本發(fā)明涉及生物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域，尤其是一種海通葉揮發(fā)油作為保鮮劑的應(yīng)用。

背景技術(shù)：

李子(prunussalicinalindl)，是薔薇科李屬植物，其果實(shí)7-8月間成熟，飽滿圓潤，玲瓏剔透，形態(tài)美艷，口味甘甜，是人們最喜歡的水果之一。李子味酸，能促進(jìn)胃酸和胃消化酶的分泌，并能促進(jìn)胃腸蠕動，因而有改善食欲，促進(jìn)消化的作用，尤其對胃酸缺乏、食后飽脹、大便秘結(jié)者有效。新鮮李肉中的絲氨酸、甘氨酸、脯氨酸、谷酰胺等氨基酸，有利尿消腫的作用，對肝硬化有輔助治療效果。李子含有多種營養(yǎng)成分，有養(yǎng)顏美容、潤滑肌膚的作用，李子中抗氧化劑含量高的驚人，堪稱是抗衰老、防疾病的“超級水果”。

由于李子貨架期短，采后不耐貯藏和運(yùn)輸，常溫條件下極易開裂、腐爛變質(zhì)。目前李子最常采用的藏方法是低溫冷藏，但低溫冷藏會導(dǎo)致藏后期出現(xiàn)果皮難剝，果肉質(zhì)地生硬、粗糙少汁等冷害現(xiàn)象，即木質(zhì)化敗壞，因此，如何防止果實(shí)的木質(zhì)化敗壞，是李子貯藏中迫切需要解決的問題。目前雖已有應(yīng)用殼聚糖、天然涂膜液、香苗等安全的保鮮方法減輕李子果實(shí)藏冷害的研究報道，但都未用于實(shí)踐，出于簡便、可操作性等方面的考慮，仍有必要研究更為實(shí)用的安全有效的保鮮方法。

植物揮發(fā)油不僅能夠祛除食品的異味，賦予香氣，還有抗菌、抗氧化、抑制呼吸等多方面的生物活性，可作為天然產(chǎn)物防腐劑的重要來源之一，在食品保鮮中具有較好的應(yīng)用前景，將植物揮發(fā)油應(yīng)用到果蔬釆后保鮮中，能夠減輕果蔬腐爛及冷害癥狀，保持果蔬品質(zhì)，延長果蔬貨架期。研究發(fā)現(xiàn)海通葉揮發(fā)性成分不僅對金黃色葡萄球菌、白色念珠菌、銅綠假單胞菌、大腸桿菌、霉菌等有較好的抑制作用，同時還具有較好的抗氧化活性在開發(fā)生物源保鮮劑方面具有巨大的應(yīng)用潛力。因此本研究擬以李子為試驗(yàn)材料，通過測定李子貯藏期間果實(shí)品質(zhì)及生理指標(biāo)的變化，研究海通葉葉揮發(fā)油對李子的保鮮作用，揭示其保鮮作用機(jī)理，為開發(fā)新的植物源保鮮劑提供理論基礎(chǔ)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

本發(fā)明的是提供海通葉揮發(fā)油作為保鮮劑的應(yīng)用。

本發(fā)明是這樣實(shí)現(xiàn)的：海通葉揮發(fā)油作為保鮮劑的應(yīng)用。

為了驗(yàn)證本發(fā)明的技術(shù)效果，進(jìn)行了如下實(shí)驗(yàn)。

1.1實(shí)驗(yàn)材料

1.1.1實(shí)驗(yàn)藥材

海通葉采自貴州大學(xué)南區(qū)，經(jīng)貴州大學(xué)林學(xué)院鑒定為馬鞭草科大青屬植物clerodendrummandarinorumdiels的葉。

供試材料為李子采購于貴陽市花溪區(qū)農(nóng)貿(mào)市場,采購后運(yùn)回實(shí)驗(yàn)室，去除未成熟、病蟲害和機(jī)械損傷的果實(shí)，挑選大小和顏色基本一致的果實(shí)。

1.1.2實(shí)驗(yàn)儀器及試劑

硬度計(jì)(樂清市寶特思儀器有限公司)；手持折光儀(杭州匯爾儀器設(shè)備有限公司)；電子天平(上海精天電子儀器有限公司)；循環(huán)水多用真空泵(鄭州杜甫儀器廠)；恰菲爾高速離心機(jī)(上海恰菲爾分析儀器有限公司)；電熱恒溫水浴鍋(上海飛越實(shí)驗(yàn)儀器有限公司)；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器(上海亞榮生化儀器廠)。碘、碘化鉀、維生素c，所有試劑均為分析純。

