本發(fā)明涉及植物提取技術(shù)領(lǐng)域，特別涉及脫苦羅漢果提取物的制備方法。

背景技術(shù)：

羅漢果，葫蘆科多年生藤本植物的果實。別名拉汗果、假苦瓜、光果木鱉、金不換、羅漢表、裸龜巴，被人們譽為“神仙果”，其葉心形，雌雄異株，夏季開花，秋天結(jié)果。主要產(chǎn)于廣西壯族自治區(qū)桂林市永?？h龍江鄉(xiāng)、龍勝和百壽等鎮(zhèn)，永福縣和龍勝縣是羅漢果之鄉(xiāng)種植歷史比較悠久，其中永福種植羅漢果已經(jīng)有300多年歷史，龍勝縣種植羅漢果已經(jīng)有200多年歷史，中國百分之九十羅漢果產(chǎn)于永?？h和龍勝縣，羅漢果是桂林名貴的土特產(chǎn)，也是國家首批批準的藥食兩用材料之一，其主要功效是能止咳化痰。果實營養(yǎng)價值很高，含豐富的維生素c(每100克鮮果中含400毫克～500毫克)以及糖甙、果糖、葡萄糖、蛋白質(zhì)、脂類等。

羅漢果味甘性涼，歸肺、大腸經(jīng)，有潤肺止咳、生津止渴的功效、適用于肺熱或肺燥咳嗽、百日咳及暑熱傷津口渴等，此外還有潤腸通便的功效。羅漢果為衛(wèi)生部首批公布的藥食兩用名貴中藥材，其所含羅漢果甜甙比蔗糖甜300倍，不產(chǎn)生熱量，是飲料、糖果行業(yè)的名貴原料，是蔗糖的最佳替代品。常飲羅漢果茶，可防多種疾病，現(xiàn)代醫(yī)學(xué)證明，羅漢果對支氣管炎、高血壓等疾病有顯著療效，還是起到防治冠心病、血管硬化、肥胖癥的作用。營養(yǎng)價值高，有清熱解暑、化痰止咳、涼血舒骨、清肺潤腸和生津止渴等功效；可治急慢性氣管炎、咽喉炎、支氣管哮喘、百日咳、胃熱、便秘、急性扁桃體炎等癥，糖尿病患者亦宜服用。

現(xiàn)有技術(shù)制備得到的羅漢果提取物會帶點苦味，且中藥味較濃，因此研究開發(fā)一種脫苦且味道較為純正的羅漢果提取物的方法非常重要，以利于擴大羅漢果提取物的市場。

技術(shù)實現(xiàn)要素：

本發(fā)明所要解決的技術(shù)問題是提供脫苦羅漢果提取物的制備方法，該方法制備得到的羅漢果提取物無苦味和中藥味，口味純正，且具有較為顯著的抗疲勞功效。

為實現(xiàn)上述目的，本發(fā)明所要解決的技術(shù)方案為：

脫苦羅漢果提取物的制備方法，包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎，加入羅漢果重量13～17倍的乙醇溶液，高壓處理，得到漿液；

2)將漿液在磁場中處理；

3)將在磁場中處理過的漿液回流提取，得到提取液；

4)將提取液過大孔吸附樹脂柱層析，以由低到高不同體積濃度的乙醇溶液為洗脫劑進行洗脫，合并洗脫液；

5)將洗脫液超濾，干燥后得到脫苦羅漢果提取物。

本發(fā)明所述步驟1)中，乙醇溶液的體積濃度為40～80％。

本發(fā)明所述步驟1)中，在18～28mpa下高壓處理3～8min。

本發(fā)明所述步驟3)中，在30～60℃下回流提取60～120min。

本發(fā)明所述步驟2)中，在3600～4600高斯的磁場中處理8～16min。本發(fā)明通過磁場處理羅漢果提取液，一般羅漢果中的苦味來源于羅漢果皂苷ⅱ，而在化學(xué)結(jié)構(gòu)上,羅漢果苦味皂苷與甜味皂苷擁有完全相同的苷元部分,僅存在葡萄糖殘基數(shù)目和位置的差別，通過在磁場中處理，將羅漢果中的葡萄糖基團引入苦味的羅漢果皂苷ⅱ中,可以延長其糖鏈,從而達到脫苦，改善其口味的目的。

本發(fā)明所述步驟4)中，先用體積濃度為30～40％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，然后用體積濃度為60～70％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，再用體積濃度為80～90％的乙醇溶液對提取液進行洗脫。

本發(fā)明所述步驟4)中，每次乙醇溶液的用量為樹脂體積的5～8倍。

本發(fā)明所述步驟4)中，提取液流速為1～3bv/h。

本發(fā)明所述步驟5)中，先用截留分子量為12～18萬的分離膜進行超濾，再用截留分子量為110～120萬的分離膜進行超濾，合并濾液。

本發(fā)明所述步驟5)中，冷凍干燥。

本發(fā)明使用不用體積濃度的乙醇溶液洗脫，獲得含有多種有效成分的羅漢果提取物，制備得到的提取物具有顯著的抗疲勞功效，經(jīng)試驗，20位專家對通過本發(fā)明方法制備得到的羅漢果提取物進行品嘗結(jié)果均為：羅漢果提取物無苦味，無中藥味，口味純正。

具體實施方式

以下結(jié)合實施例對本發(fā)明作進一步說明，但本發(fā)明并不局限于這些實施例。

實施例1

脫苦羅漢果提取物的制備方法包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎，加入羅漢果重量13倍體積濃度為80％的乙醇溶液，在18mpa下高壓處理8min，得到漿液；

