能使溴甲酚紫變黃，呈現(xiàn)白色或灰色、中間凸起的單菌落，進行接觸酶實驗，并結(jié)合革蘭氏染色法，確定了黃酒發(fā)酵液中含有乳酸菌。隨后在MRS固態(tài)培養(yǎng)基上經(jīng)過多次分離純化，最終分離得到接觸酶實驗呈陰性、革蘭氏染色呈陽性的乳酸菌菌株，命名為。菌落形態(tài)和經(jīng)革蘭氏染色后在顯微鏡下觀察的菌體形態(tài)分別如圖1和圖2所示。
[0014]實施例2菌株鑒定
[0015](一)pH 的測定
[0016]將篩選得到的希氏乳桿菌在MRS培養(yǎng)基中活化后，調(diào)整菌懸液OD6tltol=0.5，按照2%的接種量接種于IOOmL的MRS培養(yǎng)基中，在30°C條件下培養(yǎng)2d，每6h測定一次pH值。
[0017]
【權(quán)利要求】
1.一種希氏乳桿菌(Lactobacillus hilgardii),于2013年9月3日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC N0.8099，保藏地址為北京市朝陽區(qū)北辰西路I號院3號，中國科學(xué)院微生物研究所。
2.含有權(quán)利要求1所述希氏乳桿菌的直投式發(fā)酵劑。
3.權(quán)利要求1所述希氏乳桿菌應(yīng)用于制備直投式發(fā)酵劑中的應(yīng)用。
4.權(quán)利要求1所述希氏乳桿菌在黃酒釀造中的應(yīng)用。
5.權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于:是將活化和擴大培養(yǎng)后的希氏乳桿菌Lactobacillus hilgardii 應(yīng)用于黃酒釀造。
6.權(quán)利要求5所述方法，其特征在于，所述希氏乳桿菌接種量為0.1%-0.3%。
【文檔編號】C12R1/225GK103525722SQ201310405672
【公開日】2014年1月22日 申請日期:2013年9月6日 優(yōu)先權(quán)日:2013年9月6日
【發(fā)明者】毛健, 孟祥勇, 姬中偉, 劉云雅 申請人:江南大學(xué)