1.2前期處理

1.2.1果實(shí)預(yù)處理

將采集好的李子用洗潔劑溶液清洗浸泡5-10min，用清水清洗干凈，自然晾干，備用。

1.2.2海通葉揮發(fā)油的提取

稱取海通葉干燥粗粉100g，按《中華人民共和國藥典》2010版i部附錄xd揮發(fā)油測定甲法操作。采用水蒸氣蒸餾法的最佳提取工藝加12倍量水浸泡12h，蒸餾提取10h，超聲80min提取海通葉揮發(fā)油，油水先在提取器中粗分離，將蒸出的油水混合物迅速冷卻加入過量氯化鈉至溶液達(dá)到飽和，靜置2h，然后用正己烷萃取，無水硫酸鈉脫水過夜，低于35℃自然風(fēng)干，得到淡黃色油狀物，精密稱重，計(jì)算得油率，陰涼避光保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.3實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)

對照1：不做任何處理，室溫下貯藏，各指標(biāo)每10d測定一次(因?yàn)?0天時大部分水果已腐爛)。

揮發(fā)油處理：先將海通葉揮發(fā)油溶于乙醇中使其溶解后，再用去離子水配置成0.1μl·10ml^-1、0.5μl·10ml^-1、1.0μl·10ml^-1的處理液，然后將水果放入盛有不同濃度處理液的保鮮盒內(nèi)浸泡，保持1-2min，充分浸潤后，在室溫下晾干，裝入保鮮袋內(nèi)。每袋內(nèi)20個果實(shí)。置于冰箱5-10℃條件下貯藏60天，分別在果實(shí)處理前和處理后藏期間每隔10d取樣進(jìn)行各指標(biāo)分析測定。

對照2在處理液中不添加揮發(fā)油，其它操作和各處理完全相同法。

1.3實(shí)驗(yàn)方法

1.3.1質(zhì)量損失率的測定

采用稱重法測定，通過電子天平稱出水果的質(zhì)量，質(zhì)量損失率按如下公式計(jì)算：質(zhì)量損失率(％)＝(w0-wt)/w0×100％

質(zhì)量損失率式中：w0——水果的新釆購時的初始質(zhì)量；

wt——水果存放時間為時的質(zhì)量。

1.3.2硬度的測定

釆用gy-1硬度計(jì)選取水果中段進(jìn)行檢測，測定3次，取平均值，單位為kg·mm^-2。

1.3.3腐爛率的測定

觀察水果外觀是否有腐爛病變，每10天觀察一次，記錄結(jié)果，腐爛率按如下公式計(jì)算：腐敗率(％)＝腐爛個數(shù)/初始個數(shù)×100％

1.3.4糖類含量測定

用手持折光儀測定果實(shí)可溶性物糖，三組每組重復(fù)3次，取平均值，單位為每100g果實(shí)中所含糖的百分含量(％)。

1.3.5有機(jī)酸的含量測定

(1)將新鮮李子組織用勻漿機(jī)勻漿，稱取勻漿5g于50ml離心管中，將35ml左右蒸餾水加入50ml離心管，于80℃恒溫水浴中浸提30min，其間不斷搖勻。

(2)冷卻后6000r·min^–1離心10～15min，上清液用蒸餾水定容到100ml(如材料為勻漿處理，且溶液色澤不影響滴定終點(diǎn)判斷，亦可不離心冷卻后直接定容到100ml)。

(3)取試液3份，每份25ml，分別置250ml三角瓶中，各滴入酚酞指示劑2～3滴。用naoh標(biāo)準(zhǔn)溶液滴定至溶液呈微紅色，30秒不褪色，即為終點(diǎn)。記錄naoh的用量。

(4)結(jié)果計(jì)算：

式中v1——樣品提取液總體積(ml)；

v2——滴定時所取濾液體積(ml)；

v——滴定時所消耗naoh標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積(ml)；

n——naoh標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度(mol·l^–1)；

k——將總酸換算為特定有機(jī)酸的系數(shù)：蘋果酸0.067、檸檬酸0.064、酒石酸0.075、乳酸0.090、草酸0.045

a——樣品滴定前的稀釋倍數(shù)；

w——樣品鮮重(g)

1.3.6維生素c的含量測定

(1)制備果蔬組織提取液

將李子洗凈，用紗布拭干其外著水分，分別稱取20g可食用部分，置于研缽中，在研缽內(nèi)研碎，加50ml蒸餾水過濾。濾液定容至中，向瓶中加人2ml淀粉溶液,再滴加鹽酸，將ph值調(diào)至3左右。