2)將漿液在在3600高斯的磁場中處理16min；

3)將在磁場中處理過的漿液在30℃下回流提取120min，得到提取液；

4)將提取液過大孔吸附樹脂柱層析，先用體積濃度為30％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，然后用體積濃度為70％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，再用體積濃度為80％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，提取液流速為3bv/h，合并洗脫液；

5)將洗脫液先用截留分子量為18萬的分離膜進行超濾，再用截留分子量為110萬的分離膜進行超濾，合并濾液，冷凍干燥后得到脫苦羅漢果提取物。

實施例2

脫苦羅漢果提取物的制備方法包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎，加入羅漢果重量15倍體積濃度為60％的乙醇溶液，在23mpa下高壓處理5min，得到漿液；

2)將漿液在在4100高斯的磁場中處理12min；

3)將在磁場中處理過的漿液在45℃下回流提取90min，得到提取液；

4)將提取液過大孔吸附樹脂柱層析，先用體積濃度為35％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，然后用體積濃度為65％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，再用體積濃度為85％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，提取液流速為2bv/h，合并洗脫液；

5)將洗脫液先用截留分子量為15萬的分離膜進行超濾，再用截留分子量為115萬的分離膜進行超濾，合并濾液，冷凍干燥后得到脫苦羅漢果提取物。

實施例3

脫苦羅漢果提取物的制備方法包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎，加入羅漢果重量17倍體積濃度為40％的乙醇溶液，在28mpa下高壓處理3min，得到漿液；

2)將漿液在在4600高斯的磁場中處理8min；

3)將在磁場中處理過的漿液在60℃下回流提取60min，得到提取液；

4)將提取液過大孔吸附樹脂柱層析，先用體積濃度為40％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，然后用體積濃度為60％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，再用體積濃度為90％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，提取液流速為1bv/h，合并洗脫液；

5)將洗脫液先用截留分子量為12萬的分離膜進行超濾，再用截留分子量為120萬的分離膜進行超濾，合并濾液，冷凍干燥后得到脫苦羅漢果提取物。

對比例1

羅漢果提取物的制備方法包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎，加入羅漢果重量15倍體積濃度為60％的乙醇溶液，在23mpa下高壓處理5min，得到漿液；

2)將漿液在45℃下回流提取90min，得到提取液；

3)將提取液過大孔吸附樹脂柱層析，先用體積濃度為35％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，然后用體積濃度為65％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，再用體積濃度為85％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，提取液流速為2bv/h，合并洗脫液；

4)將洗脫液先用截留分子量為15萬的分離膜進行超濾，再用截留分子量為115萬的分離膜進行超濾，合并濾液，冷凍干燥后得到羅漢果提取物。

口感：20位專家品嘗有苦味。

對比例2

脫苦羅漢果提取物的制備方法包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎，加入羅漢果重量15倍體積濃度為60％的乙醇溶液，在23mpa下高壓處理5min，得到漿液；

2)將漿液在在4100高斯的磁場中處理12min；

3)將在磁場中處理過的漿液在45℃下回流提取90min，得到提取液；

4)將提取液過大孔吸附樹脂柱層析，先用體積濃度為35％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，然后用體積濃度為65％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，再用體積濃度為85％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，提取液流速為2bv/h，合并洗脫液；

5)將洗脫液冷凍干燥后得到脫苦羅漢果提取物。

對比例3

羅漢果提取物的制備方法包括以下制備步驟：

1)將羅漢果粉碎，加入羅漢果重量15倍體積濃度為60％的乙醇溶液，在45℃下回流提取90min，得到提取液；

2)將提取液過大孔吸附樹脂柱層析，先用體積濃度為35％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，然后用體積濃度為65％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，再用體積濃度為85％的乙醇溶液對提取液進行洗脫，提取液流速為2bv/h，合并洗脫液；

3)將洗脫液冷凍干燥后得到脫苦羅漢果提取物。

試驗例1：本發(fā)明方法制備得到的脫苦羅漢果提取物的抗疲勞試驗

1、試驗材料

試驗動物由廣西醫(yī)科大學(xué)實驗動物中心提供，其中，清潔級昆明小鼠(雄性)6周齡，體重18～22g；清潔級wistar大鼠(雄性)6周齡，體重180～200g。乳酸試劑盒購于南京邁博生物科技有限公司；尿素氮試劑盒購于上海江萊生物科技有限公司；糖原試劑盒購于北京索萊寶科技有限公司。主要儀器設(shè)備有：游泳箱(規(guī)格50cmx40cmx30cm)。

2、負重游泳試驗

取昆明小鼠40只，隨機分為4組(對照組、實施例2組、對比例組、對比例3組)，每組10只。對照組、實施例2組、對比例組、對比例3組分別按每天30ml/kg的劑量給昆明小鼠灌胃羅漢果提取物溶液(將10mg羅漢果提取物溶于80ml的水中制成羅漢果提取物溶液)，對照組灌胃生理鹽水(30ml/kg)，連續(xù)灌胃30d。小鼠末次灌胃羅漢果提取物溶液30min后，尾部載5％體重鉛皮，置于游泳箱(水深30cm、水溫25℃)中游泳，

記錄游泳開始至死亡(小鼠沉降不露頭)時間，即小鼠負重游泳時問。

3、血清中的尿素氮、乳酸測定

4組小鼠末次羅漢果提取物溶液30min后分別于30℃水中游泳60min，休息20min后摘眼球取血，分離血清，嚴格按試劑盒說明測定血清尿素氮及乳酸水平。

4、肝糖原測定

小鼠摘眼球取血后立即斷頸處死，剖出肝臟，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干后準確稱取肝組織，嚴格按試劑盒說明測定肝糖原水平。

5、試驗結(jié)果

表1羅漢果提取物對小鼠負重游泳時間及抗疲勞生化指標的影響

^*和^**分別表示與對照組相比存在顯著差異(p<0.05)或極顯著差異(p<0.01)。