一種植物組培苗基因組dna提取的方法
【專利摘要】本發(fā)明公開了一種植物組培苗基因組DNA提取的方法，包括取一定量的植物組培苗的葉片組織，處理后放入離心管中，然后向離心管中加入溫水預(yù)熱后的SDS與CTAB混合抽提液，混搖，再用移液槍的槍頭伸入上述離心管底部，緩慢同向旋轉(zhuǎn)挑取絲狀粘稠物質(zhì)，即所得基因組DNA，最后將該基因組DNA溶于適量水中，取少量檢測。本發(fā)明的方法操作簡單，縮短了基因組DNA的提取時(shí)間，簡化實(shí)驗(yàn)過程，有效地保護(hù)了基因組DNA的天然活性。
【專利說明】一種植物組培苗基因組DNA提取的方法
【技術(shù)領(lǐng)域】
[0001]本發(fā)明涉及分子生物學(xué)【技術(shù)領(lǐng)域】，具體來說涉及草本植物基因組DNA快速提取并檢測的方法。
【背景技術(shù)】
[0002]基因組DNA作為遺傳信息的載體和最基本的遺傳物質(zhì)，在遺傳變異、代謝調(diào)控等方面起著重要作用，是分子生物學(xué)和基因工程的主要研究對象。基因組DNA的提取通常用于構(gòu)建基因組文庫、Southern雜交(包括RFLP)及PCR分離基因等。無論是研究植物DNA的結(jié)構(gòu)和功能，還是開展外源DNA的轉(zhuǎn)化、轉(zhuǎn)導(dǎo)的研究，首先要做的就是從植物組織中提取天然狀態(tài)的高分子量的DNA。不同植物的基因組DNA提取方法有所不同；不同種類或同一種類的不同組織因其細(xì)胞結(jié)構(gòu)及成分不同，分離方法也有差異。
[0003]植物基因組DNA提取的方法有很多，其過程大多較為繁瑣，且耗時(shí)耗力。冗長的提取過程不僅增加了基因組DNA被污染的可能，影響了其純度，還可能降低了活性，喪失其天然特性。迄今為止，還沒有形成快速、簡便的植物基因組DNA提取的技術(shù)方法。

【發(fā)明內(nèi)容】

[0004]針對現(xiàn)有技術(shù)存在的上述問題，本發(fā)明目的在于克服了上述之不足，提供一種植物組培苗基因組DNA提取的方法，快速、簡便并且有效地保護(hù)了植物基因組的活性。具體來說，本發(fā)明提供的技術(shù)方案如下:
一種植物組培苗基因組DNA提取的方法，包括如下步驟:
(1)取一定量的植物組培苗的葉片組織，處理后放入離心管中；
(2)按每克上述植物組織0.5~IOml的比例向上述離心管中加入溫水預(yù)熱后的SDS與CTAB混合抽提液，混搖I~IOOmin ；
(3)用移液槍的槍頭伸入上述離心管底部，緩慢同向旋轉(zhuǎn)挑取絲狀粘稠物質(zhì)，即所得基因組DNA ；
(4)將上述基因組DNA溶于適量水中；
(5)取步驟(4)的溶液適量，采用I~10%瓊脂糖進(jìn)行電泳檢測。
[0005]優(yōu)選地，所述步驟(1)的植物組培苗葉片組織是新鮮的或_20°C環(huán)境下保存的植物組培苗葉片組織，更優(yōu)選是新鮮的植物組培苗葉片組織。
[0006]優(yōu)選地，所述步驟(2)的“溫水預(yù)熱”是指在30~100°C的水溫下預(yù)熱I~lOOmin。更優(yōu)選，所述步驟(2)的“溫水預(yù)熱”是指在60~70°C的水溫下預(yù)熱30~40min。
[0007]優(yōu)選地，所述步驟(2)的SDS與CTAB混合抽提液中SDS與CTAB的體積配比為I~10:1，更優(yōu)選為2:1或3:1或4:1。
[0008]優(yōu)選地，所述步驟(5 )瓊脂糖凝膠電泳法檢測中所采用的瓊脂糖的濃度更優(yōu)選是
I ~3%。
[0009]本發(fā)明的有益效果是:具有操作簡單，過程便捷、可操作性強(qiáng)、耗材節(jié)約、快速有效等優(yōu)點(diǎn)，對實(shí)驗(yàn)條件要求不高，對實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行簡單培訓(xùn)即可入手，大大縮短植物組培苗基因組DNA提取時(shí)間，簡化實(shí)驗(yàn)過程，有效的保護(hù)了基因組DNA的天然活性。此外，這一技術(shù)的推廣可以運(yùn)用至其他植物的基因組DNA的提取。