(2)滴定vc溶液

將配制好的vc溶液倒人潔凈的錐形瓶中，加2ml淀粉溶液，用碘液滴定，滴定過程中,邊滴邊晃動錐形瓶，直到vc溶液呈現(xiàn)藍(lán)色。

(3)滴定果蔬組織提取液

用碘液滴定果蔬組織提取液，在滴定過程中，邊滴邊晃動錐形瓶，直到提取液呈現(xiàn)藍(lán)色，且在0.5分鐘內(nèi)不褪色，重復(fù)滴定。記錄每次滴定所用去的碘溶液量，并算出平均值。

(4)計(jì)算：某種果蔬組織中vc含量：

vc含量(mg·100g^-1)＝滴定組織提取液所用碘溶液量×100×4/滴定標(biāo)準(zhǔn)vc藥片溶液所用碘溶液量。

1.4結(jié)果與分析

1.4.1海通葉揮發(fā)油對李子保鮮期間失重率的影響

果實(shí)質(zhì)量損失率是判斷保鮮效果的一個重要指標(biāo)，因?yàn)楣麑?shí)在貯藏期間的失重主要是由失水及自身呼吸代謝引起的。

由圖1可知，20d前李子各組的質(zhì)量變化不明顯，20d后室溫貯藏李子質(zhì)量損失急劇上升；60d后，5-10℃條件下貯藏的用不同濃度揮發(fā)油0.1、0.6、1.0μl·10ml^-1處理的果實(shí)在藏期間質(zhì)量損失率均比兩對照組低，質(zhì)量損失率分別為：1.09％、0.12％、0.79％。

室溫貯藏質(zhì)量損失率與貯藏時間呈正相關(guān)，5-10℃條件下貯藏空白組與各處理組之間李子之間差異顯著，各處理之間差異不顯著，因此，表明低濃度海通葉揮發(fā)油處理能減輕果實(shí)質(zhì)量損失。

1.4.2海通葉揮發(fā)油對李子保鮮期間硬度的影響

果實(shí)硬度也是判斷保鮮效果的一個重要指標(biāo)。由圖2可知，李子果實(shí)的硬度在貯藏期間呈下降趨勢，在整個貯藏過程中，揮發(fā)油處理過的李子硬度均高于同期的空白組。10天后，室溫貯藏組李子硬度明顯下降較明顯，40天后，全部的李子完全軟化。置于冰箱5-10℃條件下貯藏，揮發(fā)油處理的李子與未處理李子硬度結(jié)果比較顯示，30天后，未處理的李子硬度開始下降得明顯；60天后硬度變?yōu)?.12kg·mm^-2；0.1μl·10ml^-1處理的李子的硬度為4.42kg·mm^-2，0.5μl·10ml^-1處理的李子的硬度為11.07kg·mm^-2，1.0μl·10ml^-1處理的李子的硬度為9.32kg·mm^-2；因此，海通葉揮發(fā)油對李子的。

1.4.3海通葉揮發(fā)油對李子保鮮期間腐爛率影響

貯藏環(huán)境及微生物的影響是導(dǎo)致果蔬腐爛的重要因素。由圖3可知，10d，后室溫貯藏李子開始出現(xiàn)腐爛；20d后各組均出現(xiàn)腐爛，但室溫貯藏李子腐爛速度加快；60天后，室溫貯藏李子腐爛率為50.64％，5-10℃貯藏的空白組及不同揮發(fā)油濃度0.10、0.50、1.0μl·10ml^-1依次為20.91％、10.78％、0.025％、0.46％。

1.4.4海通葉揮發(fā)油對李子保鮮期間含糖量影響

由圖4可知，李子初始樣含糖量為2.42％。隨著時間的延長，含糖量略有上升趨勢；但10d后，室溫貯藏組含糖量開始呈下降趨勢，60d后含糖量變?yōu)?.13％；5-10℃貯藏的李子20d時含糖量達(dá)到最大值2.87％，隨后含糖量開始緩慢下降，60d后，5-10℃貯藏的空白組含糖量為2.01％，不同揮發(fā)油濃度0.10、0.50、1.0μl·10ml^-1處理的樣品含糖量依次為2.28％、2.43％、2.36％；實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在適宜的溫度貯藏的李子，同時使用合理濃度的海通葉揮發(fā)油處理對維持李子的含糖量有較好的效果。

1.4.5海通葉揮發(fā)油對李子保鮮期間有機(jī)酸的含量影響

由圖5可知，李子初始樣有機(jī)酸含量為0.27％，隨著時間的推移有機(jī)酸含量均有升高，60d后，室溫貯藏組有機(jī)酸含量為0.45％，5-10℃貯藏的空白組有機(jī)酸含量為0.36％。5-10℃貯藏的不同揮發(fā)油濃度0.10、0.50、1.0μl·10ml^-1處理的樣品有機(jī)酸含量為依次為0.42％、0.4％、0.38％。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，海通葉揮發(fā)油對李子有機(jī)酸影響不明顯。

1.4.6海通葉揮發(fā)油對果蔬保鮮期間維生素c的含量影響

由圖6可知，李子初始樣vc含量0.787％。不同處理組在貯藏30d時，李子的vc含量均有下降，室溫貯藏的李子vc含量下降較為明顯，其他組下降較為平緩，室溫貯藏組維生素c含量為0.331％，5-10℃組貯藏的空白組維生素c含量為0.503％，0.1、0.5、1.0ul·10ml^-1維生素c含量依次為0.522％、0.639％、0.704％。60d后，五個處理組維生素c含量均出現(xiàn)下降，室溫處理組維生素c含量相對其它組的下降更為明顯。

可見，在不同環(huán)境貯藏的李子，其維生素c的含量隨著時間的延長均呈下降趨勢，室溫貯藏組維生素c的含量下降相對明顯；在5-10℃貯藏李子中，海通葉揮發(fā)油處理組維生素c的含量下降相對緩慢，所有組數(shù)相對比較可知，貯藏溫度在5-10℃條件下，使用揮發(fā)油濃度為0.5ul·10ml^-1處理維生素c損失最少，其含量為0.562％。

1.5結(jié)論

(1)植物精油對果蔬品質(zhì)的保持具有顯著功效。在適宜溫度貯藏條件下，較低濃度海通葉揮發(fā)油能有效的降低李子果實(shí)質(zhì)量損失率，同時對減慢李子軟化也有較好的效果，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：揮發(fā)油濃度為0.5μl·10ml^-1時對減慢李子果實(shí)質(zhì)量損失率和對其硬度影響最佳濃度。

(2)有些植物果蔬大多呈酸性，極易滋生灰霉、匍枝根霉等腐敗菌，導(dǎo)致果蔬腐敗變質(zhì)。將植物精油應(yīng)用到果蔬采后保鮮中，能夠減輕采后果蔬腐爛，延長果蔬貨架期，前面的抑菌試驗(yàn)結(jié)果表明，海通葉揮發(fā)油對8種細(xì)菌均有較好的抑菌作用，對霉菌較為敏感。因此，海通葉揮發(fā)油能有效降低李子腐爛率可能與其抑菌作用有較密切的關(guān)聯(lián)。

(3)海通葉揮發(fā)油對李子有機(jī)酸變化影響不明顯，其對可溶性糖和維生素c含量有一定影響，在適宜溫度下，較低濃度海通葉揮發(fā)油能有效減慢可溶性糖和維生素c的分解。

(4)在適宜溫度的條件下，海通葉揮發(fā)油處理在較長的時間里可以有效延緩李子后熟衰老，保持果實(shí)的品質(zhì)和風(fēng)味，維持果實(shí)中可溶性固形物含量，綜合考慮，以0.5ul·10ml^-1的濃度處理效果最優(yōu)。

與現(xiàn)有的技術(shù)相比，本發(fā)明發(fā)現(xiàn)了海通葉揮發(fā)對果蔬品質(zhì)的保持具有顯著功效，能夠減輕采后果蔬腐爛，延長果蔬貨架期，保持果實(shí)的品質(zhì)和風(fēng)味，維持果實(shí)中可溶性固形物含量。本發(fā)明材料來源廣泛，成本低廉，使用效果好。

附圖說明

圖1為海通葉揮發(fā)油處理后李子果實(shí)質(zhì)量損失率的變化；

圖2為海通葉揮發(fā)油處理后李子果實(shí)硬度的變化；

圖3為海通葉揮發(fā)油對李子保鮮期間腐爛率變化；

圖4為海通葉揮發(fā)油對李子保鮮期間糖類含量變化；

圖5為海通葉揮發(fā)油對李子鮮期間有機(jī)酸的含量變化；

圖6為海通葉揮發(fā)油對李子保鮮期間維生素c的含量影響。

具體實(shí)施方式

本發(fā)明的實(shí)施例：將海通葉揮發(fā)油作為保鮮劑直接進(jìn)行包裝，使用時，將海通葉揮發(fā)油溶解在水中，使其形成濃度為0.1-1.0ul/10ml的濃度。