【專利附圖】

【附圖說明】
[0010]圖1是作為本發(fā)明方法的一個(gè)實(shí)施例的半夏基因組提取檢測結(jié)果的照片。
[0011]圖2是作為本發(fā)明方法的另一個(gè)實(shí)施例的白芨基因組提取檢測結(jié)果的照片。
【具體實(shí)施方式】
[0012]本發(fā)明針對現(xiàn)有技術(shù)中存在的問題開發(fā)了一種快速提取植物組培苗基因組DNA的方法。
[0013]以一定量的組織為例，以下示出一種示例性方法:
(1)取0.1~1.0g植物組培苗的葉片組織，處理后放入商用EP管(規(guī)格1.5mL或2mL)
中；
(2)上述EP管加入溫水預(yù)熱后的SDS與CTAB混合抽提液500~1000μ L，混搖I~IOOmin ；
(3)用移液槍的槍頭(規(guī)格200μ L或1000 μ L)伸入上述EP管底部，緩慢同向旋轉(zhuǎn)挑取絲狀粘稠物質(zhì)，即所得基因組DNA ；
(4)將上述基因組DNA溶于50~100μ L純水中；
(5)取步驟(4)后溶液適量，進(jìn)行I~10%瓊脂糖電泳檢測。
[0014]本發(fā)明的方法操作簡單，過程便捷、可操作性強(qiáng)、耗材節(jié)約、快速有效，對實(shí)驗(yàn)條件要求不高，對實(shí)驗(yàn)人員進(jìn)行簡單培訓(xùn)即可入手，大大縮短植物組培苗基因組DNA提取時(shí)間，簡化實(shí)驗(yàn)過程，有效的保護(hù)了基因組DNA的天然活性。
[0015]步驟(1)中的材料可以是新鮮的或_20°C環(huán)境下保存的植物組培苗葉片組織中的任一種，優(yōu)選為新鮮的植物組培苗葉片組織。
[0016]步驟(2)中的“溫水”是指30~100°C的水溫，優(yōu)選60~70°C ;而步驟(2)中的“預(yù)熱”時(shí)間為I~IOOmin,優(yōu)選30~40min。
[0017]另外，步驟(2)中的“SDS與CTAB混合抽提液”中SDS與CTAB的體積配比為I~
10:1 ;優(yōu)選為2:1或3:1或4:1。
[0018]步驟(3)中的“同向旋轉(zhuǎn)”可以是順時(shí)針旋轉(zhuǎn)，也可以是逆時(shí)針旋轉(zhuǎn)。
[0019]步驟(4)的“純水”只是生物技術(shù)中一個(gè)常用的術(shù)語，如本領(lǐng)域中所熟知，“純水”并不是對純度作出了限定，而是指滿足一定條件的水，例如在高溫高壓濕熱下滅菌后的自來水。所述的高溫高壓濕熱滅菌的條件為121~125°C、0.1~0.15Mpa ;滅菌消毒時(shí)間10~20mino
[0020]步驟(5)中的“適量”是指取I~10 μ L的溶液，優(yōu)選3~5 μ L。
[0021]并且步驟(5)的“I~10%瓊脂糖電泳檢測”是指采用瓊脂糖凝膠電泳法對所提的基因組DNA進(jìn)行檢測。作為瓊脂糖濃度的更優(yōu)選范圍，優(yōu)選采用I~3%的瓊脂糖。
[0022]下面將結(jié)合附圖和具體實(shí)施例對本發(fā)明的技術(shù)方案作進(jìn)一步的描述。
[0023]實(shí)施例1:選取0.5g新鮮的半夏組培苗葉片組織，放入商用EP管(規(guī)格1.5mL)中；加入65°C溫水預(yù)熱后的體積配比為2:1的SDS與CTAB混合抽提液1000 μ L，混搖5min ;用移液槍的槍頭(規(guī)格200 μ L)伸入上述EP管底部，緩慢順時(shí)針旋轉(zhuǎn)挑取絲狀粘稠物質(zhì)，即所得基因組DNA，將其溶于50 μ L純水中；取溶解后溶液3 μ L,進(jìn)行1%瓊脂糖電泳檢測,結(jié)果如圖1所示。
[0024]實(shí)施例2:
選取0.5g，-20°C新鮮的白芨組培苗葉片組織，放入商用EP管(規(guī)格1.5mL)中；加入65°C溫水預(yù)熱后的體積配比為3:1的SDS與CTAB混合抽提液1000 μ L，混搖5min ;用移液槍的槍頭(規(guī)格200 μ L)伸入上述EP管底部，緩慢順時(shí)針旋轉(zhuǎn)挑取絲狀粘稠物質(zhì)，即所得基因組DNA，將其溶于50 μ L純水中；取溶解后溶液5 μ L，進(jìn)行1%瓊脂糖電泳檢測，結(jié)果如圖2所示。
[0025]最后，還需要注意的是，以上列舉的僅是本發(fā)明的若干個(gè)具體實(shí)施例。顯然，本發(fā)明不限于以上實(shí)施例，還可以有許多變形。本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員能從本發(fā)明公開的內(nèi)容直接導(dǎo)出或聯(lián)想到的所有變形，均應(yīng)認(rèn)為是本發(fā)明的保護(hù)范圍。
[0026]上面結(jié)合附圖對本發(fā)明的實(shí)施方式作了詳細(xì)的說明，但是本發(fā)明不限于上述實(shí)施方式，在所屬【技術(shù)領(lǐng)域】普通技術(shù)人員所具備的知識范圍內(nèi)，還可以在不脫離本發(fā)明宗旨的前提下做出各種變化。
【權(quán)利要求】
1.一種植物組培苗基因組DNA提取的方法，其特征在于，所述方法包括如下步驟: (1)取一定量的植物組培苗的葉片組織，處理后放入離心管中； (2)按每克上述植物組織0.5~IOml的比例向上述離心管中加入溫水預(yù)熱后的SDS與CTAB混合抽提液，混搖I~IOOmin ； (3)用移液槍的槍頭伸入上述離心管底部，緩慢同向旋轉(zhuǎn)挑取絲狀粘稠物質(zhì)，即所得基因組DNA ； (4)將上述基因組DNA溶于適量水中； (5)取步驟(4)的溶液適量，采用I~10%瓊脂糖進(jìn)行電泳檢測。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組培苗基因組DNA提取的方法，其特征在于，所述步驟(O的植物組培苗葉片組織是新鮮的或_20°C環(huán)境下保存的植物組培苗葉片組織。
3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的植物組培苗基因組DNA提取的方法，其特征在于，所述步驟(1)的植物組培苗葉片組織是新鮮的植物組培苗葉片組織。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組培苗基因組DNA提取的方法，其特征在于，所述步驟(2)的“溫水預(yù)熱”是指在30~100°C的水溫下預(yù)熱I~lOOmin。
5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的植物組培苗基因組DNA提取的方法，其特征在于，所述步驟(2)的“溫水預(yù)熱”是指在60~70°C的水溫下預(yù)熱30~40min。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組培苗基因組DNA提取的方法，其特征在于，所述步驟(2)的SDS與CTAB混合抽提液中SDS與CTAB的體積配比為I~10:1。
7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的植物組培苗基因組DNA提取的方法，其特征在于，所述步驟(2)的SDS與CTAB混合抽提液中SDS與CTAB的體積配比為2:1或3:1或4:1。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的植物組培苗基因組DNA提取的方法，其特征在于，所述步驟(5)包括采用I~3%的瓊脂糖對所提基因組DNA進(jìn)行瓊脂糖凝膠電泳法檢測。
【文檔編號】C12N15/10GK104017802SQ201410280440
【公開日】2014年9月3日 申請日期:2014年6月23日 優(yōu)先權(quán)日:2014年6月23日
【發(fā)明者】張文濤, 曹言海, 陳集雙, 覃佳佳, 張本厚, 金磊磊 申請人:南京工業(yè)大學(xué)大豐海洋產(chǎn)業(yè)研究院